全 文 ：林 业 科学研 究 ,
‘
三种按树菌根菌培养条件的研究 ’
弓明钦 陈 羽 王凤珍
摘要 多根硬皮马勃 、彩色豆 马勃 及西澳枯滑菇 菌株是广东地 区应用较多 、
效果也较好的菌根真菌 , 为摸清其培养条件 , 分别进行了适温范围 、最适 以及 源 、 源需求的
测定 。 其结果表明 菌株 适温范围最广 , 为 一 , 菌株 。适温范围最窄 , 为 。
最适 范围以 菌株最广 , 为 , 菌株 最窄 , 仅为 除菌株 不能利用有
机 源中的牛肉青及酵母浸膏外 , 其它 种 源均有不同程度的利用 , 菌株对有机 利用较
好 而 菌株对氨态 利用较好 除 菌株对果糖的利用较差外 , 其它 源差异不大 , 菌株
对麦芽糖及葡萄糖利用较好 , 而 。对 种 源利用效果差异不大 。
关键词 按树 菌根菌 培养条件
菌根菌彩色豆马勃 〔 , , 〕及多根硬皮马勃 尸
! ’“ 是华南地 区按树林中 比较常见的两种外生菌根菌 ’」, 而西澳粘滑
菇 衬今 、 , 是近年从澳大利亚 引进的按树
菌根菌种 。 这三种菌根菌生长较好 , 繁殖容易 , 应用较多 , 效果也较好 , 是按树应用最有前途
的菌根菌种 。 为了便于扩大繁殖及应用推广 , 我们开展了有关生物学特性的研究 , 分别对三
个菌株的适温范围 、 最适 范围 , 以及对不同的 源及 源利用情况等进行测定 , 初步明确
了三菌种生物学及营养的有关特性和要求 。
材料及方法
供试菌种
彩色豆马勃 菌株 , 分离自海南省窿缘按 ’ ,相 盯 林下的子
实体 。
多根硬皮马勃 菌株 , 分离 自广东西部尾叶按 邵妒勺 林下的子实
体 。
西澳粘滑菇 菌株 , 原产澳大 利亚西部干热地区的赤按 ” 州 ’、
林中 , 由澳大利亚联邦科学与工业组织 !∀ 博士提供 。
适是范围的测定
在消毒培养皿中倒 入 培养基 , , 冷却后每皿定量接入生长期一致的 ,
, 大小的菌种 块 , 分别放 入 、 一。、 、 、 、 、 、 、 条件下恒温培养 , 每种温
一 一 收稿
弓明钦研究员 陈羽 王风珍 中国林业科学研究院热带林业研究所 广州 。。
· 本研究为中澳合作 项 目 一 年 及国家“八五 ”攻关子课题 “按树菌根应 用技 术研究 ” 一 孟 年
部分内容 , 澳大利 亚 〕的 博士提供 砂加 ““ 菌种 , 谨致谢意 。
林 业 科 学 研 究 卷
度处理重复 次 , 定期测定每个菌落直径 十字定向测量 次 , 取平均数 。
摇床培养试验
菌种的 范围测定 , 源试验及 源试验均放置于 型恒温摇床上进行 。 采用
三角瓶 , 每瓶装入培养液 飞经高压消毒后每瓶接入相当于 一 菌丝体
干重 的培养菌块 小块 , 每处理 次重复 , 培养温度为 , 摇床转速为 ,
培养周期为 。
范围试脸 从 共设 个梯度 , 相隔值为 。 将配好的 培养液 培
养基不加琼脂 用 调节 值至试验值 , 装瓶后消毒 , 每瓶定量接入 小块同样
大小的平板菌种 , 块 试验每处理重复 次 , 在摇床上振荡培养 后进行生物量
测定 。
源试脸 将培养基中的氮源分别选用 种不同的有机或无机氮 同时设不加 源
的处理为对照 。 其 源分别为 、 、 、 、牛肉浸膏 、蛋白陈 、酵母浸膏
及尿素等 , 每处理重复 次 按上述方法进行消毒 、接种 , 并在摇床上进行恒温振荡培养 ,
测定生物量 。
源试验 将培养基中的 源分别选用葡萄糖 、 果糖 、 麦芽糖 、 蔗糖 、 可溶性淀粉及糊
精等 种 , 另设不加 源的培养基为对照 , 每处理重复 次 , 按前述方法进行消毒 、接种 , 在摇
床上恒温培养 , 按上述方法测定各菌种生物量 。
生物圣的浏定 上述三个试验的菌种经摇床培养 后 , 分别将培养液进行过滤 、抽
提 , 滤出全部菌丝体 , 用无菌蒸馏水冲洗数次 , 将滤纸连同菌丝体放入 干操箱中烘干至
恒重 .同时设无菌丝体的滤纸相同处理以 校正其纸重 , 在电子天平上称量并计算出各处理菌丝
体的生物量 。 前述接种量计算也按此方法得出 。
2 试验结果
2.1 三菌种适温范围测定结果
菌种适温范围测定结果(表 l) 表明 :三种菌根菌的适温范围明显不同.彩色豆马勃 9216
菌株的温度范围最广 , 为 10 ~ 38 C , 以 20 ~ 35 C 为最适温度 , 10 C 以下 , 38 C 以上难以生长 ;
多根硬皮马勃 9215 菌株温度范围为 15 一 35 C , 以 20 一 30 C 为最适温度 .15 C 以下 , 30 C 以
表 l 三菌种适温范围测定结果
苗种 侧定项 目 测定温度
( C )
菌落萌动天数(d )
菌落平均 直径 (c m )
菌丝体生长量(n , n i / d )
菌落萌动天数(d )
菌落平均直径 (。m )
菌丝体生长量(m m /d )
菌落萌动天数 (d )
菌落平均直径 (c m )
菌丝体生长蛋 《m m /d)
30 3 5 3 8 4 0
3 3 1 盆 一
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注 :“ 十 ”表示菌落边缘菌丝体刚有萌动 , “ 一 ”表示不萌动 。
林 业 科 学 研 究 10 卷
度处理重复 5 次 , 定期测定每个菌落直径(十字定向测量 2 次 , 取平均数) 。
1
.
3 摇床培养试验
菌种的 pH 范围测定 , C 源试验及 N 源试验均放置于 H Y A 型恒温摇床上进行 。 采用 150
m L 三角瓶 , 每瓶装入培养液 75 m L飞经高压消毒后每瓶接入相当于 2一 4 m g / 10 m L 菌丝体
(干重)的培养菌块 3小块 , 每处理 3~ 4 次重复 , 培养温度为 25 ~ 28 C , 摇床转速为 150 rP m ,
培养周期为 30 d 。
1
.
3
.
1 p H 范围试脸 从 pH 3~ 8 共设 6 个梯度 , 相隔值为 1 。 将配好的 M N 培养液 (M N 培
养基不加琼脂 )用 1 m ol N aO H 调节 pH 值至试验值 , 装瓶后消毒 , 每瓶定量接入 3 小块同样
大小的平板菌种(0.25 cm , / 块 ).试验每处理重复 4 次 , 在摇床上振荡培养 30 d 后进行生物量
测定 。
1
.
3
.
Z N 源试脸 将培养基中的氮源分别选用 8 种不同的有机或无机氮.同时设不加 N 源
的处理为对照 。 其 N 源分别为 N H ;N ()3、 N H ; C 1 2 、 K N O 3 、 N a N O : 、牛肉浸膏 、蛋白陈 、酵母浸膏
及尿素等 , 每处理重复 3 次.按上述方法进行消毒 、接种 , 并在摇床上进行恒温振荡培养 30 d ,
测定生物量 。
1
.
3
.
3 C 源试验 将培养基中的 C 源分别选用葡萄糖 、 果糖 、 麦芽糖 、 蔗糖 、 可溶性淀粉及糊
精等 6 种 , 另设不加 C 源的培养基为对照 , 每处理重复 3 次 , 按前述方法进行消毒 、接种 , 在摇
床上恒温培养 30 d , 按上述方法测定各菌种生物量 。
1
.
3
.
4 生物圣的浏定 上述三个试验的菌种经摇床培养 30 d 后 , 分别将培养液进行过滤 、抽
提 , 滤出全部菌丝体 , 用无菌蒸馏水冲洗数次 , 将滤纸连同菌丝体放入 105 C 干操箱中烘干至
恒重 .同时设无菌丝体的滤纸相同处理以 校正其纸重 , 在电子天平上称量并计算出各处理菌丝
体的生物量 。 前述接种量计算也按此方法得出 。
2 试验结果
2.1 三菌种适温范围测定结果
菌种适温范围测定结果(表 l) 表明 :三种菌根菌的适温范围明显不同.彩色豆马勃 9216
菌株的温度范围最广 , 为 10 ~ 38 C , 以 20 ~ 35 C 为最适温度 , 10 C 以下 , 38 C 以上难以生长 ;
多根硬皮马勃 9215 菌株温度范围为 15 一 35 C , 以 20 一 30 C 为最适温度 .15 C 以下 , 30 C 以
表 l 三菌种适温范围测定结果
苗种 侧定项 目 测定温度
( C )
菌落萌动天数(d )
菌落平均 直径 (c m )
菌丝体生长量(n , n i / d )
菌落萌动天数(d )
菌落平均直径 (。m )
菌丝体生长量(m m /d )
菌落萌动天数 (d )
菌落平均直径 (c m )
菌丝体生长蛋 《m m /d)
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注 :“ 十 ”表示菌落边缘菌丝体刚有萌动 , “ 一 ”表示不萌动 。
举 业 科 学 研 究 10 卷
是 , 对牛肉浸膏及尿素的利用效果则较差;菌株 9216 的试验结果表明 , 对硝态 N 的利用比氨
态 N 效果好 , 菌丝体增殖倍数最高 , 说明该菌对硝态 N 的利用能力强 , 对氨态 N 的利用虽然
稍差 , 但菌丝体增殖倍数仍可达 46 ~ 54 倍 , 此外汉寸尿素的利用效果亦较好 , 而对蛋白脉的利
用效果则稍差 ;而 E 4o7。菌株的试验结果表明 , 它对有机 N 源的利用效果 , 远远超过对无机 N
源的利用效果 , 菌丝体增值培数增幅较大 , 其中 , 以牛肉浸膏 、酵母浸膏 及尿素这三种 N 源效
果最好 , 菌丝体增殖达 40 ~ 45 倍 , 而利用无机 N 源的处理 , 其增殖倍数仅 25 ~ 3 倍 。 无 N 源
的对照处理 , 增殖倍数都较低 , 唯有菌株 921 5 的牛肉浸膏及酵母浸膏两种 N 源处理 , 其菌丝
体增殖倍数低于对照 。
2
.
4 不同 C 源利用的试验结果
对三菌株不同 C 源利用情况试验表明 , 对供试的 6 种 C 源均有不同程度利用 , 对多搪类
的可溶性淀粉及糊精的利用稍好 , 除果糖以外的其它 C 源的利用情况差别不大(表 4)。 其中 ,
菌株 9216 对麦芽糖及葡萄搪的利用较好 , 菌丝体增殖倍数分别为 115 .5~ 71 .4 倍 , 其次为可
溶性淀粉 、糊精及蔗糖等 , 但对果糖的利用较差 。 菌株 9215 与菌株 9216 对 C 源利用情况相似 。
菌株 E 4o7。对供试的几种 C 源的利用效果差异不大 , 但以蔗糖及可溶性淀粉效果稍好 。 无 C
源的对照处理 , 其菌丝体增殖倍数普遍较低 , 证明 C 源确实为这些真菌营养生长所禽 。
表 4 不同 C 派对三菌株生长的影响
Scl, 戊以叮别口 9 2 1 5 P i‘讨it h盯 9 21 6 H d冲10用a E 4 0 7 0
C 源种类 培养液颇色 菌丝体生菌丝体干 增殖 培养液艘色 菌丝体生菌丝体干 增殖 培养液颐色 菌丝体生菌丝体干增殖
接种前 培养后 长悄况 重(mg ) 倍致 接种前 培养后 长情况 重(mg ) 倍数 接种前 培养后 长情况 重(m g) 倍数
25.18
亡J口怂门矛.‘…亡J工户巴门矛月了‘‘U,0舶脱状毛.丝球AC辣舰牡状菌"一球BAC百萄掩果 撼麦芽掩
蔗 精
可溶性淀粉
糊精
对照(无C 砚)
69.7 34.g A
45.2 22.6 A
69.0 34.S A
67.0 33.S A
78.7 39.4 C
78.0 39.O C
53.0 I3.3 A
A 呈深
D 棍色
D 绒毛
A 状
D 菌
D 丝
D 球
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231 0
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85.0
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63. 0 15. 7
注 :A 为淡黄色透明; B 为橙黄色透明; C 为白色浑浊; D 为暗橙色透明.
3 结 语
通过对三菌种(菌株)对温度 、 p H 、 N 源及 C 源等要求的测定 , 明确各菌株的不同条件要
求 , 将为这些菌种的扩大繁殖提供基础 。
( l ) 菌株 Sclero de r, n a 9 2 1 5 , 温度范围为 15~ 35 C , 适温范围 25 ~ 3o C ;对 pH 的反应不
敏感 , 3 . 5 一 6. 0 的范围内均可较好生长 ;对 N 源利用以氨态 N 效果为好 , 在有机 N 源中以蛋
白膝 、 酵母浸膏效果好;该菌株除对果糖的利用稍差外 , 其余 5 种 C 源的利用均较好 , 尤以多
糖类 C 源效果更好 。
( 2 ) 菌株 P is ol ith u: 92 16 , 温度范围为 10~ 38 C , 以 20 ~ 3 5 C 最好 , 最适温度为 3o C ;p H
范围 2.3~ 3.8 , 以 2.8 ~ 3.8 为最好;该菌株不能利用有机 N 源中的牛肉浸膏及酵母 浸膏 , 同
他人研究结果一致[31 , 对无机 N 源的利用以硝态 N 效果优于氨态 N , 这一点却与他人研究结
果相反 [s. ‘〕, 也许是由于菌株之间的差异 ;对 C 源的利用以麦芽糖及葡萄糖的效果好 , 对果糖
利用的效果差 , 这同他人研究结果一致 , 此外 , 对多糖类 C 源的利用效果也较好 。
期 弓明钦等:三种按树菌根菌培养条件的研究 5
(:弓)菌株 H ebelom a E4o7o 的温度范围最窄 , 为 15一30 C , 最适 温度为 25~ 30 C ;pH 适
应范围也最窄 , 为 4.0~ 5.5 , 最适 pH 为 4.5~ 5.0;对 N 源的利用以有机 N 源为好 , 无机 N 源
次之 , 有机 N 源中以牛肉浸膏 、酵母浸膏及尿素等效果好;该菌对供试的 6 种 C 源均可利用 ,
但以蔗糖及可溶性淀粉效果稍好些 。
参 考 文 献
弓明钦 , 陈羽 , 王风珍.按树幼苗菌根接种及其生长效应的研究.林业科学 研究 , 1 9 92 , 5 ( 6) : 6 39 ~ 6 4 5.
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40 5 .
袭致达 , 陈连庆.马尾松共生菌(尸.t) 的增殖培养条件.林业科学研究 .1992 .5(2) :2 31 ~ 234 .
郭秀珍 .毕国 昌.林木菌根及应用技术.北京 :中国林业 出版社 , 1 9 8 9.
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