全 文 ：书岷山红三叶异黄酮对去卵巢大鼠生长和
免疫及抗氧化指标的影响
俞联平１，２，郝正里１，李发弟１，３，孟祥君２，陈兴荣２，李新媛２
（１．甘肃农业大学草业生态系统教育部重点实验室 甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州７３００７０；
２．甘肃省动物营养研究所，甘肃 兰州７３００１０；３．甘肃省饲料工程技术研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：为研究岷山红三叶异黄酮的促生长、免疫及抗氧化作用，选择８０只ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ）雌性大鼠，随机分
为８组，每组１０只，其中１～７组为去卵巢＋红三叶异黄酮组，分别按３２０，１６０，８０，４０，２０，１０和０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）
的量灌胃红三叶异黄酮，第８组为假手术组，灌服等量生理盐水。结果表明，１）红三叶异黄酮对去卵巢雌性大鼠生
长有一定的抑制作用，但不存在量效关系。２）低剂量的红三叶异黄酮具有提高大鼠Ｔ淋巴细胞转化率的作用，可
以作为畜禽免疫增强剂，提高畜禽免疫力，以１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）的添加量比较适宜。３）岷山红三叶异黄酮具有明
显的抗氧化作用，适量（＞８０ｍｇ／ｋｇＢＷ·ｄ）添加可降低血清ＣＨＯ（ｔｏｔａｌｃｈｏ１ｅｓｔｅｒｏｌ，总胆固醇）、ＨＤＬ（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉ
ｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，高密度脂蛋白胆固醇）和ＬＤＬ（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，低密度脂蛋白胆固醇）
浓度，提高血清ＳＯＤ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，超氧化物歧化酶）含量。４）岷山红三叶异黄酮具有弱的雌激素作用和
较好的使用安全性。５）综合各指标，岷山红三叶异黄酮的适宜添加量为８０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）。
关键词：岷山红三叶；异黄酮；生长；免疫机能；抗氧化作用
中图分类号：Ｓ８５２．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１２）０６０１３７０８
岷山红三叶 （犜狉犻犳狅犾犻狌犿狆狉犪狋犲狀狊犲）作为甘肃省具有地域特点的地方选育品种，不仅抗寒耐湿，产草量高、质
优，且富含异黄酮（ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ，ＩＳＯ），是集草药为一体的优良豆科牧草。经检测岷山红三叶牧草中异黄酮含量为
１．０％～２．６％［１，２］，为大豆籽实中异黄酮含量（０．１％～０．３％）［３］的近１０倍，其异黄酮以鹰嘴豆芽素Ａ（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ
Ａ）和芒柄花素（ｆｏｒｍｏｎｅｔｉｎ）含量最高，占牧草干重的０．１％～０．９％，而大豆籽粒以染料木素（ｇｅｎｉｓｔｉｎ）和大豆黄
素（ｄａｉｄｚｉｎ）为主，仅占籽粒干重的０．０４％～０．１９％［４］，且豆科作物中异黄酮含量随环境因素如生态气候条件、季
节和土壤条件等变化［５］。研究表明，异黄酮类物质具有与雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）相似的结构，不仅有微弱的雌激
素活性和抗雌激素作用，还具有抗氧化、降低胆固醇、抗肿瘤、改善心血管机能等一系列重要的生物学功能［６８］。
同时，其作为一种生理调节剂，能改变动物血液中催乳素（ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）、生长激素（ｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ＧＨ）、睾
酮（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）等内源性激素的水平，家畜日粮中添加适量的异黄酮，可提高其生产性能、繁殖性能，增强机体
免疫力等［９１４］，但采食过量时，则会引起家畜，特别是反刍家畜的繁殖机能紊乱［１５］。目前国内外对大豆异黄酮的
研究比较深入，但对红三叶异黄酮提高畜禽机体免疫力、调节动物钙磷代谢以及促进其生长，改善其生产性能和
繁殖性能等方面的作用及作用机理的研究还有待进一步深入和系统化，针对岷山红三叶异黄酮药理作用、对畜禽
生产的有益作用及作用机理等方面的研究尚未见报道。
岷山红三叶异黄酮由于其来源的天然性，以及原始无污染的自然生产环境，作为畜禽饲料添加剂应用，不存
在抗生素和化学药品所具有的畜产品残留和环境污染等安全隐患［１６］。进行本试验是为探讨岷山红三叶异黄酮
在促进动物生长，提高机体抗氧化能力和免疫机能等方面的作用，以便确定其作为无公害绿色饲料添加剂开发的
价值，及提高畜禽抗疾病、抗应激能力，改善动物生产性能的潜力。
第２１卷 第６期
Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
１３７－１４４
２０１２年１２月
收稿日期：２０１１０４２２；改回日期：２０１１０９０６
基金项目：甘肃农业大学草业科学国家重点学科学术骨干科研项目和甘肃省动物营养研究所项目（ＧＮＭＫＪ２００９０１）资助。
作者简介：俞联平（１９６３），男，甘肃古浪人，研究员，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｙｕｌｐｌ５４＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｆｄ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１ 材料与方法
１．１ 试验时间与地点
试验于２００８年１２月１３日－２００９年２月１１日在甘肃省中医学院动物实验中心进行［动物实验设施合格证
ＳＹＸＫ（甘）２００４－０００６］。
１．２ 试验设计、动物与分组及试验期
采用单因素完全随机分组试验设计。选择８０只５０～６０日龄、体重接近２００ｇ、ＣＬ级（ｃｌｅａｎｇｒａｄｅ）的ＳＤ雌
性大鼠［兰州中医学院动物试验中心提供，实验动物合格证号：ＳＣＸＫ（甘）２００４－０００６］作为试验动物，随机分为８
组，每组１０只；其中１～７组去卵巢（ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ，ＯＶＸ），分别施予不同剂量的红三叶异黄酮，第８组为假手
术组（ｓｈａｍ）（表１）。试验前５日实施去卵巢手术，１２月１８日空腹称重、开始试验，正试期６０ｄ。
表１ 试验处理方案
犜犪犫犾犲１ 犜狉犻犪犾犵狉狅狌狆犻狀犵犪狀犱狋狉犲犪狋犿犲狀狋狆狉狅犵狉犪犿
组别
Ｇｒｏｕｐｉｎｇ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
红三叶异黄酮添加量
Ｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｒｅｄｃｌｏｖｅｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ（ｍｇ／ｋｇＢＷ·ｄ）
１ 去卵巢＋红三叶异黄酮（１）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（１）ｇｒｏｕｐ ３２０
２ 去卵巢＋红三叶异黄酮（２）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（２）ｇｒｏｕｐ １６０
３ 去卵巢＋红三叶异黄酮（３）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（３）ｇｒｏｕｐ ８０
４ 去卵巢＋红三叶异黄酮（４）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（４）ｇｒｏｕｐ ４０
５ 去卵巢＋红三叶异黄酮（５）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（５）ｇｒｏｕｐ ２０
６ 去卵巢＋红三叶异黄酮（６）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（６）ｇｒｏｕｐ １０
７ 去卵巢＋红三叶异黄酮（７）组 ＯＶＸ＋ＩＳＯ（７）ｇｒｏｕｐ ０
８ 假手术组Ｓｈａｍｇｒｏｕｐ ０
ＢＷ：体重Ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ；ＯＶＸ：Ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ；ＩＳＯ：Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ．
１．３ 试验材料
试验用岷山红三叶异黄酮（以下简称红三叶异黄酮）由岷州集团岷海制药有限公司提取，总异黄酮含量
１０％，其中芒柄花素５．１０％，鹰嘴豆芽素Ａ４．１０％，大豆黄素０．０５％，染料木素０．０３％；经急性毒性试验，未见红
三叶异黄酮有明显的急性毒性反应。
１．４ 试验方法
１．４．１ 大鼠去卵巢方法 用３％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠（剂量按４５ｍｇ／ｋｇＢＷ计）后，沿腹中线切口（长
约１ｃｍ），切除两侧卵巢。
１．４．２ 饲养方法 各组均饲以ＣＬ级大鼠专用颗粒饲料，日投料量按每１００ｇ体重５ｇ计（５ｇ／１００ｇＢＷ）；将各
组大鼠分别置一笼中饲喂（群饲），日饲喂２次，自由采食和饮水。
１．４．３ 投喂红三叶异黄酮的途径与方法 用０．５％羧甲基纤维素钠配制成浓度为３２，１６，８，４，２，和１ｇ／１００ｍＬ
的红三叶异黄酮悬液，分别给１～６组试验大鼠灌胃，每日１次，灌服量为１ｍＬ／１００ｇＢＷ；７和８组每日１次灌
服生理盐水１ｍＬ／１００ｇＢＷ。
１．４．４ 屠宰与取样 试验结束时，早晨空腹称大鼠个体体重；腹腔注射３％戊巴比妥钠麻醉大鼠，股动脉采血，
其中１ｍＬ加甘素抗凝，收集其余血液以３０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，分离出血清置－２０℃冰箱备用；分离子宫（双
侧）、脾脏及胸腺，分别称其重。
１．４．５ 测定指标及测定方法 １）脏器指数
子宫指数＝子宫湿重（ｍｇ）／体重（ｇ）×１００
脾脏指数＝脾脏湿重（ｍｇ）／体重（ｇ）×１００
胸腺指数＝胸腺湿重（ｍｇ）／体重（ｇ）×１００
８３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
２）Ｔ淋巴细胞转化率采用形态学方法测定［１７］。
３）血清抗氧化指标：总超氧化物歧化酶（ＴＳＯＤ）采用黄嘌呤氧化酶法［１８］；丙二醛（ＭＤＡ）采用ＴＢＡ法［１９］；
总胆固醇（ＣＨＯ）采用酶比色法［２０］；高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ）采用磷钨酸－Ｍｇ２＋沉淀法［２０］；低密度脂蛋白胆
固醇（ＬＤＬ）采用聚乙烯硫酸盐（ＰＶＳ）沉淀法［２１］。
ＴＳＯＤ和 ＭＤＡ测定利用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，ＣＨＯ、ＨＤＬ和ＬＤＬ测定均采用中生北
控生物科技股份有限公司生产的试剂盒，按说明书进行操作。
４）血清雌二醇（Ｅ２）：采用美国ＡｄｌｉｔｔｅｒａｍＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ生产的大鼠雌二醇酶联免疫试剂盒，
按说明书进行操作［２２］。
１．５ 统计分析
结果均以平均数±标准差示出。采用ＳＰＳＳ１３．０软件的Ｏｎｅｗａｙ过程对多数指标的数据进行单因素方差
分析，差异显著时用Ｄｕｎｃａｎ氏法进行多重比较；对大鼠的体重变化用ＧＬＭ Ｕｎｉｖｅｒｉａｔｅ过程进行协方差分析，差
异显著时多重比较采用ＬＳＤ法。
２ 结果与分析
２．１ 对大鼠体重的影响
采用协方差分析，对大鼠试验末平均体重及平均
体增重进行校正（表２），结果显示，假手术组（８）试验
末平均体重及平均体增重校正值均极显著低于其他各
处理（犘＜０．０１），去卵巢组（７）极显著高于处理８及添
加红三叶异黄酮１０～３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）的所有处
理 （犘＜０．０１），此范围内红三叶异黄酮添加量间无显
著差异（犘＞０．０５）。显然，去卵巢明显提高了试验末
体重与体增重，而按试验方案添加不同剂量红三叶异
黄酮均使去卵巢大鼠两指标提高的幅度减低，且剂量间
无明显差异。似乎可看出，机体自身的雌激素能明显
地控制体增重；添加红三叶异黄酮１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）
使去卵巢大鼠的体增重下降，提高添加量并未使该指
标产生变化，但红三叶异黄酮影响体增重的作用低于
大鼠卵巢雌激素。
２．２ 对大鼠脏器指数及免疫功能的影响
处理８胸腺指数最低（表３），去卵巢处理（７）使该
指标显著提高（犘＜０．０５），给去卵巢大鼠添加１０与８０
ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）（犘＜０．０１）和２０，４０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）
（犘＜０．０５）处理也显著高于处理８，但均与处理７间
表２ 各处理大鼠试验期平均体增重
犜犪犫犾犲２ 犃狏犲狉犪犵犲狑犲犻犵犺狋犵犪犻狀狅犳狉犪狋狊犻狀狋犺犲狋狉犻犪犾
狆犲狉犻狅犱犳狅狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋狉犲犪狋犿犲狀狋
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
开始体重
Ｉｎｉｔｉａｌｗｅｉｇｈｔ
（ｇ）
校正后试验末
平均体重
Ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｆｏｒ
ｆｉｎａｌｗｅｉｇｈｔ（ｇ）
校正后平均
体增重
Ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｆｏｒ
ｗｅｉｇｈｔｇａｉｎ（ｇ）
１ １７７．５０±１６．９０ａ２６２．６８±３．０２Ｂａ ７７．２４±３．０２Ｂａ
２ １８３．４０±１７．６９ａ２６３．３４±２．９８Ｂａ ７７．９１±２．９８Ｂａ
３ １８４．５０±１７．３１ａ２６６．５５±２．９７Ｂａ ８１．１２±２．９７Ｂａ
４ １９０．７０±１４．１１ａ２６３．４８±２．９９Ｂａ ７８．０５±２．９９Ｂａ
５ １９３．５０±１４．３８ａ２６５．５３±３．０２Ｂａ ８０．１０±３．０２Ｂａ
６ １９２．８０±１６．７１ａ２６３．９４±３．０１Ｂａ ７８．５１±３．０１Ｂａ
７ １７６．４２±１９．３２ａ２８３．８８±２．７８Ａ ９８．４４±２．７８Ａ
８ １８６．５６±１５．３２ａ２４２．９３±３．１３Ｃ ５７．５０±３．１４Ｃ
犘值犘ｖａｌｕｅ ０．１４４ ＜０．０１ ＜０．０１
注：同列不同小写字母表示差异显著（犘＜０．０５），不同大写字母表示
差异极显著（犘＜０．０１），下同。
Ｎｏｔｅ：Ｍｅａｎｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｗｉｔｈｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎ
ｄｉｆｆｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０５）；ｔｈｏｓｅｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｄｉｆｆｅｒ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０１）．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
无显著差异（犘＞０．０５）；添加１６０与３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）（１，２）与处理８无显著提高（犘＞０．０５），且较处理６显
著降低（犘＜０．０５），处理１显著低于处理３（犘＜０．０５）。脾脏指数以假手术组最高，显著高于处理２和６（犘＜
０．０５），并有高于处理３，４和７的趋势（犘＝０．１０９５，０．１９３４和０．１１１２），各添加组间及其与去卵巢组之间差异均
不显著（犘＜０．０５），说明红三叶异黄酮对脾脏指数的影响不明显。处理８子宫指数极显著高于其他各组（犘＜
０．０１），去卵巢与去卵巢添加不同量红三叶异黄酮组间差异均不显著（犘＞０．０５）；结果表明红三叶异黄酮无提高
子宫指数的作用，与卵巢雌激素截然不同。
处理７Ｔ淋巴细胞转化率显著低于假手术组（８），处理４（犘＜０．０１）和１，２，３，５，６（犘＜０．０５）；各添加组之间
及其与假手术组之间差异均不显著（犘＞０．０５）。结果表明，大鼠自身的雌激素在维持机体免疫功能方面有重要
作用，添加红三叶异黄酮１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）使Ｔ淋巴细胞转化率提高到假手术组的相近水平，而提高添加剂量
并不能使该指标进一步提高。
９３１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
表３ 不同处理大鼠脏器指数及犜淋巴细胞转化率
犜犪犫犾犲３ 犆犺犪狀犵犲狅犳犻狀狋犲狉狀犪犾狅狉犵犪狀犻狀犱犲狓犲狊犪狀犱犜犾狔犿狆犺狅犮狔狋犲狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳狉犪狋狊犳狅狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋狉犲犪狋犿犲狀狋
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
胸腺指数
Ｔｈｙｍｕｓｉｎｄｅｘ（％）
脾脏指数
Ｓｐｌｅｅｎｉｎｄｅｘ（％）
子宫指数
Ｕｔｅｒｕｓｉｎｄｅｘ（％）
Ｔ淋巴细胞转化率
Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔｅ（％）
１ ０．１１４±０．０３４ＡＢｃｄ ０．２３６±０．０１７ａｂ ０．０２９±０．００３Ｂａ ７５．９２５±６．２０ＡＢａ
２ ０．１１５±０．０２３ＡＢｂｃｄ ０．２１７±０．０２１ｂ ０．０２１±０．００５Ｂａ ７５．６１２±５．３４ＡＢａ
３ ０．１４２±０．０２３Ａａｂ ０．２２５±０．００７ａｂ ０．０２０±０．００３Ｂａ ７６．３２８±４．０４ＡＢａ
４ ０．１２８±０．０３０ＡＢａｂｃ ０．２３０±０．０２５ａｂ ０．０２８±０．００５Ｂａ ７６．６５８±３．８１Ａａ
５ ０．１３２±０．０３５ＡＢａｂｃ ０．２３３±０．０５２ａｂ ０．０３０±０．０１３Ｂａ ７６．１１７±２．５４ＡＢａ
６ ０．１４７±０．０２７Ａａ ０．２１７±０．０１７ｂ ０．０４８±０．０１９Ｂａ ７５．８５５±３．００ＡＢａ
７ ０．１３５±０．０２０ＡＢａｂｃ ０．２２６±０．０１７ａｂ ０．０２５±０．００６Ｂａ ６９．３２０±１．５８Ｂｂ
８ ０．１００±０．０１６Ｂｄ ０．２４７±０．０２０ａ ０．３７１±０．１１１Ａ ７６．４４８±３．９８Ａａ
犘值犘ｖａｌｕｅ ０．００４５ ０．０２２０ ０．０００１ ０．００８５
２．３ 对血清抗氧化指标的影响
处理７血清ＣＨＯ含量有高于处理８的趋势（犘＝０．０８８），表明去卵巢一定程度上使ＣＨＯ提高；红三叶异黄
酮有降低ＣＨＯ的作用，且有剂量反应（处理６不太规律）；与去卵巢组（７）相比，处理１（犘＜０．０１），２和３的
ＣＨＯ较低 （犘＝０．０５８和０．０９４）；处理５高于１（犘＜０．０５）和２（犘＝０．０８５）；处理４和６也呈高于１的趋势（犘＝
０．０６５和０．０６３）。处理７血清ＨＤＬ含量显著高于８，１，２（犘＜０．０１）及３（犘＜０．０５）；处理５ＨＤＬ含量高于处理１
和２（犘＜０．０１）及８和３（犘＝０．０５１和０．０６３）；处理６和４均具有高于１和２的趋势（犘＝０．０５３，０．０５７）和（犘＝
０．０７２，０．０７９），各添加组及去卵巢大鼠血清 ＨＤＬ含量存在线性关系（狔＝－０．００２５狓＋１．７８１；犚２＝０．６８４，犘＝
０．０２２）。血清ＬＤＬ变化与 ＨＤＬ相似，去卵巢组（７）极显著高于８（犘＜０．０１），去卵巢后添加红三叶异黄酮８０
（犘＜０．０１）与１６０，３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）（犘＜０．０５）才使ＬＤＬ水平显著低于７。血清ＣＨＯ、ＨＤＬ和ＬＤＬ含量均
以添加中、高剂量添加组的处理１，２和３较低。从绝对值看，似乎去卵巢组和１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）组血清 ＭＤＡ
含量较高，但统计分析表明各处理间该指标差异均不显著（犘＞０．０５），是否该指标较大的个体差异掩盖了处理间
差异，还有待进一步验证。去卵巢使血清ＳＯＤ含量下降，添加红三叶异黄酮与去卵巢大鼠血清ＳＯＤ含量存在曲
线关系（狔＝－１．８犈－５狓３＋０．００８５狓２－０．７９２狓＋１６４．６７；犚２＝０．８１０５，犘＝０．０１３）：在１０～４０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）范
围内随添加量增加逐渐下降，处理４和５（犘＜０．０５）显著低于８；但在８０～３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）范围内又渐次上
升，最大添加量组显著高于处理４和５（犘＜０．０５），且达到了假手术组的相近水平，处理２也显示高于４的趋势
（犘＝０．０８７）。
表４ 不同处理血清抗氧化指标及犈２ 含量变化
犜犪犫犾犲４ 犜犺犲狊犲狉狌犿犪狀狋犻狅狓犻犱犪狋犻狅狀狆犪狉犪犿犲狋犲狉狊犪狀犱犈２犾犲狏犲犾犳狅狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋狉犲犪狋犿犲狀狋
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
总胆固醇
ＣＨＯ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
高密度脂蛋白胆固醇
ＨＤＬ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
低密度脂蛋白胆固醇
ＬＤＬ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
丙二醛
ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／Ｌ）
总抗氧化酶
ＴＳＯＤ（Ｕ／Ｌ）
雌二醇
Ｅ２（ｐｇ／Ｌ）
１ １．９１２±０．２９ｂ １．１６５±０．１６Ｂｃ ０．７９±０．１３ＢＣＤｃｄ ５．１１±２．２２ａ １９６．７７±１９．６７ａ １６．１３３±４．６５ａ
２ ２．１８８±０．７２ａｂ １．１６５±０．１２Ｂｃ ０．８０±０．０９ＢＣＤｂｃｄ ５．９９±３．４２ａ １７８．４５±１０．９１ａｂ １４．０４２±３．９２ａ
３ ２．３２２±０．６４ａｂ １．３３８±０．３６ＡＢｂｃ ０．７０±０．１１Ｄｄ ５．３０±２．２３ａ １６０．７４±３９．７８ａｂ １３．７２８±３．７９ａ
４ ２．８０２±０．９９ａｂ １．６５７±０．６９ＡＢａｂｃ ０．９８±０．１７ＡＢＣａｂ ５．９１±２．４６ａ １３３．１７±４４．５４ｂ １３．６５０±４．５５ａ
５ ３．０２０±１．０２ａ １．８４７±０．５５ＡＢａｂ １．０６±０．１４Ａａ ５．６５±１．９９ａ １４２．５３±５３．０３ｂ １３．１９８±３．９７ａ
６ ２．７９２±０．９７ａｂ １．７０７±０．６３ＡＢａｂｃ ０．９６±０．２２ＡＢＣａｂｃ ６．６８±２．８９ａ １６３．１８±４８．６７ａｂ １２．８４６±２．８３ａ
７ ３．１１５±０．５１ａ ２．０４０±０．１９Ａａ １．０２±０．１２ＡＢａ ６．６０±３．１０ａ １７０．１１±５２．３６ａｂ １１．９９０±２．４１ａ
８ ２．２９３±０．５８ａｂ １．３００±０．２５Ｂｂｃ ０．７５±０．１３ＣＤｄ ６．０４±１．８２ａ ２００．４９±２１．０２ａ １７．４３２±５．３８ａ
犘值犘ｖａｌｕｅ ０．０４５６ ０．００３９ ０．０００２ ０．９５７６ ０．０４６７ ０．４４２９
０４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
去卵巢组血清Ｅ２ 含量具有低于处理８的趋势（犘＝０．０６９）。从绝对值看各添加组血清Ｅ２ 含量介于二者之
间，随红三叶异黄酮添加量的增加而上升，且存在线性关系（狔＝０．０１０６狓＋１２．７０４；犚２＝０．８９６９，犘＝０．００１），
３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）组的测定值最接近假手术组，但无统计学意义（犘＞０．０５），是否也与该指标个体测定值差异
较大有关，有待进一步验证。
３ 讨论
３．１ 对大鼠体增重的影响
去卵巢能显著提高雌性大鼠体重和全期平均体增重，添加１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）的红三叶异黄酮即可使去卵
巢大鼠两项指标增幅下降，而进一步提高添加量并未使这两项指标产生变化，未见明显的量效关系，且红三叶异
黄酮影响体增重的作用仅达到大鼠卵巢雌激素的４２．３１％～５１．７８％。本试验结果与前人研究揭示的异黄酮抑
制雌性动物生长的规律相符合。张勇等［２３］研究表明，红三叶异黄酮对小鼠生长性能的影响与性别和剂量有关，
对雌性小鼠的增重作用不显著，且随剂量增大有抑制作用，但可显著提高雄性小鼠的生长性能，但随剂量增大作
用效果下降；任慧玲［２４］的试验也取得了类似结果；郭晓红等［２５，２６］在肉仔鸡上的试验表明，大豆异黄酮的促生长作
用对雄性动物较明显而对雌性动物不明显，试验组仔母鸡血清生长激素、胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒｓ，ＩＧＦ１）水平与对照组差异不明显，而仔公鸡血清ＧＨ、ＩＧＦ１及睾酮水平显著升高；郭慧君等［２７］的研究也
表明，大豆异黄酮使去势仔公猪的血清睾酮、ＩＧＦＩ和血钙水平显著升高，但对去势仔母猪却表现为抑制作用，其
血清睾酮和ＩＧＦＩ含量下降。一般研究认为，异黄酮对雌性动物生长的抑制作用，可能与异黄酮的雌激素作用有
关，雌激素使雌性动物促黄体激素（ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ，ＬＨ）分泌下降，导致睾酮水平降低，使垂体ＧＨ 的生成
和释放减少［２６，２８３０］。本试验未呈现岷山红三叶异黄酮抑制雌性大鼠生长的剂量效应，与张勇等［２３］的试验报道不
一致，可能与该异黄酮具有弱的雌激素活性有关，且其作用远低于大鼠内源雌激素。而对雄性动物的作用机理不
同，红三叶异黄酮等能与下丘脑、垂体等Ｅ２ 受体不同程度结合，影响动物神经内分泌系统的性轴，促进雄性动物
睾酮的生成和释放；同时，也影响生长轴，使垂体的ＧＨ生成和释放增加，刺激肝脏ＧＨ受体发育和ＩＧＦ１生成
加强，促进雄性动物生长［２６，２８３０］。
３．２ 对大鼠免疫功能的影响
胸腺和脾脏是动物的重要免疫器官，胸腺系数和脾脏系数的大小直接反映机体免疫水平的高低。一般认为，
免疫器官重量降低为免疫抑制所致，而免疫器官重量增加则为免疫增强的表现［２４，２５，３１］。结果显示去卵巢能显著
提高大鼠胸腺指数，添加红三叶异黄酮使其胸腺指数降低，当添加量≥１６０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）时，胸腺指数降低到
与假手术组相近的水平，显示高剂量外源植物雌激素与内源雌激素一样具有抑制胸腺细胞增殖的作用。去卵巢
使大鼠脾脏指数降低，添加红三叶异黄酮对其脾脏指数无明显影响。去卵巢也使大鼠Ｔ淋巴细胞转化率降低，
但添加红三叶异黄酮１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）即可使Ｔ淋巴细胞转化率提高到与假手术组相近的水平，而提高添加
剂量并不能使该指标进一步提高。这说明，低剂量红三叶异黄酮即可提高大鼠的细胞免疫功能。朱宇旌等［３２］在
肉鸡上的试验表明，低剂量（基础日粮中添加５ｍｇ／ｋｇ）红三叶异黄酮能提高肉鸡免疫器官指数，当红三叶异黄酮
添加量进一步提高时，肉鸡免疫器官相对重也表现出逐渐降低趋势。朱宇旌等［３１］对苜蓿异黄酮的研究认为，其
对小鼠特异性和非特异性免疫功能都有一定的提高和改善，适宜添加量为１２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）。任慧玲［２４］研
究认为，中、高剂量的苜蓿及红三叶异黄酮能促进小鼠免疫器官的发育。刘德义［３３］用奶牛试验也表明，大豆黄酮
６０和７０ｍｇ／ｋｇ添加组淋巴细胞转化率和Ｔ细胞数显著高于对照组。有研究认为，植物雌激素具有免疫抑制和
免疫刺激的双重作用，低剂量雌激素可刺激淋巴细胞的增殖，而超生理剂量的雌激素抑制淋巴细胞增殖［３４］。由
此可见，不同来源的异黄酮对肉鸡、小鼠、奶牛和大鼠等不同动物的免疫调节作用及有效剂量各不相同，可能与异
黄酮来源及试验动物种别有关，有待进一步研究和验证。本试验从红三叶异黄酮提高大鼠免疫力和降低生产成
本的角度来看，１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）添加量比较适宜。
３．３ 对血清抗氧化指标及Ｅ２ 含量的影响
研究表明，异黄酮的酚羟基作为供氢体能与自由基反应，使之形成相应的离子或分子，熄灭自由基，终止自由
基的链式反应。异黄酮的抗氧化作用还表现在它们可减少活性氧自由基对ＤＮＡ的损伤［３３，３５，３６］。刘宝剑等［３７］的
１４１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
体外试验证明了红三叶总黄酮清除自由基的作用，并且随着异黄酮浓度的增加，对羟自由基的清除作用增强。
ＳＯＤ和谷胱甘肽过氧化酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨＰｘ）、过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）是生物机体内重要
的抗氧化酶，是重要的活性氧自由基清除剂［３８］，有研究表明，大豆异黄酮能提高体内抗氧化酶活性，用含３００
ｍｇ／ｋｇ的染料木黄酮糖苷的高脂饲料喂养小鼠４９ｄ，小鼠肝脏和心脏ＳＯＤ和 ＧＳＨＰｘ活性有不同程度地提
高［３９］，并可减少体内 ＭＤＡ含量［４０］，刘德义等［３３］对奶牛的试验中也得到了相似的结论。本试验结果表明，红三
叶异黄酮具有降低血清ＣＨＯ、ＬＤＬ和ＨＤＬ浓度，提高ＳＯＤ活性，预防动脉粥样硬化，抵抗自由基引起氧化损伤
的作用。大鼠灌服一定剂量（＞８０ｍｇ／ｋｇＢＷ·ｄ）的岷山红三叶异黄酮，可降低血清ＣＨＯ、ＬＤＬ和 ＨＤＬ浓度；
随添加量增加，红三叶异黄酮对血清ＳＯＤ含量的影响存在先下降，后上升的曲线关系，最大添加量组血清ＳＯＤ
含量达到了假手术组的相近水平；血清 ＭＤＡ含量因较大的个体差异，各组间未呈现统计学意义，但去卵巢组和
１０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）添加组血清 ＭＤＡ含量绝对值较高。同时还可看出，红三叶异黄酮在降低血清ＣＨＯ和ＬＤＬ
含量的同时，也使血清ＨＤＬ含量降低，与相关试验报道的大豆异黄酮上调血清 ＨＤＬ的作用［４１］不一致，但与大
豆黄酮在产蛋鸡［４２］，改构异黄酮在大鼠［４３］上的研究结果相符，是否也与试验动物种别及异黄酮来源不同有关，
需进一步验证。
各添加组血清Ｅ２ 含量介于去卵巢组和假手术组之间，随红三叶异黄酮添加量的增加而上升，且存在线性关
系（狔＝０．０１０６狓＋１２．７０４；犚２＝０．８９６９，犘＝０．００１），３２０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）添加组血清Ｅ２ 含量达到了假手术组
相近的水平，显示红三叶异黄酮具有弱的雌激素样作用，高剂量添加组也未出现血清Ｅ２ 含量高于假手术组的情
况，说明其具有较好的使用安全性。李颖等［４４］和陈琦等［４５］试验表明，红三叶异黄酮在一定程度上具有提高去卵
巢大鼠和围绝经期大鼠血清雌激素水平的作用。
４ 结论
添加岷山红三叶异黄酮对去卵巢雌性大鼠生长具有一定的抑制作用，但不存在量效关系；低剂量的红三叶异
黄酮具有提高大鼠 Ｔ 淋巴细胞转化率的作用，以１０ ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）的添加量比较适宜；适量（＞８０
ｍｇ／ｋｇＢＷ·ｄ）的红三叶异黄酮可降低血清ＣＨＯ、ＨＤＬ和ＬＤＬ浓度，升高血清ＳＯＤ含量，具有明显的抗氧化
作用。本试验未呈现红三叶异黄酮上调血清 ＨＤＬ的作用；岷山红三叶异黄酮具有弱的雌激素样作用和较好的
使用安全性；综合各指标，岷山红三叶异黄酮的适宜添加量为８０ｍｇ／（ｋｇＢＷ·ｄ）。
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犈犳犳犲犮狋狅犳犻狊狅犳犾犪狏狅狀犲犻狀狉犲犱犮犾狅狏犲狉狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺犪狀犱犻犿犿狌狀犲犳狌狀犮狋犻狅狀狊，
犪狀犱犻狀狋犺犲犪狀狋犻狅狓犻犱犪狀狋犻狀犱犻犮犲狊犻狀狅狏犪狉犻犲犮狋狅犿犻狕犲犱狉犪狋狊
ＹＵＬｉａｎｐｉｎｇ１，２，ＨＡＯＺｈｅｎｇｌｉ１，ＬＩＦａｄｉ１，３，ＭＥＮＧＸｉａｎｇｊｕｎ２，ＣＨＥＮＸｉｎｇｒｏｎｇ２，ＬＩＸｉｎｙｕａｎ２
（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＥｃｏｓｙｓｔｅｍｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＦａｃｕｌｔｙｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．ＧａｎｓｕＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００１０，Ｃｈｉｎａ；３．ＧａｎｓｕＦｅｅｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｅｘｐｌｏｒｅｄｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｉｎｒｅｄｃｌｏｖｅｒ（犜狉犻犳狅犾犻狌犿狆狉犪狋犲狀狊犲ｃｖ．Ｍｉｎｓｈａｎ）ｏｎａｎ
ｉｍａｌｇｒｏｗｔｈ，ｏｒｇａｎｉｓｍｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．ＥｉｇｈｔｙｆｅｍａｌｅＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙｒａｔｓ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅ
ｇｉｃｕｓ）ａｔｔｈｅ５０－６０ｄａｙｏｌｄｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｎｄｅｖｅｎｌｙａｓｓｉｇｎｅｄｔｏｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｒａｔｓｉｎｇｒｏｕｐｓ１ｔｏ７ｗｉｔｈ
ｔｈｅｏｖａｒｙｅｘｃｉｓｅｄｗｅｒｅｇｉｖｅｎｒｅｄｃｌｏｖｅｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｄａｉｌｙａｔｔｈｅｒａｔｅｓｏｆ３２０，１６０，８０，４０，２０，１０ｏｒ０
ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）ｂｙｇａｖａｇｅ．Ｔｈｅｒａｔｓｉｎｇｒｏｕｐ８ｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅａｓｔｈｅｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ．１）Ｒｅｄ
ｃｌｏｖｅｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄｒａｔｓｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ，ｂｕｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄ
ｅｎｔｅｆｆｅｃｔ．２）ＴｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｈｅｉｓｏｆｌａｖｏｎｅａｔｔｈｅｌｏｗｅｒｄｏ
ｓｅｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｒｅｄｃｌｏｖｅｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅａｔｔｈｅｌｏｗｅｒｄｏｓｅｓｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｔｏｉｍｐｒｏｖｅ
ｔｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙｏｆａｎｉｍａｌｓ．Ｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅａｍｏｕｎｔｔｏａｄｄｗａｓ１０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）．３）Ｒｅｄｃｌｏｖｅｒｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｈａｄａｎ
ｏｂｖｉｏｕｓａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔａｄｄｉｔｉｏｎ（＞８０ｍｇ／ｋｇ·ｄ）ｍａｙｒｅｄｕｃｅｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＣＨＯ，
ＨＤＬａｎｄＬＤＬ，ｂｕｔｉｎｃｒｅａｓｅＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｈａｄａｗｅａｋｅｓｔｒｏｇｅｎｌｉｋｅ
ｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｌｅｖｅｌｆｏｒａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｗａｓ８０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）ｆｏｒｔｈｅｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄｒａｔｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｒｅｄｃｌｏｖｅｒ（犜狉犻犳狅犾犻狌犿狆狉犪狋犲狀狊犲）；ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ；ｇｒｏｗｔｈ；ｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ
４４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６