全 文 ：书高寒草甸魏斯氏乳酸菌的分离鉴定及理化特性研究
杨杨１，石超２，郭旭生２，３
（１．兰州大学草地农业科技学院 草地农业生态系统国家重点实验室，甘肃 兰州７３００２０；２．兰州大学生命科学学院 草地农业生态系统
国家重点实验室，甘肃 兰州７３００００；３．兰州大学青藏高原生态系统管理国际中心，甘肃 兰州７３００００）
摘要：本试验对青藏高原藏北嵩草附着乳酸菌进行了分离培养，并利用传统培养法和１６ＳｒＲＮＡ序列分析对分离
乳酸菌进行了鉴定，以期探讨高寒地区乳酸菌的发酵生物学特性并分离筛选优良发酵乳酸菌。试验共分离得到１７
株乳酸菌，其中有６株菌为食窦魏斯氏乳酸菌（犠犲犻狊狊犲犾犾犪犮狅狀犳狌狊犪），其余均为融合魏斯氏乳酸菌（犠犲犻狊狊犲犾犾犪犮犻犫犪狉
犻犪）。分离出的融合魏斯氏乳酸菌菌株均能在４℃条件下生长，其中有５个菌株能在ｐＨ值为３的培养基中生长，且
分离的食窦魏斯氏乳酸菌均能利用半乳糖，１０株融合魏斯氏菌均能够发酵利用阿拉伯糖。体现出高寒地区分离出
的融合魏斯氏乳酸菌菌株具有耐低温，耐酸性强和发酵利用碳源广泛的特征。
关键词：乳酸菌；分离；鉴定；高寒草甸
中图分类号：Ｓ８１２．３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１４）０１０２６６１０
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１４０１３２　　
　　草地畜牧业作为青藏高原传统的基础产业在其经济发展中具有重要的地位，也是青藏高原今后经济发展的
支柱产业之一。但是，长期以来天然草地饲草料供给的季节性不平衡，严重制约着青藏高原草地畜牧业的高效发
展，加之长期的超载过牧，草地退化，使草畜矛盾日益突出［１３］。通过人工种草和天然草地打草来制作青贮饲料，
将是解决高寒草地畜牧业冬春季节饲草料严重不足的有效措施之一。乳酸菌在饲料工业中，尤其在青贮饲料的
制备领域中有着重要的作用。在很多国家特别是欧美等发达国家已经对乳酸菌在青贮饲料制备中的应用进行了
大量而深入的研究。其研究内容主要包括性状优良乳酸菌的筛选，乳酸菌对青贮饲料发酵品质的影响，添加乳酸
菌的青贮饲料对奶牛采食量的影响以及乳酸菌对青贮饲料二次发酵的抑制作用等［４］。而在用于饲料青贮的乳酸
菌的筛选及其对青贮饲料发酵品质影响的基础应用研究、产品开发等方面日本和欧美国家处于领先地位，但我国
乳酸菌在青贮饲料中的研究主要是利用国外商品化的乳酸菌制剂进行试验［５６］，对具有自主知识产权的乳酸菌制
剂的研究与开发很少。然而，我国青藏高原地区的极端气候环境，使得传统商品化乳酸菌在该地区的应用受到了
限制，因为商品化乳酸菌制剂的适宜生长温度通常为２０～２５℃。因此，发掘利用高寒地区乡土乳酸菌种质资源，
对于在该地区制作青贮饲料具有重要的意义。
近几年，有关青藏高原乳酸菌的多样性与种质资源的研究，逐渐引起了国内外学者的关注，这方面的研究主
要涉及食品学科并集中于高原传统发酵乳制品中乳酸菌的分离与鉴定［７１３］。国内有关牧草中天然附着乳酸菌分
离鉴定及其在青贮饲料中的筛选研究与应用方面起步较晚，最近几年才开始有报道［４，１４１６］，而且关于青藏高原高
寒地区牧草中附着乳酸菌的研究还无人涉及，只有相关研究表明，在我国高寒地区高海拔、低温和缺氧的极端环
境中进行牧草青贮时能够得到优质的青贮饲料。青贮饲料色绿，酸香味浓，适口性好，几乎没有二次发酵的现
象［１７１８］。这说明在我国青藏高原高寒地区依然存在着能够在极端环境中发酵饲料的特殊乳酸菌菌群。在西藏高
寒地区，以藏北嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻）为优势种的草地型是全区高寒沼泽化草甸亚类草地中分布范围广、面
积大、牧草饲用价值较高的草地型［１９２０］。因此，本试验以藏北嵩草为原料，对其附着乳酸菌进行分离、鉴定和生物
学特性研究，为筛选青藏高原青贮饲料用优良乳酸菌种质资源提供科学依据。
２６６－２７５
２０１４年２月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第２３卷　第１期
Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
收稿日期：２０１２０２１７；改回日期：２０１２０４２８
基金项目：国家自然科学基金（３１２７２４８６）资助。
作者简介：杨杨（１９８７），女，甘肃兰州人，硕士。
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｇｕｏｘｓｈ０７＠ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１　材料与方法
１．１　样品采集
用于分离乳酸菌的试验样品藏北嵩草于２０１０年７月初分别采自西藏纳木错高寒草甸草地 （海拔５１００ｍ；东
经９０°４２′，北纬２９°５８′）；那曲古露镇高寒草甸（海拔４５８２ｍ；东经９１°３７′，北纬３０°５０′）；堆龙德庆的高寒草甸（海
拔３９８０ｍ；东经９０°４９′，北纬２９°５７′）。样品采集地点的气候属于高山亚寒带半干旱季风气候。试验地堆龙德庆
乡年均降雨量为４４４ｍｍ，年均气温７℃，年平均日照时数３０００ｈ；纳木错采样区年平均温度－０．６℃，年降雨量
４５６．８ｍｍ，年最高温在７月份，为１４．６℃，该地区日照时数２８８０ｈ；样品采集点古露镇年平均气温－１．３℃，年内
最高温度在７月份，为９．１℃，年平均降雨量为４２１．９ｍｍ，该地区年平均日照时数为２８４６ｈ。样品采集地点牧草
生长期为５月中旬至９月底，土壤类型均为高山草甸土。每个采样点设置１０个１ｍ×１ｍ样本框分别进行采样。
牧草样品剪取后，装入塑料袋，冰盒中冷藏，带回实验室，－２０℃保存，以备附着微生物检测。
１．２　培养基
试验用培养基参考凌代文［２１］的方法配制。
葡萄糖酵母蛋白胨（ＧＹＰ）培养基：蛋白胨２ｇ，酵母提取物５ｇ，葡萄糖１０ｇ，吐温－８００．２５ｇ，ＭｇＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ０．１ｇ，ＭｎＳＯ４０．１ｇ，ＦｅＳＯ４０．１ｇ，ＮａＣｌ５ｇ，ＣａＣＯ３５ｇ，加蒸馏水至１０００ｍＬ，调ｐＨ６．８，１２１℃灭菌１５
ｍｉｎ。
ＭＲＳ培养基：蛋白胨１０ｇ，牛肉膏１０ｇ，酵母提取物５ｇ，葡萄糖２０ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４５ｇ，柠檬酸铵２ｇ，乙酸钠５
ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．５８ｇ，吐温－８０１ｍＬ，ＭｎＳＯ４０．２５ｇ，ＣａＣＯ３２０ｇ，琼脂粉２０ｇ，加蒸馏水至１０００ｍＬ，调
ｐＨ６．２～６．４，１２１℃灭菌１５ｍｉｎ。不加琼脂粉即可得到 ＭＲＳ培养液。
ＰＹＧ培养基：ＰＹ基础培养液内加入１．０ｇ葡萄糖。ＰＹ基础培养基为蛋白胨０．５ｇ，胰酶解酪朊０．５ｇ，酵母
提取物１．０ｇ，盐溶液４．０ｍＬ，蒸馏水１００ｍＬ。其中盐溶液为无水氯化钙０．２ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．４８ｇ，磷酸氢
二钾１．０ｇ，磷酸二氢钾１．０ｇ，碳酸氢钠１０．０ｇ，氯化钠２．０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ。
１．３　乳酸菌的分离与纯化
在无菌室中，将嵩草样品剪成１ｃｍ左右的短段，并称取１０ｇ分别置装有９０ｍＬ灭菌生理盐水的三角瓶中，
常温摇床４～６ｈ。用已灭菌的生理盐水适当稀释，选２个稀释度，每个稀释度取０．１ｍＬ菌种稀释液滴到ＧＹＰ
（含有碳酸钙）平板上，用涂布棒将其涂布均匀后，将平板在３７℃厌氧培养４８ｈ。之后，根据菌落的颜色、大小、光
泽、透明程度等，挑取有透明圈的单菌落，进行革兰氏染色、油镜镜检和过氧化氢酶试验，凡是革兰氏染色阳性、过
氧化氢酶阴性的菌株疑似其为乳酸菌并以划线的方式在 ＭＲＳ培养基上继续分离纯化培养２次。将纯化后的菌
株接种到 ＭＲＳ斜面培养基上培养后，在４℃条件下保存备用。
１．４　菌种鉴定
１．４．１　属的鉴定　按照凌代文［２１］、杨洁彬等［２２］、东秀珠和蔡妙英［２３］介绍的方法，将所有革兰氏阳性，过氧化氢
酶试验阴性的分离菌株初步鉴定为乳酸菌。之后根据菌种的形态学特征将其分为杆菌和球菌，并根据凌代文［２１］
的方法进行乳酸菌属的初步鉴定试验。
１．４．２　种的鉴定　乳酸菌种的鉴定参考凌代文［２１］的方法。通过糖发酵试验进行乳酸菌种的鉴定，采用杭州天
和生化有限公司提供的糖发酵试剂盒。具体方法按照试剂盒的说明进行。
１．４．３　乳酸菌的１６ＳｒＲＮＡ 序列测定　分离的乳酸菌在 ＭＲＳ培养基中培养８ｈ后进一步纯化并进行菌株
ＤＮＡ的提取。ＤＮＡ提取试剂盒由天根生化试剂（北京）有限公司提供。ＤＮＡ的提取及纯化按照试剂盒使用方
法进行。分离单菌 ＤＮＡ 做模板，采用引物５７Ｆ：５′ＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ３′和２０５Ｒ：５′ＣＴＴＧＴ
ＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣ３′进行ＰＣＲ扩增；反应系为（５０μＬ）：ＤＮＡ模板２μＬ，５７Ｆ１μＬ，２０５Ｒ１μＬ，２×Ｍａｓｔｅｒ
Ｍｉｘ２５μＬ，ｄｄＨ２Ｏ２１μＬ。反应程序为：９４℃３０ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，６０～５０℃，３０ｓ（每个循环降１℃），７２℃１．５
ｍｉｎ，１０个循环；９４℃３０ｓ，５０℃３０ｓ，７２℃１．５ｍｉｎ，３０个循环；７２℃５ｍｉｎ。ＰＣＲ纯化产物进行测序（北京博迈德
科技发展有限公司）。
７６２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
１．５　生长特性检测
１．５．１　乳酸菌生长速率的测定　用待测菌株的培养液，以相同的接种量（０．１ｍＬ）接入 ＭＲＳ液体培养基中，于
３０℃厌氧培养箱中培养２４ｈ，每隔２ｈ取样品，用紫外可见分光光度计（日立，Ｕ２９１０）以培养基为空白，在波长
６２０ｎｍ下立即测定样品的吸光度值，并按照下列公式计算菌株的生长速率。
菌株的生长速率＝液体培养基各时间点的ＯＤ值－液体培养基的起始ＯＤ值。
１．５．２　乳酸菌产酸速率测定　将待测菌液分别接种于 ＭＲＳ液体培养基中，于３０℃厌氧培养箱中培养２４ｈ，每
隔２ｈ取样品，用ｐＨ计（上海精科，ＰＨＳ３Ｃ）检测培养液ｐＨ值，并按照下列公式计算菌株的产酸速率。
产酸速率＝培养基中起始ｐＨ－各时间点ｐＨ。
１．５．３　不同温度条件下生长特性　将配制好的 ＭＲＳ培养液以５ｍＬ量分装试管，１２１℃高压灭菌１５ｍｉｎ，将试
验菌株以相同的接种量（０．１ｍＬ）接入培养液中，摇匀，塞子封口，各设２个重复，温度为４℃放在冰箱中，１０，１５，
２５，３０℃放在恒温培养箱中，４０，５０，６０℃的放在水浴锅中分别培养，其中４℃培养１４ｄ，４０，５０和６０℃培养７ｄ，其
余培养２ｄ，观察菌株的生长情况。
１．５．４　不同ｐＨ条件下生长特性　所用培养基是将ＭＲＳ培养液用盐酸或氢氧化钠调ｐＨ至所需酸碱度，即ｐＨ
分别为３，４，４．５，５，６，７，８，９，９．５的９种 ＭＲＳ液体培养基，同上步骤，将试验菌株的培养液，以相同的接种量
（０．１ｍＬ）接入装有已灭菌培养基中，各设２个重复，置于３７℃恒温培养箱培养２ｄ后，观察菌株的耐酸碱能力。
１．６　数据统计分析
不同乳酸菌菌株生长速率及产酸速率利用ＳＰＳＳ１９．０进行单因素方差分析和多重比较。根据乳酸菌的１６Ｓ
ｒＤＮＡ序列，在Ｇｅｎｂａｎｋ中进行比对，分析相似性。乳酸菌１６ＳｒＲＮＡ序列用 ＭＥＧＡ５．０中的ＣｌｕｓｔａｌＷ 对最
近类群的序列进行多重比较分析，并通过该软件的邻近法（ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ）构建系统发育树，分支聚类的稳定
性用Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ方法进行１００次随机重复取样评价［１３］。
２　结果与分析
２．１　藏北嵩草分离魏斯氏乳酸菌的１６ＳｒＲＮＡ基因序列分析
采用１６ＳｒＲＮＡ测序结果表明（表１），从西藏德庆、那曲古露和纳木错高寒草甸藏北嵩草中共分离出１７株
魏斯氏乳酸菌。其中从德庆、那曲古露及纳木错藏北嵩草中各分离出９，３及５株菌。这些菌种属于魏斯氏乳酸
菌的２个种，即食窦魏斯氏乳酸菌（犠犲犻狊狊犲犾犾犪犮犻犫犪狉犻犪）和融合魏斯氏乳酸菌（犠犲犻狊狊犲犾犾犪犮狅狀犳狌狊犪）；而且有１０个菌
株与Ｇｅｎｂａｎｋ中的标准菌株食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９（犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９）和融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３（犠．犮狅狀犳狌狊犪
ＪＣＭ１０９３）的相似率均为９９％。通过进一步对２种魏斯氏乳酸菌菌种相似菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列进行多重
比较分析和系统发育树的构建（图１），鉴定出所分离的１７株魏斯氏乳酸菌菌株有６株为食窦魏斯氏乳酸菌，１１
株为融合魏斯氏乳酸菌菌株。
２．２　藏北嵩草分离魏斯氏乳酸菌的生长特性
不同海拔地区藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌的生长特征见表２。从分离菌株在不同温度的生长情况来看，这
些菌株均能够在４和１０℃生长。在不同ｐＨ值条件下的生长情况表明，菌株Ｄ７，Ｄ９ 和Ｎ２，Ｎ３，Ｎ４ 能在ｐＨ值为
３的条件下生长，而且大多数菌株能在ｐＨ值为４～９．５的范围内生长。
分离乳酸菌的糖发酵试验结果见表３。从表３看出，除了菌株Ｎ２ 外，所有的菌株都发酵阿拉伯糖。发酵半
乳糖的结果表明，有１５个魏斯氏菌株可发酵利用半乳糖，而菌株Ｄ２ 和Ｄ７ 为可变的反应。所有的菌株均能利用
纤维二糖，麦芽糖，果糖，蜜二糖和蔗糖。菌株Ｄ４，Ｇ３，以及Ｎ２～Ｎ５ 均能发酵核糖，而菌株Ｄ１，Ｄ２ 和Ｄ９ 不利用核
糖，其余菌株为可变的反应；从利用棉籽糖的情况来看，菌株Ｄ６，Ｎ１，Ｎ２，Ｎ３ 不发酵棉籽糖。根据魏斯氏乳酸菌
的糖发酵鉴定方法，食窦魏斯氏乳酸菌发酵阿拉伯糖，不发酵半乳糖和木糖。但本试验中所分离菌株的糖发酵试
验结果表明，只有菌株Ｄ７ 利用半乳糖为可变反应，其余５株食窦魏斯氏乳酸菌（Ｄ３，Ｄ８，Ｄ９，Ｎ１，Ｎ３，Ｎ４）均能发酵
利用半乳糖。而１６ＳｒＲＮＡ序列分析结果表明，菌株Ｄ２，Ｄ４，Ｄ５，Ｄ６ 及Ｇ１，Ｇ２ 和Ｎ２，Ｎ３ 与融合魏斯氏乳酸菌的
相似性均为１００％，并结合系统发育分析结果（图１），菌株Ｄ１，Ｄ８ 和Ｇ２ 均为融合魏斯氏乳酸菌。
８６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
表１　藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌菌株的１６犛狉犚犖犃基因序列分析结果
犜犪犫犾犲１　犚犲狊狌犾狋狊狅犳１６犛狉犚犖犃犵犲狀犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊狅犳狊狋狉犪犻狀犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
菌株及编号
Ｓｔｒａｉｎａｎｄｎｕｍｂｅｒ
基因库存取号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒ
近源种
Ｃｌｏｓｅｓｔｒｅｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎ
与Ｇｅｎｂａｎｋ中近源种的相似性Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗｉｔｈ
ｔｈｅｃｌｏｓｅｓｔｄｅｓｃｒｉｂｅｄｓｐｅｃｉｅｓｉｎＧｅｎｂａｎｋ（％）
Ｄ１ Ｇ７５８Ｎ８ＲＴ０１Ｓ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｄ２ Ｇ７５Ｎ１Ｐ３Ｕ０１Ｎ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｄ３ Ｇ７５ＵＺ８Ｚ６０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｄ４ Ｇ７５ＺＸＫ８Ｚ０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｄ５ Ｇ７６３６９ＪＰ０１３ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｄ６ Ｇ７６７０１Ｔ５０１６ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｄ７ Ｇ７６Ａ８ＺＳＦ０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｄ８ Ｇ７６ＣＤ５ＹＹ０１６ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｄ９ Ｇ７６Ｆ１Ｆ７Ｃ０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｇ１ Ｇ７６ＪＸＹＺＭ０１Ｎ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｇ２ Ｇ７６ＭＹＣＦＥ０１Ｓ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｇ３ Ｇ７６ＲＭＪ９Ｍ０１３ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｎ１ Ｇ７６ＵＲＢ２Ｐ０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｎ２ Ｇ７６ＸＪＴＶＣ０１３ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
Ｎ３ Ｇ７７０ＪＭＪＧ０１６ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｎ４ Ｇ７７２Ｎ１Ｙ２０１２ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ ９９
食窦魏斯氏菌ＩＩＩ５９犠．犮犻犫犪狉犻犪ＩＩＩ５９ ９９
Ｎ５ Ｇ７７５Ｄ１ＪＺ０１３ 融合魏斯氏菌ＪＣＭ１０９３犠．犮狅狀犳狌狊犪ＪＣＭ１０９３ １００
　注：Ｄ１～Ｄ９，德庆藏北嵩草分离的魏斯氏乳酸菌；Ｇ１～Ｇ３，那曲古露藏北嵩草分离的魏斯氏乳酸菌；Ｎ１～Ｎ５，纳木错藏北嵩草分离的乳酸菌。
　Ｎｏｔｅ：Ｄ１－Ｄ９，犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ；Ｇ１－Ｇ３，犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＧｕｌｕｏｆＮａｑｕ；
Ｎ１－Ｎ５，犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＮａｍｕｃｕｏ．
２．３　藏北嵩草分离魏斯氏乳酸菌的产酸及生长特性
藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌的产酸速率见表４。１７株魏斯氏乳酸菌培养６ｈ后，菌株Ｄ４ 的产酸速率最快，
其培养基中ｐＨ比起始培养基的ｐＨ下降了１．３８，且显著高于其他菌株的产酸速率（犘＜０．０５）。培养１２ｈ后，菌
株Ｇ１ 培养基中的ｐＨ最低，比起始ｐＨ降低了２．０９，且显著高于其他菌株的产酸速率（犘＜０．０５）。培养１８ｈ后，
菌株Ｎ１ 培养基中的ｐＨ最低，显著高于其他菌株的产酸速率（犘＜０．０５），且比起始ｐＨ降低２．４６。同时，该菌株
在培养２４ｈ后，其产酸速率也最大。
不同菌株的生长速率结果见表５。从表５可以看出，分离的魏斯氏乳酸菌在培养６ｈ后，菌株Ｄ４，Ｇ１ 和Ｎ２
的繁殖速率最快，其培养基中细胞的浓度（ＯＤ值）显著高于其他菌株（犘＜０．０５）。培养１２ｈ后，菌株Ｇ１ 的生长
速率最快，且其培养基中的细胞浓度显著高于其他菌株（犘＜０．０５）。这一结果与产酸速率结果一致。在各菌株
培养１８ｈ后，菌株Ｄ１ 和Ｇ２ 的培养基中细胞浓度最大，菌株Ｄ４，Ｎ１ 和Ｎ４ 的浓度次之。而培养２４ｈ后，菌株Ｄ６
的生长速率最大，且显著高于其他菌株（犘＜０．０５），而菌株Ｇ２ 培养基中的浓度次之。
９６２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
图１　藏北嵩草分离魏斯氏乳酸菌的系统发育分析
犉犻犵．１　犜犺犲狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犠犲犻狊狊犲犾犾犪犾犪犮狋犻犮犪犮犻犱犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
　图中Ｄ，Ｇ，Ｎ分别代表从德庆，那曲古露及纳木错藏北嵩草分离出的魏斯氏乳酸菌；括号中的字母数字表示该菌株的编号；树枝中的数字表示
ｂｏｏｔｓｔｒａｐ验证中该树枝可信度的百分数；标尺表示０．５％的序列差异度。Ｄ，Ｇ，ａｎｄＮｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＤｅｑｉｎｇ，ＧｕｌｕａｎｄＮａｍｕｃｕｏ，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｌｅｔｔｅｒｗｉｔｈｎｕｍｂｅｒｓｉｎｂｒａｃｋｅｔｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｒａｉｎｎｕｍｂｅｒｓ；ｎｕｍｂｅｒｓｉｎｔｒｅｅｂｒａｎｃｈｒｅｐｒｅｓｅｎｔｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｆｏｒｅａｃｈｂｒａｎｃｈ；
ｓｃａｌｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔ０．５％ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅ．
３　讨论
　　魏斯菌属（犠犲犻狊狊犲犾犾犪）是１９９３年Ｃｏｌｉｎｓ等提议建立的一个新菌属，目前至少由１２个菌种组成［２４］。该乳酸
菌不形成芽孢，无动力的革兰阳性球菌或球杆菌，呈单个、成双或短链状排列。这类乳酸菌广泛分布于发酵食物
（如腊肠、泡菜）、土壤等，多数菌种在植物发酵中起重要作用［２４］。在青贮饲料中报道的魏斯氏菌主要为类肠膜魏
斯菌（犠．狆犪狉犪犿犲狊犲狀狋犲狉狅犻犱犲狊），并在青贮饲料发酵初期起重要作用，但研究表明这类乳酸菌在提高青贮饲料品质
方面作用较小［２５］。
０７２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
表２　藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌在不同温度和狆犎条件下的生长特性
犜犪犫犾犲２　犌狉狅狑狋犺狆狉狅犳犻犾犲狊狅犳犠犲犻狊狊犲犾犾犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻犪狋犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲犪狀犱狆犎
项目
Ｉｔｅｍ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
不同温度Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）
４ １０ １５ ２５ ３０ ４０ ５０ ６０
德庆藏北嵩草附着魏斯氏乳酸
菌 犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ
Ｄ１ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ － － ＋＋
Ｄ２ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ｗ － ＋
Ｄ３ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ － ＋
Ｄ４ ＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋
Ｄ５ ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ｗ － ＋
Ｄ６ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ － ＋
Ｄ７ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ － ＋
Ｄ８ ＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋
Ｄ９ ＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋
那曲古露藏北嵩草附着魏斯氏
乳酸菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＧｕｌｕ
Ｇ１ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋ ｗ ｗ ＋＋ ＋
Ｇ２ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋ ｗ ｗ － ＋
Ｇ３ ＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋ － ＋
纳木错藏北嵩草附着魏斯氏乳
酸菌 犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＮａｍｕｃｕｏ
Ｎ１ ＋＋ ＋＋＋ ｗ ＋＋＋ ＋＋＋ ｗ － ＋
Ｎ２ ＋ ｗ － ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋
Ｎ３ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ － ＋
Ｎ４ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ｗ － ｗ
Ｎ５ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ｗ － ＋
项目
Ｉｔｅｍ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
不同ｐＨＤｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨ
３ ４ ４．５ ５ ６～７ ８ ９ ９．５
德庆藏北嵩草附着魏斯氏乳酸
菌 犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ
Ｄ１ － ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋
Ｄ２ － ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ － －
Ｄ３ － ｗ － ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｄ４ － ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｄ５ － ｗ ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋
Ｄ６ － ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｄ７ ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｄ８ － ＋ ＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｄ９ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
那曲古露藏北嵩草附着魏斯氏
乳酸菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＧｕｌｕ
Ｇ１ － ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｇ２ － ｗ ｗ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋
Ｇ３ － ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ｗ
纳木错藏北嵩草附着魏斯氏乳
酸菌 犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＮａｍｕｃｕｏ
Ｎ１ － ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋ ＋
Ｎ２ ＋ ｗ ＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋
Ｎ３ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋
Ｎ４ ＋ ＋＋ ＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ ＋
Ｎ５ － ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋
　注：“＋”生长，“＋＋”生长较好，“＋＋＋”生长良好，“－”不生长；“ｗ”微弱生长。
　Ｎｏｔｅ：“＋”ｇｒｏｗｔｈ，“＋＋”ｇｒｏｗｔｈｗｅｌ，“＋＋＋”ｇｒｏｗｔｈｖｅｒｙｗｅｌ，“－”ｎｏｎｇｒｏｗｔｈ，“ｗ”ｇｒｏｗｔｈｗｅａｋｌｙ．
１７２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
表３　藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌的糖发酵特性
犜犪犫犾犲３　犛狌犵犪狉犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狆狉狅犳犻犾犲狊狅犳犠犲犻狊狊犲犾犾犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
项目Ｉｔｅｍ
德庆藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌
犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ
犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ
Ｄ１ Ｄ２ Ｄ３ Ｄ４ Ｄ５ Ｄ６ Ｄ７ Ｄ８ Ｄ９
那曲古露藏北嵩草附着魏斯
氏乳酸菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓ
ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
ｉｎＧｕｌｕｏｆＮａｑｕ
Ｇ１ Ｇ２ Ｇ３
纳木错藏北嵩草附着魏斯
氏乳酸菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓ
ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
ｉｎＮａｍｕｃｕｏ
Ｎ１ Ｎ２ Ｎ３ Ｎ４ Ｎ５
阿拉伯糖Ａｒａｂｉｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ｄ核糖ＤＲｉｂｏｓｅ － － ＋ ｄ ｄ ｄ ｄ ｄ － ｄ ｄ ＋ ｄ ＋ ＋ ＋ ＋
甘露糖 Ｍａｎｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
鼠李糖 Ｒｈａｍｎｏｓｅ － － － － － － － ＋ － － － － － － － － －
棉籽糖Ｒａｆｆｉｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － ＋ ＋
果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
半乳糖Ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋ ｄ ＋ ＋ ＋ ＋ ｄ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
密二糖 Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
苦杏仁苷Ａｍｙｇｄａｌｉｎ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
乳糖Ｌａｃｔｏｓｅ ＋ － ｄ ｄ ＋ ＋ － － ＋ ｄ － － ＋ ＋ ＋ ＋ －
葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
葡萄糖酸盐Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ － － － － － － － － － － － － － － － － －
七叶苷Ｅｓｃｕｌｉｎ ＋ ＋ ＋ ＋ ｄ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ｄ ＋ ｄ ＋ ＋ ＋
纤维二糖Ｃｅｌｏｂｉｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
麦芽糖 Ｍａｌｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
甘露醇 Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
水杨苷Ｓａｌｉｃｉｎ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
山梨醇Ｓｏｒｂｉｔｏｌ ＋ － ＋ ＋ － ＋ － － － － ｄ － － － ＋ － ｄ
蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
精氨酸水解ＮＨ３ｆｒｏｍａｒｇｉｎｉｎｅ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
　注：“＋”９０％菌株为阳性；“－”９０％菌株为阴性；“ｄ”可变的反应。
　Ｎｏｔｅ：“＋”９０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓａｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅ；“－”９０％ｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓａｒｅｎｅｇａｔｉｖｅ；“ｄ”ｖａｒｉａｂｌｅ．
魏斯菌属细菌可分离于多种来源。但在高寒极端环境中分离的魏斯氏乳酸菌还未见报道。本研究从高寒地
区藏嵩草中分离的魏斯氏乳酸菌，通过１６ＳｒＲＮＡ序列分析表明，主要为食窦魏斯氏乳酸菌和融合魏斯氏乳酸
菌。从目前的研究资料来看，仅见这２种菌分离于人类或其他动物的报道［２６２７］。研究表明，这２种菌很难从形态
特征及菌落特征方面区别；食窦魏斯氏菌发酵阿拉伯糖，不发酵半乳糖和木糖，可区别于融合魏斯氏菌［２４］，因为
融合魏斯氏菌不发酵阿拉伯糖、蜜二糖和棉籽糖，但发酵半乳糖、纤维二糖、麦芽糖、核糖等［２１］。但本试验的研究
结果表明，从藏嵩草中分离的融合魏斯氏菌除了菌株Ｎ２ 外，其他菌株菌发酵阿拉伯糖，而且分离鉴定的食窦魏
斯氏乳酸菌均能利用半乳糖。这可能是高寒环境中魏斯氏乳酸菌对碳源的利用比其他环境中分离出的菌种更具
有广泛性。
由于青藏高原高寒环境的特殊性，从藏嵩草中分离的乳酸菌能够在４℃的条件下生长，而且在１０℃时生长活
力旺盛，体现出高寒环境中分离出的乳酸菌对低温的适应特性。这对高寒低温条件下，应用分离出的耐低温乳酸
菌进行青贮饲料的发酵提供了保障和科学依据，对于低温环境中青贮饲料的调制具有重要的意义。另外，本试验
结果表明，菌株Ｄ７，Ｄ９ 和Ｎ２，Ｎ３，Ｎ４ 能在ｐＨ为３的条件下生长，体现出这些菌株具有强的耐酸性能力。从本试
验 分离出的１７株融合魏斯氏乳酸菌的生长特性及产酸能力来看，菌株Ｄ４和Ｇ１分别在培养６和１２ｈ时，产酸
２７２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
表４　藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌的产酸速率
犜犪犫犾犲４　犃犮犻犱狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳犠犲犻狊狊犲犾犾犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
项目
Ｉｔｅｍ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
时间 Ｔｉｍｅ（ｈ）
６ １２ １８ ２４
德庆藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌
犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ 犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ
Ｄ１ ０．３０ｄ １．６１ｄ ２．１７ｄ ２．２９ｅ
Ｄ２ ０．２４ｅ １．５９ｅ ２．１３ｅ ２．２９ｅ
Ｄ３ ０．１３ｇ ０．４３ｉ ２．２４ｃ ２．３０ｅ
Ｄ４ １．３８ａ １．８８ｂ ２．２１ｃｄ ２．４０ｃ
Ｄ５ ０．２８ｄ １．５８ｅ ２．２５ｃ ２．３６ｄ
Ｄ６ ０．３１ｄ １．８４ｂ ２．２３ｃ ２．２９ｅ
Ｄ７ ０．１７ｆ １．２９ｇ ２．０２ｆ ２．１５ｈ
Ｄ８ ０．２１ｅ １．６３ｄ ２．０４ｆ ２．１９ｇ
Ｄ９ ０．０７ｈ １．４８ｆ １．８７ｈ １．９８ｊ
那曲古露藏北嵩草附着魏斯氏乳酸
菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＧｕｌｕ
Ｇ１ ０．５７ｂ ２．０９ａ ２．１２ｅ ２．１８ｇ
Ｇ２ ０．０７ｈ １．３３ｇ １．８０ｈ １．９２ｋ
Ｇ３ ０．０７ｈ １．５６ｅ １．８４ｈ １．９２ｋ
纳木错藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌
犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ 犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＮａｍｕｃｕｏ
Ｎ１ ０．２２ｅ １．７６ｃ ２．４６ａ ２．６５ａ
Ｎ２ ０．３５ｃ ０．６２ｈ １．９５ｇ ２．２６ｆ
Ｎ３ ０．０７ｈ ０．６９ｈ ２．０４ｆ ２．０８ｉ
Ｎ４ ０．２４ｅ １．７２ｃ ２．３１ｂ ２．４３ｂ
Ｎ５ ０．１６ｆ １．５６ｅ ２．１７ｄ ２．２６ｆ
ＳＥ ０．０５ ０．０８ ０．０３ ０．０３
　注：同列数据不同字母表示差异显著（犘＜０．０５）。ＳＥ，标准误差。下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｍｅａｎｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（犘＜０．０５）；ＳＥ，ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
表５　藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌的生长速率
犜犪犫犾犲５　犌狉狅狑狋犺狉犪狋犲狅犳犠犲犻狊狊犲犾犾犪狊狋狉犪犻狀狊犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犓．犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻
项目
Ｉｔｅｍ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
时间 Ｔｉｍｅ（ｈ）
６ １２ １８ ２４
德庆藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌
犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ 犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＤｅｑｉｎｇ
Ｄ１ ０．０４ｄ １．６４ｉ ２．０６ａ ２．０９ｃ
Ｄ２ ０．１４ｃｄ １．５５ｊ １．９１ｄ １．９４ｈ
Ｄ３ ０．０４ｄ ０．１４ｐ １．９８ｃ １．９９ｅ
Ｄ４ ０．９１ａ １．９５ｄ ２．０２ｂ ２．０１ｄ
Ｄ５ ０．０７ｄ ２．０２ｂ １．８７ｅｆ １．８８ｌ
Ｄ６ ０．１２ｃｄ １．９８ｃ １．８４ｇｈ ２．１８ａ
Ｄ７ ０．０９ｄ １．０９ｍ １．７２ｉ １．８７ｌ
Ｄ８ ０．０３ｄ １．９３ｅ １．８２ｈ １．８８ｌ
Ｄ９ ０．５１ｂｃ １．７１ｇ １．９３ｄ １．９２ｊ
那曲古露藏北嵩草附着魏斯氏乳酸
菌犠犲犻狊狊犲犾犾犪ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＧｕｌｕｏｆＮａｑｕ
Ｇ１ ０．８２ａｂ ２．０６ａ １．９０ｄｅ １．９３ｉ
Ｇ２ ０．０９ｄ １．３７ｌ ２．０５ａｂ ２．１２ｂ
Ｇ３ ０．０４ｄ １．６５ｈ １．６９ｊ １．８８ｌ
纳木错藏北嵩草附着魏斯氏乳酸菌
犠犲犻狊狊犲犾犾犪 ｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ 犓．
犾犻狋狋犾犲犱犪犾犲犻ｉｎＮａｍｕｃｕｏ
Ｎ１ ０．１３ｃｄ １．９２ｆ １．９９ｂｃ １．９５ｇ
Ｎ２ ０．９０ａ ０．４６ｏ １．５１ｋ １．９７ｆ
Ｎ３ ０．０３ｄ ０．６６ｎ １．８６ｆ １．９０ｋ
Ｎ４ ０．１８ｃｄ １．９３ｅ １．９９ｂｃ １．９９ｅ
Ｎ５ ０．０７ｄ １．５３ｋ １．８７ｅｆ １．８７ｌ
ＳＥ ０．０６ ０．０９ ０．０２ ０．０１
３７２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
速率显著高于其他菌株，可作为饲料青贮时，青贮饲料发酵启动菌株的备选菌株。而菌株Ｎ１ 在培养１８至２４ｈ
后，其产酸速率均显著高于其他菌株。这一特性将对青贮饲料后续发酵起到重要的作用。上述菌株的产酸速率
特性，可为青贮饲料发酵菌株的科学合理配伍提供依据。而从生长速率来看，所分离的菌株与其产酸能力并不对
应。说明生长速率快的菌株，其产酸能力不一定强。为此，在筛选饲料青贮用乳酸菌菌株时，应以产酸速率为依
据。
４　结论
本试验首次报道了从牧草（高寒藏北嵩草）中分离出魏斯氏乳酸菌。分离出的融合魏斯氏乳酸菌菌株具有耐
低温，耐酸性强，发酵碳源广泛的特征。这一结果对于今后在我国青藏高原高寒环境中分离具有特殊发酵性能的
乳酸菌以及利用这些乳酸菌菌株进行低温环境中青贮饲料的调制提供了重要的科学依据。本试验分离魏斯氏乳
酸菌菌株对青贮饲料发酵模式及品质的影响将做进一步研究。
参考文献：
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ｉｎｅｍｅａｄｏｗ
《草业学报》２０１３年承蒙以下专家审稿，特此表示感谢
（以姓氏拼音为序）
安　渊 包爱科 毕玉芬 蔡青年 蔡体久 曹成有 曹志军 陈兵林 陈秀蓉 陈远学
程积民 崔国文 董召荣 段廷玉 多立安 樊明寿 冯虎元 傅　华 高　峰 高洪文
高　洁 高灵旺 高学文 郭继勋 郭旭生 郭彦军 郭振飞 郭正刚 韩烈保 韩清芳
韩新才 郝敦元 郝明德 郝正里 侯扶江 呼天明 胡小文 胡自治 黄季 简　恒
江海东 金　睴 李春俭 李春杰 李国旗 李辉信 李建龙 李　杰 李彦忠 李召虎
李镇清 李志华 李志坚 李志强 梁天刚 林惠龙 林晓飞 刘公社 刘建秀 刘玉民
刘志龙 刘志鹏 龙瑞军 陆　巍 吕和平 吕晓涛 毛培胜 毛胜勇 穆春生 南志标
潘远智 庞保平 彭　燕 蒲　训 强　胜 秦玉川 尚占环 邵　涛 沈禹颖 沈振西
司怀军 宋小玲 苏永中 苏　勇 孙　彦 孙志高 唐延林 田　江 田耀武 汪诗平
王成章 王　刚 王国祥 王　俊 王　 王三根 王锁民 王晓娟 王新宇 王彦荣
王
!
文 王正文 王州飞 魏春雁 吴永成 辛国荣 邢　福 徐秉良 徐世健 杨洪兵
杨惠敏 杨晓光 杨允菲 杨志民 杨中艺 姚　青 姚　拓 姚　霞 于应文 于　卓
袁学军 翟保平 张吉宇 张金林 张金屯 张巨明 张克云 张世挺 张卫建 张新全
张堰铭 赵哈林 赵团结 赵　祥 赵志刚 周洪旭 周顺利 庄　苏
５７２第２３卷第１期 草业学报２０１４年