全 文 ：书马铃薯贮藏期主要病害拮抗内生细菌的
筛选、鉴定及功能评价
王颖，王玉琴，杨成德，姚玉玲，陈秀蓉，薛莉
（甘肃农业大学草业学院 草业生态系统教育部重点实验室 甘肃省草业工程实验室 中－美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：马铃薯坏疽病、炭疽病和枯萎病是甘肃省马铃薯贮藏期最主要的病害，为了获得马铃薯贮藏期病害防治的生
防菌株，利用对峙培养法从东祁连山高寒草地线叶嵩草内生细菌中筛选获得高抗菌株２６３ＸＹ１，其对马铃薯枯萎病
菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌的抑菌率分别达到６７．１７％，８６．１７％和７０．８９％；该菌株在含有色氨酸和不
含色氨酸的金氏培养基中分泌的ＩＡＡ分别为３．３１和１．５２ｍｇ／Ｌ，在ＰＫＯ含无机磷培养基中的有效磷增量为
３８．９４ｍｇ／Ｌ，具有固氮能力。经 １６ＳｒＤＮＡ 序列分析，其与死谷芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊狏犪犾犾犻狊犿狅狉狋犻狊，登录号：
ＪＱ５４７６３３．１）同源性达９９％，初步鉴定为死谷芽孢杆菌。
关键词：内生细菌；１６ＳｒＤＮＡ鉴定；拮抗作用；生物学功能
中图分类号：Ｓ４３５．３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１４）０３０２６９０７
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１４０３３２
我国是世界第二大草地资源国家，拥有天然草地近４３２ｈｍ２，而在各类草地中，高寒草甸类草地面积最大，占
全国草地总面积的１７．７７％；线叶嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪）是高寒草甸类草地的优势牧草之一［１］，其大量的内
生细菌是挖掘优良生物学功能菌株的微生物资源库。随着生态农业和绿色食品生产的兴起和发展，作物病虫害
的生物防治越来越受到人们的重视。已从小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）［２３］、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）［４］、马铃薯（犛狅犾犪
狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）［５］、番茄（犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）［６］、柑橘（犆犻狋狉狌狊狉犲狋犻犮狌犾犪狋犪）［７］、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）［８］、
大豆（犌犾狔犮犻狀犲犿犪狓）［９］、棉花（犌狅狊狊狔狆犻狌犿）［１０］和油茶（犆犪犿犲犾犾犻犪狅犾犲犻犳犲狉犪）［１１］等植物中分离得到拮抗内生细菌。拮
抗内生细菌防治范围广，对细菌病害、真菌病害和线虫病害都有一定的作用，因此，内生细菌作为一种生防资源，
已成为近年来生防菌剂研制开发的热点［１２１３］。不少学者对内生细菌的生物学功能进行了深入研究，发现内生细
菌不仅可以通过产生植物生长素、赤霉素及细胞激动素等植物促生物质［１４］来促进植物生长，而且可以通过溶磷
作用［１５１６］和固氮作用［１７１８］转化无效营养为有效营养，刺激和调控植物生长，增强植物抗病和抗逆能力等。因此，
开发应用内生细菌资源不仅能解决化学农药和肥料带来的诸多问题，还能保持农田微生态系统多样性，维持农田
生态平衡，提高作物产量，实现农业的可持续发展。
马铃薯坏疽病（犘犺狅犿犪犳狅狏犲犪狋犪）、炭疽病（犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犮狅犮犮狅犱犲狊）和枯萎病（犉狌狊犪狉犻狌犿犪狏犲狀犪犮犲狌犿）是甘肃
省马铃薯贮藏期最主要的病害，在重病区引起的烂薯率在３０％以上［１９２１］。因此，本研究以东祁连山高寒草地线
叶嵩草内生细菌为对象，以马铃薯贮藏期坏疽病菌、炭疽病菌和枯萎病菌为指示菌进行了筛选，对拮抗细菌的分
泌ＩＡＡ、溶磷和固氮等能力进行了评价，并对其进行１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定，以期为线叶嵩草生防内生细菌的利用
与开发提供理论依据，也为马铃薯贮藏期病害生物防治提供优质菌种资源。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 供试拮抗细菌 ２０１２年７月分离自东祁连山高寒草地线叶嵩草中的４４株内生细菌，现保存于甘肃农业
第２３卷 第３期
Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．３
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２６９－２７５
２０１４年６月
收稿日期：２０１３０９２７；改回日期：２０１３１１０８
基金项目：国家自然科学基金（Ｎｏ．３１１６０１２２）和草业生态系统教育部重点实验室（甘肃农业大学）开放课题项目（Ｎｏ．ＣＹｚｓ２０１１０１１）资助。
作者简介：王颖（１９８９），女，甘肃平凉人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｗｙｗｐｔｙｕｌ＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｃｄ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
大学草业学院微生物多样性实验室。
１．１．２ 供试病原真菌 马铃薯炭疽病菌、马铃薯枯萎病菌和马铃薯坏疽病菌，由甘肃农业大学草业学院植物病
理实验室提供。
１．１．３ 供试培养基 ＮＡ培养基、ＬＢ培养液、ＰＤＡ培养基和金氏培养基按文献［２２］配制；ＰＫＯ培养基、蒙金娜
培养基［２３］和阿须贝无氮培养基［２４］分别按文献的方法配制。
１．２ 拮抗能力的测定
１．２．１ 拮抗内生细菌的筛选 采用平皿对峙法测定抑菌效果。将病原真菌（马铃薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌
和马铃薯坏疽病菌）打成直径为６ｍｍ的菌饼，接在ＰＤＡ培养基中央，将内生细菌点接在距菌饼２．５ｃｍ处，每皿
接４点，以只接病原真菌为对照，３个重复，置于２５℃恒温下培养８ｄ，测量抑菌带并计算抑菌率，对拮抗能力强的
菌株进行以下试验。
１．２．２ 对病原菌菌丝生长的影响 采用平板对峙法于接种后８ｄ观察病原菌菌丝形态并显微照相。
１．３ 菌株的鉴定
１．３．１ 培养性状和形态特征 将拮抗内生菌于ＮＡ平板划单菌落，２８℃下培养３ｄ后观察并描述单菌落培养性
状；在ＮＡ平板上培养１８～２４ｈ后进行革兰氏染色、测量菌体大小并显微照相。
１．３．２ １６ＳｒＤＮＡ序列鉴定 按上海生工提供的试剂盒（Ｅｚｕｐ柱式基因组ＤＮＡ抽提试剂盒，批号：８２５６１２０２）
提取ＤＮＡ并检测，对具有特异性 ＤＮＡ 条带的提取物进行ＰＣＲ扩增。扩增使用引物２７Ｆ（５′ＡＧＡＧＴＴＴ
ＧＡＴＣＭＴＧＧＣＴＣＡＧ３′）和１４９２Ｒ（５′ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ３′）。扩增条件为：９４℃预变性５ｍｉｎ，
９４℃变性１ｍｉｎ，４８℃退火３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，３０个循环；最后在７２℃下延伸８ｍｉｎ，终止反应。反应体系：
１０×ｂｕｆｆｅｒ（不含 ＭｇＣｌ２）５μＬ，ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）３μＬ，ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，引物２７Ｆ（１０μｍｏｌ／Ｌ）１
μＬ，引物１４９２Ｒ（１０μｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，Ｔａｑ酶 （２Ｕ／μＬ）０．５μＬ，ＴａｒｇｅｔＤＮＡ（１０ｎｇ／μＬ）１．２μＬ，ｄｄＨ２Ｏ定容至
５０μＬ。经检测具特异性条带的扩增产物送上海生工测序，所测序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中序列进行同源性对比，
采用Ｃｌｕｓｔａｌ１．８软件和 Ｍｅｇａ４．０软件构建系统发育树，确定菌株的系统发育学地位。
１．４ 固氮、溶磷、产ＩＡＡ能力的测定
１．４．１ 产ＩＡＡ能力的定性测定 采用Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ比色法［２５］。将１００μＬ菌悬液分别接到含１００ｍｇ／Ｌ色氨酸
和不含色氨酸的金氏培养液中，设置３个重复，以加等量无菌水的培养液为空白对照，于２８℃、１２０ｒ／ｍｉｎ恒温振
荡培养１２ｄ，后分别取５０μＬ加入等量比色液（ＰＣ比色液或Ｓ２比色液），室温静置１５ｍｉｎ后，观察显色反应，３
个重复均变红色表示能分泌ＩＡＡ，否则不分泌ＩＡＡ，颜色越深表示分泌数量越多。
１．４．２ 产ＩＡＡ能力的定量测定 采用纯３ＩＡＡ制作标准曲线。配制２组浓度依次为２．５，５．０，７．５，１０．０，
１２．５，１５．０，１７．５ｍｇ／Ｌ和２５，５０，７５，１００，１２５，１５０，１７５ｍｇ／Ｌ的标准溶液，分别取４ｍＬ，第１组中加等量ＰＣ比
色液，另１组中加等量Ｓ２比色液，设置３个重复，黑暗静置３０ｍｉｎ后测定其ＯＤ５３０值并制作标准曲线。将培养
１２ｄ的菌悬液和空白对照１００００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液４ｍＬ分别加入等量比色液，黑暗静置３０ｍｉｎ后
测定ＯＤ５３０值，以只加比色液为空白对照。根据标准曲线计算菌株分泌ＩＡＡ的量，并按照ＰＣ比色液和Ｓ２比色
液的测定范围最终确定结果［２６］。
１．４．３ 溶磷能力的定性测定 将２６３ＸＹ１分别点接于ＰＫＯ和蒙金娜平板培养基上，每皿４个接菌点，重复３
次，２８℃恒温培养７ｄ后，观察并测量菌株在培养基平板上形成的溶磷圈大小。根据溶磷圈直径／菌落直径（Ｄ／ｄ
值）确定内生菌的溶磷能力。比值越大，表示溶磷能力越强。
１．４．４ 溶磷能力的定量测定 将１ｍＬ２６３ＸＹ１菌悬液接于ＰＫＯ和蒙金娜培养液中，装液量为５０／１５０ｍＬ，以
接入等量无菌水的培养液为对照，重复３次。２８℃、１６０ｒ／ｍｉｎ恒温振荡培养１０ｄ后１００００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，
上清液采用钼锑抗比色法测定有效磷增量［２７］。计算公式如下：
犘 ＝犓×犞／犞１
式中，犘为有效磷增量；犓 为标准曲线查得显色液的磷含量（ｍｇ／Ｌ）；犞 为显色时溶液定容的体积（ｍＬ）；犞１ 为显
色时吸取上清液的体积（ｍＬ）。
０７２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．３
１．４．５ 固氮能力的定性测定 将２６３ＸＹ１点接于阿须贝无氮平板培养基上，每皿４个接菌点，重复３次，２８℃恒
温培养；同时将２００μＬ菌悬液接于阿须贝液体培养基中，重复３次，以接种等量无菌水为对照，２８℃恒温振荡培
养，于第３，５，７天观察其生长状况，若菌株能够在平板培养基上明显生长且能使液体培养基变浑浊则具有固氮能
力。
１．５ 统计分析
运用Ｅｘｃｅｌ２００７和ＳＰＳＳ１７．０统计分析软件
进行试验数据处理与分析。
２ 结果与分析
２．１ 拮抗能力测定
２．１．１ 拮抗菌株筛选 从４４株内生细菌中筛选得
到７ 株具拮抗作用的内生细菌，编 号 分 别 为
２６２ＸＹ１、２６２ＸＹ２′、２６２ＸＹ３、２６３ＸＹ１、２６３ＸＧ５、
２６３ＸＧ６ 和 ２６３ＸＧ８，其 中 ２６３ＸＧ５、２６３ＸＧ６ 和
２６３ＸＧ８分离自线叶嵩草根部，２６２ＸＹ１、２６２ＸＹ２′、
２６２ＸＹ３和２６３ＸＹ１分离自茎部。２６３ＸＹ１与马铃
薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌对
峙培养，具明显的抑菌带（图１），抑菌率分别为
６７．１７％，８６．２４％和７０．８９％（表１），其抑菌能力显
著高于其他６株拮抗细菌（犘＜０．０５），因此对该菌
株进行了以下试验。
表１ 内生细菌的抑菌能力测定
犜犪犫犾犲１ 犐狀犺犻犫犻狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻狌犿狅狀狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犳狌狀犵犻
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
抑菌率Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ（％）
马铃薯枯萎病菌
犉．犪狏犲狀犪犮犲狌犿
马铃薯炭疽病菌
犆．犮狅犮犮狅犱犲狊
马铃薯坏疽病菌
犘．犳狅狏犲犪狋犪
２６３ＸＹ１ ６７．１７Ａａ ８６．２４Ａａ ７０．８９Ａａ
２６２ＸＹ１ ６２．３８Ａｂ ８３．９９ＡＢａｂｃ ７０．８９Ａａ
２６２ＸＹ２′ ５４．８６Ｂｃ ８０．１５ＡＢｂ ６８．０４Ａａｂ
２６２ＸＹ３ ５２．４６Ｂｃ ７８．８７ＢＣｃ ６７．０９Ａｂ
２６３ＸＧ５ － ７０．５５Ｄｄ ６７．７２Ａｂ
２６３ＸＧ８ － ７２．７９ＣＤｄ ５７．５９Ｂｃ
２６３ＸＧ６ － ６０．３１Ｅｅ ５３．１６Ｂｄ
注：大、小写字母分别表示在０．０１和０．０５水平差异显著；“－”表示无拮
抗作用。
Ｎｏｔｅ：Ｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓａｎｄｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ
０．０１ａｎｄ０．０５ｌｅｖｅｌ，“－”ｈａｖｅｎｏａｎｔａｇｏｎｉｓｍｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ．
２．１．２ 对病原菌菌丝生长的影响 病原菌菌落生长受抑制后，菌落边缘和抑菌带接触部位的菌丝生长缓慢。镜
检发现，受抑制菌丝的生长端分支增多，菌丝顶端、中部膨大呈泡状，有明显的畸形，部分前端膨胀破裂，内含物外
溢（图２），说明２６３ＸＹ１可使病原菌菌丝发生畸形变化从而影响菌丝正常生长。
图１ ２６３犡犢１对３种病原真菌的抑制效果
犉犻犵．１ 犐狀犺犻犫犻狋狅狉狔犲犳犳犲犮狋狊狅犳２６３犡犢１狅狀３狊狆犲犮犻犲狊狅犳犳狌狀犵狌狊狆犪狋犺狅犵犲狀狊
Ａ：枯萎病菌对照和处理Ｎｏｒｍａｌａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｆ犉．犪狏犲狀犪犮犲狌犿；Ｂ：炭疽病菌对照和处理Ｎｏｒｍａｌａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｆ犆．犮狅犮犮狅犱犲狊；Ｃ：坏疽病菌对照和处理
Ｎｏｒｍａｌａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｆ犘．犳狅狏犲犪狋犪；下同Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
图２ ２６３犡犢１对病原菌菌丝的影响
犉犻犵．２ 犜犺犲犻狀犳犾狌犲狀犮犲狅犳２６３犡犢１犪犵犪犻狀狊狋犺狔狆犺狅犪犲狅犳狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犳狌狀犵犻
１７２第２３卷第３期 草业学报２０１４年
２．２ ２６３ＸＹ１菌株的鉴定
图３ ２６３犡犢１革兰氏染色（犃）与单菌落（犅）
犉犻犵．３ 犌狉犪犿狊狋犪犻狀犻狀犵（犃）犪狀犱犪狊犻狀犵犾犲犮狅犾狅狀狔（犅）狅犳２６３犡犢１
图４ ２６３犡犢１的１６犛狉犇犖犃电泳图
犉犻犵．４ １６犛狉犇犖犃犘犆犚犲犾犲犮狋狉狅狆犺狅狉犲狊犻狊犿犪狆狅犳２６３犡犢１
（１，２：２６３犡犢１；３：标记 犕犪狉犽犲狉）
２．２．１ 形态观察 ２６３ＸＹ１革兰氏染色阳性（图３Ａ），
菌体大小为０．３６～０．８５μｍ×０．６９～１．８７μｍ。在
ＮＡ平板培养基上菌落大小为３～４ｍｍ，不规则形，边
缘不整齐，呈波状，表面褶皱，较干燥，不透明，米白色
（图３Ｂ）。
２．２．２ １６ＳｒＤＮＡ序列鉴定 提取的２６３ＸＹ１基因
组经１６ＳｒＤＮＡ引物扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳检
测，在近１５００ｂｐ处有一清晰的ＰＣＲ特异性条带 （图
４），经上海生工测序得１６ＳｒＤＮＡ 基因序列长度为
１４５１ｂｐ，使用ＢＬＡＳＴ 程序对所得序列在Ｇｅｎｅｂａｎｋ
中进行同源性比较，２６３ＸＹ１与已报道的犅犪犮犻犾犾狌狊狏犪犾
犾犻狊犿狅狉狋犻狊（ＪＱ７６５４３３．１），犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊（ＦＪ７６３６４８．１），
犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊（ＪＦ９２６５３１．１）和犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪
犮犻犲狀狊（ＪＦ８９９２６０．１）等多个基因序列的同源性在９９％以
上，应用Ｃｌｕｓｔａｌ１．８和 Ｍｅｇａ４．０软件进行多重序列
比较后邻接法构建系统发育树，表明 ２６３ＸＹ１ 与
犅．狏犪犾犾犻狊犿狅狉狋犻狊相似性最高（图５），因此将其鉴定为
犅犪犮犻犾犾狌狊狏犪犾犾犻狊犿狅狉狋犻狊（ＫＦ８１８６４２）。
图５ ２６３犡犢１的１６犛狉犇犖犃系统发育树
犉犻犵．５ １６犛狉犇犖犃狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲狅犳２６３犡犢１
图６ ２６３犡犢１比色反应
犉犻犵．６ ２６３犡犢１犮狅犾狅狉犻犿犲狋狉犻犮狉犲犪犮狋犻狅狀
２．３ 生物学功能测定
图７ ２６３犡犢１在蒙金娜（犃）和犘犓犗（犅）平板
培养基上形成的溶磷圈
犉犻犵．７ 犎犪犾狅狅犳狆犺狅狊狆犺犪狋犲狊狅犾狌犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犿犻犮狉狅狅狉犵犪狀犻狊犿
２６３犡犢１犕狅狀犵犻狀犪（犃）犪狀犱犘犓犗（犅）狊狅犾犻犱犿犲犱犻狌犿
２．３．１ 产ＩＡＡ能力的定性测定 与ＣＫ相比，加入
不含色氨酸（Ｔｒｐ）的Ｋｉｎｇ菌悬液和含色氨酸的Ｋｉｎｇ
菌悬液均有显色反应，呈淡粉色（图６），说明２６３ＸＹ１
可以分泌ＩＡＡ。
２．３．２ 产ＩＡＡ能力的定量测定 ２６３ＸＹ１经连续培
养１２ｄ后，测定ＯＤ５３０值，结果表明，不含色氨酸时其
分泌ＩＡＡ的浓度为１．５２ｍｇ／Ｌ；含１００ｍｇ／Ｌ色氨酸
的金氏培养液中其分泌ＩＡＡ的浓度为３．３１ｍｇ／Ｌ，是
前者的２倍，说明色氨酸的存在能增加２６３ＸＹ１合成
２７２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．３
ＩＡＡ的量，即外源色氨酸可以作为２６３ＸＹ１合成ＩＡＡ的前体物质。
２．３．３ 溶磷能力的定性测定 ２６３ＸＹ１在蒙金娜培养基上溶磷圈不明显（图７Ａ），Ｄ／ｄ值为１．１０；但在ＰＫＯ培
养基上溶磷圈明显（图７Ｂ），Ｄ／ｄ值为２．１０，说明对无机磷有明显溶磷能力，而对有机磷的溶解能力较差。
２．３．４ 溶磷能力的定量测定 ２６３ＸＹ１在ＰＫＯ和蒙金娜液体培养基培养１０ｄ后，有效磷增量分别为３８．９４和
０．１１ｍｇ／Ｌ，说明２６３ＸＹ１对无机磷有较强的溶磷能力，但对有机磷溶磷能力差。
２．３．５ 固氮能力的定性测定 ２６３ＸＹ１点接于阿须贝平板培养基后，在第３天时形成菌落；接种于阿须贝液体
培养基，７ｄ后培养液变浑浊，说明２６２ＸＹ１有固氮能力。
３ 结论与讨论
近年来，草地退化问题严重，在草地的生产中，应及时采取措施，才可逆转草地的退化进程，实现草地的可持
续利用。恢复退化的草地已成为亟待解决的问题，而养分供给能力是成功恢复退化草地主要依赖的因素之
一［２８３０］。开发具有拮抗作用等多功能的牧草内生细菌应用于草地，一方面可以补充草地自身养分，协调草地资源
利用中生产功能与生态功能的冲突；另一方面也可以应用于农作物病虫害的生物防治中。本研究以东祁连山高
寒草地线叶嵩草中分离的内生细菌２６３ＸＹ１为对象，经１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定为芽孢杆菌属的细菌。目前，在国内
外内生细菌多样性研究的报道中，认为芽孢杆菌作为优势菌种［３１３２］，具有开发成为生物农药和生物肥料的潜力，
且效果显著［３３３４］，有进一步开发利用的价值。
内生细菌通过释放土壤中不溶性的磷元素，促进植物生长和次级代谢物积累已有报道［１５，１６］。２６３ＸＹ１在
ＰＫＯ含无机磷培养基中的有效磷增量为３８．９４ｍｇ／Ｌ，说明２６３ＸＹ１有较好溶解无机磷的能力，即具有较好促生
作用，但是其溶磷机制有待进一步研究。周佳宁等［３５］从茅苍术（犚犺犻狕狅犿犪犪狉犲犪犮狋狔犾狅犱犻狊）叶片中分离得到４５株内
生细菌研究其促生潜力，其中４３株能够分泌ＩＡＡ，其浓度在２２～２６８ｍｇ／Ｌ，说明内生细菌可以分泌ＩＡＡ促进宿
主生长和抗逆；张英等［３６］研究４株牧草根际促生细菌互作效应中发现，其分泌ＩＡＡ量为０．２１２～９．３３ｍｇ／Ｌ，低
于单株２６３ＸＹ１分泌的ＩＡＡ量，２６３ＸＹ１与其他菌株复配时产生ＩＡＡ的能力可能更强，但还有待进一步研究。
２６３ＸＹ１分离自高寒草地线叶嵩草，其生存的极端环境可能有利于内生细菌在逆境中适应力的提高，如拮抗或增
加ＩＡＡ的分泌量等，发挥更好的促生作用［３７］。另外，高寒的生存环境与马铃薯在贮藏期所需要的低温条件正好
吻合，更加适合于开发为防治马铃薯贮藏期病害的生物农药。
目前报道的具生物学功能的内生细菌较多，但同时具备多种功能于一体的内生细菌并不多。２６３ＸＹ１为
Ｇ＋，经１６ＳｒＤＮＡ序列分析将其鉴定为死谷芽孢杆菌，对马铃薯枯萎病菌、马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌均
具有较强拮抗作用，抑菌率分别达到６７．１７％，８６．１７％和７０．８９％，且还具有较强溶磷、产生ＩＡＡ和固氮能力，是
一株多功能拮抗内生细菌。因此，该菌株有进一步开发为防治马铃薯贮藏期病害的微生物产品的巨大潜力。
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犛犮狉犲犲狀犻狀犵，犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犳狌狀犮狋犻狅狀犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀狅犳犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮
犫犪犮狋犲狉犻犪犪犵犪犻狀狊狋狆狅狋犪狋狅狊狋狅狉犪犵犲犱犻狊犲犪狊犲
ＷＡＮＧＹｉｎｇ，ＷＡＮＧＹｕｑｉｎ，ＹＡＮＧＣｈｅｎｇｄｅ，ＹＡＯＹｕｌｉｎｇ，ＣＨＥＮＸｉｕｒｏｎｇ，ＸＵＥＬｉ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＥｃｏｓｙｓｔｅｍ，
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Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ＳｉｎｏＵ．Ｓ．ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＧｒａｚｉｎｇｌａｎｄＥｃｏｓｙｓｔｅｍＳｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：犘犺狅犿犪犳狅狏犲犪狋犪，犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犮狅犮犮狅犱犲狊ａｎｄ犉狌狊犪狉犻狌犿犪狏犲狀犪犮犲狌犿 ａｒｅ３ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｐｏｔａｔｏｓｔｏｒａｇｅ
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Ｍｏｕｎｔａｉｎｓｕｓｉｎｇｔｈｅｃｏｎｆｒｏｎｔｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｓｏｆ２６３ＸＹ１ａｇａｉｎｓｔ犉．犪狏犲狀犪犮犲狌犿，犆．犮狅犮
犮狅犱犲狊ａｎｄ犘．犳狅狏犲犪狋犪ｗｅｒｅ６７．１７％，８６．１７％ａｎｄ７０．８９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＩＡＡｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙ
２６３ＸＹ１ｗａｓ３．３１ｍｇ／ＬｉｎｔｈｅＫｉｎｇｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈＴｒｐ，ａｎｄ１．５２ｍｇ／ＬｗｉｔｈｏｕｔＴｒｐ．Ｔｈｅｉｎｃｒｅｍｅｎｔｏｆａｖａｉｌａ
ｂｌｅＰｗａｓ３８．９４ｍｇ／ＬｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇｉｎｏｒｇａｎｉｃＰ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｏｆｃａｌｃｉｕｍ）ａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎ２６３ＸＹ１
ｐｏｓｓｅｓｓｅｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｆｉｘｎｉｔｒｏｇｅｎ．Ｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ２６３ＸＹ１ｓｈａｒｅｄ９９％ｈｏ
ｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈ犅犪犮犻犾犾狌狊狏犪犾犾犻狊犿狅狉狋犻狊（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＪＱ５４７６３３．１），ｓｏ２６３ＸＹ１ｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓ犅．狏犪犾
犾犻狊犿狅狉狋犻狊．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＤＮＡ；ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ
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