全 文 ：书东祁连山线叶嵩草内生细菌犡４的产吲哚乙酸、
解磷、抗菌和耐盐特性研究及分子鉴定
高晓星，满百膺，陈秀蓉，杨成德
（甘肃农业大学草业学院 草业生态系统教育部重点实验室 甘肃省草业工程实验室
中－美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：线叶嵩草内生细菌Ｘ４分离自东祁连山高寒草地，对其产吲哚乙酸、解磷、抗菌和耐盐特性及其分子生物学特
性研究结果表明，其在含色氨酸的金氏培养基中分泌吲哚乙酸的量为５０．７４ｍｇ／Ｌ，溶磷圈直径／菌落直径（Ｄ／ｄ）值
分别为３．２３和４．３１，对辣椒立枯丝核病菌、黄瓜枯萎病菌、油菜菌核病菌及番茄灰霉病菌都有抑制作用，且致菌丝
生长畸形，菌落生长的酸碱度范围为７～１０，耐 ＮａＣｌ溶液范围为＜７％，菌体短杆状，革兰氏阴性，无芽孢，１６Ｓ
ｒＤＮＡ序列与普城沙雷氏菌（犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪）最为接近。该菌具有微生物杀菌剂、改良土壤等潜力。
关键词：内生细菌；普城沙雷氏菌；生物学；１６ＳｒＤＮＡ鉴定
中图分类号：Ｑ９４５．７８；Ｑ９４８．１２＋２．３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１３）０４０１３７１０
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０４１７　　
　　植物内生菌在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于植物的各个组织和器官内部并与植物建立和谐联合关
系［１］。它们可以从寄主植物体内获得空间和养分，同时也能增强寄主植物的抗虫性、抗病性、抗旱性以及生长竞
争能力，突出强调了内生菌与植物的互惠共生关系［２，３］。几乎所有的植物中都伴随植物内生菌的存在，许多植物
内生菌长期生活在植物体内的特殊环境中并与宿主协同进化［４，５］，且在植物体内能发挥多种生物学作用，如分泌
生长激素促进植物生长和防治病虫害等［６］，除此之外，它们还能通过改变根部周围的环境来缓解植物根部的非生
物压力，如内生细菌可以分泌胞外多糖来改变土壤结构和多孔性，从而使植物的根部更好地适应多水或缺水、以
及温度改变的环境，同时使植物根部能更好地在土壤中伸展［７，８］。近年来，植物内生菌的生物学功能，尤其是生
物防治功能是内生菌研究开发的热点之一。Ｈａｋｅｅｍ和Ｄａｎｖｅ［９］发现宿主植物与植物内生菌之间互作在一定程
度上对病理性真菌起到防御作用。蔡学清等［１０］在研究内生枯草芽孢杆菌ＢＳ２菌株对水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）苗生
长效应中发现，该菌能提高水稻叶绿素的含量，促进其生长，还能提高其保护酶活性，从而提高水稻的抗逆性；
Ｎｅｊａｄ和Ｊｏｈｎｓｏｎ［１１］发现从植物组织内分离的内生细菌，不但能促进油菜（犅狉犪狊狊犻犮犪犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊）和番茄（犛狅犾犪
狀狌犿犾狔犮狅狆犲狉狊犻犮狌犿）种子发芽和幼苗及植株的生长，而且能够明显降低黄萎病和枯萎病的发病症状；沈德龙等［１２］
发现水稻内生成团泛菌（犘犪狀狋狅犲犪犪犵犵犾狅犿犲狉犪狀狊）ＹＳ１９能分泌４种不同的植物生长激素，它们共同调节水稻生命
活动，影响水稻乳熟期光合产物分布；Ａｈｍａｄ等［１３］发现内生菌犘犻狉犻犳狅狉犿狅狊狆狅狉犪犻狀犱犻犮犪在番茄体内定殖能有效抑
制由轮生菌（犞犲狉狋犻犮犻犾犾犻狌犿犱犪犺犾犻犪犲）引起的病害。综上所述，内生菌在植物体内不仅积极地生存着，而且还发挥着
多种生物学作用。现已从棉花（犌狅狊狊狔狆犻狌犿）、水稻、马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）和辣椒（犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿）等多
种植物中分离筛选到对植物病害具有生防作用的内生细菌［１４，１５］。东祁连山高寒草地地处青藏高原的东缘，由于
地理位置特殊、气候条件独特、生物种类多样，独特的生态环境孕育了功能多元化的微生物种群［１６］。但是，目前
关于高寒草地植物内生细菌的促生防病等生物学功能的研究报道较少，李振东等［１７，１８］对高寒草地珠芽蓼（犘狅
犾狔犵狅狀狌犿狏犻狏犻狆犪狉狌犿）内生细菌Ｚ５产吲哚乙酸、抑菌能力以及Ｚ１７的抑菌能力进行测定。因此，本试验以东祁连
山高寒草地线叶嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪）内生菌Ｘ４为研究对象测定其生物学特性，并利用１６ＳｒＤＮＡ序列
第２２卷　第４期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
１３７－１４６
２０１３年８月
收稿日期：２０１２０２１７；改回日期：２０１２０４０５
基金项目：甘肃省科技支撑计划（０９０ＮＫＣＡ０８２）资助。
作者简介：高晓星（１９８６），女，甘肃榆中人，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｗｙ２０６ｗｙ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｘｉｕｒｏｎｇ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
分析结合形态特性对该内生细菌Ｘ４进行鉴定，以期为高寒草地的植物内生细菌的开发和利用提供理论依据，同
时也为微生物农药和微生物菌肥的研发提供有价值的菌种资源。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　供试菌株　内生细菌Ｘ４由本课题组从东祁连山高寒草地线叶嵩草的叶部分离获得，现由甘肃农业大学
草业学院草地生物多样性实验室保存。植物病原真菌：辣椒立枯丝核病菌（犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犻）；黄瓜枯萎病菌
（犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿）；油菜菌核病菌（犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狀狋犻狅狉狌犿）；番茄灰霉病菌（犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪）。
１．１．２　试剂与培养基　试剂：蛋白酶Ｋ、溶菌酶和ＤＮＡＴａｑ聚合酶购自上海生工生物技术公司，２０００ｂｐｌａｄｄｅｒ
Ｍａｒｋｅｒ购自宝生物工程（大连）有限公司，其他化学试剂均为国产分析纯。培养基：肉汁胨培养基（ＮＡ）用于内生
细菌Ｘ４的活化和保存，金氏培养基用于菌株产吲哚乙酸的测定，Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ培养基用于溶解无机磷的测定；蒙
金娜培养基用于测定菌株Ｘ４溶解有机磷的能力；马铃薯葡萄糖琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ）培养基用于植物病原
真菌的培养和对峙试验［１９２１］。仪器：ＡＬ１０４型电子天平；ＨＨ１．５Ｐｌｕｓ型超净工作台；ＰＣＲ仪和凝胶成像系统，立
式高速冷冻离心机，ＢＸ５１型多功能光学显微镜，水平凝胶电泳装置；电热恒温水浴锅；各种剂量移液枪。
１．２　方法
本试验于２０１０年９月－２０１１年１０月进行，重复３次。
１．２．１　菌种Ｘ４的鉴定　形态学鉴定：将内生细菌Ｘ４纯化培养３ｄ，观察并描述菌落的形态、大小、光泽、质地、
边缘特征、表面特征、隆起形状、透明度及菌落颜色等特征。同时将Ｘ４接种到肉汁胨液体培养基恒温摇培３ｄ，
描述其液体培养物形态。
分子生物学特性测定：提取细菌ＤＮＡ，根据细菌１６ＳｒＤＮＡ两端的保守系列，设计１对细菌的通用引物，引
物序列如下，引物１：５′ＣＣＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣＡＧＣＡ３′；引物２：５′ＣＧＧＧＡＴＣＣＴ
ＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ３′。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。ＰＣＲ反应体系
为，１０×Ｂｕｆｆｅｒ５μＬ，ｄＮＴＰ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）３．５μＬ，Ｐｒｉｍｅｒ１（１０μｍｏｌ／Ｌ）１．５μＬ，Ｐｒｉｍｅｒ２（１０μｍｏｌ／Ｌ）１．５μＬ，
ＴａｑＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒｓｅ（２Ｕ／μＬ）０．２μＬ，ＴｅｍｐｌａｔｅＤＮＡ１μＬ（以加超纯水１μＬ为阴性对照），ｄｄＨ２Ｏ３３．３μＬ。
按程序９４℃热启动５ｍｉｎ；９４℃变性１０ｓ；５４退火１０ｓ；７２℃延长１ｍｉｎ；３５次循环，７２℃下延伸１０ｍｉｎ扩增后，
取５μＬ扩增产物在１％琼脂糖凝胶上８０Ｖ下电泳，然后在紫外灯下观察结果。将特异性好，纯度高的扩增产物
－２０℃保存待测序，所得基因序列与Ｇｅｎｂａｎｋ报道序列进行同源性分析，确定Ｘ４在微生物系统发育学上的地位。
１．２．２　分泌ＩＡＡ能力的测定　ＰＣ比色液：称取ＦｅＣｌ３１２ｇ溶于３００ｍＬ蒸馏水，然后缓慢加入４２９．７ｍＬ９８％
Ｈ２ＳＯ４，待冷却后定容至１Ｌ，测定吲哚乙酸范围为０．３～２０．０ｍｇ／Ｌ；Ｓ２比色液配制：称取４．５ｇＦｅＣｌ３ 溶于３００
ｍＬ蒸馏水，然后缓慢加入５８７．４ｍＬ９８％ Ｈ２ＳＯ４，待冷却后定容至１Ｌ，测定吲哚乙酸范围为５～２００ｍｇ／Ｌ。
定性测定：采用Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ比色法［２２］。加入比色液之后１５ｍｉｎ观察颜色变化，３个重复均变红为阳性，表示
能分泌吲哚乙酸ＩＡＡ，颜色越深表示分泌数量多；３个重复均不变色为阴性，表示不分泌吲哚乙酸ＩＡＡ。定量测
定：采用纯３ＩＡＡ标准曲线制作，将培养１２ｄ的菌悬浮液和对照离心（４℃，１００００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ），取上清液４
ｍＬ加等量比色液，黑暗静置３０ｍｉｎ后测定ＯＤ５３０，重复３次。根据标准曲线计算内生细菌Ｘ４分泌吲哚乙酸的量。
１．２．３　溶磷能力的测定　定性测定：将Ｘ４点接于Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ或蒙金娜培养基平板上，每皿５个接菌点，重复３
次，２８℃恒温培养，观察并测量菌株在培养基平板上形成的溶磷圈大小。根据溶磷圈直径／菌落直径（Ｄ／ｄ值）确
定Ｘ４的溶磷能力。比值越大，表示溶磷能力越强。定量测定：将内生细菌Ｘ４接种于Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ（或蒙金娜）培
养液中，置于２８℃、１６０ｒ／ｍｉｎ控温摇培１０ｄ，离心（４℃，１００００ｒ／ｍｉｎ，１５ｍｉｎ），以不接菌的培养液为对照。取上
清液采用钼锑抗比色法［２３］测定有效磷增量（扣除对照后的值），并用酸度计测定培养１０ｄ后的各菌株培养液ｐＨ
值变化情况。计算公式如下：犘＝犓×犞／犞１。式中，犘 为有效磷增量；犓 为标准曲线查得显色液的磷含量
（ｍｇ／Ｌ）；犞 为显色时溶液定容的体积（ｍＬ）；犞１ 为显色时吸取上清液的体积（ｍＬ）。
１．２．４　Ｘ４溶磷机制初探　将Ｘ４在ＮＡ培养液培养２４ｈ，按１％的接菌量接入Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ（或蒙金娜）培养液
中。置于２８℃、１５０ｒ／ｍｉｎ恒温振荡培养７２ｈ后，做以下４种处理：即一份置１２１℃灭菌１０ｍｉｎ，使酶类失活，以
８３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
测定各类有机酸对磷的溶解效果；一份在无菌条件下调节ｐＨ为７．０，以消除各类有机酸的影响，测定酶类对磷
的溶解作用；一份既不调节ｐＨ，也不灭活处理，以测定酶类和有机酸对磷的共同作用；最后一份设为对照，既灭
活处理也调节ｐＨ。上述４种处理各５０ｍＬ，加入培养液５０ｍＬ，置于２８℃、１５０ｒ／ｍｉｎ恒温摇培７ｄ，离心１５ｍｉｎ
（１３０００ｒ／ｍｉｎ），弃沉淀。各处理重复３次，采用钼锑抗比色法测定上清液中有效磷增量［２４］。
１．２．５　酸碱适应性测定　取１００μＬ培养至对数期的Ｘ４菌原液加入１０ｍＬｐＨ分别为４．０，５．０，６．０，７．０，８．０，
９．０，１０．０的ＮＡ培养液中，于２８℃、１２０ｒ／ｍｉｎ恒温摇培３ｄ，测定其ＯＤ６００值（以ＮＡ培养液为对照），重复３次。
１．２．６　耐盐性测定　取１００μＬ培养至对数期的Ｘ４菌原液加入１０ｍＬＮａＣｌ浓度分别为０，０．５％，１．５％，
３．０％，５．０％，７．０％，９．０％和１１．０％的ＮＡ培养液，于２８℃，１２０ｒ／ｍｉｎ恒温摇培３ｄ，测定其ＯＤ６００值（以ＮＡ培
养液为对照），重复３次。
１．２．７　抑菌能力的测定　采用平皿对峙法［２５］测定抑菌效果。将４种植物病原真菌：辣椒立枯丝核病菌，黄瓜枯
萎病菌，油菜菌核病菌，番茄灰霉病菌分别接种于ＰＤＡ培养基中央，距菌饼２．５ｃｍ处点接Ｘ４于ＰＤＡ平板上，
每皿接４点，各重复３次，以点接无菌水为对照，２８℃恒温培养，测量病原菌向内生细菌Ｘ４方向生长的长度和对
照中病原菌菌落的半径（ｃｍ），以犚值表示抑菌作用的大小。同时挑取病原菌菌落边缘的菌丝体和正常菌丝体于
光学显微镜下观察菌丝形态的变化对比，并照相。
２　结果与分析
图１　犡４的菌落
犉犻犵．１　犜犺犲犮狅犾狅狀狔狅犳狊狋狉犪犻狀犡４
　
２．１　菌种Ｘ４的鉴定
在牛肉胨平板培养基上２８℃培养３ｄ，菌落圆形，
边缘整齐，脐状凸起，表面光滑，奶油色（图１）。在ＮＡ
液体培养基，２８℃摇床培养３ｄ后，丰富生长，高度混
浊，絮状沉淀，振荡不完全分散，表面无膜，无气味（图
２）。革兰氏染色呈阴性，不产芽孢，短杆状（图３）。
提取内生细菌Ｘ４的ＤＮＡ（图４），经ＰＣＲ反应后
检测，得到一条约１５００ｂｐ的ＤＮＡ片段（图５），测序
后得到其１６ＳｒＤＮＡ序列。在ＧｅｎＢａｎｋ中登录后，获
得登录号为 Ｘ４（ＥＵ２３６７５４），采用 ＮＣＢＩ网站中的
Ｂｌａｓｔ工具，将上述菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ
中已报道的序列进行比较，调出与其序列同源性较高的相关菌株１６ＳｒＤＮＡ序列，其菌株名称及其在ＧｅｎＢａｎｋ
中的登录号分别为普城沙雷氏菌 犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪，ＡＪ２３３４３３；普城沙雷氏菌 犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪，
ＥＵ２６６５８３。结果表明，菌株Ｘ４与同源性较高菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列相似性分别为：９９％（犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪，
ＡＪ２３３４３３），９９％（犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪，ＥＵ２６６５８３）。由此可见，菌株Ｘ４在ＧｅｎＢａｎｋ中可找到与其１６ＳｒＤＮＡ
序列同源性较高的相似种。
图２　犡４的液体形态
犉犻犵．２　犜犺犲犾犻狇狌犻犱犿狅犱犪犾犻狋狔狅犳狊狋狉犪犻狀犡４
　
图３　犡４革兰氏染色
犉犻犵．３　犛狋狉犪犻狀犡４犌狉犪犿
　
９３１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
图４　内生细菌犡４的犇犖犃电泳图
犉犻犵．４　犇犖犃犲狓狋狉犪犮狋犲犱犳狉狅犿狊狋狉犪犻狀犡４　
图５　内生细菌犡４的犘犆犚产物电泳图
犉犻犵．５　犘犆犚犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳狊狋狉犪犻狀犡４（犕：犕犪狉犽犲狉）　
　　将Ｘ４与其同源性较高菌株的１６ＳｒＤＮＡ序列在Ｃｌｕｓｔａｌ（１．８）程序包中进行多重序列匹配排列（ＭｕｌｔｉｐｌｅＡ
ｌｉｇｎｍｅｎｔｓ）分析，再用 Ｍｅｇａ（２．１）程序包中的ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ法构建系统发育树（图６）。结果表明，供试菌株
Ｘ４与其１６ＳｒＤＮＡ序列同源性高的菌株聚在一起，即 Ｘ４与犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪（ＡＪ２３３４３３）、犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔
犿狌狋犺犻犮犪（ＥＵ２６６５８３）聚为一类，在系统发育上亲缘关系较近。
　　通过１６ＳｒＤＮＡ序列同源性比较和系统发育分析结果，结合形态特征，初步鉴定该内生细菌Ｘ４为普城沙雷
氏菌犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪Ｘ４。
图６　菌株犡４的１６犛狉犇犖犃系统发育树
犉犻犵．６　１６犛狉犇犖犃狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲狅犳狊狋狉犪犻狀犡４
　
２．２　分泌ＩＡＡ的测定
在含有１００ｍｇ／Ｌ色氨酸的金氏培养液中，加入该细菌的比色液变红（图７）。采用纯３ＩＡＡ制作标准曲线。
ＰＣ标准方程为：狔＝０．０４１０狓＋０．０２７１，犚２＝０．９８６０；Ｓ２标准曲线方程为：狔＝０．０１６８狓＋０．０１４９，犚２＝０．９９６４。
Ｘ４在不含色氨酸的金氏培养液中培养１２ｄ后，其ＰＣ和Ｓ２比色液的ＯＤ５３０值为０．２３０和０．０９８。而在含色氨酸
的金氏培养液中，其ＰＣ和Ｓ２比色液的ＯＤ５３０为１．１６２和０．８６７。根据ＰＣ和Ｓ２标准方程可计算出在不含色氨
酸的金氏培养液中Ｘ４分泌吲哚乙酸的量为４．９５ｍｇ／Ｌ，而在含１００ｍｇ／Ｌ色氨酸的金氏培养基中Ｘ４的分泌量
则为５０．７４ｍｇ／Ｌ，即吲哚乙酸的合成量是前者的１２．９倍（表１）。色氨酸的存在能明显增加Ｘ４分泌吲哚乙酸的
量，说明色氨酸是Ｘ４合成吲哚乙酸ＩＡＡ的重要前体物质。
２．３　内生细菌Ｘ４解磷能力的测定
定性测定结果表明，内生细菌Ｘ４在Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ（或蒙金娜）培养基上培养５ｄ后，溶磷圈直径／菌落直径
（Ｄ／ｄ）值分别为４．３１和３．２３，都能形成一定的溶磷圈（图８），说明该内生细菌Ｘ４既能溶解无机磷，又能溶解有
机磷。定量测定的结果表明，内生细菌Ｘ４在Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ或蒙金娜培养液中培养１０ｄ后，有效磷增量分别为
８６．０５和１４．３９ｍｇ／Ｌ，培养液的ｐＨ值均有所降低，并与对照之间存在显著差异（表２）。即该内生细菌Ｘ４溶解
有机磷和无机磷的能力差异较大，溶解无机磷是有机磷的６倍左右，表明此菌对无机磷有良好的溶解能力。
０４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
图７　菌株犡４的比色反应
犉犻犵．７　犛狋狉犪犻狀犡４犮狅犾狅狉犻犿犲狋狉犻犮狉犲犪犮狋犻狅狀
　Ｓ２＋Ｔｒｐ：加入色氨酸的Ｓ２比色液Ｓ２ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈＴｒｐ；ＰＣ＋Ｔｒｐ：加入色氨酸的ＰＣ比色液ＰＣｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈＴｒｐ；Ｓ２＋ｎｏ
Ｔｒｐ：不加色氨酸的Ｓ２比色液Ｓ２ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｏｕｔＴｒｐ；ＰＣ＋ｎｏＴｒｐ：不加色氨酸的ＰＣ比色液ＰＣｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｏｕｔＴｒｐ；ＣＫ：
不接菌的空白比色液Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｏｕｔｓｔｒａｉｎ．
　
表１　菌株犡４产生吲哚乙酸的能力
犜犪犫犾犲１　犜犺犲犪犫犻犾犻狋狔狅犳狊狋狉犪犻狀犡４狆狉狅犱狌犮犻狀犵犪狌狓犻
菌株Ｓｔｒａｉｎ 测定方法 Ｍｅｔｈｏｄ 金氏（含色氨酸）培养基ＫｉｎｇｗｉｔｈＴｒｐ 金氏（不含色氨酸）培养基ＫｉｎｇｗｉｔｈｏｕｔＴｒｐ
Ｘ４ 定性测定Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｔｅｓｔ ＋＋ －
定量测定Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｅｓｔ（ｍｇ／Ｌ） ５０．７４ ４．９５
　注：“－”无色；“＋”浅粉色；“＋＋”粉色；“＋＋＋”深粉色。
　Ｎｏｔｅ：“－”ｎｏｃｏｌｏｕｒ；“＋”ｌｏｗｐｉｎｋ；“＋＋”ｐｉｎｋ；“＋＋＋”ｄｅｅｐｐｉｎｋ．
图８　定性测定菌株犡４的解磷能力
犉犻犵．８　犙狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲狋犲狊狋狅犳狆犺狅狊狆犺犪狋犲犱犻狊狊狅犾狏犻狀犵犪犫犻犾犻狋狔狅犳狊狋狉犪犻狀犡４
　
　　Ｘ４溶磷机制初探的结果表明（图９），在无机培养液中培养７ｄ，对照的有效磷增量为２８．７４ｍｇ／Ｌ，酸处理下
有效磷增量为３２．１５ｍｇ／Ｌ，酶处理下有效磷增量为３６．２７ｍｇ／Ｌ，酸和酶类的共同作用下有效磷增量为４８．７３
ｍｇ／Ｌ；而在有机培养液中，对照的有效磷增量为３．１４ｍｇ／Ｌ，酸处理下有效磷增量为５．２４ｍｇ／Ｌ，酶处理下有效
磷增量为８．７１ｍｇ／Ｌ，酸和酶类的共同作用下有效磷增量为５．４３ｍｇ／Ｌ；方差分析表明，酸和酶类的共同作用在
Ｘ４溶解无机磷的过程中显著高于其他２种处理，即酸和酶共同作用更有利于对无机磷的溶解；而在溶解有机磷
的过程中，酶类所起的作用更明显。看来此菌对有机磷和无机磷的溶解机制存在差异。
１４１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
表２　定量测定菌株犡４的解磷能力
犜犪犫犾犲２　犙狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲狋犲狊狋狅犳狆犺狅狊狆犺犪狋犲犱犻狊狊狅犾狏犻狀犵犪犫犻犾犻狋狔狅犳狊狋狉犪犻狀犡４
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａ无机培养基Ｐｉｋｏｖａｓｋａｉａｉｎｏｒｇａｎｉｃｍｅｄｉｕｍ
有效磷增量ＩｎｃｒｅｍｅｎｔｏｆａｖａｉｌａｂｌｅＰ（ｍｇ／Ｌ） ｐＨ值ｐＨｖａｌｕｅ
蒙金娜有机培养基 Ｍｏｎｋｉｎａｏｒｇａｎｉｃｍｅｄｉｕｍ
有效磷增量ＩｎｃｒｅｍｅｎｔｏｆａｖａｉｌａｂｌｅＰ（ｍｇ／Ｌ） ｐＨ值ｐＨｖａｌｕｅ
Ｘ４ ８６．０５ａＡ ６．６０ｂＢ １４．３９ａＡ ５．６０ｂＢ
ＣＫ ３１．７１ｂＢ ７．００ａＡ ３．２７ｂＢ ７．００ａＡ
　注：同列不同大写字母表示差异极显著（犘＜０．０１），不同小写字母表示差异显著（犘＜０．０５）。
　Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０１，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ
犘＜０．０５．
２．４　酸碱适应性
图９　不同处理后内生细菌犡４在无机和有机
培养液中有效磷增量
犉犻犵．９　犐狀犮狉犲犿犲狀狋狅犳犪狏犪犻犾犪犫犾犲犘狅犳狊狋狉犪犻狀犡４犻狀犻狀狅狉犵犪狀犻犮
犪狀犱狅狉犵犪狀犻犮犿犲犱犻狌犿犪犳狋犲狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋狉犲犪狋犿犲狀狋狊
不同字母表示差异显著（犘＜０．０５）。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓ
ｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０５．　
不同酸碱条件下菌液 ＯＤ６００的测定结果表明，菌
株Ｘ４在ｐＨ小于５的强酸环境下表现为弱生长，随着
酸度的降低（ｐＨ６～８）菌体逐渐生长旺盛，而当ｐＨ大
于８呈碱性环境时，菌体生长明显有下降的趋势。可
见，菌株Ｘ４对酸碱的适应性有所不同，适于Ｘ４生长
的最佳ｐＨ在６～８之间，这较大多数细菌的最适ｐＨ
（６．５～７．５）范围略宽（图１０）。
２．５　耐盐性
菌株Ｘ４的耐盐性测定结果表明，菌株Ｘ４在含有
０．５％ ＮａＣｌ的培养基中生长时，菌体的浓度最大，随
着ＮａＣｌ浓度的增大，菌体浓度呈下降的趋势。当
ＮａＣｌ浓度在０～７％之间时，Ｘ４能够存活；在０～
１．５％之间时，菌体生长旺盛；当ＮａＣｌ浓度大于１．５％
时，随着ＮａＣｌ浓度的增加，菌体生长呈下降趋势。当
ＮａＣｌ浓度大于７％时，菌株Ｘ４生长非常缓慢或停止
生长（图１１），表明菌株Ｘ４具有一定的耐盐性。
２．６　内生细菌Ｘ４对植物病原真菌的抑制作用
内生细菌Ｘ４对４种植物病原菌都有一定的抑制作用，犚值的范围在０．４９～０．６７之间。挑取病原菌菌落边
缘的菌丝体和正常菌丝体于光学显微镜下观察菌丝形态的变化对比发现：辣椒立枯丝核病菌的正常菌落呈褐色，
图１０　菌株犡４适宜狆犎的测定
犉犻犵．１０　犜犺犲狅狆狋犻犿犻狕犪狋犻狅狀狆犎狅犳狋犺犲狊狋狉犪犻狀犡４
　
图１１　菌株犡４耐盐性的测定
犉犻犵．１１　犜犺犲犲犳犳犲犮狋狅犳犖犪犆犾犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅狀狋犺犲狊狋狉犪犻狀犡４
　
２４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
菌丝有明显的直角分支，分支处有隘缩，有隔，而Ｘ４与辣椒立枯丝核菌对峙培养后，其菌落交界处形成深褐色边
缘，镜检发现菌丝扭曲卷成一团，壁加厚，原生质溢出，有断裂现象，犚值为０．６６；黄瓜枯萎病菌的正常菌落纤细
平滑，与Ｘ４对峙培养后，菌落交界面菌落较薄，颜色变淡，显微镜下观察，菌丝体扭曲膨大，产生大量圆珠形囊状
体，犚值为０．４９；油菜菌核病菌的正常菌丝纤细，无色，原生质均匀，与Ｘ４对峙培养后的交界处菌落颜色加深，镜
检观察发现菌丝体扭曲变形，部分出现膨大，断裂，出现内含物，犚值为０．６４；番茄灰霉病菌的正常菌丝呈灰褐
色，有隔膜，而与Ｘ４对峙培养后菌丝膨大畸形扭曲，细胞节间缩短，菌丝体缩短变粗，菌丝消解，原生质外溢的现
象，出现内含物，犚值为０．６７。总之显微观察供试病原菌与Ｘ４对峙培养后菌丝生长形态异常，出现膨大、扭曲现
象，菌丝顶端和中部出现泡状物，菌丝的泡状物破裂，原生质外溢，致使菌丝断裂（图１２）。
图１２　菌株犡４对植物病原菌菌丝生长的影响
犉犻犵．１２　犜犺犲犲犳犳犲犮狋狅犳犡４狅狀狆犾犪狀狋狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犳狌狀犵犻犿狔犮犲犾犻犪犵狉狅狑狋犺
３４１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
３　讨论与结论
近年来，研究人员发现大多数细菌都能产生３吲哚乙酸或相关的吲哚类化合物，这可以有效地抑制不同的
细菌、真菌引起的植物病害。大多数内生菌具有溶解有机磷、矿物磷，以及分泌植物激素的特性，增强了植株的抗
病性和适应性［２６］。在研究中发现，植物内生细菌通过产生抗生素、水解酶、生物碱及植物生长调节剂等次生代谢
产物或与病原菌竞争生态位和营养等方式来抑制植物病害发生和发展从而有利于植物，达到间接促生作用［２７］。
目前报道的细菌分泌吲哚乙酸的量差异较大，一般在１．４０～６２．０３ｍｇ／Ｌ［２８，２９］。这与该内生细菌Ｘ４分泌ＩＡＡ
的量基本一致（５０．７４ｍｇ／Ｌ）。郑国华和牛先前［３０］认为短时间低温处理下，枇杷（犈狉犻狅犫狅狋狉狔犪犼犪狆狅狀犻犮犪）幼果中吲
哚乙酸含量较快增长并出现峰值，以应对逆境提高抗寒能力。已有研究发现，当微生物与其生态环境协同进化
时，会形成一种适应性［３１］。因此，可以推测菌株Ｘ４分泌吲哚乙酸的能力可能与线叶嵩草对高寒环境的适应性有
很大的相关性。
具有溶磷能力的细菌，目前文献报道［３２］在培养期间，培养介质的酸度一般都降低；不具有解磷能力的微生
物，其培养介质的ｐＨ反而会升高。Ｓｐｅｒｂｅｒ［３３］认为解磷微生物的解磷作用是由于微生物分泌出多种有机酸，它
们与Ｃａ２＋、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋、Ａｌ３＋等离子螯合而使难溶性磷酸盐溶解。该内生细菌既能溶解有机磷也能溶解无机磷，
在无机或有机培养液中ｐＨ分别为６．６０和５．６０，与对照相比较（７．００）都有所降低，且存在显著差异。这与文献
报道相一致。菌株溶磷机制的初探结果不难发现菌株Ｘ４在溶解无机磷时，酸和酶类的共同作用起主要作用，而
溶解有机磷的过程中，酶类的作用则更明显。另外，Ｘ４对无机磷的溶解能力远远大于溶解有机磷，而供试的无机
磷选为Ｃａ３（ＰＯ４）２ 并不能完全反映菌株对磷矿粉的溶磷效果，还有待做进一步研究。
菌株Ｘ４对酸碱适应性和耐盐性的测定结果表明：Ｘ４能够在ｐＨ６～８的条件下生长良好，在７％ＮａＣｌ中能
够生存，相关资料报道［３４］多数细菌最佳ｐＨ为６．５～７．５，高度耐盐性的细菌能在１０％～１２％ＮａＣｌ中生存，可见
Ｘ４具有较好酸碱适应性和耐盐性。
Ｘ４对供试植物病原真菌的菌丝生长均有抑制作用，导致病原菌菌丝生长形态异常，出现膨大、扭曲现象，原
生质发生凝集，菌丝顶端和中部出现泡状物，菌丝的泡状物破裂，原生质外溢，致使菌丝断裂。由于本试验未将其
抑菌物质定性，具体的作用机理有待于进一步的生理生化分析。
Ｘ４菌落形态圆形，边缘整齐，脐状凸起，表面光滑，奶油色，革兰氏染色呈阴性，不产芽孢，短杆状，经１６ＳｒＤ
ＮＡ鉴定，Ｘ４与犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪（ＡＪ２３３４３３）和犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪（ＥＵ２６６５８３）的相似性系数达到９９％，
表明在系统发育上其亲缘关系较近。初步鉴定菌株Ｘ４为普城沙雷氏菌犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪。因此，该内生细
菌Ｘ４是一株兼有分泌吲哚乙酸、溶磷及抑菌为一体的多功能促生拮抗菌，这可以进一步为开发利用高寒草地植
物内生菌资源以及建立功能内生细菌资源库提供可靠的理论依据。
参考文献：
［１］　Ｓｎｅｌ Ｗ Ｈ，ＤｉｃｋＥＡ．ＡＧｌｏｓｓａｒｙｏｆＭｙｃｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：ＨａｒｖａｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９７１：２６３８．
［２］　黄东益，黄小龙．旗草内生真菌与旗草抗病性研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：３９４５．
［３］　ＰｒｏｍｐｕｔｔｈａＩ，ＬｕｍｙｏｎｇＳ，ＤｈａｎａｓｅｋａｒａｎＶ．Ａｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｗｈｅｔｈｅｒｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｂｅｃｏｍｅｓａｐｒｏｔｒｏｐｈｓａｔｈｏｓｔｓｅ
ｎｅｓｃｅｎｃｅ［Ｊ］．ＭｉｃｒｏｂｉａｌＥｃｏｌｏｇｙ，２００７，５３（４）：５７９５９０．
［４］　林吉恒，王睿之．植物益生菌对植物的益生效应及其应用［Ｊ］．中国生物防治，２０１０，２６：１００１０５．
［５］　戴传超，余伯阳，赵玉婷，等．大戟内生菌的抑菌活性及其与宿主相关性研究［Ｊ］．应用生态学报，２００５，１６（７）：１２９０１２９４．
［６］　ＦｉｏｒｅＳＤ，ＧａｌｏＭ．ＥｎｄｏｐｈｙｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａ：ＴｈｅｉｒＰｏｓｓｉｂｌｅＲｏｌｅｉｎｔｈｅＨｏｓｔＰｌａｎｔＡｚｏｓｐｉｒｉｌｕｍＶＩａｎｄＲｅｌａｔｅｄＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｍ］．
Ｇｅｒｍａｎｙ：ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，１９９５：１６９１８７．
［７］　ＣｏｏｍｂｓＪ，ＦｒａｎｃｏＣ．Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐｅｃｉｅｓｉｎｗｈｅａｔｓｅｅｄ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＭｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，６９：４２６０４２６２．
［８］　ＡｌａｍｉＹ，ＡｃｈｏｕａｋＷ，ＭａｒｏｌＣ．Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆｓｕｎｆｌｏｗｅｒｓｂｙａｎｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａ
ｒｉｄｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇ犚犺犻狕狅犫犻狌犿ｓｐ．ｓｔｒａｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓｕｎｆｌｏｗｅｒｒｏｏｔｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，６６：
３３９３３３９８．
４４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
［９］　ＨａｋｅｅｍＯＳ，ＤａｎｖｅＣＭ．Ｐｌａｎｔｅｎｄｏｐｈｙｔｅｉｎｔｅｒｐｌａｙｐｒｏｔｅｃｔｓｔｏｍａｔｏａｇａｉｎｓｔａｖｉｒｕｌｅｎｔ犞犲狉狋犻犮犻犾犾犻狌犿［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，２００９，２２９：
４１５４２６．
［１０］　蔡学清，林彩萍，何红，等．内生枯草芽孢杆菌ＢＳ２对水稻苗生长的效应［Ｊ］．福建农林大学学报（自然科学版），２００５，
３４（２）：１８９１９４．
［１１］　ＮｅｊａｄＰ，ＪｏｈｎｓｏｎＰＡ．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｎｄｕｃｅｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎａｎｄｗｉｌｔｄｉｓｅａｓｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅａｎｄｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，２０００，１８：２０８２１５．
［１２］　沈德龙，冯永君，宋末，等．内生成团泛菌ＹＳ１９对水稻乳熟期光合产物在旗叶、穗分配中的影响［Ｊ］．自然科学进展，２００２，
１２（８）：８６３８６５．
［１３］　ＡｈｍａｄＦ，ＤｉａｎａＲＡ，ＳｕｓａｎｎｅＢ．Ｉｍｐａｃｔｏｆ犘犻狉犻犳狅狉犿狅狊狆狅狉犪犻狀犱犻犮犪ｏｎｔｏｍａｔｏｇｒｏｗｔｈａｎｄｏｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｆｕｎｇａｌａｎｄｖｉ
ｒａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２０１０，２０：１９１２００．
［１４］　ＹｉＬ，ＸｉａｏＣ，ＭａＧ，犲狋犪犾．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｔｏｃｏｎｔｒｏｌｔｏｂａｃｃｏｂｒｏｗｎｓｐｏｔ［Ｊ］．Ａｃｔａ
ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｉｎｉｃａ，２００４，４４（１）：１９２２．
［１５］　ＨｅＨ，ＣａｉＸＱ，ＨｏｎｇＹＣ，犲狋犪犾．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊ＢＳ２２ｏｎｖｅｇｅｔａｂｌｅｄａｍｐｉｎｇｏｆｆｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｕｊｉａｎ
ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ），２００４，３３（１）：１７２０．
［１６］　芦光新，陈秀蓉，杨成德，等．一株纤维素分解菌的鉴定及对两种草坪草凋落物分解活性的研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，
２０（６）：１７０１７９．
［１７］　李振东，陈秀蓉，李鹏，等．珠芽蓼内生菌Ｚ５产吲哚乙酸和抑菌能力测定及其鉴定［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（２）：６１６８．
［１８］　李振东，陈秀蓉，杨成德，等．珠芽蓼内生菌Ｚ１７抑菌能力测定及其鉴定［Ｊ］．草业科学，２０１１，２８（１２）：２０９６２１０１．
［１９］　方中达．植病研究方法（第三版）［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９８：１１０，１８２１８３．
［２０］　师尚礼，曹致中，刘建荣，等．苜蓿根瘤菌溶磷和分泌植物生长素能力研究［Ｊ］．草业学报，２００７，１６（１）：１０５１１１．
［２１］　林启美，赵小蓉，孙炎鑫，等．四种不同生态系统的土壤解磷细菌数量及种群分布［Ｊ］．土壤与环境，２０００，９（１）：４４４６．
［２２］　ＧｌｉｃｋｍａｎｎＥ，ＤｅｓｓａｕｘＹ．ＡｃｒｉｔｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅＳａｌｋｏｗｓｋｉｒｅａｇｅｎｔｆｏｒｉｎｄｏｌｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，６１９（２）：７９３７９６．
［２３］　史瑞和．土壤农化分析［Ｍ］．北京：农业出版社，１９８１：７（４）：２４３４．
［２４］　叶震．东祁连山高寒草地土壤优良解磷细菌的研究［Ｄ］．兰州：甘肃农业大学，２０１０．
［２５］　张茹，李金花，柴兆祥，等．甘肃河西马铃薯根际生防木霉菌对接骨木镰刀菌的拮抗筛选及鉴定［Ｊ］．草业学报，２００９，
１８（２）：１３８１４５．
［２６］　孟宪法，隆小华，康健，等．菊芋内生固氮菌分离、鉴定及特性研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（６）：１５７１６３．
［２７］　Ｋｅｅｌ，ＤｅｆａｇｏＧ．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＢｅｔｗｅｅｎＢｅｎｅｆｉｃｉａｌＳｏｉｌＢａｃｔｅｒｉａａｎｄＲｏｏｔＰａｔｈｏｇｅｎｓ：ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＩｍｐａｃｔ［Ｍ］．
Ｌｏｎｄｏｎ，ＵｎｉｔｅｄＫｉｎｇｄｏｍ：ＢｌａｃｋｗｅｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９７：２７４６．
［２８］　李法峰，平淑珍，苏宝林，等．粪产碱菌的Ｔｎ５转座诱变及吲哚乙酸生物合成特性的研究［Ｊ］．微生物学报，２０００，４０（５）：
５５１５５５．
［２９］　李鹏，陈秀蓉，李振东，等．乳白香青分泌吲哚乙酸内生细菌的１６ＳｒＤＮＡ鉴定［Ｊ］．草原与草坪，２００９，（２）：６１０．
［３０］　郑国华，牛先前．冰核细菌对枇杷幼果中内源激素的影响［Ｊ］．热带作物学报，２００９，３０（３）：２５９２６３．
［３１］　王国荣，陈秀蓉，张俊忠，等．东祁连山高寒灌丛草地土壤微生物生理功能群的动态分布研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（２）：
３１３８．
［３２］　林启美，王华，赵小蓉，等．一些细菌和真菌的解磷能力及其机理初探［Ｊ］．微生物学通报，２００１，２８（２）：２６３０．
［３３］　ＳｐｅｒｂｅｒＪＩ．Ｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｐａｔｉｔｅｂｙｓｏｉｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｓ［Ｊ］．ＡｕｓｔｒａｌｉａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅ
ｓｅａｒｃｈ，１９５８，９：７８２７８７．
［３４］　张宽厚．细菌生理学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９６４：２０９２２８．
５４１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犓狅犫狉犲狊犻犪犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪
犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犡４犻狀狋犺犲犈犪狊狋犙犻犾犻犪狀犕狅狌狀狋犪犻狀犃犾狆犻狀犲犵狉犪狊狊犾犪狀犱狊
ＧＡＯＸｉａｏｘｉｎｇ，ＭＡＮＢａｉｙｉｎｇ，ＣＨＥＮＸｉｕｒｏｎｇ，ＹＡＮＧＣｈｅｎｇｄｅ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒｅ，ＧａｎｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＥｃｏｓｙｓｔｅｍｏｆＭＯＥ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄｉｎＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＳｉｏｎＵ．Ｓ．
ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＧｒａｚｉｎｇｌａｎｄＥｃｏｓｙｓｔｅｍＳｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｎｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｘ４），ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｏｆ犓狅犫狉犲狊犻犪犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪ｉｎ
ｔｈｅＥａｓｔＱｉｌｉａｎＭｏｕｎｔａｉｎｓＡｌｐｉｎｅｇｒａｓｓｌａｎｄｓ，ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇＳａｌｋｏｗｓｋｉｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｐｈｏｓ
ｐｈｏｒｕｓｃｙｃｌｅａｎｄｃｏｎｆｒｏｎｔｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．ＳｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＩＡＡｗａｓ５０．７４ｍｇ／ＬｉｎＫｉｎｇ’ｓｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｒｙｐ
ｔｏｐｈａｎ．Ｉｔｓｄｉｓｓｏｌｖｅｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒ／ｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（Ｄ／ｄ）ｖａｌｕｅｓｗｅｒｅ４．３１ａｎｄ３．２３
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｉｎｈｉｂｉｔｅｄｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ，ｓｕｃｈａｓ犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犻，犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿，
犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪，ａｎｄ犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿，ａｎｄｌｅｄｔｏａｂｎｏｒｍａｌｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｓｅｆｕｎｇｉ．ＴｈｅｐＨｒａｎｇｅ
ｏｆｃｏｌｏｎｙｇｒｏｗｔｈｗａｓ５－１０ａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＮａＣｌｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ７％．Ｔｈａｌｉｗｅｒｅｓｈｏｒｔｒｏｄｓ，ａｎｄ
Ｇｒａｍｎｅｇａｔｉｖｅｗｉｔｈｎｏｓｐｏｒｅｓ．Ｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＸ４ｗａｓｍｏｓｔｓｉｍｉｌａｒｔｏ犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪．
Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｓｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｏｍａｋｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓａｎｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｓｏｉｌ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪；ｂｉｏｌｏｇｙ；１６ＳｒＤＮＡｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
６４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４