全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA　 41(6): 561-569(2011)
收稿日期: 2010-12-21; 修回日期: 2011-08-01
基金项目: 公益性行业(农业)科研专项(200903040)
通讯作者: 康振生,教授,博士。 主要从事植物病理学研究; E-mail:kangzs@nwsuaf. edu. cn
第一作者: 赵 杰,博士,主要从事植物病理学研究; E-mail: jiezhao@nwsuaf. edu. cn。
陕西省小麦禾谷孢囊线虫 rDNA-ITS区序列
与 RFLP分析
赵 杰1,2, 张管曲1, 钮绪燕1, 彭德良3, 康振生1,2*
( 1 西北农林科技大学植物保护学院, 杨凌 712100; 2旱区作物逆境生物学国家重点实验室, 杨凌 712100;
3中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193)
摘要: 采用线虫通用引物 TW81 和 AB28 对采自陕西的 20 个小麦禾谷孢囊线虫群体的 rDNA-ITS 区进行 PCR 扩增、克隆
和测序。 利用 Mega软件的 UPGMA方法分析了陕西省小麦禾谷孢囊线虫群体及其与 GenBank公布的近缘种的系统发育
关系,结果表明陕西省小麦孢囊线虫群体的 rDNA-ITS 区片段的长度为 1 045 bp,且均为禾谷孢囊线虫(Heterodera ave-
nae),ITS区序列同源性为 99. 56% ,只有 3 处碱基存在差异。 其 ITS 区同中国河南(EU106175)、北京(AY148382)、山东
(HM370427)的禾谷孢囊线虫 H. avenae,澳大利亚的 H. australis(AY148395)及俄罗斯的 H. pratensis(AY148351)的亲缘
关系最为接近。 利用 8 种限制性内切酶 Ava Ⅰ(Eco88 Ⅰ)、Alu Ⅰ、Hha Ⅰ(Cfo Ⅰ)、Hae Ⅲ(BsuR Ⅰ)、Hind Ⅲ、Hinf Ⅰ、
Rsa Ⅰ和 Mva Ⅰ(Bst N1)对 20 个陕西省 CCN群体的 ITS区 PCR扩增产物进行限制性内切酶谱(RFLP)分析,结果表明 8
种限制性内切酶酶切 ITS-PCR产物后共产生 22 个酶切片段,20 个种群的 PCR-RFLP 谱型一致,表明陕西省小麦禾谷孢囊
线虫是同一个群体且与已报道的中国 CCN群体的“C”型一致,有别于欧洲的“A”型群体和印度的“B”型群体。 这是首次
报道陕西省小麦禾谷孢囊线虫种群的分子特征。
关键词:禾谷孢囊线虫;rDNA-ITS;RFLP;小麦
Sequence and RFLP analysis of rDNA-ITS region of cereal cyst nematode on wheat
from Shaanxi Province　 ZHAO Jie1,2, ZHANG Guan-qu1, NIU Xu-yan1, PENG De-liang3, KANG
Zhen-sheng1,2 　 ( 1College of Plant Protection, Northwest A&F University, Yangling 712100, China; 2State Key Laboratory of
Crop Stress Biology for Arid Area, Yangling 712100, China; 3State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect
Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China)
Abstract: The amplification of rDNA-ITS region of Heterodera avenae (CCN) populations collected from
twenty counties of Shaanxi Province with the universal primers TW81 and AB28 produced a single fragment of
1 045 base pairs. The results of ITS sequence analysis and multi-alignment among Shaanxi CCN populations
and its related species including Chinese CCN populations (GenBank accession number EU106175 for Henan
population, AY148382 for Beijing population and HM370427 for Shandong population), Australian popula-
tion(AY148395, H. australis) and Russian population (H. pratensis , AY148351) with UPGMA (software
Mega) showed that they were clustered in the same group with close relationship, and that all of CCN popula-
tions from Shaanxi were the same species shared high homology (99. 56% ) except for the difference of three
base pairs. A total of 22 scored fragments were produced by 8 restriction enzymes including AvaⅠ(Eco88Ⅰ),
AluⅠ, HhaⅠ(Cfo Ⅰ), Hae Ⅲ (BsuR Ⅰ), Hind Ⅲ, Hinf Ⅰ, Rsa Ⅰ, and Mva Ⅰ (Bst N1), which yield
restriction profiles identical for all CCN populations. This demonstrated that 20 populations might be type C of
H. avenae in accordance with the reported Chinese CCN populations type C, and were distinguished from
　
植物病理学报 41 卷
type A of European populations and type B of Indian populations. This is the first report on molecular charac-
terization of H. avenae populations from Shaanxi.
Key words: Heterodera aveane;rDNA-ITS;RFLP;wheat
中图分类号: S432. 45　 　 　 　 　 文献标识码: A　 　 　 　 　 文章编号: 0412-0914(2011)06-0561-09
　 　 小麦孢囊线虫病(cereal cyst nematode, CCN)
是小麦、燕麦、大麦、黑麦等禾谷类作物与牧草上的
一种世界性重要寄生性线虫病害,病原为禾谷孢囊
线虫(Heterodera aveane Wollenweber) [1, 2]。 CCN
在世界温带小麦产区广泛分布,目前,该病害已在
世界上 40 个国家均有发生[3]。 我国于 1989 年首
先在湖北省天门县小麦上发现 CCN,迄今,已迅速
传播蔓延至湖北[4]、江苏[5]、安徽[6]、山东[7]、内蒙
古[8]、宁夏[9]、河北[9]、河南[10]、山西[11]、北京[11]、
青海[12]、陕西[12]、甘肃[12]13 个省(市),给当地小
麦生产造成了严重危害。
禾谷孢囊线虫组是由燕麦孢囊线虫(H. ave-
nae)等 11 个有效种组成的复合种群,由于典型诊
断特征的鉴别困难和种群内单个虫体的高度变异,
利用传统形态鉴定方法很难将禾谷孢囊线虫组单
个虫体鉴定到种的水平[13]。 以 DNA 为基础的分
子生物学技术的发展为线虫的鉴定提供了一条有
效而迅速的方法。 rDNA-ITS 区序列和 ITS-PCR-
RFLP图谱能够有效地区分和鉴别线虫间的亲缘
关系和遗传特征,近年来,基于 rDNA 的分子生物
学方法已被广泛应用于线虫的鉴定和分子诊断。
Subbotin等[13]利用 RFLP 方法揭示了禾谷孢囊线
虫种内 ITS 存在异质性,命名 2 个 ITS 区域类型,
即“A”和“B”型。 用限制性内切酶 BshR Ⅰ,Pst Ⅰ
和 Taq Ⅰ将 H. filipjevi 群体与禾谷孢囊线虫组内
的其它种类鉴别开来;Zheng 等[14]对来自山西太
谷的禾谷孢囊线虫群体与国外上述两种 ITS 型群
体 rDNA中 ITS区的 PCR-RFLP比较分析,发现中
国禾谷孢囊群体的 ITS 特征系是一个新的类型
“C”型,用 Hinf Ⅰ和 Tru9 Ⅰ将中国禾谷孢囊线虫
与其他禾谷孢囊线虫分开;Peng 等[15]利用 PCR-
RFLP技术,对中国 CCN 群体和摩洛哥 CCN 群体
的 rDNA-ITS 区进行了分析,揭示中国的 CCN 完
全不同于摩洛哥的 CCN 群体;Madani 等[16]利用
RFLP和 ITS-rDNA序列对地中海盆地的孢囊线虫
属(Heterodera spp. )的 5 个种群进行了研究,首次
从意大利小麦上检测到 H. filipjevi、从希腊荨麻上
检测到 H. ripae,揭示出 H. hordecalis种群间存在
较高的序列差异性;Yan 等[17]基于 6 种内切酶
(Taq Ⅰ、Hinf Ⅰ、Pst Ⅰ、Hae Ⅲ、Rsa Ⅰ、Alu Ⅰ)
利用 PCR-RFLP快速地将美国俄勒冈州的 H. fil-
ipjevi和 H. avenae 区别开,其中 3 种内切酶可将
H. filipjevi、H. avenae、H. latipons 和 H. schachtii
很容易地区分出来,分析认为 H. filipjevi种群内的
rDNA-ITS区没有种间多态性;Ye 等[18]利用 ITS-
PCR技术对甘肃的 CCN群体的 28S rDNA-D2 / D3
区和 ITS区进行了 RFLP 图谱分析,认为甘肃的
CCN群体与中国的“C”型群体最为接近;Ou 等[10]
基于 rDNA-ITS 区利用 RFLP 鉴定河南郑州小麦
禾谷孢囊线虫群体为同一个种群且属于不同于欧
洲群体(“A”型)和印度群体(“B”型)的“C”型;国
内学者目前利用 PCR-RFLP 技术已对我国的河
南[10]、山西[14]、北京[15]、河北[15]、内蒙古[15]、甘
肃[18]、安徽[18]发生的 CCN 群体进行了相关研究,
但除 Peng[12]2008 年报道陕西杨凌和韩城的小麦
上发生孢囊线虫外,尚没有陕西省发生的小麦禾谷
孢囊线虫群体的相关研究报道。 陕西与 CCN发生
的省份河南、甘肃、内蒙古、青海、山西地理接壤,而
联合收割机作业加剧了 CCN的传播,可以说,CCN
对陕西省的小麦存在巨大的潜在危害性,因此,明
确陕西省 CCN群体类型为该病害的防治提供理论
依据十分必要。
本研究利用 PCR 方法对采自陕西省不同县
(市或区)的 20 个小麦禾谷孢囊线虫群体的 ITS
区进行扩增、克隆、测序及序列比对分析,并对陕西
CCN群体进行 ITS-PCR-RFLP 图谱分析,鉴定陕
西省 CCN群体的致病型,揭示了陕西省内不同地
理分布区域 CCN种群间的亲缘关系。
1　 材料与方法
1. 1　 禾谷孢囊线虫孢囊的分离
根据 Peng 等[19]的方法,于 2010 年 5 月小麦
265
　
　 6 期 　 　 赵 杰,等:陕西省小麦禾谷孢囊线虫 rDNA-ITS区序列与 RFLP分析
生长季节,从陕西省的 20 个县(表 1)采集受害的
小麦根及根际土壤,取 500 mL 土壤用强水流冲
洗,并不停搅动,静置 1 分钟,将水溶液用规格为
20 目和 60 目的筛子过滤,如需要,可重复以上步
骤 2 或 3 次。 用小水流轻轻清洗 60 目筛面上的过
滤残余物,将其淋洗至三角瓶中,用滤纸进行过滤,
在解剖镜下收集可育的孢囊置 4 ~ 5℃冷藏备用。
1. 2　 孢囊线虫 DNA提取
挑取 5 个成熟孢囊放入灭菌的 1. 5 mL Eppen-
dorf 管中,加入 20 μL无菌水,置 -20℃冻 1 ~ 2 h,
研磨 1 min,使样品完全破碎,然后加入 8 μL 预冷
的蠕虫裂解WLB缓冲液(2. 5 mM DTT, 1. 125 %
Tween 20, 0. 0025% Gelatin, 2. 5 × PCR buffer)和
2 μL预冷的蛋白酶 K(1 mg / mL)。 将 Eppendorf
管置于 - 80℃冰箱冷冻 10 min, 65℃恒温水浴
1 h, 95℃恒温水浴 10 min, 14 000 rpm 离心 1
min,取上清液置 -20℃备用。
1. 3　 PCR扩增
PCR反应总体积为 50 μL,体系组成为:5 μL
10 × PCR buffer (500 mM KCl,100 mM Tris-HCl pH
8． 8, 15 mM MgCl2 ),4 μL dNTPs (浓度为 2. 5
mM),引物 TW81和 AB28各 4 μL(浓度为 5 μM),
0. 4 μL Taq DNA polymerase(5 U / μL,Fermentas),
2 μL模板 DNA,最后加无菌双蒸水补充至 50 μL。
同时设无菌水为阴性对照。 本试验所用引物为扩增
线虫 ITS 的通用引物 TW81(5′-GTTTCCGTAGGT-
GAACCTGC-3′) 和 AB28 ( 5′-ATATGCTTAAGT-
TCAGCGGGT-3′) [20]。 在 Bio-Rad S1000 Thermo
Cycler PCR扩增仪上进行扩增。 扩增条件为:94℃
预变性 5 min;94℃ 40 s, 55℃ 1 min,72℃ 1 min,35
个循环;72℃延伸 10 min。 扩增结束后取 5 μL PCR
扩增产物加 1 μL 6 ×上样缓冲液( loading buffer),
在 1. 5 %琼脂糖凝胶上电泳,用 1 × TAE(40 mM
Tris,20 mM乙酸,1 mM EDTA,pH 8. 2)溶液作为电
泳缓冲液,100 V下电泳 40 min,经浓度为 0. 5 μg /
mL的溴化乙啶(EB)染色,用 Bio-Rad Gel Dox XR
凝胶成像系统观测照相。
1. 4　 ITS-RFLP 分析
取 5 μL PCR 产物用以下 8 种限制性内切酶
Ava Ⅰ(Eco88 Ⅰ)、Alu Ⅰ、Hha Ⅰ(Cfo Ⅰ)、Hae
Ⅲ(BsuR Ⅰ)、Hind Ⅲ、Hinf Ⅰ、Rsa Ⅰ和 Mva Ⅰ
(Bst N1) (8 种内切酶均购自 Fermentas 公司)酶
切,在 37 ℃水浴 16 h,酶切后的 DNA加 1 μL上样
缓冲液在 1. 5 %琼脂糖凝胶上电泳,用 1 × TAE 作
为电泳缓冲液,100 V 下电泳 60 min,EB 染色,电
泳后在紫外光下观测和照相。
Table 1　 Sample codes and origin of cereal cyst nematode
(Heterodera avenae) collected in Shaanxi in May 2010
Sample
code
Origin
GenBank accession number
for the ITS sequence
Sample
code
Origin
GenBank accession number
for the ITS sequence
Ha1 Yangling HQ698921 Ha11 Zhouzhi HQ697363
Ha2 Xianyang - - Ha12 Chang′an - -
Ha3 Jingyang HQ697362 Ha13 Fufeng - -
Ha4 Sanyuan - - Ha14 Huxian - -
Ha5 Xingping - - Ha15 Meixian - -
Ha6 Gaoling - - Ha16 Lantian HQ697364
Ha7 Qianxian - - Ha17 Qishan - -
Ha8 Pucheng - - Ha18 Huaxian - -
Ha9 Yanliang - - Ha19 Fuping - -
Ha10 lintong - - Ha20 Baoji - -
365
　
植物病理学报 41 卷
1. 5　 ITS-PCR产物克隆、测序
将 PCR产物回收纯化(DNA凝胶回收试剂盒
购自上海捷瑞生物工程有限公司),连接到 pGM-T
载体(上海 Bestbio贝博生物),转入 DH5α 感受态
细胞,涂布在含有 Ampicillin (100 mg / L)、 IPTG
(24 mg / L)、X-gal(200 mg / L)的 LB 培养基平板
上,37℃过夜培养,进行蓝白斑筛选,挑取单个白色
菌斑于液体 LB 培养基(含 100 mg / L 的 Ampicil-
lin)中摇荡培养过夜。 提取质粒 DNA ( Plasmid
miniprep Kit II购自 Biomiga公司),PCR鉴定后送
北京奥科生物技术有限责任公司测序。 测序结果
在 NCBI上进行 BLAST比对分析。
2　 结果
2. 1　 rDNA-ITS区 PCR扩增
经用引物 AB28 和 TW81 对陕西省禾谷孢囊
线虫群体的 rDNA内转录间隔区( internal transcript
spacer,ITS)进行扩增,从扩增结果可以看出,陕西
省禾谷孢囊线虫 20 个群体均扩增到大小为 1 045
bp的 DNA 片段,而在阴性对照中没有扩增产物
(图 1)。
2. 2　 ITS-RFLP分析
8 种限制性内切酶酶切 20 个陕西禾谷孢囊线
虫群体的 rDNA-ITS 扩增产物后,共出现 22 个不
同长度的酶切片段(图 2)。 用 Alu Ⅰ酶切陕西禾
谷孢囊线虫群体的 rDNA-ITS 的 PCR 扩增产物,
所有群体均产生 560 和 480 bp的 2 个 RFLP片段。
经 Rsa Ⅰ酶切后,所有群体都产生 730 和 310 bp
的 2 个片段。 Hae Ⅲ 酶切均产生 3 个相同
的 RFLP酶切片段 ,大小分别为 4 8 0 、 3 8 0和
180 bp。 内切酶 Hinf Ⅰ酶切全部测试群体均产生
长度为 860 和 180 bp的相同片段。 Mva Ⅰ酶切产
生 3 个相同的片段,分别为 420、330 和 290 bp。
Hha Ⅰ(Cfo Ⅰ)酶切后,所有群体产生 750、160 和
110 bp 3 个相同的 RFLP片段,而 Ava Ⅰ和 HindⅢ
不能酶切陕西省禾谷孢囊线虫群体的 rDNA-ITS
的 PCR产物。
2. 3　 序列分析结果
经 PCR 扩增 rDNA-ITS 区,陕西禾谷孢囊线
虫群体的 ITS 区的序列长度为 1 045 bp(图 3)。
ITS 区测序比对结果表明 Ha1 与 Ha2、Ha4 ~ 9、
Ha14、Ha15 和 Ha17 ~ 19 序列完全一致,因此只将
Ha1 的序列提交 GenBank;Ha11 与 Ha10、Ha13 及
Ha20 序列 100%匹配,将 Ha11 的序列提交 Gen-
Bank;Ha3、Ha16、Ha1 与 Ha11 间的序列只存在 1
或 2 个碱基差异(表 1,图 4)。 将序列在 NCBI 核
酸数据库进行 BLAST 分析,发现与 GenBank(ht-
tp: / / www. ncbi. nlm. nih. gov / genbank / )注册的中
国山东莱芜的小麦禾谷孢囊线虫 (H. avenae,
HM370427)完全匹配,所有 20 个陕西省 CCN 种
群的 ITS 区序列与已报道的中国 H. avenae
(HM370427)仅有 3 个碱基的差异(图 4),其余碱
基序列完全相同,表明为同一个种群。 该序列与
NCBI下载的近缘种类的 rDNA-ITS序列进行了序
列比较,包括:Avenae 组,成员有澳大利亚的 H.
australis ( AY148395 )、 英 国 的 H. arenaria
(AF274396 ) 以及来自德国 (AY148360)、印度
(AY148362 ) 和 中 国 的 H. avenae ( AY148382,
EU106175, HM370427 )、 中 国 的 H. filipjevi
(GU083595 ) 、美国的H. filipjevi(GU079654 ) ;
Fig. 1　 PCR amplification products of rDNA-ITS of
Heterodera avenae with primers TW81 and AB28
M: DL2000 marker; 1-20:Ha1 to Ha20 of H. avenae population sampled from different regions in Shaanxi; 21: Negative control.
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　 6 期 　 　 赵 杰,等:陕西省小麦禾谷孢囊线虫 rDNA-ITS区序列与 RFLP分析
Fig. 2　 PCR-RFLP patterns for the twenty cereal cyst nematode samples digested with eight
restriction endonucleases AluⅠ, RsaⅠ, HaeⅢ, HinfⅠ, HindⅢ, MvaⅠ, AvaⅠand HhaⅠ(CfoⅠ)
M:DNA molecular weight standard (DL2000 marker);1:Undigested PCR product;2-21:Ha1 to Ha20 of
Heterodera avenae populations collected from different regions in Shaanxi.
Fig. 3　 Sequence of PCR-amplified ITS regions of Heterodera avenae (Ha11) collected in
Zhouzhi county in Shaanxi Province with primers TW81 and AB28
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植物病理学报 41 卷
Fig. 4　 Sequence alignment of Heterodera avenae populations from Shaanxi and H. avenae
(GenBank accession number HM370427) from Shangdong
Schachtii组,如来自伊朗的 H. glycines(AF498387)
和比利时的 H. schachtii(AY166438);Goettingiana
组,如来自伊朗的H. goettingiana(AF498374)、荷兰
的 H. cruciferae(AF274411)和意大利的 H. caro-
tae(AY347917)。 上述序列用生物学软件Mega的
UPGMA方法构建系统进化树,遗传距离为 0. 05
(图 5)。 从进化树可以看出,陕西省孢囊线虫群体
与中国(HM370427,EU106175,AY148382)、澳大
利亚(AY148395)和俄罗斯(AY148351)的 CCN
群体进化关系最为接近,并且明显区别于 Schachtii
群组和 Goettingiana 群组。 中国(GU083595)与美
国(GU079654)的菲利普孢囊线虫进化关系最近,
聚类到一个群组,而且显著不同于燕麦孢囊线虫。
3　 结论与讨论
基于 ITS 区域的 ITS-RFLP 图谱可以直观地
检测禾谷孢囊线虫种内和种间异质性,便于种间的
分子遗传多态性研究。 Subbotin 等[13]利用限制性
内切酶从 CCN种内检测到 A和 B两种不同的 ITS
单元类型。 “A”型 CCN的 ITS区不能被 Alu Ⅰ酶
切,而“B”型 CCN 群体则可以用 Rsa Ⅰ酶切产生
两个片段,用 Alu Ⅰ和 Rsa Ⅰ能将“A”型和“B”型
CCN区别开。 Alu Ⅰ和 Rsa Ⅰ被认为是区分 CCN
的 ITS 区的 2 个单元型的关键限制性内切酶。
“A”型 ITS在大多数欧洲 CCN 群体最为典型,而
“B”型 ITS则在印度 CCN 群体较为典型,由于这
两个内切酶部分酶解法国群体的 ITS 区,证实
rDNA存在异质性。 Zheng等[14]利用 RFLP技术分
析中国大豆孢囊线虫(H. glycines)和禾谷孢囊线
虫(H. avenae)的 ITS-rDNA 序列发现,Ava Ⅰ酶
切中国大豆孢囊线虫产生 4 条片段,而禾谷孢囊线
虫则不能被酶切。 用 Hinf Ⅰ酶切分析认为中国禾
谷孢囊线虫不同于欧洲 H. avenae(“A”型)和印
度群体(“B”型),将其称为“C”型。
从系统发育树的结果上可以看出,陕西省的小
麦禾谷孢囊线虫群体与中国群体 (HM370427,
EU106175,AY148382 ) 聚类到一个群组里,两
者序列仅相差2个碱基;陕西群体与俄罗斯群体
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　 6 期 　 　 赵 杰,等:陕西省小麦禾谷孢囊线虫 rDNA-ITS区序列与 RFLP分析
Fig. 5　 Phylogenetic tree of close related species and the tested populations from Shaanxi
Province based on rDNA-ITS sequence with software UPGMA method (software, Mega)
(AY148351)和澳大利亚群体(AY148395)最为接
近。 本研究所获得的陕西群体序列间仅相差 3 个
碱基,说明陕西省 H. avenae与中国 H. avenae、H.
australia以及 H. pratensis亲缘关系相当近。 与中
国(GU083595) 和美国(GU079654)发生的菲利普
孢囊线虫(H. filipjevi)聚类到两个不同的群组,而
与中国已报道的燕麦孢囊线虫群体聚类到一个群
组,亲缘关系近。
　 　 本研究利用 8 种限制性内切酶对陕西省的孢
囊线虫群体进行酶切分析,结果表明孢囊线虫群体
的 8 个酶切图谱表现很好的一致性,证实发生在陕
西省的孢囊线虫群体为同一个种。 Subbotin 等[21]
发现 CCN 在 ITS 区域存在 Ava Ⅰ的酶切位点;
Alu Ⅰ不能酶切欧洲 CCN 的 ITS 区域,但可以对
印度 CCN群体的 ITS区域进行酶切,认为 H. ave-
nae是一个并系分类群体,中国禾谷孢囊线虫不同
于印度和欧洲的 CCN 群体。 表明 ITS-RFLP 图谱
分析能够直观快捷地鉴别种内或种间的线虫群体
差异性特点,便于群体间的遗传多态性研究。
陕西群体 rDNA-ITS 区的 PCR 片段测序序列
的 BLAST分析结果表明,陕西 CCN群体 ITS区域
与 GenBank 已发表的燕麦孢囊线虫 (Accession
No. HM370427) ITS区序列完全匹配,从而证实陕
西省 CCN群体为燕麦孢囊线虫。 与 PCR-RFLP分
析中的 Hinf Ⅰ的酶切图谱与 Ou 等[10]、 Zheng
等[15]、Ye 等[18]所检测的 H. avenae 的“C”型一
致;Hae Ⅲ酶切图谱与前人的研究[10,15,18]相吻合;
而其他 4 种限制性内切酶的酶切结果亦与已发表
的研究报道相符[10,18],与 Peng[22]报道中国河南发
生的菲利普(H. filipjevi)孢囊线虫亲缘关系甚远,
综合考虑以上所述,进一步确定陕西省孢囊线虫群
体为燕麦孢囊线虫(H. avenae),ITS-RFLP的图谱
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植物病理学报 41 卷
特征应为“C”型。
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李晖
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