全 文 ：苜蓿细菌性病害研究进展
张振粉，南志标
（草地农业生态系统国家重点实验室 兰州大学草地农业科技学院，甘肃 兰州７３００２０）
摘要：综述了国内外在苜蓿细菌性病害方面的研究概况。全世界现已报道９种苜蓿细菌性病害，它们是由８种细
菌病原引起的，这些细菌分属于６个属。其中由革兰氏阳性细菌引起的病害１种，即苜蓿细菌性萎蔫病（犆犾犪狏犻
犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊犻ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊）；革兰氏阴性菌引起的病害有８种，即细菌性芽萎蔫病（犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻
狀犪），细菌性芽腐烂病（犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻），根癌土壤杆菌（犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊），冠腐和根腐综合病
（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪），细菌性叶斑病和细菌性猝倒病为同一病原（犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲），细
菌性茎疫病（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲）和矮化病（犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪）。我国已报道危害较轻的细菌性
叶斑病（犡．犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲）和细菌性茎疫病（犘．狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲）以及２０１２年新报道的细菌性芽萎
蔫病（犈．狆犲狉狊犻犮犻狀犪）。本文归纳了苜蓿细菌性病害的种类及其特征；列举了病害的分布及其寄主范围；详述了它们
的症状识别与病原表型特征；介绍了当前常见的苜蓿细菌病原鉴定方法，即形态、生理和生化表型特征鉴定，系统
发育如１６ＳｒＲＮＡ序列分析以及自动化数值分析如Ｂｉｏｌｏｇ自动鉴定系统。
关键词：苜蓿；细菌病害；病原特征；症状特征；鉴定方法；种带细菌
中图分类号：Ｓ８１６；Ｓ４３５．４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１４）０４０３３０１３
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１４０４４０　　
　　苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）是最重要的多年生豆科牧草，在我国用作农作物的耕作历史已有两千多年［１］。苜蓿
产量高，具有保持水土和改善土壤结构的功能，是北半球温带地区最主要的牧草和草品产业化、草田轮作的首选
豆科牧草，在农牧业生产中有着不可替代的作用［２］。病害（真菌、细菌、病毒、线虫和寄生性种子植物）是苜蓿生产
的主要限制因素之一［３５］。目前关于苜蓿病害的研究工作多集中于苜蓿真菌性病害［６１２］，而对于苜蓿细菌性病害
的研究则较少。据美国植物病理学会２０１０年统计结果，苜蓿真菌性病害国际报道３７种，病毒性病害１２种，线虫
病害１２种，而苜蓿细菌性病害只有７种。国外关于苜蓿细菌性病害的研究主要包括苜蓿细菌性萎蔫病（犆犾犪狏犻
犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犲ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊）［１３］、细菌性茎疫病（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲）［１４］、细菌性芽
腐烂病（犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻）［１５］、细菌性叶斑病（犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲）［１６］、根癌土壤杆菌
（犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊）、冠腐和根腐综合病（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪）和矮化病（犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪）［１７］；
国内关于苜蓿细菌性病害的研究仅有Ｚｈａｎｇ和Ｎａｎ［１８］于２０１２年新报道的苜蓿细菌性芽萎蔫病（犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻
犮犻狀犪）以及俞大绂和方中达［１９］、方中达与任欣正［２０］、刘若［２１］、南志标和员宝华［７］等报道的危害程度较轻的细菌性
茎疫病和细菌性叶斑病。
自１９２５年Ｊｏｎｅｓ［２２］报道的苜蓿细菌性萎蔫病害，之后世界不同国家陆续在不同苜蓿种植区发现细菌性萎蔫
病。据Ｎｙｖａｌ［１７］报道，苜蓿细菌性萎蔫病可在所有苜蓿种植区发生。随着苜蓿种植在世界范围越来越普及的同
时，各个国家对苜蓿细菌性萎蔫病保持高度警惕，并且苜蓿上其他细菌性病害也逐渐受到植物病理学工作者的重
视。目前尤其是国内对苜蓿细菌性病害的认识还不是很深入，对病害种类及其特征、防治方法等方面也需要全
面的总结以往的工作，同时，开展包括防治方法在内的新的内容。本文着重综述了国内外苜蓿细菌性病害研究情
况，明白其分布及寄主范围；详述其症状和病原识别特征；归纳室内常见鉴定手段和有效的防治方法；提出了我国
目前急需开展的苜蓿细菌性病害研究的几点建议；旨在为防止苜蓿细菌性病害在国内爆发及流行提供理论基础，
３３０－３４２
２０１４年８月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第２３卷　第４期
Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
收稿日期：２０１２０６１４；改回日期：２０１２０７０９
基金项目：９７３项目课题（２０１４ＣＢ１３８７０４）和国家牧草产业技术体系（病虫害防控室主任、病害防控岗位科学家）资助。
作者简介：张振粉（１９８４），男，福建霞浦人，博士。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｆ＿１０＠ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｚｈｉｂｉａｏ＠ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
为苜蓿细菌性病害的防治提供基础资料。
１　病害种类及其特征
１．１　细菌性芽萎蔫病
症状：细菌性叶斑病主要发生于芽上。初为苜蓿芽脱水、黄化；在２４～４８ｈ内芽停止生长、萎蔫、变褐和伴有
菌脓溢出。
病原：桃色欧文氏菌（犈．狆犲狉狊犻犮犻狀犪）。菌体杆状，大小为（０．５～１．０）μｍ×（１．０～３．０）μｍ。革兰氏阴性，无
芽孢，无荚膜，兼性厌氧型，能运动。营养琼脂上菌落小，表面微凸，半透明，边缘整齐。最适生长温度为２８～
３０℃，３６℃也能生长，可在５％ ＮａＣｌ营养肉汤中生长。发酵型，能从葡萄糖、阿拉伯糖、乳糖、棉籽糖、鼠李糖、甘
露醇、蔗糖、甘油产酸，不能从木糖、肌醇、松三糖、苦杏仁苷产酸。氧化酶阴性，接触酶阳性。还原硝酸盐。不能
液化明胶，不产生吲哚、精氨酸双水解酶、苯丙氨酸脱氨酶以及脲酶。ＶＰ反应阳性，ＯＮＰＧ反应阳性。水解酪
蛋白。利用柠檬酸盐。可存活于植物种子［１８］。此属细菌多为植物致病菌。
１．２　细菌性芽腐烂病
症状：主要发生于芽上。种子刚萌发的根上出现半透明的黄色色斑，２４～４８ｈ之内种子变黄，停止生长紧接
着黄化，芽上附着大量细菌，散出气味。该病害可通过种子接触迅速传播，可以毁坏苜蓿芽整个生产［１５］。高湿及
适合的生长温度（２８℃）常使腐烂加重，当气温将至２１℃时，发病率明显降低。
病原：菊欧文氏菌（犈．犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻），现为菊果胶杆菌（犘犲犮狋狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻）。菌体杆状，大小为
（０．５～１．０）μｍ×（１．０～３．０）μｍ，圆形末端，单生或对生。革兰氏阴性菌。以周生鞭毛运动。可发酵，兼性厌
氧。最适生长温度为２７～３０℃，最高生长温度４０℃。氧化酶阴性，接触酶阳性。可降解蔗糖，水解明胶和果胶，
不能降解淀粉。可于５％的ＮａＣｌ中微弱生长。可产生吲哚。可使马铃薯软腐，对红霉素过敏。卵磷脂酶和磷酸
酶阳性，脲酶阴性。可以从葡萄糖中产气。不能从麦芽糖、α甲基Ｄ葡萄糖苷、乳糖、卫矛醇、海藻糖和帕拉金糖
产酸。此属细菌可引起植物病害类型有，疫病，溃疡，顶梢枯死，叶斑，萎蔫病，植物组织变色，根腐，茎腐，冠腐和
果实腐烂等。Ｐｉｅｒｃｅ和 ＭｃＣａｉｎ［１５］报道，该菌不能在苜蓿种子上存活超过１４ｄ。菊欧文氏菌在菊花（犇犲狀犱狉犪狀
狋犺犲犿犪犿狅狉犻犳狅犾犻狌犿）上造成的菊基腐病是我国重要检疫性病害之一。
１．３　冠瘿病
症状：冠瘿病又称根癌病，主要发生于苜蓿的根部。在苜蓿较大的次生根上形成分枝的瘤状结构。在交叉的
瘿上，有褐色不规则结构的大片区域。
病原：根癌土壤杆菌（犃．狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊），有３个变种［２３］。菌体杆状，单个或成对排列。不形成芽孢。革兰氏
阴性，以１～６根周毛运动。严格好氧，以氧分子为末端电子受体。最适生长温度为２５～２８℃。菌落通常凸起。
全缘光滑，无色素至浅灰黄色。接触酶阳性，通常氧化酶和脲酶阳性。可产生３酮基乳糖。可广泛利用碳水化
合物、有机酸盐和氨基酸作为碳源，但不能利用纤维素、淀粉、琼脂糖和半乳糖等。未见种传报道，多为土壤传播。
此属细菌多可以引致植物细胞的自发增生而成为肿瘤细胞［２３］。
１．４　细菌性冠腐和根腐综合病
症状：细菌性冠腐和根腐综合病可为害各个生长期的苜蓿植株。该病初发生时，在种植地零散地出现。感病
植株的一系列病变为，黄化，褪绿，并表现为萎蔫状，进而萎蔫，坏死，植株矮化和叶子畸形。
病原：苜蓿细菌性冠腐和根腐综合病的病原为绿黄假单胞菌 （犘．狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪）。菌体杆状，大小为（０．５～
１．０）μｍ×（１．５～５．０）μｍ。革兰氏阴性，极生鞭毛运动。严格需氧菌，进行严格的呼吸型代谢，以氧为最终电子
受体。５％蔗糖营养琼脂上，菌落常黄色；在含酵母膏和甘油培养基上，菌落为橄榄绿到金黄色。有些菌株可产生
蓝色色素。氧化酶阴性。可以利用酒石酸盐，丙酮酸酯和山梨醇；不能利用棉籽糖，延胡索酸酯戊二酸盐和蔗糖。
此菌在高湿和下雨条件下最为活跃，可随雨流传播，多为植物致病菌。
１．５　细菌性叶斑病和猝倒病
症状：细菌性叶斑病主要发生于叶片上。初为小而圆的水渍状病斑、黄色、分散；后期呈不规则形，淡褐色。
叶片背面水渍状边缘明显。病部中心干枯呈纸状，有发亮的淡黄至棕褐色半透明菌膜。此病害引起植株严重落
１３３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
叶，易被真菌病害病斑掩盖。
症状：猝倒病主要发生于苜蓿生长的苗期。幼苗大多从茎基部感病，初为水渍状，并很快扩展、溢缩变细如
“线”样，病部不变色或呈黄褐色，病势发展迅速，在子叶仍为绿色、萎蔫前即从茎基部（或茎中部）倒伏而贴于床
面。
病原：苜蓿细菌性叶斑和猝倒病的病原均为野油菜黄单胞菌苜蓿致病变种（犡．犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲）［１６］。
菌体杆状，大小为（０．４～０．６）μｍ×（０．８～２．０）μｍ，单生，对生或呈短链状。革兰氏阴性，单极生鞭毛运动。严
格需氧菌，进行严格的呼吸型代谢，以氧为最终电子受体。营养琼脂上，菌落常黄色，光滑呈奶油状，类粘蛋白或
具粘性。其色素系具特色的溴化芳基多烯酶，一般称之为黄单胞菌色素（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄｉｎｓ）。没有硝化作用或反
硝化作用的发生。常可产生Ｈ２Ｓ，不产吲哚。可存活于植物种子。此属细菌多为植物致病菌。
１．６　细菌性茎疫病
症状：细菌性茎疫常发生于早春直至第１个收获期，通常在茎的第５节以下发病。发病初期水渍状并且在叶
茎连接点、叶中脉和叶柄处褪绿。病斑成线形，由淡褐色转褐色并最终呈黑色。病斑逐渐向下发展，延至老根中。
细菌渗出物可出现在叶表面，与病处接触可使叶子褪色且死亡。发病茎秆薄而脆，普遍短于正常植株［１４，１９］。
病原：丁香假单胞菌萨氏致病变种（犘．狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲）。菌体杆状，大小为（０．７～１．２）μｍ×１．５
μｍ。没有菌柄也没有鞘。不产芽孢。革兰氏阴性，以数根极毛运动。需氧，进行严格的呼吸型代谢，以氧为最终
电子受体。不产生黄单胞菌素。不能在酸性条件下生长。在营养琼脂上，圆形和白色的菌落缓慢生长，直径２～
３ｍｍ。氧化酶阴性。从蔗糖产果聚糖，不能使果胶凹陷。不能积累聚β羟基丁酸盐为储藏物质。不能反硝化，
精氨酸双水解酶阴性。能在甘露醇、甜菜碱、肌醇、山梨糖醇、胡芦巴碱、奎尼酸盐、赤藓糖醇和Ｌ乳酸盐中生长。
不能在Ｌ酒石酸盐、氨基苯甲酸盐和高丝氨酸中生长。该属细菌可存活于植物种子，存在多种致病变种，对多种
植物致病。
１．７　细菌性萎蔫病
症状：此病明显的症状是植株矮化，丛枝，颇似由病毒引致的“鬼帚病”。但在水肥等条件不良，牧草普遍长势
欠佳时，该症状就不明显。发病植株叶绿素含量下降［２４］，故色泽浅淡，多呈浅绿，黄色，天气炎热时或呈淡褐色。
病株叶片细小，卷缩。天气干热时，株顶萎垂、干枯，甚至全株枯萎。刈割后再生草的矮化尤其显著。每刈之后，
植株愈益纤弱。病株常在越冬时死亡。以致草地逐年稀疏，牧草甚或绝迹。
病株的根部和茎部的维管束发生病变。主根和侧根的木质部变为黄色，橙色，褐色，有时还杂以深色斑点。
病变在横切面上极为明显。此病所引致的木质部变色，不限于根颈和主根上部，可一直延伸到根梢。与冻害引致
的木质部变色有所区别。病根表面有时出现棕红色或褐色溃疡状病斑。由于根、茎维管束系统破坏，病株地上部
分常部分或全部凋萎。
病原：密执安诡异棍状杆菌（犆．犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犲ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊）。菌体杆状，末端圆形，单生或成对，但不
成链状。大小为（０．４～０．５）μｍ×（０．７～１．０）μｍ。无鞭毛，不运动。不产芽孢。革兰氏阳性。琼脂培养基上的
菌落圆形，扁平或稍隆起，光滑，具光泽，粘稠。在马铃薯上或马铃薯蔗糖琼脂培养基上渐变为蓝色或淡紫色［２４］。
可发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖和半乳糖，但不产气。不产生 Ｈ２Ｓ和氨。不能还原硝酸盐，缓慢水解淀粉。最适生长
温度２３℃，致死温度５１～５２℃。此菌有很多菌系，毒力差异很大。可在种子和植物残体中长期存活并传播。密
执安棍状杆菌存在多个亚种，可致使多种农作物萎蔫病。
１．８　矮化病
症状：该病最明显的症状为植株矮化。病株常有蓝绿色小叶和短小的茎。主根大小正常，但切开后，维管束
黄化，伴随着暗色条状死组织。在新感染的植株中黄化一般出现在皮下的一圈。病株矮化并最终死亡。
病原：苛求木杆菌（犡．犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪）。该菌对营养条件有严格要求。革兰氏阴性，为木质部栖息菌。菌体杆
状，单生，大小为（０．２５～０．５）μｍ×（１．０～４．０）μｍ。不运动。需氧，进行严格的呼吸型代谢，以氧为最终电子受
体。菌落奶油色至白色。凸起呈垫状，光滑，整个边缘呈乳白光和脐状凸起粗糙的具波纹状的边缘。氧化酶阴
性，接触酶阳性。最适生长温度２６～２８℃，最适ｐＨ值６．５～６．９。苛求木杆菌在葡萄（犞犻狋犻狊狏犻狀犻犳犲狉犪）上可造成
严重的Ｐｉｅｒｃｅ’ｓ病。该病原未见种传报道。
２３３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
２　病害分布及寄主范围
苜蓿细菌性病害在世界多个国家不同程度的危害苜蓿的生产，并且伴随苜蓿的各个不同生长期。苜蓿芽腐
烂病，猝倒病，茎疫病，叶斑病，冠瘿病，冠腐和根腐综合病，苜蓿矮化病以及在苜蓿３年以上种植区可以发生毁
灭性危害的细菌性萎蔫病。所以，详细了解苜蓿细菌性病害的分布有助于我们综合评价引进苜蓿品种和选择苜
蓿产地。苜蓿细菌性病害广泛分布于世界各个苜蓿种植区（表１），主要集中在美洲，欧洲和亚洲。大部分病原菌
表１　苜蓿细菌性病害的分布及其病原寄主范围
犜犪犫犾犲１　犇犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀犪狀犱犺狅狊狋狉犪狀犵犲狅犳犪犾犳犪犾犳犪犫犪犮狋犲狉犻犪犾犱犻狊犲犪狊犲狊
苜蓿细菌性病害Ａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅ 分布Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ 病原寄主范围 Ｈｏｓｔｏｆｐａｔｈｏｇｅｎ
细菌性芽萎蔫病（犈．狆犲狉狊犻犮犻狀犪）Ｂａｃ
ｔｅｒｉａｌｓｐｒｏｕｔｗｉｌｔ
中国兰州Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ［１８］． 苜蓿 犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，菜豆 犘犺犪狊犲狅犾狌狊狏狌犾犵犪狉
犻狊［２５］，豌豆犘犻狊狌犿狊犪狋犻狏狌犿［２６］．
细菌性芽腐烂病（犘．犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻）
Ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｒｏｕｔｒｏｔ
美国加利福尼亚Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ａｍｅｒｉｃａ，贝兹维尔Ｂａｔｅｓ
ｖｉｌｅ［１７］．
苜蓿犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，菊犇犲狀犱狉犪狀狋犺犲犿犪犿狅狉犻犳狅
犾犻狌犿［２７］．
冠瘿病（犃．狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊）Ｃｒｏｗｎｇａｌ 广泛分布 Ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ［２０］． 广泛寄生 Ｗｉｄｅｒａｎｇｅ［１６，２３］．
冠腐和根腐综合病（犘．狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪）
Ｃｒｏｗｎａｎｄｒｏｏｔｒｏｔｃｏｍｐｌｅｘ
未知Ｕｎｋｎｏｗｎ［１７］． 苜蓿 犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，油菜 犅狉犪狊狊犻犮犪犮犪犿狆犲狊
狋狉犻狊［２８］，豌豆 犘犻狊狌犿狊犪狋犻狏狌犿［２９］，婆婆纳 犎犲犫犲
ｓｐｐ．［３０］，西瓜犆犻狋狉狌犾犾狌狊犾犪狀犪狋狌狊［３１］，猕猴桃犃犮
狋犻狀犻犱犻犪ｓｐｐ．［３２］，洋葱 犃犾犾犻狌犿犮犲狆犪［３３］，金盏花
犆犪犾犲狀犱狌犾犪狅犳犳犻犮犻狀犪犾犻狊［３４］．
细菌性茎疫病（犘．狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔
狉犻狀犵犪犲）Ｂａｔｅｒｉａｌｓｔｅｍｂｌｉｇｈｔ
美国西北部ＮｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎｏｆＡｍｅｒｉｃａ［１７］，伊朗西部
ＷｅｓｔｏｆＩｒａｎ［１４］，中国东北（沙尔图）畜牧场Ａｆａｒｍｉｎ
ｎｏｒｔｈｅａｓｔｏｆＣｈｉｎａ［１９］．
苜蓿犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，豇豆犞犻犵狀犪狌狀犵狌犻犮狌犾犪狋犪［１６］，
蚕豆犞犻犮犻犪犳犪犫犪［１６］，丁香犛狔狉犻狀犵犪ｓｐｐ．［１６］，三叶草
犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊［１６］，小麦犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿［１６］，
葡萄犞犻狋犻狊狏犻狀犻犳犲狉犪［１６］，高粱犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉［１６］，
梅花犘狉狌狀狌狊犿狌犿犲［１６］，梨犘狔狉狌狊ｓｐｐ．［３５］，紫丁香
犛狔狉犻狀犵犪狅犫犾犪狋犪［３６］，哈密瓜犆狌犮狌犿犻狊犿犲犾狅ｖａｒ．狊犪犮
犮犺犪狉犻狀狌狊［３７］，西红柿犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿［３８］，
火棘犘狔狉犪犮犪狀狋犺犪犮狅犮犮犻狀犲犪［３９］．
细菌性叶斑病（犡．犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．
犪犾犳犪犾犳犪犲）Ｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔ；细菌性
猝倒病（犡．犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲）
Ｄａｍｐｉｎｇｏｆｆ
美国堪萨斯 Ｋａｎｓａｓ，Ａｍｅｒｉｃａ［４０］，澳大利亚昆士兰
Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ，Ａｕｓｔｒｉａ［４１］，中国江苏ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，
Ｃｈｉｎａ［１９］，北 京 Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ［４２］，新 疆 Ｘｉｎｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ［７，４３］，及湿润温暖的种植区 Ｗｈｅｒｅｖｅｒ
ａｌｆａｌｆａｉｓｇｒｏｗｎｕｎｄｅｒｗａｒｍ，ｗｅｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［１７］．
苜蓿 犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，三 叶 草 犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲
狆犲狀狊［１６］．
细菌 性 萎 蔫 病 （犆．犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犲
ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊）Ｂａｔｅｒｉａｌｗｉｌｔ
美国 Ａｍｅｒｉｃａ，加拿大Ｃａｎａｄａ，墨西哥 Ｍｅｘｉｃｏ，捷克
Ｃｚｅｃｈ，希腊 Ｇｒｅｅｃｅ，爱尔兰Ｉｒｅｌａｎｄ，意大利Ｉｔａｌｙ，波
兰Ｐｏｌａｎｄ，罗马尼亚Ｒｏｍａｎｉａ，俄罗斯 Ｒｕｓｓｉａｎ，英国
Ｅｎｇｌａｎｄ，南斯拉夫 Ｙｕｇｏｓｌａｖｉａ，突尼斯 Ｔｕｎｉｓｉａ，南非
ＳｏｕｔｈＡｆｒｉｃａ，巴西Ｂｒａｚｉｌ，智利Ｃｈｉｌｅ，沙特阿拉伯Ｓａ
ｕｄｉＡｒａｂｉａ，土库曼斯坦 Ｔｕｒｋｍｅｎｉｓｔａｎ，澳大利亚
Ａｕｓｔｒａｌｉａ，新西兰ＮｅｗＺｅａｌａｎｄ，印度Ｉｎｄｉａ［４４］．
苜蓿犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪．
矮化病（犡．犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪）Ｄｗａｒｆ 美国（加利福尼亚州，乔治亚州等）Ａｍｅｒｉｃａ（Ｃａｌｉｆｏｒ
ｎｉａ，Ｇｅｏｒｇｉａ，犲狋犪犾．）［１７］．
苜蓿犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪，桑树犕狅狉狌狊犪犾犫犪［４５］，葡萄
犞犻狋犻狊狏犻狀犻犳犲狉犪［４６］，夹竹桃犖犲狉犻狌犿犻狀犱犻犮狌犿［４７］，桃
树犃犿狔犵犱犪犾狌狊狆犲狉狊犻犮犪［４８］，咖啡犆狅犳犳犲犪ｓｐｐ．［４９］，
杏仁 犃犿狔犵犱犪犾狌狊犮狅犿犿狌狀犻狊［５０］，橡 树 犙狌犲狉犮狌狊
狆犪犾狌狊狋狉犻狊［５１］，鳄梨 犘犲狉狊犲犪犪犿犲狉犻犮犪狀犪［５２］，柑 橘
犆犻狋狉狌狊狉犲狋犻犮狌犾犪狋犪［５３］．
３３３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
最适的生长条件一致，２２～２７℃，相对湿度１００％等，但不同病害的病原对寄主生长部位要求存在差异，如欧文氏
菌属的两种菌寄生于苜蓿芽上，根癌土壤杆菌引起根部细胞增生，苛求木杆菌为木质部栖息菌，对生境要求苛刻
等，这可能与某些组织具有特殊的营养物质有关。因此同一病原可能在不同作物上表现出不同的症状，也可能在
不同地理环境的同一植物上表现出不同危害现象。阴性致病细菌的寄主范围比较广泛，而诡异密执安棒状杆菌
寄主窄，目前仅见它侵染苜蓿。各致病菌的寄主范围详见表１。
３　病原细菌常用鉴定方法
苜蓿细菌性病害病原的分类结合了表型特征和遗传学特征鉴定手段，如研究较深入的密执安诡异棍状杆菌
（犆．犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犲ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊）［５４］。表型是指由于基因与环境因素相互作用所引起的，在细胞、器官和整
体水平上可检测到和观察到的特征。细菌的表型分类依据主要为细菌的形态学特征和不同实验条件的生长能力
及代谢特征等，可区分不同的菌种，但不能区分不同的菌株［５５］。遗传型信息主要为菌体内核酸（ＤＮＡ和ＲＮＡ），
当前较为常用的是ｒＲＮＡ测序，它是细菌分类的系统发育框架之基础。此技术同样存在缺点，即同种ｒＲＮＡ操
纵子是多拷贝的，不同拷贝间１６ＳｒＲＮＡ有０～５％的差异，不同菌株间亦有０～１６％的差异，因此在评价结果时
应谨慎处理。应用多相鉴定方法可使鉴定结果更为可靠，是现代细菌分类中的主流。在此我们简要地列出了细
菌分类学中常用的分类依据和特征（表２）。
表２　细菌分类学中应用的类别和特征［５６］
犜犪犫犾犲２　犆犪狋犲犵狅狉犻犲狊犪狀犱犮犺犪狉犪犮狋犲狉狊犪狆狆犾犻犲犱犻狀犫犪犮狋犲狉犻犪犾狊狔狊狋犲犿犪狋犻犮狊［５６］
类别Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ 实例Ｅｘａｍｐｌｅｓ
培养特性Ｃｕｌｔｕｒａｌ 菌落形态Ｃｏｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；菌落的颜色Ｃｏｌｏｒｏｆｃｏｌｏｎｉｅｓ；子实体Ｆｒｕｉｔｉｎｇｂｏｄｉｅｓ；菌丝 Ｍｙｃｅｌｉａ．
形态特性 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ 细胞形态Ｃｅｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；细胞大小Ｃｅｌｓｉｚｅ；运动性 Ｍｏｔｉｌｉｔｙ；鞭毛类别Ｆｌａｇｅｌａｔｉｏｎｔｙｐｅ；储存物质Ｒｅｓｅｒｖｅｍａｔｅｒｉ
ａｌｓ；革兰氏染色Ｇｒａｍｓｔａｉｎ；抗酸染色Ａｃｉｄｆａｓｔｓｔａｉｎ．
生理特性Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ 温度范围Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒａｎｇｅ；ｐＨ范围ｐＨｒａｎｇｅ；耐盐性Ｓａｌｉｎｉｔｙｔｏｌｅｒａｎｃｅ．
生化特征Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ 碳源利用Ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ；糖类的氧化作用Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ；糖类发酵Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒａｔｅｓ；酶Ｅｎｚｙｍｅｐｒｏｆｉｌｅ．
抑制测试Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｔｅｓｔｓ 选择性培养基Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｍｅｄｉａ；抗生素Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ；染料Ｄｙｅｓ．
血清学特征Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ 凝集作用Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ；免疫扩散Ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ．
化学分类Ｃｈｅｍｏｔａｘｏｎｏｍｉｃ 脂肪酸Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓ；极性油脂Ｐｏｌａｒｌｉｐｉｄｓ；枝菌酸 Ｍｙｃｏｌｉｃａｃｉｄｓ；脂多糖成分Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；脂多糖
聚丙酰胺凝胶电泳ＰＡＧＥｏｆｌｏｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；细胞壁二氨基酸Ｃｅｌｗａｌｄｉａｍｉｎｏａｃｉｄｓ；细胞壁氨基酸成分Ｃｅｌｗａｌ
ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；全细胞糖 Ｗｈｏｌｅｃｅｌｓｕｇａｒｓ；细胞壁糖Ｃｅｌｗａｌｓｕｇａｒｓ；细胞色素Ｃｅｌｕｌａｒｐｉｇｍｅｎｔｓ；醌类系
统Ｑｕｉｎｏｎｅｓｙｓｔｅｍｉ；多胺含量Ｐｏｌｙｍｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ；全细胞蛋白质聚丙酰胺凝胶电泳 ＷｈｏｌｅｃｅｌｐｒｏｔｅｉｎＰＡＧＥ．
基因型特征Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ 脱氧核糖核酸碱基比［（Ｇ＋Ｃ）％］ＤＮＡｂａｓｅｒａｔｉｏ（Ｇ＋Ｃｃｏｎｔｅｎｔ）；随机扩增脱氧核糖核酸多态性分析Ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ（ＲＡＰＤ）；限制性片段长度多态性分析Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＲＦＬＰ）；脱氧核糖核酸
片段脉冲凝胶电泳Ｐｕｌｓｅｄｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ）ｏｆＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓ；脱氧核糖核酸探针ＤＮＡｐｒｏｂｅｓ．
系统发育Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ 脱氧核糖核酸与脱氧核糖核酸杂交ＤＮＡ：ＤＮＡｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；脱氧核糖核酸与核蛋白核糖核酸杂交ＤＮＡ：ｒＲＮＡｈｙ
ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；１６ＳｒＲＮＡ序列１６ＳｒＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅ；２３ＳｒＲＮＡ序列２３ＳｒＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅ；ＡＴＰ合成酶的β亚基序列Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅβｓｕｂｕｎｉｔｏｆＡＴＰｓｙｎｔｈａｓｅ；伴侣蛋白序列ＧｒｏＥＬ（Ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ）ｓｅｑｕｅｎｃｅ．
　下划线表示应用在苜蓿细菌性病害病原的表型鉴定中的类别。Ｃｈａｒａｃｔｅｒｓｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｔｔｏａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｓａｒｅｓｈｏｗｎｕｎｄｅｒｌｉｎｅ．
３．１　表型特征鉴定
细菌的表型分类技术包括形态学特征、生理生化特征、抗生素的敏感性、噬菌体分型、血清学分析、蛋白质分
析等，在细菌分类中具有重要意义。形态学特征始终被用作细菌分类和鉴定的重要依据之一，而且也往往是系统
发育相关性的一个标志。在细菌系统分类中众多传统的生化、营养和生理特征测试业已建立，例如氧化发酵［５７］、
４３３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
细胞色素氧化酶［５８６０］、接触酶［６１］、氨肽酶［６２６３］和ＫＯＨ测试［６４６６］等试验。一般情况下这些试验是在固体或液体
培养基中进行的，耗时耗力，常常也难以标准化和诠释［５５］。但是值得强调的是传统的这些测试存在重要意义，尤
其是这些表型特征对于分类单位的划定具有重要作用。实际上，在现代细菌分类中，任何能稳定地反映细菌种类
特征的资料都有分类学意义，都可以作为分类鉴定的依据。在苜蓿细菌性病害病原的鉴定中形态学特征等表型特
征仍然扮演着不可或缺的角色。现将几种苜蓿细菌性病害病原的表型鉴定特征列出，以飨植物病理工作者（表３）。
表３　几种苜蓿细菌性病害病原鉴定特征（犪）
犜犪犫犾犲３　犘犺犲狀狅狋狔狆犻犮犮犺犪狉犪犮狋犲狉狊狅犳狆犪狋犺狅犵犲狀狊狅犳犪犾犳犪犾犳犪犫犪犮狋犲狉犻犪犾犱犻狊犲犪狊犲狊（犪）
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
菊欧文氏菌
犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻（ｂ）
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
桃色欧文氏菌
犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀犪（ｃ）
最适温度Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｐｔｉｍｕｍ（℃） ２７～３０ 粉红色素Ｐｉｎｋｄｉｆｆｕｓｉｂｌｅｐｉｇｍｅｎｔ ＋
接触酶Ｃａｔａｌａｓｅ ＋ 氧化酶Ｏｘｉｄａｓｅ －
休加利夫森 ＨｕｇｈＬｅｉｆｓｏｎ ＋ 接触酶Ｃａｔａｌａｓｅ ＋
生长于３７℃ Ｇｒｏｗｔｈａｔ３７℃ ＋ 硝酸盐还原Ｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ＋
蔗糖降解Ｓｕｃｒｏｓｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ＋ ＶＰ反应ＶＰｒｅａｃｔｉｏｎ ＋
生长于５％ ＮａＣｌＧｒｏｗｔｈｉｎ５％ ＮａＣｌ Ｗｅａｋ＋ 七叶灵水解 Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆａｅｓｃｕｌｉｎ ＋
产吲哚Ｉｎｄｏｌｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＋ 利用柠檬酸Ｃｉｔｒａｔｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ＋
卵磷脂酶Ｌｅｃｉｔｈｉｎａｓｅ ＋ 产吲哚Ｉｎｄｏｌｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ －
磷酸酶Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＋ 产生乙偶姻Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｏｉｎ ＋
红霉素Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ 精氨酸脱羧酶Ａｒｇｉｎｉｎｅｄｉｈｙｄｒｏｌａｓｅ －
马铃薯软腐Ｐｏｔａｔｏｓｏｆｔｒｏｔ ＋ 产酸Ａｃｉｄｆｒｏｍ：
产气自葡萄糖Ｇａｓｆｒｏｍｇｌｕｃｏｓｅ ＋ 核糖Ｄｒｉｂｏｓｅ ＋
果胶降解Ｐｅｃｔａｔｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ＋ 麦芽糖 Ｍａｌｔｏｓｅ ＋
明胶水解Ｇｅｌａｔｉｎｌｉｑｕｅｆａｃｔｉｏｎ ＋ 蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ＋
脲酶Ｕｒｅａｓｅ － 阿拉伯糖Ｌａｒａｂｉｎｏｓｅ －
产酸Ａｃｉｄｆｒｏｍ： 卫矛醇Ｄｕｌｃｉｔｏｌ －
麦芽糖 Ｍａｌｔｏｓｅ － 甘油Ｇｌｙｃｅｒｏｌ －
α甲基Ｄ葡萄糖苷αＭｅｔｈｙｌＤｇｌｕｃｏｓｉｄｅ － 来苏糖Ｌｙｘｏｓｅ －
乳糖Ｌａｃｔｏｓｅ － 淀粉Ｓｔａｒｃｈ －
海藻糖Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ －
卫矛醇Ｄｕｌｃｉｔｏｌ －
帕拉金糖Ｐａｌａｔｉｎｏｓｅ －
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
密执安诡异棍状杆菌　
犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊犻　
ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊（ｄ）
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
丁香假单胞菌
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊
狊狔狉犻狀犵犪犲（ｅ）
葡萄糖氧化发酵Ｏ／Ｆｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｇｌｕｃｏｓｅ Ｏ 色素Ｐｉｇｍｅｎｔ：
接触酶Ｃａｔａｌａｓｅ ＋ 脓青素（绿脓菌素）Ｐｙｏｃｙａｎｉｎ －
细胞色素氧化酶Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｏｘｉｄａｓｅ － 绿针菌素Ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｎ －
七叶灵水解Ａｅｓｃｕｌｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ＋ 吩嗪单羧酸盐Ｐｈｅｎａｚｉｎｅ１ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ －
马铃薯淀粉水解 Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｐｏｔａｔｏｓｔａｒｃｈ ＋ 氧化酶Ｏｘｉｄａｓｅ －
产酸Ａｃｉｄｆｒｏｍ： ＰＨＢ积累Ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ －
甘露糖 Ｍａｎｎｏｓｅ ＋ 从蔗糖产果聚糖Ｌｅｖａｎｆｒｏｍｓｕｃｒｏｓｅ ＋
５３３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
　续表３　Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
密执安诡异棍状杆菌　
犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊犻　
ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊（ｄ）
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
丁香假单胞菌
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊
狊狔狉犻狀犵犪犲（ｅ）
甘露醇 Ｍａｎｎｉｔｏｌ － 果胶凹陷Ｐｅｃｔａｔｅｇｅｌｐｉｔｔｉｎｇ －
鼠李糖Ｒｈａｍｎｏｓｅ － β葡糖苷酶βｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ －
半乳糖Ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋ 胞外ＰＨＢ水解Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ －
木糖Ｘｙｌｏｓｅ ＋ 反硝化Ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ －
山梨糖醇Ｓｏｒｂｉｔｏｌ － 精氨酸双水解酶Ａｒｇｉｎｉｎｅｄｏｕｂｌｅｈｙｄｒｏｌａｓｅ －
利用Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ： 利用Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ：
乙酸钠Ｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅ － 葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ ＋
琥珀酸钠Ｓｏｄｉｕｍｓｕｃｃｉｎａｔｅ － 甘露醇 Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋
乳酸Ｌａｃｔａｔｅ － 甜菜碱Ｂｅｔａｉｎｅ ＋
生长于６％ＮａＣｌＧｒｏｗｔｈａｔ６％ＮａＣｌ － 肌醇Ｉｎｏｓｉｔｏｌ ＋
从蛋白胨产 Ｈ２ＳＨ２Ｓｆｒｏｍｐｅｐｔｏｎｅ － 山梨糖醇Ｓｏｒｂｉｔｏｌ ＋
甲基红 Ｍｅｔｈｙｌｒｅｄ ＋ 赤藓糖醇Ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ ＋
胡芦巴碱Ｔｒｉｇｏｎｅｌｉｎｅ ＋
奎尼酸盐Ｑｕｉｎａｔｅ ＋
Ｌ乳酸Ｌｌａｃｔａｔｅ ＋
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
野油菜黄单胞菌
犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊狋狉犻（ｅ）　
特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
苛求木杆菌
犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪（ｅ）
鞭毛根数Ｎｕｍｂｅｒｏｆｆｌａｇｅｌａ １ 最适温度Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｐｔｉｍｕｍ（℃） ２８
硝酸盐还原Ｎｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ － 硝酸盐还原Ｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎ －
赖氨酸脱羧酶Ｌｙｓｉｎｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ － 七叶灵水解Ｅｓｃｕｌｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ －
产黄单胞菌色素犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪犱犻狀狊ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＋ 抗生素敏感性Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏ：
明胶水解Ｇｅｌａｔｉｎｌｉｑｕｅｆａｃｔｉｏｎ ｄ 氨苄青霉素Ａｍｐｉｃｉｌｉｎ ＋
七叶灵水解Ｅｓｃｕｌｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ＋ 青霉素ＰｅｎｉｃｉｌｉｎＧ －
淀粉水解Ｓｔａｒｃｈｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｄ 卡那霉素Ｋａｎａｍｙｃｉｎ ＋
牛奶解朊 Ｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎ ＋ 链霉素Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ －
由胨产 Ｈ２ＳＨ２Ｓｆｒｏｍｐｅｐｔｏｎｅ ＋ 优势脂肪酸Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｆａｔｔｙａｃｉｄ：
最高生长温度 Ｍａｘｉｍｕｍｇｒｏｗｔｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃） ３５～３９ Ｃ１５：０ａｎｔｅｉｓｏ ＋
产酸Ａｃｉｄｆｒｏｍ： Ｃ１６：１ ＋
阿拉伯糖Ａｒａｂｉｎｏｓｅ ＋ Ｃ１７：０ ＋
甘露糖 Ｍａｎｎｏｓｅ ＋ 羟基脂肪酸 Ｈｙｄｒｏｘｙｆａｔｔｙａｃｉｄ：Ｃ１０：０２ＯＨ ＋
半乳糖Ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋
海藻糖Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ＋
纤维二糖Ｃｅｌｏｂｉｏｓｅ ＋
果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ＋
　（ａ）：＋，≥９０％菌株为阳性；－，≥９０％菌株为阴性；ｄ，１１％～８９％菌株为阳性；Ｗｅａｋ＋，≥９０％菌株为弱阳性；Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，≥９０％菌株为过敏。＋，
ｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒａｌｏｒｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｅｓｔｅｄ；－，ｎｅｇａｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒａｌｏｒｌｅｓｓｔｈａｎ１０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｅｓｔｅｄ；ｄ，ｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎ
ｆｏｒ１１％ｔｏ８９％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｅｓｔｅｄ；Ｗｅａｋ＋，ｗｅａｋｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒａｌｏｒｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｅｓｔｅｄ；Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒ
ａｌｏｒｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｅｓｔｅｄ．（ｂ）：资料来自Ｐｉｅｒｃｅ和 ＭｃＣａｉｎ［１５］。ＤａｔａｆｒｏｍＰｉｅｒｃｅａｎｄＭｃＣａｉｎ［１５］．（ｃ）：资料来自Ｚｈａｎｇ和 Ｎａｎ［１８］。
ＤａｔａｆｒｏｍＺｈａｎｇａｎｄＮａｎ［１８］．（ｄ）：资料来自ＯＥＰＰ／ＥＰＰＯＢｕｌｅｔｉｎ（４０：３５３－３６４，２０１０）［５４］和《常见细菌系统鉴定手册》［２３］。ＤａｔａｆｒｏｍＯＥＰＰ／ＥＰ
ＰＯＢｕｌｅｔｉｎ（４０：３５３－３６４，２０１０）［５４］ａｎｄｆｒｏｍＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｏｍｍｏｎＢａｃｔｅｒｉａ［２３］．（ｅ）：资料来自《Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｔｅ
ｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ》（ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ）（Ｖｏｌｕｍｅ２，ＰａｒｔＢ）［６７］和《常见细菌系统鉴定手册》［２３］。ＤａｔａｆｒｏｍＢｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
（ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌｕｍｅ２ＰａｒｔＢ［６７］ａｎｄＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｏｍｍｏｎＢａｃｔｅｒｉａ［２３］．
６３３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
３．２　１６ＳｒＲＮＡ序列分析
２０世纪７０年代初，Ｗｏｅｓｅ和Ｃｏｗｏｒｋｅｒｓ开始将１６ＳｒＲＮＡ序列分析应用于原核生物的系统发育［５５］。由于
１６ＳｒＲＮＡ在生物进化过程中变异频率较低，大小适中（约１．５ｋｂ），既含有保守序列又含可变序列，携带了足够
的遗传信息，而且其序列变化与进化距离相适应，因此是合适的系统发育指标，已成为细菌分类和鉴定的一个有
力工具［５４，６８］。１６ＳｒＲＮＡ序列主要通过寡核苷酸编目、克隆序列的测定、反转录直接测序、对ＰＣＲ扩增产物的直
接测序等方法获得后，用一些必要的计算机分析软件将所得序列与基因数据库中序列进行同源性比较，进而绘制
系统进化树［６９７２］。１６ＳｒＤＮＡ序列分析鉴定方法已在苜蓿细菌性萎蔫病菌的研究中得到应用［５４，７３］。
３．３　Ｂｉｏｌｏｇ自动鉴定系统
Ｂｉｏｌｏｇ自动快速微生物鉴定系统是１９８４年美国安普中心生产的，此系统的商品化开创了细菌鉴定史上新的
一页。它的鉴定原理为微生物利用碳源进行新陈代谢时，产生的酶能使显色物质（如ＴＶ：ＴｅｔｒａｚｏｌｉｕｍＶｉｏｌｅｔ；
ＩＮＴ：ρｉｏｄｏｎｉｔｒｏｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍＶｉｏｌｅｔ）发生颜色反应；微生物利用碳源代谢不断增殖，浊度也会发生改变；Ｂｉｏｌｏｇ基
于以上原理建立了每种微生物的特征代谢指纹数据，即与微生物种类相对应的数据库，检测时通过智能软件将待
鉴定微生物的碳源指纹图谱与数据库参比，即可得出鉴定结果。它的核心技术为鉴定板和数据库。革兰氏阴性
（ＧＮ）和革兰氏阳性（ＧＰ）鉴定板中含９５种不同碳源、胶质和四唑类显色物质。根据２００６年的数据库显示，Ｂｉ
ｏｌｏｇ能鉴定革兰氏阴性菌５２４种（１０６个属）和革兰氏阳性菌３５１种（５５个属），包括几乎全部人类病原菌，１９０种
动、植物病原菌以及部分与环境有关的细菌等。Ｂｉｏｌｏｇ技术具有数据库容量大，种类齐全；鉴定结果准确率高；鉴
定周期短，最快４ｈ出结果；操作简单，对操作者技术要求不高等特点。已在临床、食品、植物病理、微生物生态、
兽医等领域得到广泛应用［７４７５］。
４　防治方法
４．１　植物检疫
植物检疫是一项传统植物保护措施，苜蓿种带病原物的检疫，是病害防治的第一道卡，应给予高度重视。植
物检疫其内容涉及植物保护中的预防、杜绝或铲除的各个方面，也是最有效和最经济，而且是一种具有法律强制
性的一项具体措施。细菌性萎蔫病是苜蓿的一种毁灭性病害，在美国、加拿大、澳大利亚、新西兰和日本等世界各
地均有发生。苜蓿细菌性萎蔫病可以随种子和植物残体传播，是我国出入境进出口植物检疫检验病害。菊欧文
氏菌在菊花上造成的菊基腐病亦是我国重要检疫性病害之一。本文综述的苜蓿细菌性病害，希望能在某一侧面
为国内苜蓿细菌病害的检疫工作提供有益参考。
４．２　利用抗病或耐病品种
抗病或耐病品种的利用在牧草病害管理中是经济且有效的措施，其在牧草病害可持续管理体系中居于核心
与主导地位［３］。培育抗病品种，更是防治苜蓿细菌性病害的主要方法，如耐寒品种可减少霜害，从而减少侵染率
进而降低细菌性茎疫病发生；维管束数目较少，导管较短，皮层较厚的苜蓿品种较抗细菌性萎蔫病。
４．３　农业防治
细菌的繁殖与水分有着密切关系，水分是细菌流动传播的载体亦是菌体大量繁殖的供体。苜蓿苗期细菌性
病害的防治应注意采获种子的前期晾晒，注重种子的储存环境，阴凉通风不利于细菌的滋生，注重保洁，用０．５％
的次氯酸钠或次氯酸钙溶液浸泡２ｈ有助防治苜蓿芽细菌腐烂病。合理的田间管理措施亦能有效防止病害侵染
和流行传播。比如：于春季播种能有效地防治细菌性叶斑病，在霜冻期后收获或刈割，可减轻细菌性茎疫病侵染；
提高土壤肥力，尤其是增加磷钾肥，可以增加苜蓿对此病的抗性，使损失减轻；注意地下害虫的防治；刈割活动，应
在天气干燥，牧草表面无液态水时进行；新播草地应远离老龄草地，并且安排在老龄草地的上游或地势较高；病情
较重的草地，应翻耕轮作；控制禾本科杂草。
４．４　生物防治
生物防治即利用自然界中生物间的“相克”作用，从而达到有害生物的防治［７６］。南志标［３］指出抗病品种的利
用和草地的合理放牧均可属于广义的生物防治范畴。苜蓿细菌性病害的工作在国内开展还较为有限，因此相应
７３３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
的生物防治的研究工作近乎空白。毫无疑问，在生态环境日益恶化的背景下，牧草在生态环境保护及治理方面的
作用将日益凸显。众所周知，化学防治中农药直接作用于牧草而残留，污染草地和整个牧草生产，通过食物链最
终影响人类健康。由此更加显现出生物防治在苜蓿细菌性病害防治中具有光明的前景，应是我国亟待加强的研
究领域之一。
总而言之，关于苜蓿细菌性病害的防治应以种带病原物检疫，预防为主；重视生态环境的保护，以发展生物防
治为辅；培育抗病品种，加强种子采后等综合管理措施，从而达到提高苜蓿生产力。
５　展望
苜蓿细菌性病害与真菌性病害及其他类病害的研究存在较大差异，我国在此方面的研究工作也远远滞后于
其他苜蓿种植国家。在９种已知的苜蓿细菌性病害中，对于它们的研究程度是与病害的危害程度呈正比的，尤其
对于苜蓿细菌性萎蔫病的研究较其他深入。但是病害的危害程度是会随寄主、地域或特发的气候条件等而转变
的。所以我们不能就因某些病害经济危害程度较轻，而对其不予足够重视。地球上９０％左右的食用作物是以种
子繁殖的，种带病原是很多农作物病害的重要初侵染源之一，是引起作物在田间和在贮藏期发病的祸根。种子携
带并传播病害是很多地区发生新病害的原因。理论上任何植物病原细菌都有可能由种子传播。细菌性病害的传
播形式多样，种子由于其丰富的营养条件及理想的含水量，使其成为病原寄生和再传播最为理想及隐蔽的媒介。
Ｎｅｅｒｇａａｒｄ［７７］报道，细菌在植物种子表皮可存活２～３年不等，但是它们却可在种子内长久的存活。Ｎｅｍｅｔｈ
等［１３］指出，细菌可随苜蓿种子对原本无病区域进行生物入侵。据世界贸易图集统计结果显示，我国自２００７年从
外进口苜蓿２１６０ｔ，并逐年剧烈增长，直至２０１０年上半年进口苜蓿量达９５０７９ｔ。一方面，世界贸易和世界气候
变化全球化的同时，生物入侵对各国都是一个严峻的考验，苜蓿上细菌性病原的入侵可对苜蓿生产造成不可估量
的重大经济损失，如苜蓿细菌性萎蔫病等；另一方面，目前关于苜蓿细菌性病害的调查及研究工作在我国近乎空
白，一旦一些不为我们所熟悉的细菌性病害流行爆发，将对苜蓿的生产是一个严峻的考验。所以，如何用最简便
的方法快速准确的识别和鉴定出病害及其病原，是植物病理工作者及所有检疫人员共同追求的目标。一方面，一
些先进技术的诞生，为我们提供了解决这些问题的不同手段；另一方面，全面客观的了解一种病害及其病原特征，
却不是只能靠某些先进技术就能解决的简单问题。所以在病害和病原的识别和鉴定中，结合病理工作者积累的
田间经验和室内分子鉴定，自动数值鉴定（Ｂｉｏｌｏｇ）和传统的表型特征鉴定等方法，是细菌病害及其病原鉴定方法
呈现多样化形势下的趋势。综上所述，首先详尽了解苜蓿存在的细菌性病害，对我国苜蓿的进口将是一个防患于
未然的有效策略；其次苜蓿种带细菌区系也是衡量种子健康的重要指标之一，随着种子进口贸易量的增加，我们
有必要对苜蓿种带细菌进行详尽的探明；最后随着苜蓿种植量在国内的稳步提升，开展全面客观的存在于我国的
苜蓿细菌性病害调查工作势在必行。
苜蓿品质优良、适口性好、饲用形式多样、饲用价值高和良好的生态效应，被冠以“牧草之王”的美誉。苜蓿除
可以作为牧草外，近年来随着人们对苜蓿营养的不断认识，苜蓿芽正在作为一种食品被人们所接受。随之而来的
苜蓿食源性中毒事件也屡有发生。民众食物安全意识的提高，将人们的眼光聚焦于食源性致病菌的最新动态。
因此植物上人体致病细菌的研究将是病理研究方向的热点之一，尤其是苜蓿上的人体致病细菌。如桃色欧文氏
菌不仅可以引起苜蓿芽萎蔫病，还可以引起人类尿道感染［７８］，而且它是一种苜蓿种传病害，但是对于它是否可引
起食源性中毒还未可知？我国草原面积辽阔，草原类型丰富，农牧交错带明显和管理程度参差不齐等因素，使得
以苜蓿为主等牧草病害在时间与空间分布上呈现差异化和病害种类上呈现多样化。综合考虑，我们急需开展以
下几个方面的工作：１）分离和鉴定不同苜蓿品种种带细菌，探明它们的致病性或有益作用；２）全国范围内调查天
然草地与管理型草地和农牧交错带草原与农田种植草原苜蓿细菌性病害的种类及危害程度，分析它们的相互关
系；３）全国范围内调查苜蓿细菌性病害的种类及其分布，初步建立苜蓿细菌性病害病原资源库；４）探索对苜蓿细
菌性病害行之有效的生物等防治手段。
致谢：在论文写作过程中承蒙甘肃农业大学的陈秀蓉教授和杨成德副教授以及兰州大学草地农业科技学院副教
８３３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
授段廷玉给予的建设性意见，谨此一并致谢。
参考文献：
［１］　ＣｈｅｎＷ，ＳｈｅｎＹＹ，ＲｏｂｅｒｔｓｏｎＭＪ，犲狋犪犾．ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｌｕｃｅｒｎｅｗｈｅａｔｃｒｏｐｒｏｔａｔｉｏｎｏｎｔｈｅＬｏｅｓｓＰｌａｔｅａｕｏｆＮｏｒｔｈ
ｅｒｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＦｉｅｌｄＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２００８，１０８：１７９１８７．
［２］　郭玉霞，南志标，王成章，等．苜蓿根部入侵真菌研究进展［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：２４３２４９．
［３］　南志标．建立中国的牧草病害可持续管理体系［Ｊ］．草业学报，２０００，９（２）：１９．
［４］　南志标．我国的苜蓿病害及其综合防治体系［Ｊ］．动物科学与动物医学，２００１，１８（４）：１４．
［５］　李春杰，南志标．苜蓿种带真菌及其致病性测定［Ｊ］．草业学报，２０００，９（１）：２７３６．
［６］　南志标．锈病对紫花苜蓿营养成分的影响［Ｊ］．中国草原与牧草，１９８５，２（３）：３３３６．
［７］　南志标，员宝华．新疆阿勒泰地区苜蓿病害［Ｊ］．草业科学，１９９４，１１（４）：１４１８．
［８］　ＣｏｕｔｕｒｅＬ，ＤｈｏｎｔＣ，ＣｈａｌｉｆｏｕｒＦＰ，犲狋犪犾．犉狌狊犪狉犻狌犿ｒｏｏｔａｎｄｃｒｏｗｎｒｏｔｉｎａｌｆａｌｆａｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏａｕｔｕｍｎｈａｒｖｅｓｔｓ［Ｊ］．Ｃａｎａｄｉａｎ
ＪｏｕｒｎａｌＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００２，８２：６２１６２４．
［９］　ＰｒａｔｔＲＧ，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎＭＲ，ＰｅｄｅｒｓｏｎＧＡ，犲狋犪犾．Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆ犕犪犮狉狅狆犺狅犿犻狀犪狆犺犪狊犲狅犾犻狀犪狋狅ｍａｔｕｒｅｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆａｌ
ｆａｌｆａａｎｄｗｈｉｔｅｃｌｏｖｅｒ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９８，８２（９）：１０３３１０３８．
［１０］　李敏权．苜蓿根和根颈腐烂病病原致病性及品种抗病性研究［Ｊ］．中国草地，２００３，２５（１）：３９４３．
［１１］　侯天爵，ＨｕａｎｇＨＣ，ＦｒａｓｅｒＪ．两种轮枝菌对１５种豆科牧草的致病性［Ｊ］．植物病理学报，１９９５，２５（２）：１８９１９２．
［１２］　袁庆华．我国苜蓿病害研究进展［Ｊ］．植物保护，２００７，３３（１）：６１０．
［１３］　ＮｅｍｅｔｈＪ，ＬａｓｚｌｏＥ，ＥｍｏｄｙＬ．犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊ｓｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊ｉｎｌｕｃｅｒｎｅｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＥＰＰＯＢｕｌｅｔｉｎ，１９９１，２１：
７１３７１８．
［１４］　ＨａｒｉｇｈｉＢ．ＯｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｅｍｂｌｉｇｈｔｄｉｓｅａｓｅｉｎＫｕｒｄｉｓｔａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｉｒａｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，
２００７，１５５：５９３５９５．
［１５］　ＰｉｅｒｃｅＬ，ＭｃＣａｉｎＡＨ．Ａｌｆａｌｆａｓｐｒｏｕｔｒｏｔｃａｕｓｅｄｂｙ犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９８７，７１：７８６７８８．
［１６］　ＬｅｌｉｏｔｔＲＡ，ＳｔｅａｄＤＥ．ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＢａｃｔｅｒｉａｌＤｉｓｅａｓｅｓｏｆＰｌａｎｔｓ［Ｍ］．ＢｅｃｃｌｅｓａｎｄＬｏｎｄｏｎ：ＷｉｌｉａｍＣｌｏｗｅｓ
Ｌｉｍｉｔｅｄ，１９８７：２９．
［１７］　ＮｙｖａｌＲＦ．ＦｉｅｌｄＣｒｏｐＤｉｓｅａｓｅ（ＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ）［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＴｈｅＷｉｌｅｙＢｌａｃｋＷｅｌＰｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，１９９９：３６．
［１８］　ＺｈａｎｇＺＦ，ＮａｎＺＢ．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀狌狊ｃａｕｓｉｎｇｗｉｌｔｉｎｇｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪ｓｐｒｏｕｔｓｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓ
ｅａｓｅ，２０１２，９６（３）：４５４．
［１９］　俞大绂，方中达．中国植物病原细菌的初步名录［Ｊ］．农业学报，１９５６，７（３）：３５９３６３．
［２０］　方中达，任欣正．中国植物病原细菌名录［Ｊ］．南京农业大学学报，１９９２，１５（４）：１６．
［２１］　刘若．草原保护学（第三分册），牧草病理学（第二版）［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９８４．
［２２］　ＪｏｎｅｓＦＲ．Ａｎｅｗｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｏｆａｌｆａｌｆａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９２５，１５：２４３２４４．
［２３］　东秀珠，蔡妙英．常见细菌系统鉴定手册［Ｍ］．北京：科学出版社，２００１．
［２４］　刘若．苜蓿细菌性凋萎病［Ｊ］．国外畜牧学·草原，１９８１，（１）：１６．
［２５］　ＧｏｎｚáｌｅｚＡＪ，ＴｅｌｏＪＣ，ｄｅＣａｒａＭ．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀犪ｆｒｏｍ犘犺犪狊犲狅犾狌狊狏狌犾犵犪狉犻狊ｉｎＳｐａｉｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，
２００５，８９（１）：１０９．
［２６］　ＧｏｎｚáｌｅｚＡＪ，ＴｅｌｏＪＣ，ＲｏｄｉｃｉｏＭＲ．犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀犪ｃａｕｓｉｎｇｃｈｌｏｒｏｓｉｓａｎｄｎｅｃｒｏｔｉｃｓｐｏｔｓｉｎｌｅａｖｅｓａｎｄｔｅｎｄｒｉｌｓｏｆ犘犻狊狌犿
狊犪狋犻狏狌犿ｉｎＳｏｕｔｈｅａｓｔｅｒｎＳｐａｉｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００７，９１（４）：４６０．
［２７］　ＣａｔｉｎｇＲＡ，ＨｏｎｇＪＣ，ＰａｌｍａｔｅｅｒＡＪ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｓｏｆｔｒｏｔｏｎ犞犪狀犱犪狅狉犮犺犻犱狊ｃａｕｓｅｄｂｙ犇犻犮犽犲狔犪犮犺狉狔狊犪狀
狋犺犲犿犻（犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻）ｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（６）：９７７．
［２８］　ＭｙｕｎｇＩＳ，ＬｅｅＹＫ，ＬｅｅＳＷ，犲狋犪犾．Ａｎｅｗｄｉｓｅａｓｅ，ｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔｏｆｒａｐｅ，ｃａｕｓｅｄｂｙａｔｙｐｉｃａｌ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪
ｉｎＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１０，９４（９）：１１６４．
［２９］　ＭａｒｔíｎＳａｎｚＡ，ＰａｌｏｍｏＪＬ，ＰéｒｅｚｄｅｌａＶｅｇａＭ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｉｇｈｔｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪ｏｎ
ｐｅａｉｎＳｐａｉｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１０，９４（１）：１２８．
［３０］　ＧｏｎｚáｌｅｚＡＪ，ＲｏｄｉｃｉｏＭＲ．犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪ｃａｕｓｉｎｇｎｅｃｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｓａｎｄｄｅｆｏｌｉａｔｉｏｎｏｎ犎犲犫犲ｓｐｐ．ｉｎＮｏｒｔｈｅｒｎ
９３３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
Ｓｐａｉｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００６，９０（９）：１１４３１１４９．
［３１］　ＭｉｒｉｋＭ，ＡｙｓａｎＹ，ＣｅｔｉｎｋａｙａＹｉｌｄｉｚＲ，犲狋犪犾．Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎａｓａｎｅｗｈｏｓｔｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪，ｃａｕｓａｌａｇｅｎｔｏｆｌｅａｆ
ａｎｄｓｔｅｍｎｅｃｒｏｓｉｓ，ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｉｎＴｕｒｋｅｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００４，８８（８）：９０７．
［３２］　ＢａｌｅｓｔｒａＧＭ，ＭａｚｚａｇｌｉａＡ，ＲｏｓｓｅｔｔｉＡ．Ｏｕｔｂｒｅａｋｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｏｓｓｏｍｂｌｉｇｈｔｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪ｏｎ犃犮狋犻狀
犻犱犻犪犮犺犻狀犲狀狊犻狊ｋｉｗｉｆｒｕｉｔｐｌａｎｔｓｉｎＩｔａｌｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（１２）：１７０７．
［３３］　ＧｉｔａｉｔｉｓＲ，ＳｕｍｎｅｒＤ，ＧａｙＤ，犲狋犪犾．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒｅａｋａｎｄｂｕｌｂｒｏｔｏｆｏｎｉｏｎ：Ｉ．Ａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｍｅｄｉｕｍｆｏｒｔｈｅｓｅｍｉｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎａｎｄｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９７，８１（８）：８９７９００．
［３４］　ＭｏｒｅｔｔｉＣ，ＦａｋｈｒａｎｄＲ，ＢｕｏｎａｕｒｉｏＲ．Ｃａｌｅｎｄｕｌａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ：Ａｎｅｗｎａｔｕｒａｌｈｏｓｔｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪ｉｎＩｔａｌｙ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１２，９６（２）：２８５．
［３５］　ＸｕＬＨ，ＸｉｅＧＬ，ＬｉＢ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｐｅａｒｂｌｏｓｓｏｍｂｌａｓｔｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲ｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（５）：８３２．
［３６］　ＳｃｈｅｃｋＨＪ，ＣａｎｆｉｅｌｄＭＬ，ＰｓｃｈｅｉｄｔＪＷ，犲狋犪犾．Ｒａｐｉｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｉｎ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲
ｗｉｔｈａｌｉｌａｃｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｂｉｏａｓｓａｙａｎｄｓｙｒｉｎｇｏｍｙｃｉｎＤＮＡｐｒｏｂｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９７，８１（８）：９０５９１０．
［３７］　ＬａｎｇｓｔｏｎＤＢ，ＳａｎｄｅｒｓＦＨ，ＢｒｏｃｋＪＨ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆａｆｉｅｌｄｏｕｔｂｒｅａｋｏｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔｏｆｃａｎｔａｌｏｕｐｅａｎｄ
ｓｑｕａｓｈｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲ｉｎＧｅｏｒｇｉａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９７，８７（５）：６００．
［３８］　ＧａｒｉｂａｌｄｉＡ，ＭｉｎｕｔｏＡ，ＳｃｏｒｔｉｃｈｉｎｉＭ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｓｙｒｉｎｇａｅｌｅａｆｓｐｏｔｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀
犵犪犲ｏｎｔｏｍａｔｏｉｎＩｔａｌｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００７，９１（１１）：１５１８．
［３９］　ＢｏｂｅｖＳＧ，ＢａｅｙｅｎＳ，ＶａｅｒｅｎｂｅｒｇｈＪＶ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｃｏｒｄｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｉｇｈｔｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲
ｏｎ犘狔狉犪犮犪狀狋犺犪犮狅犮犮犻狀犲犪ａｎｄａｎ犃犿犲犾犪狀犮犺犻犲狉ｓｐ．ｉｎＢｕｌｇａｒｉａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（８）：１２５１．
［４０］　ＬｅｎｓｓｅｎＡＷ，ＳｏｒｅｎｓｅｎＥＬ，ＰｏｓｌｅｒＧＬ，犲狋犪犾．Ｆｏｒａｇｅｑｕａｌｉｔｙｏｆａｌｆａｌｆａｐｒｏｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔ［Ｊ］．
ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，３９：６１７０．
［４１］　ＭｏｆｆｅｔｔＭＬ，ＩｒｗｉｎＪＡＧ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆａｎｄｓｔｅｍｓｐｏｔ（犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犪犾犳犪犾犳犪犲）ｏｆｌｕｃｅｒｎｅｉｎＱｕｅｅｎｓｌａｎｄ［Ｊ］．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ，１９７５，１５：２２３２２６．
［４２］　王政选．苜蓿细菌性叶斑病［Ｊ］．微生物学杂志，２００２，２２（３）：６４．
［４３］　李春杰，南志标．新疆苜蓿和苏丹草病害及其防治［Ａ］．见：南志标，李春杰．中国草类作物病理学研究［Ｍ］．北京：海洋
出版社，２００３．
［４４］　ＯＥＰＰ／ＥＰＰＯ．ＤａｔａｓｈｅｅｔｓｏｎｑｕａｒａｎｔｉｎｅＰｅｓｔｓＮｏ．４９，犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊［Ｒ］．ＢｕｌｅｔｉｎＯＥＰＰ／
ＥＰＰＯＢｕｌｅｔｉｎ，１９９２：１４．
［４５］　ＨｅｒｎａｎｄｅｚＭａｒｔｉｎｅｚＲ，ＰｉｎｃｋａｒｄＴＲ，ＣｏｓｔａＨＳ，犲狋犪犾．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｓｔｒａｉｎｓｉｎ
ｓｏｕｔｈｅｒｎＣａｌｉｆｏｒｎｉａｃａｕｓｉｎｇｍｕｌｂｅｒｒｙｌｅａｆｓｃｏｒｃｈ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００６，９０（９）：１１４３１１４９．
［４６］　ＳｍｉｔｈＤＬ，ＤｏｍｉｎｉａｋＯｌｓｏｎＪ，ＳｈａｒｂｅｒＣＤ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆＰｉｅｒｃｅ’ｓｄｉｓｅａｓｅｏｆｇｒａｐｅｃａｕｓｅｄｂｙ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎＯｋｌａｈｏ
ｍａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００９，９３（７）：７６２．
［４７］　ＨｕａｎｇＱ，ＢｒｌａｎｓｋｙＲＨ，ＢａｒｎｅｓＬ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｏｌｅａｎｄｅｒｌｅａｆｓｃｏｒｃｈｃａｕｓｅｄｂｙ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎＴｅｘａｓ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００４，８８（９）：１０４９．
［４８］　ＲａｎｄａｌＪＪ，ＦｒｅｎｃｈＪ，ＹａｏＳ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎｐｅａｃｈｉｎＮｅｗ Ｍｅｘｉｃｏ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２０１１，
９５（７）：８７１．
［４９］　ＲｏｄｒíｇｕｅｚＣＭ，ＯｂａｎｄｏＪＪ，ＶｉｌａｌｏｂｏｓＷ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎｆｅｃｔｉｎｇｃｏｆｆｅｅｉｎＣｏｓｔａＲｉｃａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｄｉｓｅａｓｅ，２００１，８５（９）：１０２７．
［５０］　ＨｅｒｎａｎｄｅｚＭａｒｔｉｎｅｚＲ，ＣｏｓｔａＨＳ，ＤｕｍｅｎｙｏＣＫ，犲狋犪犾．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｓｔｒａｉｎｓｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎｆｅｃｔｉｎｇｇｒａｐｅ，ａｌ
ｍｏｎｄｓ，ａｎｄｏｌｅａｎｄｅｒｕｓｉｎｇａｍｕｌｔｉｐｒｉｍｅｒＰＣＲａｓｓａｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，２００６，９０（１１）：１３８２１３８８．
［５１］　ＢａｒｎａｒｄＥＬ，ＡｓｈＥＣ，ＨｏｐｋｉｎｓＤＬ，犲狋犪犾．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎｏａｋｓｉｎＦｌｏｒｉｄａａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈ
ｇｒｏｗｔｈｄｅｃｌｉｎｅｉｎ犙狌犲狉犮狌狊犾犪犲狏犻狊［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９８，８２（５）：５６９５７２．
［５２］　ＭｏｎｔｅｒｏＡｓｔúａＭ，ＳａｂｏｒíｏＲＧ，ＣｈａｃóｎＤíａｚＣ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎａｖｏｃａｄｏｉｎＣｏｓｔａＲｉｃａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｄｉｓｅａｓｅ，２００８，９２（１）：１７５．
［５３］　ＡｇｕｉｌａｒＥ，ＶｉｌａｌｏｂｏｓＷ，ＭｏｒｅｉｒａＬ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪ｉｎｆｅｃｔｉｎｇｃｉｔｒｕｓｉｎＣｏｓｔａＲｉｃａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓ
０４３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４
ｅａｓｅ，２００５，８９（６）：６８７．
［５４］　ＯＥＰＰ／ＥＰＰＯ．犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊ｓｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊［Ｊ］．ＯＥＰＰ／ＥＰＰＯＢｕｌｅｔｉｎ，２０１０，４０：３５３３６４．
［５５］　陶天申，杨瑞馥，东秀珠．原核生物系统学［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００７．
［５６］　ＢｕｓｓｅＨＪ，ＤｅｎｎｅｒＥＢＭ，ＬｕｂｉｔｚＷ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａ：ｃｕｒｒｅｎｔａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏａｎｏｌｄｐｒｏｂｌｅｍ．Ｏ
ｖｅｒｖｉｅｗｏｆｍｅｔｈｏｄｓｕｓｅｄｉｎｂａｃｔｅｒｉａｌｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６，４７：３３８．
［５７］　ＨｕｇｈＲ，ＬｅｉｆｓｏｎＥ．Ｔｈｅｔａｘｏｎｏｍｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅｖｅｒｓｕｓｏｘｉｄａｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓｂｙｖａｒｉｏｕｓ
Ｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９５３，６６：２４２６．
［５８］　ＫｏｖａｃｓＮ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狆狔狅犮狔犪狀犪犲ｂｙｔｈｅｏｘｉｄａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），１９５６，１７８：７０３．
［５９］　ＧａｂｙＷＬ，ＨａｄｌｅｙＬ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙｔｅｓｔｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犪犲狉狌犵犻狀狅狊犪［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，
１９５７，７４：３５６．
［６０］　ＣｏｗａｎＳＴ，ＳｔｅｅｌＫＪ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｃｒｉｔｅｒｉａｆｏｒｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉａｎｄｍｉｃｒｏｃｏｃｃｉ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，
１９６４，８８：８０４．
［６１］　ＧａｇｎｏｎＭ，ＨｕｎｔｉｎｇＷ Ｍ．Ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃａｔａｌａｓｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９５９，３１：１４４．
［６２］　ＣｅｒｎｙＧ．Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅｆｒｏｍｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ，１９７６，３：２２３２２５．
［６３］　ＭａｎａｆｉＭ，ＫｎｅｉｆｅｌＷ．Ｒａｐｉｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅｆｒｏｍｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅａｅｒｏｂｉｃａｎｄｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅａｎａｅｒｏｂｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９９０，６９：８２２８２７．
［６４］　ＧｒｅｇｅｒｓｅｎＴ．Ｒａｐｉｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎｏｆｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅｆｒｏｍｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄ
ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９７８，５：１２３１２７．
［６５］　ＨａｌｅｂｉａｎＳ，ＨａｒｒｉｓＢ，ＦｉｎｅｇｏｌｄＭ，犲狋犪犾．Ｒａｐｉｄｍｅｔｈｏｄｔｈａｔａｉｄｓｉｎｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｉｎｇｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅｆｒｏｍｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅａｎａｅｒｏ
ｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８１，１３：４４４４４８．
［６６］　ＢｏｕｒｇａｕｌｔＡＭ，ＬａｍｏｔｈｅＦ．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＫＯＨｔｅｓｔａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｄｉｓｋｔｅｓｔｉｎｒｏｕｔｉｎｅｃｌｉｎｉｃａｌａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８８，２６：２１４４２１４６．
［６７］　ＢｒｅｎｎｅｒＤＪ，ＫｒｉｅｇＮＲ，ＳｔａｌｅｙＪＴ．Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＰａｒｔＢ）［Ｍ］．ＥａｓｔＬａｎ
ｓｉｎｇ：ＳｐｒｉｎｇｅｒＰｒｅｓｓ，２００５．
［６８］　陈秀蓉．陇东典型草原草地退化与微生物相关性及其优势菌系统发育分析与鉴定［Ｄ］．甘肃：甘肃农业大学，２００３．
［６９］　ＬｅｂｌｏｎｄＢ，ＰｈｉｌｉｐｐｅＮ，ＭａｎｇｉｎＩ，犲狋犪犾．１６ＳｒＲＮＡａｎｄ１６Ｓｔｏ２３Ｓｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｅｓｒｅａｅａｌｉｎｔｅｒ
ａｎｄｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｆｉｃＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈｙｌｏｇｅｎｙ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９９６，４６：１０２．
［７０］　ＭａｔｓｕｎａｇａＴ，ＴａｋｅｙａｍａＨ，ＮａｋａｙａｍａＨ．１６ＳｒＲＮＡＴａｒｇｅｔｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌｇｅｎｅｒａｕｓｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｐｒｏｂｅｓｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｍａｇｎｅｔｉｃｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００１，１３：３８９３９４．
［７１］　ＪａｍｅｓＧ．ＵｎｉｖｅｒｓａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙＰＣＲａｎｄＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰＣＲｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，２０１０，３：２０９２１４．
［７２］　ＭａｒｃｈｅｇｇｉａｎｉＳ，ＩａｃｏｎｅｌｉＭ，ＤａｎｇｅｌｏＡ，犲狋犪犾．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄ１６ＳｒＲＮＡａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｕｌｐｈｉｔｅｒｅｄｕｃｉｎｇｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｆｒｏｍ
ｒｉｖｅｒｓｅｄｉｍｅｎｔｓｉｎｃｅｎｔｒａｌＩｔａｌｙ［Ｊ］．ＢＭＣＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，８：１７１．
［７３］　漆艳香，朱水芳，谢艺贤，等．苜蓿细菌性萎蔫病菌１６ＳｒＤＮＡ片段的克隆及序列分析（简报）［Ｊ］．草业学报，２００６，１５（３）：
１２３１２７．
［７４］　谢关林，朱国念，任小平．浙江水稻稻种病原细菌多样性研究［Ｊ］．植物病理学报，２００２，３２（２）：１１４１２１．
［７５］　ＫａｎｅｓｈｉｒｏＷＳ，ＢｕｒｇｅｒＭ，ＶｉｎｅＢＧ，犲狋犪犾．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻ｆｒｏｍａｂａｃｔｅｒｉａｌｈｅａｒｔｒｏｔｏｆｐｉｎｅａｐｐｌｅ
ｏｕｔｂｒｅａｋｉｎＨａｗａｉ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ（ｅＸｔｒａ），２００８，９２：１４４４１４５０．
［７６］　张壬午，张彤，许文瑛．中国传统农业中的生态观及其在技术上的应用［Ｊ］．生态学报，１９９６，１６：１００１０６．
［７７］　ＮｅｅｒｇａａｒｄＰ．ＳｅｅｄＰａｔｈｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｌｏｎｄｏｎ：ＴｈｅＭａｃＭｉｌａｎＰｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，１９７７：１１８１４６．
［７８］　Ｏ’ＨａｒａＣＭ，ＳｔｅｉｇｅｒｗａｌｔＡＧ，ＨｉｌＢＣ，犲狋犪犾．Ｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆａｈｕｍａｎｉｓｏｌａｔｅｏｆ犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀狌狊［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，３６：２４８２５０．
１４３第２３卷第４期 草业学报２０１４年
犚犲狊犲犪狉犮犺狆狉狅犵狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪犫犪犮狋犲狉犻犪犾犱犻狊犲犪狊犲狊
ＺＨＡＮＧＺｈｅｎｆｅｎ，ＮＡＮＺｈｉｂｉａｏ
（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＡｇｒｏｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＰａｓｔｏｒａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＬａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００２０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｓ，ｂｏｔｈｉｎＣｈｉｎａａｎｄｏｖｅｒｓｅａｓ，ａｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ．Ｎｉｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｗｅｒｅｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎｗｏｒｌｄｗｉｄｅａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅｃａｕｓｅｄｂｙ８ｂａｃｔｅｒｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏ６
ｇｅｎｅｒａ．Ｔｈｅｙｗｅｒｅａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｗｉｌｔｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｅｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ （犆犾犪狏犻犫犪犮狋犲狉犿犻犮犺犻犵犪狀犲狀狊犻狊犻
ｓｕｂｓｐ．犻狀狊犻犱犻狅狊狌狊），ａｎｄ８ｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｃａｕｓｅｄｂｙｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ：ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｒｏｕｔｗｉｌｔ
（犈狉狑犻狀犻犪狆犲狉狊犻犮犻狀狌狊），ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｒｏｕｔｒｏｔ（犈狉狑犻狀犻犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻ｐｖ．犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻），ｃｒｏｗｎｇａｌ （犃犵狉狅犫犪犮
狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊），ｃｒｏｗｎａｎｄｒｏｏｔｒｏｔｃｏｍｐｌｅｘ（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪），ｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔａｎｄｄａｍｐｉｎｇ
ｏｆｆ（犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊ｐｖ．犪犾犳犪犾犳犪犲），ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｅｍｂｌｉｇｈｔ（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．狊狔狉犻狀犵犪犲）ａｎｄ
ｄｗａｒｆ（犡狔犾犲犾犾犪犳犪狊狋犻犱犻狅狊犪）．Ａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｌｅａｆｓｐｏｔａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｅｍｂｌｉｇｈｔｗｅｒｅｒｅｃｏｒｄｅｄ，ａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｓｐｒｏｕｔｗｉｌｔ，ａｎｅｗｄｉｓｅａｓｅ，ｗａｓｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎ２０１２，ｉｎＣｈｉｎａ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｔｙｐｅｓｏｆａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓ
ｅａｓｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｈｏｓｔｒａｎｇｅａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｎｄｌｉｓｔｅｄ．Ｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓｄｉｓｔｉｎ
ｇｕｉｓｈｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅｓａｒｅｄｅｔａｉｌｅｄ．Ｔｈｅｆｒｅ
ｑｕｅｎｔｌｙｕｓｅｄｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒａｌｆａｌｆａｂａｃｔｅｒｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｇｅｔｈｅｒ
ｗｉｔｈ１６ＳｒＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｔｈｅＢｉｏｌｏｇｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ａｌｆａｌｆａ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅ；ｓｙｍｐｔｏｍｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ；ｐａｔｈｏｇｅｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ；
ｓｅｅｄｂｏｒｎｅｂａｃｔｅｒｉａ
２４３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４