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Effects of adding lactic acid bacteria and pineapple peel on Stylosanthes silage quality

添加乳酸菌和菠萝皮对柱花草青贮品质的影响



全 文 :书添加乳酸菌和菠萝皮对柱花草青贮品质的影响
申成利,陈明霞,李国栋,张建国
(华南农业大学农学院草业科学系,广东 广州510642)
摘要:柱花草是热带、亚热带的优质豆科牧草,蛋白含量高、营养品质好,为促进柱花草的加工利用,本试验研究了
添加不同乳酸菌和菠萝皮对其青贮发酵品质和有氧稳定性的影响。青贮处理为CK(对照)、LQ(青贮宝)、LF(发酵
乳杆菌)、LP(植物乳杆菌)、LS(鼠李糖乳杆菌)、B(20%菠萝皮)、BLQ(B+LQ)、BLF(B+LF)、BLP(B+LP)、BLS
(B+LS)。添加处理后青贮60d进行分析。结果表明,柱花草含有较少的可溶性碳水化合物和乳酸菌,自然青贮
其pH超过5.0,发酵品质差;所有添加物都显著降低pH、增加乳酸含量(犘<0.05),明显改善了柱花草青贮料的发
酵品质。单独添加菠萝皮的丁酸和NH3N含量显著高于所有单独添加乳酸菌(犘<0.05),pH与LP以外的其他3
种乳酸菌差异不显著(犘>0.05)。除LP的乙酸含量较高,丁酸含量较低外,4种乳酸菌对其他各个发酵指标的影
响没有显著差异(犘>0.05)。本试验所用4种乳酸菌与菠萝皮混合添加,都进一步改善了柱花草青贮料的发酵品
质,特别是BLP的青贮效果最佳,其pH值、乙酸和NH3N含量低,乳酸含量及乳酸与乙酸比高。青贮袋开封后,
包括对照在内的所有青贮料的有氧稳定性均较佳。
关键词:乳酸菌;柱花草;菠萝皮;青贮;发酵品质
中图分类号:S816.5+3  文献标识码:A  文章编号:10045759(2012)04019206
  柱花草属(犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊)牧草是世界上热带亚热带地区最重要的豆科牧草,广泛用于青饲料、草粉生产、放
牧、水土保持、果园覆盖和绿肥作物等[1]。柱花草属牧草约有50个种,在世界热带豆科牧草生产中占有重要地
位。它的大部分品种原产南美洲、中美洲和加勒比海地区,喜热带潮湿气候,适合北纬23℃以南、年均温19~
25℃、年降水量1000mm左右的地区种植[2]。我国于1962年首次从马来西亚引种柱花草到海南岛,目前,柱花
草在海南、广东、广西、福建、云南、四川、贵州、重庆等省(区)推广种植面积已超过20多万hm2,已成为我国南方
热带草业的当家草种,形成了“北有苜蓿草,南有柱花草”的草业发展新格局,促进了我国热带草业和畜牧业的发
展[3]。
柱花草是豆科柱花草属多年生草本植物,其茎叶繁茂,根系发达,生物产量大,营养丰富,每kg干物质含粗
蛋白156~243g,是稻谷、玉米的2~3倍;每公顷产总能109.75GJ,比玉米、稻谷高65%~69%,是重要的蛋白
质和能量饲料来源[4,5]。在饲用柱花草的过程中,发现柱花草对动物的生长发育和繁殖等有明显的促进作用,很
多种畜禽场已把柱花草粉作为添加剂来使用,市场潜力巨大。但由于华南地区阴雨天多,给柱花草干草(粉)的加
工带来了不少的难度,造成有市无货局面。因此,应重视与当地气候特点相适应的加工贮藏方法,以解决“季节不
平衡”和“地区不平衡”矛盾,提高种草的经济效益[6]。柱花草因生长前期叶上的茸毛及叶尖对家畜口腔有刺激
性,青饲适口性较差,对其进行晒干处理,适口性虽有所提高,但营养物质损失增大,而且其大部分营养生长期处
于华南地区的雨季,将其加工成干草较难。有报道指出,加工草颗粒与草粉是柱花草的有效利用途径[7],但成本
过高,不利推广;也有报道指出,青贮是华南地区柱花草利用的新途径[8],但因柱花草的可溶性糖含量低,缓冲能
高,较难青贮。菠萝皮是菠萝罐头生产的下脚料(约占原果的60%),长期以来,被认为是农产品废弃物而丢弃或
填埋,导致环境污染。菠萝皮的可溶性糖含量较高,但国内对菠萝皮的深加工及利用较少[9],陈明霞和张建国[10]
的研究结果表明添加菠萝皮对饲料稻发酵品质的改善有较好的效果。因此,本试验研究了添加乳酸菌和菠萝皮
(B)对柱花草青贮发酵品质和有氧稳定性的影响,为柱花草的青贮加工提供理论依据。
192-197
2012年8月
   草 业 学 报   
   ACTAPRATACULTURAESINICA   
第21卷 第4期
Vol.21,No.4
收稿日期:20110706;改回日期:20110926
基金项目:十二五国家科技支撑计划项目(2011BAD18B02)和现代农业产业技术体系建设专向资金资助。
作者简介:申成利(1986),女,河南新乡人,在读硕士。Email:shenchengli2006@163.com
通讯作者。Email:zhangjg@scau.edu.cn
1 材料与方法
1.1 试验材料
2010年10月18日收割处于初花期的柱花草,距地面8~10cm全株收割。收割后带回实验室,切短至1~2
cm,混合均匀,留0.5kg用于鲜样分析,剩余材料分别进行青贮处理。菠萝皮是从水果市场收集的新丢弃物,切
成小块备用。
乳酸菌添加剂为青贮宝(LQ,宝来利来生物工程有限责任公司),乳酸菌LF(发酵乳杆菌)、乳酸菌LP(植物
乳杆菌)和乳酸菌LS(鼠李糖乳杆菌)。LF、LP和LS为华南农业大学农学院草产品加工实验室分离菌株。
1.2 青贮处理
本试验设菠萝皮和乳酸菌两因素。菠萝皮分为无添加和添加,乳酸菌为无添加、LQ、LF、LP、LS,共10个处
理,即:CK、LQ、LF、LP、LS,B(20%菠萝皮),BLQ(B+LQ)、BLF(B+LF)、BLP(B+LP)、BLS(B+LS)。每个
处理3个重复。
1.3 测定方法
1.3.1 青贮饲料的调制 各种乳酸菌的添加量为105cfu/gFM(鲜重),菠萝皮的添加量为20%,每个处理3
袋,每袋约200g。处理后的材料装入30cm×20cm的聚乙烯青贮袋,用真空密封机(SINBOVacuumSealer,
HongTaiHomeElectricalApplianceCo.Ltd.)抽气、密封,置于室温贮藏60d。
1.3.2 材料营养成分及微生物分析 干物质(DM)含量采用70℃干燥法测定,粗蛋白含量采用凯氏定氮法测定
(定氮仪 KDN103F,上海纤检仪器有限公司),粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量在范氏法(VanSoest)
的基础上使用改进的滤袋分析法(ANKOMA200i,北京)测定[11],粗脂肪含量采用残余法测定(SLF06,杭州托
普仪器有限公司),粗灰分含量采用灼烧法测定[12]。可溶性碳水化合物(watersolublecarbohydrates,WSC)含量
采用蒽酮硫酸法测定[13],氨态氮(NH3N)含量用凯氏定氮仪直接蒸馏测定,缓冲能采用盐酸、氢氧化钠滴定法
测定[14],乳酸菌、细菌和酵母菌数量分别采用MRS(deManRogosaSharpe)琼脂培养基、营养琼脂培养基(nutri
entager,广东环凯微生物有限公司)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potatodextroseagar,广东环凯微生物有限公
司)计数[15]。乳酸菌用厌氧箱(YQXⅡ型,上海新苗医疗器械制造有限公司),37℃培养2~3d;细菌和酵母菌用
生化培养箱30℃培养2~4d。
1.3.3 发酵品质分析 青贮袋开封后,取20g混匀的青贮料放入聚乙烯塑料封口袋中,加入80mL蒸馏水,在
4℃下浸泡18h后过滤,用pH计(PHS3B,上海鹏顺科学仪器有限公司)测定浸提液pH值[16]。有机酸含量采
用岛津LC20AT型高效液相色谱仪测定[17],色谱条件:色谱柱(KC811),流动相为3mmol/L的 HClO4 液,流
速1mL/min,柱温60℃,检测波长210nm。
1.3.4 有氧稳定性分析 青贮袋开封后,无菌操作混匀材料,然后取出一部分进行发酵品质分析,剩下的材料不
封口放置于室内,分别有氧放置2,4,6d后,取袋中已混匀样品20g,测定pH值。pH值上升幅度越小,有氧稳
定性则越好,反之则较差。
1.4 统计方法
采用Excel和SPSS10软件对试验数据进行统计分析。其中,乳酸菌与含糖物质的添加使用双因素方差分
析。有氧稳定性测定的数据采用Excel处理。
2 结果与分析
2.1 青贮前柱花草与菠萝皮特性
柱花草的乳酸菌少于105cfu/gFM,好气性细菌和酵母菌数较多,缓冲能(340mE/kgDM)较高,WSC含量
(3.91%DM)较低,这些都不利于青贮饲料的发酵。干物质含量为34.10%,水分含量适中(表1)。作为本试验
添加物之一的菠萝皮,其 WSC含量较高(42.83%DM)(表1),可以弥补柱花草青贮材料 WSC较低的缺陷,可为
乳酸菌提供充足的发酵底物。
2.2 添加物对青贮发酵品质的影响
单 独添加乳酸菌或菠萝皮对柱花草青贮料的pH、乳酸含量、NH3N含量和乳酸乙酸比都有显著影响
391第21卷第4期 草业学报2012年
(犘<0.05),乳酸菌和菠萝皮的互作对乙酸之外的指
标都达到了极显著 (犘<0.01)。乳酸菌或菠萝皮单独
添加对丙酸含量影响不显著,而它们互作显著(犘<
0.05)。乳酸菌添加显著降低丁酸含量 (犘<0.05),除
LP外,单独添加菌对乙酸含量影响不显著(犘>
0.05),菠萝皮则正好相反(表2)。与对照相比,单独
添加菌虽然显著降低了丁酸含量,但未能完全抑制丁
酸发酵,而乳酸菌与菠萝皮混合添加很少或无丁酸产
生。所有处理中,对照的pH值(5.26)和NH3N含量
(18.21%)最高,乳酸含量最低(1.26%),所有添加处
理都显著降低了pH值和NH3N含量,提高了乳酸含
量,特别是乳酸菌和菠萝皮的混合添加。除BLS外,
混合添加的pH都显著低于乳酸菌或菠萝皮单独添加
(犘<0.05),而且低于4.2,达到了良好的青贮效果。
各种乳酸菌和菠萝皮单独添加的青贮料,它们的
乳酸含量、丙酸含量和乳酸乙酸比没有显著差异(犘>
0.05),但添加乳酸菌的丁酸含量和NH3N含量显著
低于B处理组。除LP外,单独添加乳酸菌的pH与B
添加没有显著差异。LP的乙酸含量显著高于LF、丁
酸含量显著低于LQ和LF(犘<0.05)。结果表明,添
加乳酸菌和菠萝皮都可明显改善柱花草青贮料的发酵
品质,但乳酸菌,特别是LP的效果优于菠萝皮,而两
者结合效果更佳。
表1 青贮前柱花草和菠萝皮的特性
犜犪犫犾犲1 犆犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊犪狀犱
狆犻狀犲犪狆狆犾犲狉犲狊犻犱狌犲犫犲犳狅狉犲犲狀狊犻犾犻狀犵
项目
Item
柱花草
犛狋狔犾狅
狊犪狀狋犺犲狊
菠萝皮
Pineapple
residue
干物质 Drymatter(%FM) 34.10 14.50
粗蛋白Crudeprotein(% DM) 11.39 6.48
粗脂肪Etherextract(% DM) 2.76 1.30
粗纤维Crudefiber(% DM) 45.40 12.18
无氮浸出物 Nitrogenfreeextract(% DM) 36.00 76.48
中性洗涤纤维 Neutraldetergentfiber(% DM) 71.34 37.78
酸性洗涤纤维 Aciddetergentfiber(% DM) 58.83 18.13
粗灰分Crudeash(% DM) 4.44 3.57
可溶性碳水化合物 Watersolublecarbohydrates
(% DM)
3.91 42.83
pH 5.46 4.04
氨态氮 NH3N(% TN) 1.69 4.66
缓冲能Bufferingcapacity(mE/kgDM) 340 1545
乳酸菌Lacticacidbacteria(Lgcfu/gFM) 4.54 4.68
好气性细菌 Aerobicbacteria(Lgcfu/gFM) 6.76 5.14
酵母菌 Yeasts(Lgcfu/gFM) 5.35 4.64
 TN:总氮含量 Totalnitrogen;FM:鲜物质 Freshmatter;Lg:菌数取
以10为底的对数Denarylogarithmofthenumbersofbacteria.
表2 添加物对柱花草青贮发酵品质的影响
犜犪犫犾犲2 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犪犱犱犻狋犻狏犲狊狅狀狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狇狌犪犾犻狋狔狅犳犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊狊犻犾犪犵犲
处理
Treatment
pH 乳酸Lacticacid
(% DM)
乙酸Aceticacid
(% DM)
丙酸Propionicacid
(% DM)
丁酸Butyricacid
(% DM)
乳酸/乙酸
Lacticacid/Aceticacid
NH3N
(% TN)
CK 5.26a 1.26d 1.99de 1.55ab 1.18a 0.64f 18.21a
LQ 4.53bc 3.93c 2.46abcd 1.51ab 0.41b 1.62cde 8.45c
LP 4.44cd 4.01c 2.80abc 1.42abcd 0.11cd 1.43de 7.32cd
LS 4.55bc 3.60c 2.14cde 1.49abc 0.35bc 1.69cde 8.45c
LF 4.66bc 2.82c 1.98de 1.68a 0.45b 1.51de 8.45c
B 4.74b 3.25c 3.11a 1.58ab 1.27a 1.10e 13.14b
BQ 3.99ef 6.16ab 1.72e 1.04e 0.00d 3.60b 6.20cd
BLP 3.91f 7.02a 1.63e 1.14cde 0.00d 4.33a 6.01d
BLS 4.19de 5.34ab 2.30bcde 1.21cde 0.00d 2.32c 6.76d
BLF 4.12ef 5.47ab 2.85ab 1.33cde 0.17cd 1.93cd 6.76cd
标准误SEM 0.08 0.41 0.21 0.09 0.07 0.22 0.70
LAB   NS NS   
B    NS NS  
LAB×B   NS    
 注:表中同列不同字母表示在犘<0.05水平差异显著。:0.05水平作用显著;:0.01水平作用显著;LAB:乳酸菌;B:菠萝皮。
 Note:Meanswithdifferentlettersinthesamecolumnaresignificantlydifferentatthe0.05level.and:Significantat犘<0.05and犘<
0.01,respectively;LAB:Lacticacidbacteria;B:Pineappleresidue.
491 ACTAPRATACULTURAESINICA(2012) Vol.21,No.4
2.3 添加物对青贮有氧稳定性的影响
柱花草青贮料开封暴露于空气中6d后,所有处理的pH 值都没有显著变化(犘>0.05),乳酸含量除了LF
和LS外也无显著变化(图1),LF和LS处理的乳酸含量虽显著降低,但都还有70%以上被保留下来(分别为
71%和79%),说明所有的柱花草青贮料的有氧稳定性都比较好。
图1 柱花草青贮料开封6犱后的狆犎值和乳酸含量变化
犉犻犵.1 犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳狋犺犲狆犎犪狀犱犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犮狅狀狋犲狀狋狊狅犳犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊狊犻犾犪犵犲狊犪犳狋犲狉犲狓狆狅狊犲犱狋狅狋犺犲犪犻狉犳狅狉6犱犪狔狊
 :0.01水平差异显著;没有标注的就是没有显著差异。:Significantat犘<0.01;nonotemeansnosignificantdifference.
3 讨论
3.1 材料特性
乳酸菌的数量和 WSC含量是影响青贮饲料发酵品质的2个重要因素,其中之一不足都会限制乳酸发酵[18]。
一般情况下,青贮原料乳酸菌超过105cfu/gFM[17],WSC含量超过25~35g/kg[19],才能获得优质青贮料。本试
验所用材料的乳酸菌数量少于105cfu/gFM,好气性细菌和酵母菌数较多,缓冲能较高,WSC含量较低,这些都
不利于优质青贮饲料的调制。近年来,糖类也常用作青贮材料的添加剂来提高青贮发酵品质[20],但成本比较高,
经济效益差。菠萝皮的 WSC含量较高(42.83%DM),将菠萝皮作为添加剂不仅可以解决柱花草 WSC含量低、
难以青贮的问题,同时可使菠萝皮得到有效利用,提高经济效益。
3.2 添加物对青贮发酵品质的影响
一般情况下,青贮成功的关键在于促进乳酸菌的大量繁殖,然而,材料上附着的乳酸菌数远低于好气性微生
物(好气细菌和真菌等)。在厌氧条件下,当材料水分、缓冲能、可溶性碳水化合物含量适宜时,附着的乳酸菌大量
繁殖,材料pH值迅速降低,有害菌(大肠杆菌、梭菌、芽孢杆菌、酵母菌、霉菌等)则受到抑制,因此,pH值是判别
青贮品质好坏的主要指标之一[19]。
近年来,各国研究实践证明接种产酸能力强的乳酸菌是提高牧草发酵品质的有效方法[21,22],然而这些研究
多针对温带牧草或作物而言。Uchida和Kitamura[23]指出接种乳酸菌到 WSC含量低的热带牧草中对改善发酵
品质的效果不明显。但本试验的结果表明,添加乳酸菌可以显著降低柱花草青贮饲料的pH值、丁酸和NH3N
含量,同时乳酸含量和乳乙酸比显著提高,说明添加乳酸菌可以改善其发酵品质。原因可能是材料本身的乳酸菌
数量较少,没有达到105cfu/gFM,添加后促进了乳酸发酵。本试验的结果表明,单独添加菠萝皮也能显著降低
柱花草青贮料的pH值并提高乳酸含量,但其丁酸和NH3N含量却显著高于单独添加乳酸菌,原因可能是菠萝
皮内含有降解蛋白质的酶[24],分解了更多的蛋白质,产生的NH3N较多。B处理的NH3N含量之所以显著低
于CK,可能是因为B的pH低、有机酸含量多,对蛋白质分解的梭状芽孢杆菌有一定抑制作用。
单独添加乳酸菌的乳酸乙酸比显著高于CK,可能是因为添加乳酸菌之后促进了柱花草青贮料的乳酸发酵,
乳酸含量显著增加,而乙酸含量除了LP以外都没有显著变化。单独添加菠萝皮之后 WSC含量增加,为乳酸菌
591第21卷第4期 草业学报2012年
提供了更多的发酵底物,促进了乳酸发酵,虽然同时也产生了较多的乙酸,但乳酸乙酸比较CK高,说明菠萝皮的
添加也促进了同型发酵。BLQ和BLP显著高于其他所有处理,因为LQ和LP是同型发酵菌,而且又添加了足
够的WSC,产生的乳酸含量显著增加,而乙酸含量无显著变化。BLF的乳酸乙酸比与单独添加菌无显著差异,显
著低于BLQ和BLP,可能是因为LF是异型发酵乳酸菌。鼠李糖乳杆菌是优良的生产L乳酸的细菌,但它在高
糖浓度下会受到抑制并且它对营养要求苛刻[25,26],对增加乳酸产量效果不好,所以,在混合添加处理组中,BLS
的乳酸含量最低,使得乳酸乙酸比显著低于BLQ和BLP。
3.3 添加物对有氧稳定性的影响
青贮容器开封后,厌氧环境立即变成有氧环境,好气微生物开始活动。通常,青贮饲料的好气变质主要是由
酵母、霉菌等的活动所引起[27,28]。当青贮饲料暴露于空气中时,青贮发酵产生的乳酸及牧草中的氨基酸、蛋白质
和糖类等会被酵母和霉菌利用,使青贮饲料CO2、水和氨逐渐增加,使pH 逐渐上升,好气变质不断加剧[29,30]。
本试验所有青贮料在开封6d后的pH都没有显著变化,可能是因为本试验中所有的青贮料丙酸含量较高,而丙
酸抑制酵母的效果较强[31]。这也被开封时所有的青贮料都未能检测到酵母菌(低于检查水平5×102cfu/gFM)
所证实。
4 结论
本研究所用4种乳酸菌与菠萝皮单独添加都能明显改善柱花草的青贮发酵品质,二者混合添加效果更佳,特
别是菠萝皮与乳酸菌LP混合。4种乳酸菌中乳酸菌LP在部分发酵指标上优于其他3种,而且它们都优于单独
添加菠萝皮。无论是添加菠萝皮或乳酸菌,还是混合添加,它们的有氧稳定性与对照一样非常稳定。
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犈犳犳犲犮狋狊狅犳犪犱犱犻狀犵犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪犪狀犱狆犻狀犲犪狆狆犾犲狆犲犲犾狅狀犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊狊犻犾犪犵犲狇狌犪犾犻狋狔
SHENChengli,CHENMingxia,LIGuodong,ZHANGJianguo
(DepartmentofGrasslandScience,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊isalegumeforagewhichhashighproteincontentandgoodnutritionalqualityintropical
andsubtropicalareas.Topromotetheutilizationof犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊,theeffectsofaddinglacticacidbacteriaand
pineapplepeelonthesilagefermentationqualityandaerobicstabilitywerestudiedafter60daysstorage.The
experimentaltreatmentswereCK(noadditive),LQ(commercialinoculant),LF(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犳犲狉犿犲狀狋狌犿),
LP(犔.狆犾犪狀狋犪狉狌犿),LS(犔.狉犺犪犿狀狅狊狌狊),B(20%pineapplepeel),BLQ(B+LQ),BLF(B+LF),BLP(B+
LP),andBLS(B+LS).犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊silagehadfewwatersolublecarbohydratesandlacticacidbacteria,to
getherwithpoorqualityandahighpH(>5.0)whentherewerenoadditives.Altheadditivessignificantlyre
ducedpH,increasedlacticacidcontents(犘<0.05),andconsiderablyimprovedthesilagefermentationquality
comparedwiththecontrol.ThecontentsofbutyricacidandNH3Ninthesilagewithadditionofpineapplepeel
onlyweresignificantlyhigherthanthosewithonlylacticacidbacteriaadded(犘<0.05).ThepHwasnotsig
nificantlydifferentfromLQ,LF,andLS(犘>0.05).Therewerenosignificantdifferencesbetweenthefour
lacticacidbacterialtreatmentsinanyoftheindices(犘>0.05)exceptthatLPhadahigheraceticacidcontent
andlowerbutyricacidcontentthantheothers.Combiningpineapplepeelandanylacticacidbacteriaimproved
thesilagefermentationqualityof犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊,especialyforBLP,whichhadalowerpH,loweraceticacid
andNH3Ncontents,higherlacticacidbacteriacontentand,higherratiooflacticacidtoaceticacid.Althesi
lagesincludingthecontrolhadgoodaerobicstability.
犓犲狔狑狅狉犱狊:lacticacidbacteria;犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊;pineapplepeel;silage;fermentationquality
791第21卷第4期 草业学报2012年