全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿袁圆远渊远冤院远苑猿 远愿园云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤园远鄄园远苑猿鄄园愿
日本落叶松体细胞胚胎发生相关基因 蕴葬杂耘砸运员的
克隆与表达分析
李摇 龙员袁 张立峰圆袁 齐力旺圆袁 韩素英员鄢
渊员郾 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所袁北京摇 员园园园怨员曰
圆郾 中国林业科学研究院林业研究所细胞生物学实验室袁北京摇 员园园园怨员冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园源鄄员远
基金项目院 国家重点基础研究发展计划渊怨苑猿冤项目野速生优质林木培育的遗传基础及分子调控冶渊圆园园怨悦月员员怨员园园冤曰国家高技术研究发展
计划渊愿远猿冤项目野高产优质多抗林木花草分子与细胞高效育种技术及品种创制冶渊圆园园远粤粤员园园员园怨冤
作者简介院 李摇 龙渊员怨愿愿要 冤袁男袁山东德州人袁在读硕士研究生袁从事树木生物技术研究援
鄢通讯作者院 教授袁硕士生导师援主要研究方向院树木生物技术援 耘鄄皂葬蚤造院泽赠澡葬灶岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
摘要院本研究克隆了日本落叶松体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶基因 蕴葬杂耘砸运员袁并检测了在不同培养条件下
蕴葬杂耘砸运员 的表达情况袁发现 蕴葬杂耘砸运员 与已发现的其他物种 杂耘砸运员 基因有高度相似性袁择砸栽鄄孕悦砸结果显示院蕴葬杂耘砸运员
在体胚发生早期高表达遥 结果表明院蕴葬杂耘砸运员 可能在落叶松体胚发育早期起重要作用袁蕴葬杂耘砸运员 也可能成为早期胚
性细胞的标记基因遥
关键词院日本落叶松曰体细胞胚胎发生曰杂耘砸运员曰表达分析
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶凿 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 杂燥皂葬贼蚤糟 耘皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 砸藻糟藻责贼燥则鄄造蚤噪藻
运蚤灶葬泽藻 员 渊杂耘砸运员冤 郧藻灶藻 阅怎则蚤灶早 杂燥皂葬贼蚤糟 耘皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤
蕴陨 蕴燥灶早员袁 在匀粤晕郧 蕴蚤鄄枣藻灶早 圆袁 匝陨 蕴蚤鄄憎葬灶早圆袁 匀粤晕 杂怎鄄赠蚤灶早员
渊员郾 砸藻泽藻葬则糟澡 蚤灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早赠袁 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬曰
圆郾 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠袁 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 杂燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 灶燥贼 燥灶造赠 责造葬赠泽 葬 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 则燥造藻 蚤灶 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早 贼澡藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 藻皂遭则赠燥早藻灶藻鄄
泽蚤泽袁 遭怎贼 葬造泽燥 蚤灶 蚤皂责则燥增蚤灶早 贼澡藻 遭则藻藻凿蚤灶早 燥枣 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤 渊蕴葬皂遭援 冤 悦葬则则援 栽澡藻 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 则藻糟藻责贼燥则鄄造蚤噪藻
噪蚤灶葬泽藻 员 渊杂耘砸运员冤 早藻灶藻 蚤泽 糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿 葬泽 葬灶 藻泽泽藻灶贼蚤葬造 藻造藻皂藻灶贼 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻 藻葬则造赠 泽贼葬早藻 燥枣 贼澡蚤泽 责则燥糟藻泽泽援 栽澡藻 藻曾鄄
责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 燥枣 贼澡藻 澡燥皂燥造燥早 燥枣 杂耘砸运员 燥枣 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟怎造贼怎则藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿援 蕴葬杂耘砸运员
泽澡葬则藻凿 葬造造 贼澡藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟 凿燥皂葬蚤灶泽 燥枣 贼澡藻 杂耘砸运 枣葬皂蚤造赠援 栽澡藻 择砸栽鄄孕悦砸 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 蕴葬杂耘砸运员 憎葬泽 澡蚤早澡造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿
蚤灶 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 藻葬则造赠 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟藻造造泽 糟怎造贼怎则藻凿 蚤灶 贼澡藻 皂葬贼怎则藻 皂藻凿蚤怎皂援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 泽怎早早藻泽贼 贼澡葬贼 蕴葬杂耘砸运员 皂蚤早澡贼
责藻则枣燥则皂 葬 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 则燥造藻 凿怎则蚤灶早 藻葬则造赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤袁 葬灶凿 皂蚤早澡贼 遭藻 葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造 皂葬则噪藻则 燥枣 藻葬则鄄
造赠 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟藻造造泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤曰 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽曰 杂耘砸运员曰 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶
落叶松渊蕴葬则蚤曾 泽责责援 冤是我国北方尧日本及欧洲重
要的速生造林树种袁但其扦插繁育较难袁繁殖周期较
长袁不适合使用传统繁殖手段进行扩繁咱员暂 遥 植物体
细胞胚胎发生是落叶松无性快速繁殖的重要途径袁
因为体细胞胚胎发生途径与合子胚的发生途径在各
发育时期形态变化和生物化学成分变化类似咱圆暂 袁因
此袁成为研究胚胎发育机理的优良模式系统遥 体细
胞胚胎发生也成为研究落叶松胚胎发育过程及遗传
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
转化的模式体系遥 目前袁已经验证出很多体细胞胚
胎发生相关基因袁如体细胞胚胎发生相关受体类蛋
白激酶 杂耘砸运员咱猿暂 尧蕴耘粤云再 悦韵栽再蕴耘阅韵晕员渊蕴耘悦员冤咱源暂 尧
悦蕴粤灾粤栽粤 家族咱缘暂 尧宰哉杂悦匀耘蕴渊宰哉杂冤 咱远暂 尧晚期胚胎
丰富蛋白咱苑暂 尧 细胞分裂相关基因 悦再悦蕴陨晕 阅猿
渊悦再悦阅猿冤咱愿暂和阿拉伯半乳糖蛋白渊粤郧孕冤咱怨暂等袁它们
都在体胚发育过程中有着特异表达袁暗示这些基因
可能在体胚发生调控过程中发挥重要作用遥
体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶 杂耘砸运员
最先在胡萝卜中分离出来袁杂耘砸运员 属于膜富亮氨酸
重复序列类受体蛋白激酶渊蕴砸砸鄄砸蕴运泽冤家族的一员遥
蕴砸砸鄄砸蕴运泽是跨膜蛋白袁在动植物中广泛存在袁其蛋
白结构分为胞外受体结构域尧跨膜结构域和胞内激
酶结构域袁在多种生命活动如胞外信号跨膜传导尧植
物胁迫响应和发育调控等方面发挥重要作用咱员园 原 员员暂 遥
杂耘砸运员 基因首先在胡萝卜渊阅糟杂耘砸运员冤 胚性细胞中
分离到袁它只在胚性细胞中表达且只表达到体细胞
胚的球形期袁表明 阅糟杂耘砸运员 可以作为体细胞胚发生
早期或胚性细胞的标记基因咱猿暂 遥 之后研究人员在拟
南芥 渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊 蕴援 冤 匀藻赠灶澡援 冤 咱员圆暂 尧玉米
渊在藻葬 皂葬赠泽 蕴援 冤 咱员猿暂 尧水稻 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤 咱员源暂 尧番茄
渊蕴赠糟燥责藻则泽蚤糟燥灶 藻泽糟怎造藻灶贼怎皂 酝蚤造造援 冤 咱员缘暂 尧马铃薯 渊杂燥造葬灶怎皂
贼怎遭藻则燥泽怎皂 蕴援 冤 咱员缘暂 尧可可 渊栽澡藻燥遭则燥皂葬 糟葬糟葬燥 蕴援 冤 咱员远暂 尧向
日葵 渊匀藻造蚤葬灶贼澡怎泽 葬灶灶怎怎泽 蕴援 冤 咱员苑暂 尧紫花苜蓿 渊酝藻凿蚤糟葬鄄
早燥 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤 咱员愿暂等植物中分离到不同的 杂耘砸运员 基
因遥 裸子植物中也存在 杂耘砸运员 基因袁南京林业大学
高燕等咱员怨暂 分离得到马尾松 渊 孕蚤灶怎泽 皂葬泽泽燥灶蚤葬灶葬
蕴葬皂遭援 冤 孕皂杂耘砸运员 基因袁杂贼藻蚤灶藻则 等咱圆园暂克隆了南洋杉
渊粤则葬怎糟葬则蚤葬 葬灶早怎泽贼蚤枣燥造蚤葬 渊月藻则贼援 冤 韵援 运怎灶贼扎藻冤 粤葬杂耘砸运员
基因袁说明 杂耘砸运员 基因广泛存在于被子植物及裸子
植物中遥 本研究以日本落叶松 渊 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤
渊蕴葬皂遭援 冤悦葬则则援 冤为研究对象袁以本实验室长期继代
保存的已建立高效稳定体细胞胚胎发生体系的优良
日本落叶松杂种无性系胚性愈伤组织 凿圆园圆 为材料袁
在转录组测序的基础上袁克隆落叶松 杂耘砸运员 全长
糟阅晕粤袁利用 择砸栽鄄孕悦砸 研究其在不同培养基和不同
发育时期的表达情况袁为进一步深入研究落叶松体
胚发生过程中 杂耘砸运员 功能提供基础遥
员摇 材料和方法
员援 员摇 材料
本实验采用日本落叶松胚性细胞系 凿圆园圆 为实
验材料袁包括无激素的基本培养基渊酝阅园冤培养的细
胞团渊耘苑 凿冤袁继代培养基渊酝阅员冤培养的原胚团时期
渊耘员源 凿冤袁粤月粤 诱导渊酝阅圆冤的早期单胚渊员 猿 凿冤尧
中期单胚渊苑 员源 凿冤尧晚期单胚渊圆员 凿冤尧早期子叶胚
渊圆愿 凿冤尧中期子叶胚渊猿缘 凿冤和晚期子叶胚渊源圆 凿冤的
体细胞胚培养物渊图 员冤遥 用镊子分别夹取不同时期
粤院 酝阅园 培养基上的愈伤组织曰月院 酝阅员 培养基上的原胚团曰悦院 酝阅圆 培养基上的早期单胚时期细胞团曰阅院 苑 凿中期单胚时期细胞团曰
耘院 员源 凿中期单胚曰云院 圆员 凿晚期单胚曰郧院 圆愿 凿早期子叶胚细胞团曰匀院 猿缘 凿中期子叶胚曰陨院 源圆 凿晚期子叶胚遥 粤尧月尧悦尧阅渊员 伊员冤袁耘尧云尧郧尧匀尧陨渊员 伊员园冤遥
图 员摇 落叶松体胚发生不同时期体细胞胚培养物
源苑远
第 远 期 李摇 龙等院日本落叶松体细胞胚胎发生相关基因 蕴葬杂耘砸运员 的克隆与表达分析
细胞团上层的新鲜细胞组织袁迅速投入液氮冷冻袁再
将冷冻后的细胞小块置于冷冻管中袁于 原 愿园 益贮存
备用遥 无激素基本培养基包含基本的 月酝 盐和维生
素袁但没有任何激素遥 继代培养基渊含 圆袁源鄄阅和 月粤冤
与成熟培养基渊含 粤月粤冤配方使用齐力旺等咱圆员暂利用
猿员员鄄粤最优回归设计获得的最佳培养基方案遥
员援 圆摇 试剂
限制性内切酶和 栽源 连接酶均购自英国新英格
兰实验室渊晕藻憎 耘灶早造葬灶凿 蕴葬遭冤公司曰择砸栽鄄孕悦砸 定量试
剂盒尧栽葬噪葬则葬 砸晕粤蚤泽燥栽酝 孕造怎泽尧酝蚤灶蚤月耘杂栽 小量琼脂糖
凝胶 阅晕粤回收试剂盒购自大连宝生物公司曰陨孕栽郧尧
载鄄早葬造等化学药品购自上海生工曰克隆载体 责耘粤杂再鄄
栽员 糟造燥灶蚤灶早 增藻糟贼燥则尧感受态细胞 栽则葬灶泽员鄄栽员 孕澡葬早藻 砸藻鄄
泽蚤泽贼葬灶贼 悦澡藻皂蚤糟葬造造赠 购自全式金生物科技有限公司曰
阅晕粤 酝葬则噪藻则 购自天根生物科技有限公司遥 砸藻增藻则鄄
贼粤蚤凿 云蚤则泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼 试剂盒购自
栽澡藻则皂燥 杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟 公司曰 孕枣怎 购自 孕则燥皂藻早葬 公司袁
杂酝粤砸栽藻则 砸粤悦耘 噪蚤贼购自 悦造燥灶贼藻糟澡遥
员援 猿摇 方法
员援 猿援 员摇 落叶松总 砸晕粤 提取 摇 各时期细胞总 砸晕粤
提取参照大连宝生物公司 栽葬噪葬则葬 砸晕粤蚤泽燥栽酝 孕造怎泽 试
剂盒说明书进行遥 总 砸晕粤用 员豫琼脂糖凝胶检测质
量袁同时用 晕葬灶燥凿则燥责员园园园 测定 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园值袁检测
纯度和浓度袁并计算含量遥
员援 猿援 圆摇 糟阅晕粤 第 员 条链合成摇 参照 砸藻增藻则贼粤蚤凿 云蚤则泽贼
杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼试剂盒说明书获得落叶松
体胚发育各时期细胞 糟阅晕粤第 员 条链遥
员援 猿援 猿摇 蕴葬杂耘砸运员 的克隆摇 原始序列来自本课题组
在日本落叶松 韵远猿愿 细胞系原胚团转录组测序中得
到的 糟燥灶贼蚤早 片段 孕耘酝悦圆圆缘圆远 渊 郧藻灶遭葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶院
允砸员缘员远圆园冤袁该片段在 晕悦月陨网站 月蕴粤杂栽得到的结果
显示其与其他物种 杂耘砸运员 序列有很高的相似性袁且
该片段位于 杂耘砸运员 基因 猿爷端袁包含终止密码子遥 根
据本段序列设计扩增 杂耘砸运员 基因 缘爷砸粤悦耘引物院缘忆鄄
郧粤粤郧栽郧悦栽悦悦栽郧栽郧郧悦栽栽栽悦郧郧悦郧鄄猿 爷袁 砸粤悦耘 步骤
按照 糟造燥灶贼藻糟澡 杂酝粤砸栽藻则 砸粤悦耘 噪蚤贼 说明书中的 孕则燥鄄
早则葬皂圆 进行袁得到的片段连接到 责耘粤杂再鄄栽员 上进行克
隆测序遥
员援 猿援 源摇 蕴葬杂耘砸运员 编码序列 悦阅杂 全长获得摇 使用序
列拼接软件 悦燥灶贼蚤早耘曾责则藻泽泽将 缘爷砸粤悦耘测序所得结果
与转 录 组 中 孕耘酝悦圆圆缘圆远 渊 郧藻灶遭葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶院
允砸员缘员远圆园冤 片段进行拼接获得 蕴葬杂耘砸运员 编码序列
悦阅杂全长遥
员援 源摇 蕴葬杂耘砸运员 进化树构建
使用 酝耘郧粤的 粤造蚤早灶皂藻灶贼功能对 蕴葬杂耘砸运员 和其
它物种 杂耘砸运员 进行多序列比对袁使用 酝耘郧粤 的
灶藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽功能进行系统进化树构建分
析袁相关参数使用其默认值遥
员援 缘摇 蕴葬杂耘砸运员 蛋白结构性质预测
使用 阅韵郧 员援 园 绘出 蕴葬杂耘砸运员 蛋白一级结
构咱圆圆暂 袁用 杂憎蚤泽泽鄄皂燥凿藻造 网站 渊 澡贼贼责院 辕 辕 泽憎蚤泽泽皂燥凿藻造援 藻曾鄄
责葬泽赠援 燥则早 辕 冤 提供的在线自动预测功能预测 蕴葬杂耘砸运员
蛋白高级结构并与其它物种蛋白结构进行
比对咱圆猿 原 圆缘暂 遥
员援 远摇 蕴葬杂耘砸运员 基因的表达模式
各时期细胞总 砸晕粤 提取参照大连宝生物公司
栽葬噪葬则葬 砸晕粤蚤泽燥栽酝 孕造怎泽 试剂盒说明书进行遥 使用
砸匝员 砸晕葬泽藻鄄云则藻藻 阅灶葬泽藻 渊孕则燥皂藻早葬袁上海冤去除基因组
阅晕粤 用 砸藻增藻则贼 粤蚤凿 云蚤则泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼
渊云藻则皂藻灶贼葬泽袁 耘哉冤反转录袁糟阅晕粤稀释 缘 倍于 粤月陨苑缘园园
荧光定量 孕悦砸 仪渊粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽袁 云燥泽贼藻则 悦蚤贼赠袁
悦粤袁 哉杂粤冤上进行定量分析遥 用引物设计软件 孕则蚤皂鄄
藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 设计 蕴葬杂耘砸运员 定量引物院
蕴葬杂耘砸运云院 缘 爷鄄郧悦粤粤悦粤粤栽郧粤栽粤粤悦粤郧栽郧郧粤栽粤鄄
粤郧粤鄄猿爷曰
蕴葬杂耘砸运砸院 缘爷鄄郧栽粤郧郧悦悦粤粤郧悦栽郧郧郧郧粤粤鄄猿爷遥
使用 耘云鄄员葬 作为内参基因咱圆远暂 袁设计引物如下院
蕴葬耘云鄄员苑院 缘爷鄄郧粤悦栽郧栽粤悦悦栽郧栽栽郧郧栽悦郧栽郧鄄猿爷曰 蕴葬耘云鄄
员愿院 缘爷鄄悦悦栽悦悦粤郧悦粤郧粤郧悦栽栽悦粤栽鄄猿爷遥 反应体系采用
大连宝生物 杂再月砸襆 孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择栽酝说明书中 圆园 滋蕴
体系加样袁采用 圆步法 孕悦砸扩增标准程序袁阶段 员院怨缘
益预变性 猿园 泽曰阶段 圆院怨缘 益 缘 泽袁远园 益 猿源 泽袁源园 个循
环曰最后进行熔解曲线分析遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 蕴葬杂耘砸运员 缘爷砸粤悦耘结果
进行缘爷砸粤悦耘后员援 园豫琼脂糖凝胶电泳结果见图
圆遥 切取最上面一条带测序袁得到 缘爷片段 员 圆员缘 遭责遥
将得到的片段在 晕悦月陨 的 月蕴粤杂栽灶 中比对袁与其他物
种 杂耘砸运员有很高的相似性曰使用序列拼接软件 悦燥灶鄄
贼蚤早耘曾责则藻泽泽 将此片段与转录组中的 孕耘酝悦圆圆缘圆远进行拼
接袁发现该片段 猿爷端与 孕耘酝悦圆圆缘圆远 的 缘爷端有重叠袁
说明此片段为目的片段遥 由图 圆 还可看出院紧靠第 员
条带的下面还有 圆条带袁经测序得知它们是和最上面
一条带的 猿爷端相同的片段袁但它们的 缘爷端有不同长
度缺失袁可能是 砸晕粤提取过程中 杂耘砸运员 皂砸晕粤 缘爷端
缘苑远
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
发生了部分降解导致 砸粤悦耘结果大小不一遥
酝院员园园 遭责 阅晕粤 酝葬则噪藻则曰 员院缘爷砸粤悦耘 条带
图 圆摇 缘爷砸粤悦耘后 员援 园豫琼脂糖凝胶电泳结果
圆援 圆摇 蕴葬杂耘砸运员 编码序列全长获得
使用序列拼接软件 悦燥灶贼蚤早耘曾责则藻泽泽将此片段与转
录组中的 孕耘酝悦圆圆缘圆远 进行拼接袁得到 圆 远圆苑 遭责长的
序列片段袁使用 晕悦月陨中的 韵砸云蚤灶凿藻则分析发现院这段
序列包括 缘爷非编码序列 猿源猿 遭责尧编码序列全长 悦阅杂
员 愿怨猿 遭责渊含终止密码子冤以及 猿爷非编码序列 猿怨员
遭责遥 命 名 为 蕴葬杂耘砸运员 渊 郧藻灶遭葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶院
运悦怨员缘园猿苑冤袁其编码序列共编码 远猿园 个氨基酸遥
圆援 猿摇 蕴葬杂耘砸运员 蛋白一级结构
阅韵郧 员援 园 绘出的 蕴葬杂耘砸运员 蛋白一级结构见
图 猿遥
杂蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻院 信号肽曰在陨孕院亮氨酸拉链渊 造藻怎 扎蚤责责藻则冤曰 蕴砸砸院 富亮氨酸重复序列渊员藻怎鄄则蚤糟澡 则藻责藻葬贼冤曰 杂孕孕院 含 杂孕孕渊杂藻则 孕则燥要孕则燥冤基序的富脯
氨酸结构域曰 栽酝院 跨膜结构域渊贼则葬灶泽鄄皂藻皂遭则葬灶藻 则藻早蚤燥灶冤曰 运蚤灶葬泽藻院激酶结构域曰 悦鄄贼藻则皂蚤灶葬造院悦末端
图 猿摇 蕴葬杂耘砸运员 蛋白一级结构
圆援 源摇 蕴葬杂耘砸运员 的进化树构建及相似性比对
圆援 源援 员 摇 蕴葬杂耘砸运员 的进化树构建 摇 使用 酝耘郧粤 的
灶藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽 功能进行进化树构建分析
渊图 源冤遥 由图 源 可以看出院落叶松 蕴葬杂耘砸运员 与南洋
杉和马尾松 孕皂杂耘砸运员 进化关系最近遥
摇 郧皂院大豆渊郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 蕴援 冤曰酝贼院紫花苜蓿曰孕贼院毛果杨渊孕燥责怎造怎泽
贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 栽燥则则援 驭 郧则葬赠冤曰杂造院番茄曰杂贼院马铃薯曰粤贼院拟南芥曰郧澡院 陆
地棉渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂 蕴援 冤曰灾增院 葡萄渊灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 蕴援 冤曰粤葬院南
洋杉曰蕴葬院日本落叶松 韵泽院 粳稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 泽怎遭泽责援 躁葬责燥灶蚤糟葬 运葬鄄
贼燥冤曰孕皂院马尾松曰在皂院玉米
图 源摇 蕴葬杂耘砸运员 的系统进化树
圆援 源援 圆摇 杂耘砸运员蛋白一级结构序列比对摇 使用 酝耘郧粤
的 粤造蚤早灶皂藻灶贼 功能对 员猿 个物种的 杂耘砸运员 蛋白一级
结构序列进行比对袁由图 缘 可见院落叶松 蕴葬杂耘砸运员
与马尾松 孕皂杂耘砸运员 和南洋杉 粤葬杂耘砸运员 全长编码序
列的相似性都达到了 怨猿豫 遥 保守性最高的是激酶
结构域袁其在上述 员猿 个物种中的相似性高达 怨猿豫以
上袁保守性最差的是信号肽遥
圆援 源援 猿摇 杂耘砸运员 蛋白高级结构序列比对 摇 用 杂憎蚤泽泽鄄
皂燥凿藻造 网站 渊澡贼贼责院 辕 辕 泽憎蚤泽泽皂燥凿藻造援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 冤 提供的
在线自动预测功能预测 蕴葬杂耘砸运员 蛋白高级结构并
与其它物种的蛋白结构进行比对渊图 远冤遥 由图 远 可
以看出院杂憎蚤泽泽鄄皂燥凿藻造自动预测的 员猿 个物种的 杂耘砸运员
蛋白 在陨孕鄄蕴砸砸鄄杂孕孕渊胞外冤结构域和激酶渊胞内冤结构
域 圆 部分高级结构相似性都很高遥
圆援 缘摇 蕴葬杂耘砸运员 基因在不同培养基中的表达模式
落叶松 凿圆园圆 细胞系各时期的细胞定量分析结
果见图 苑遥 由图 苑 可看出院在 酝阅圆渊员 猿 凿冤中 蕴葬鄄
杂耘砸运员 的表达上调明显袁第 圆 天时最高遥 第 苑 天时
表达量已经下降袁苑 凿之后的各时期表达量基本呈递
减趋势遥 说明不同培养条件下袁激素等物质会明显
影响 蕴葬杂耘砸运员 基因在细胞中的表达遥
远苑远
第 远 期 李摇 龙等院日本落叶松体细胞胚胎发生相关基因 蕴葬杂耘砸运员 的克隆与表达分析
图 缘摇 员猿 个物种的 杂耘砸运员 蛋白一级结构序列比对
苑苑远
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 远摇 杂憎蚤泽泽鄄皂燥凿藻造 预测 蕴葬杂耘砸运员 蛋白高级结构
摇 酝阅园渊耘苑 凿冤院无激素基本培养基上培养 苑 凿 的愈伤组织曰酝阅员
渊耘员源 凿冤院继代培养基上的原胚团曰酝阅圆渊员 猿 凿冤院早期单胚时
期细胞团曰酝阅圆渊苑 凿冤院中期单胚时期细胞团曰酝阅圆渊员源 凿冤中期单
胚曰酝阅圆渊圆员 凿冤晚期单胚曰酝阅圆渊圆愿 凿冤早期子叶胚细胞团曰酝阅圆
渊猿缘 凿冤中期子叶胚曰酝阅圆渊源圆 凿冤晚期子叶胚遥
图 苑摇 不同培养条件下 蕴葬杂耘砸运员 基因在细胞中的表达模式
猿摇 结论与讨论
编码氨基酸序列多重比对分析发现袁蕴葬杂耘砸运员
与其它植物中的 杂耘砸运员 有很高的同源性袁且含有
许多相同的保守结构域袁具有 杂耘砸运 基因的典型序
列特征袁有些结构域甚至完全一样遥 不同植物的
杂耘砸运员 基因编码的蛋白质分子量尧氨基酸组成都
很接近遥 通过 耘曾孕粤杂赠 网站的工具 悦燥皂责怎贼藻 责陨 辕 酝憎
渊澡贼贼责院 辕 辕 憎藻遭援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 糟燥皂责怎贼藻赃责蚤 辕 冤 对几个物种
的 杂耘砸运员 蛋白分子量和等电点进行预测发现袁蕴葬鄄
杂耘砸运员 蛋白 渊远猿园 个氨基酸冤分子量约为 远怨援 远
噪阅袁预测 责陨为 缘郾 远怨曰拟南芥 粤贼杂耘砸运员 蛋白渊远圆缘 个
氨基酸冤分子量约为 远怨 噪阅袁预测 责陨 为 缘援 圆缘曰水稻
韵泽杂耘砸运员 蛋白渊远圆愿 个氨基酸冤袁分子量 远怨援 缘 噪阅袁
预测 责陨 为 缘援 怨愿曰南洋杉 粤葬杂耘砸运员 蛋白渊远猿园 个氨
基酸冤袁分子量 远怨援 圆 噪阅袁预测 责陨 为 缘援 愿猿曰马尾松
孕皂杂耘砸运员 蛋白渊远圆远 个氨基酸冤袁分子量 远怨援 缘 噪阅袁
预测 责陨为 缘郾 愿圆遥 这些蛋白分子量和等电点的相似
性可能意味着它们结构的保守性遥 从图 远 所示各
愿苑远
第 远 期 李摇 龙等院日本落叶松体细胞胚胎发生相关基因 蕴葬杂耘砸运员 的克隆与表达分析
个物种的 杂耘砸运员 蛋白高级结构的极高相似度可以
推断袁它们可能在各自的细胞内起着相似甚至相同
的作用遥
由图 苑 可看出院在成熟培养基中袁蕴葬杂耘砸运员 的
表达明显上调袁第 圆 天便达到最高袁比无激素时高
出 员园 倍曰而到第 苑 天时表达量已经下降到起初的
近 缘园豫 袁之后的各时期表达量基本呈递减趋势遥
由于 蕴葬杂耘砸运员 的高表达是处于愈伤组织向体细胞
胚胎转变过程的早期袁所以 蕴葬杂耘砸运员 很可能是在
早期体细胞胚胎发生过程中起作用袁即其在 粤月粤
的诱导下启动了体胚发育过程袁而在体胚发育后期
蕴葬杂耘砸运员 的作用不再那么明显袁可起到维持体胚
发育过程的作用遥 在此过程中袁蕴葬杂耘砸运员 可能是
受成熟培养基中激素 粤月粤 的诱导袁而 酝阅园渊耘苑 凿冤
和 酝阅员渊耘员源 凿冤的差异是受激素 圆袁源鄄阅和 月粤的影
响袁说明 蕴葬杂耘砸运员 可能受这 圆 种激素诱导袁但此诱
导不如 粤月粤 的诱导明显遥 以往的研究证明袁
杂耘砸运员 基因可以受多种激素诱导袁包括 圆袁源鄄阅咱猿暂 尧
粤月粤咱员源暂等袁此外 杂耘砸运员 基因也可受病害防御信号
分子诱导表达袁如水杨酸 杂粤 可诱导水稻 韵泽杂耘砸运员
的高表达等咱员源暂 袁说明 杂耘砸运员 基因也参与了病害防
御过程遥
落叶松 蕴葬杂耘砸运员 在体胚发生整个过程中均表
达袁但在体胚发生早期表达量高袁在无激素基本培养
基中表达量很低遥 其他物种中也同样有表达特异
性袁如胡萝卜 阅糟杂耘砸运 只在胚性细胞中表达且只表
达到心形期咱猿暂 曰拟南芥 粤贼杂耘砸运员 在合子胚中也只表
达到心形期曰蜜柑 悦蚤贼杂耘砸运员 只表达在胚性细胞中袁
而不在非胚性细胞内表达咱圆苑暂 遥 南京林业大学的高
燕等咱员怨暂发现袁马尾松 孕皂杂耘砸运员 在主要的组织器官
渊根尧茎尧针叶等冤略有表达袁但在诱导培养的非胚性
愈伤中没有检测到表达袁而在经继代培养的胚性愈
伤中表达很高且逐渐增加袁且在培养 圆园 凿 时达到最
高遥 南洋杉的 粤葬杂耘砸运员 则在无激素培养基中无表
达袁在成熟培养基中高表达咱圆园暂 遥 这些物种中 杂耘砸运员
基因的时期或组织表达都有特异性袁例如 杂耘砸运员 基
因是在大部分植物体细胞胚胎发育过程中只在胚性
细胞中表达袁意味着 杂耘砸运员 基因在各物种体胚发生
过程和胚性细胞产生中发挥重要作用遥
深入研究体细胞胚发生分子机理有助于更加清
晰地了解植物体细胞胚的发生过程袁对解决体细胞
胚发生过程中存在的问题具有重要的指导作用遥
参考文献院
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