SSR markers were used to identify 14 poplar varieties, including 4 varieties of Populus deltoides, 2 varieties of Populus nigra and 3 transgenic varieties of the same species, 2 hybrid varieties, ‘Senhai 1‘ and ‘Senhai 2‘, of P. deltoides ‘55/65‘ × P. cathayana and 2 hybrid varieties, ‘Danhong‘ and ‘Juba‘, of P. deltoides ‘55/65‘ × P. deltoides‘2KEN8‘, by using capillary electrophoresis with fluorescence detection. A total of 58 primers were screened to detect differences of SSR markers among the varieties. The 4 varieties of P. deltoides were distinguished by 4 primers, the 5 varieties of P. nigra were distinguished by 5 primers, and the hybrid varieties of the 2 crosses were identified by 4 primers. Varieties of Aigeiros and Tacamahaca displayed their own unique peaks in 4 SSR loci (GCPM_1574, GCPM_1155, GCPM_1293 and GCPM_1502). P. deltoides and P. nigra were found significantly different at the SSR loci. There were different SSR genotypes between the transgenic and non-transgenic varieties of P. nigra. The results indicated that the SSR markers are reliable for identifying those poplar varieties including transgenic varieties. The pedigree analysis of poplar hybrids revealed that the hybrid variety ‘Danhong‘had 2 peaks of 109 bp and 129 bp at 2 SSR loci (GCPM_1037 and GCPM_1376) that did not exist in its parents, indicating possible pollen contamination occurred during the pollination process.
全 文 ：第 !" 卷 第 # 期
$ % & & 年 # 月
林 业 科 学
’()*+,)- ’)./-* ’)+)(-*
/012!"!+02#
3456!$ % & &
利用荧光 77+标记鉴别杨树品种!
冯锦霞7张川红7郑勇奇7孙荣喜
"中国林业科学研究院林业研究所7国家林业局植物新品种分子测定实验室7国家林业局林木培育重点实验室7北京 &%%%?&$
关键词&7杨树# ’’]# 毛细管电泳# 荧光检测# 品种鉴别
中图分类号! ’"&C2!?"’"&C2!#777文献标识码!-777文章编号!&%%& B"!CC#$%&&$%# B%&#" B%C
收稿日期&$%&% B%8 B&?# 修回日期&$%&% B%> B&?%
基金项目&国家林业局,?!C-引进项目,林木新品种测试技术引进- "$%%&X$&$ # 植物新品种分子测试技术指南"$%%"%&&$ %
!郑勇奇为通讯作者% 致谢&中国林业科学研究院韩一凡研究员和胡建军副研究员为本试验提供了宝贵材料%
M5,)0’*’8%0’")"*Q"$.%&V%&’,0’,(1< 77+3%&a,&(J(’)- !%$’.%&<
2.,80&"$4"&,(’(=’04/.9"&,(8,)8,H,0,80’")
SD5H3F5YF97G@95H(@495@05H7G@D5Hn05HVF7’45 ]05HYF
" 1&2+*&3+*0+4\+.#-=.&*C#73%’( 4+*D#P).&’3^ &*%#3%#7+4;3&3#6+*#73*0>:9%’%73*&3%+’7/#01&2+*&3+*0+4C*##N*##:%’(
&’: 5=.3%,&3%+’ +4;3&3#6+*#73*0>:9%’%73*&3%+’7M’73%3=3#+46+*#73*0! 5"%’#7#>-&:#90+46+*#73*07N#%$%’( &%%%?&$
:1(0&%80&7’’]A9M‘DM;UDMD4;D: <0F:D5
:#.3+%:#7.$m*+C/! KQ4;F5HN9OF19MQD1DN
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10NF6,@DMDUDMD:FLDMD5<’’]HD50
杨树作为重要造林树种!多用于水土保持(防风防沙
和园林绿化!也是造纸(建筑及木材工业的重要经济
树种% 杨树易繁殖!生长速度快!生产周期短!在我
国广泛栽培!我国也是世界上杨树人工林面积最大
的国家"(9M1D#3&.F! $%%>$%
我国杨树引种和育种的历史可追溯到新中国建
立时期!杨树种质资源十分丰富!我国已培育了许多
优良杨树品种"马常耕! &??>$% 随着育种技术的发
展!新品种产生的速度与日俱增% 然而!由于杨树品
种繁多!形态相似!容易出现品种混淆% 特别是近年
来杨树种苗市场的迅速发展!为了追逐经济效益!杨
树种苗市场上出现了以次充好!甚至出现造假的现
象"马常耕! $%%!$% 急需切实加强植物新品种保护
制度的实施力度!而建立一种稳定(快捷(高效和可
靠的树木品种鉴别方法则成为树木品种权保护的关
键技术!进而从根本上保证我国杨树商品性种植业
的顺利发展%
按照国际植物新品种保护联盟的规定!目前植
物新品种特异性(一致性和稳定性的测试采用生物
学特性鉴定方法!但是!生物学特性易受外界环境干
扰和生长发育时间的限制!而且周期较长% 除利用
生物学性状外!生化标记 "同工酶和蛋白质电泳技
术$ 也得到广泛应用 "]9P0M9! &?C?# 赵晓平等!
$%%C$% 然而!同工酶和蛋白质电泳技术受取样的
时间和样品的质量影响很大% 许多学者都认为
林 业 科 学 !" 卷7
+^-分子标记技术可以作为树木品种鉴定的重要
补充手段"G@D5H#3&.F! $%%"# 王琼等! $%%C$%
分子标记方法有 ]S._!]-_^ !)’’]!-S._!’+_
和 ’’]!它们可单独运用"=9<@F9;#3&.F! $%%?# W90
#3&.F! $%%#9# ’95N@DI#3&.F! &?CC# (9;
合使用进行杨树品种鉴定以及杨树品种间遗传关系
和变异的研究 "S0;;9
$%%#K# ]9P0M9#3&.F! $%%8# ’99#3&.F! $%%? $% 其
中!’’]标记在杨树种内(种间以及品种间的鉴定分
析研 究 中 应 用 最 广 泛 " RD‘‘904F#3&.F! $%%8#
=4@9AA9: #3&.F! $%%$# 王辉等! $%%C# 梁海永等!
$%%># 张亚东等! $%%?$!并且国家林业局植物新品
种保护办公室在实质审查中已有应用 ’’]标记鉴
别有异议的杨树申请品种的案例"王琼等! $%%C$%
随着毛果杨")+E=.=73*%-"+-&*E&$全基因组的测
序工作完成!研究者可以在国际杨树基因组委员会的
官方网站上获得大量关于杨树的 ’’]序列和 ’’]引
物的信息"张勇等! $%%#$!基本不再需要研究者自己
设计 ’’]引物!解决了 ’’]分子标记的关键技术%
最新的 ’’]检测技术是 ,_X=&8",9F1D: OMFADMX=&8$
"=9M‘4;! $%%%$毛细管自动电泳荧光检测法!,_X=&8
荧光标记技术采用 8 条引物来进行 _(]扩增!通过
=&8 链的退火!实现 ’’]引物的荧光标记% 此法只需
标记 & 条=&8 引物!而且还可通过不同颜色的荧光染
料对=&8 引物进行标记!通过 & 次毛细管电泳就能同
时检测多个 ’’]位点!较以前每个 ’’]正向或反向
引物标记荧光的方法!具有低成本和高通量的优点
"l495H#3&.6! $%%?$% 毛细管电泳荧光检测法比聚丙
烯酰胺凝胶电泳银染技术的自动化和程序化更高!而
且系统软件还能校正各毛细管间的电泳差异!减少了
试验的人为和系统误差!增强了试验结果的稳定性和
可重复性!符合品种测定实验标准化的要求"易红梅
等! $%%#$% ,_X=&8 毛细管电泳结合多色荧光检测
进行片段分析技术适应了新品种 +^-指纹数据库构
建的需求"郝晨阳等! $%%>$%
本研究采用 ,_X=&8 毛细管自动电泳荧光检测
法对参试杨树品种进行 ’’]分析!旨在探讨,_X=&8
毛细管自动电泳 ’’]荧光检测法在杨树品种鉴别
和亲子鉴定上的可靠性和可操作性!为分子标记在
植物新品种 k^’" F^;
奠定技术上的基础!为新品种申请(品种权纠纷处
理(保护育种者权利等!提供客观(科学和准确的技
术保障%
@A材料与方法
&2&7试验材料7共 &! 个杨树品种"表 &$%
表 @A供试材料
C%1D@ I’(0"*,F$,&’#,)0#%0,&’%.(
品种 /9MFD.森海 & 号/7. ’D5@9F&/
美洲黑杨.>> e#>/ ".$ g青杨"/$
)F:#.3+%:#7.>> e#>/ ".$ g)F-&3"&0&’&"/$
林业授权品种数据库
@
美洲黑杨.>> e#>/ ".$ g青杨"/$
)F:#.3+%:#7.>> e#>/ ".$ g)F-&3"&0&’&"/$
林业授权品种数据库
@
美洲黑杨.>> e#>/ ".$ g美洲黑杨.$m*+C/ "/$
)F:#.3+%:#7.>> e#>/ ".$ g)F:#.3+%:#7.$m*+C/ "/$
林业授权品种数据库 @
美洲黑杨.>> e#>/ ".$ g美洲黑杨.$m*+C/ "/$
)F:#.3+%:#7.>> e#>/ ".$ g)F:#.3+%:#7.$m*+C/ "/$
林业授权品种数据库
@
采自山西省五台山
(01DN
美洲黑杨.&"!/7)F:#.3+%:#7.&"!/ 国外引种无性系 )5
7第 # 期 冯锦霞等& 利用荧光 ’’]标记鉴别杨树品种
&2$7试验方法7&$ +^-提取7每个供试材料均选
取 & 个单株!取枝条上无病害嫩叶"$%% AH$% 使用
植物基因组 +^-提取试剂盒"天根生化科技有限
公司$提取总 +^-% 提取的 +^-经 %2Cd琼脂糖凝
胶在 & g,-*电泳缓冲液中电泳后!经凝胶成像系
统检测所提 +^-的含量和质量%
$$_(]扩增7从国际杨树基因组联盟" @
标记的 >C 对 ’’]引物!从中选取能够在样品中扩
增出清晰片段的引物"表 $$% 引物由上海生工生物
工程技术服务有限公司合成% 采用 8 条引物来进行
_(]扩增% 第 & 条引物是 ’’]正向引物的 >b端和
=&8" B$&$的序列相连组成带 =&8 尾巴序列 ">bX
,W,----(W-(WW((-W,X8b$的引物 "例如&
W(_=~&%8" 的正向引物序列为 >bX-,W---,,(
W(---W,(-W,X8b!那么 W(_=~&%8" 的正向引物
为 >bX,W,----(W-(WW((-W,-,W---,,(
W(---W,(-W,X8b$!第 $ 条引物为正常的 ’’]
反向引物!第 8 条引物是 >b端标有 (n> 荧光标记的
=&8 尾巴引物% _(]反应程序和反应体系参照文
献"=9M‘4;! $%%%$% 所用样品 +^-浓度不低于 $%
5H’#.B&! 反 应 体 系 中 使 用 一 管 便 携 式 _(]
=9;
C%1D>A77+$&’#,&(*"&Q"$.%&E%&’,0< ’5,)0’*’8%0’")
编号 +06 引物名称 +9AD0LOMFADM 正向引物 S0MU9M: OMFADM;">b)8b$ 反向引物 ]DTDM;DOMFADM;">b)8b$ 基序 =0
! W(_=~&%!C (,,(,(,,(-W(W,,(,(-, W,-,W-,-((((,(,(,((( H9
> W(_=~&%>C -(--WWW,W--W,,W----- (,(-,,(-,(-(-,,,(-,,W <9
" W(_=~&%#> ,W(--,(-,-,-,,((,((( -,----,,-(,W(W,W((-, 9N
&> W(_=~&&>> -(--WWW,W--W,,W----- (,(-,,(-,(-(-,,,(-,,W <9
&C W(_=~&&"" W,W,,W--WW-,,W--W(-, ,--(-,,W,-,W(((-,,W- HH9
$C W(_=~&$>% W--W-(W--W-(W-,-W(-W --W-(W-W-W(-W--(-W-W <9
8% W(_=~&$>> W--((,,----((-W--((( W-W((-(-W---,-(,W(,( 9H
8> W(_=~&$"! W((,W-,-(,,W,WW-((,- (((W,-,--,-,W-,W-,((- <9<
8? W(_=~&$?8 ---(,W-,((-,(WW,-W-- (,,((,,,,(,,W,(--,,,,, <9
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#& W(_=~&>& ,,W-,W(-W(-W--,W,--( -(-(-,W(-(--,--W-,,,W, <9
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C$ W(_=~&>C? --,-,-(((,(,(,WW-((( -,--,W,(-W-,(---(((W H99
C8 W(_=~&>?? --(----((-((-(-(---, ,W,--,W,,((,-(,((W(, 9H
C> W(_=~&#%C W(,((,WW,,,,-((-(-, W--(-W(-WW-,(-,-W-W(
778 $毛细管电泳7将甲酰胺与分子量内标按
&%%p&的体积比混匀后!取 &> #.加入上样板中!再
加入 & #.稀释 &% 倍的 _(]产物% 然后使用
R*(m=-+(*JC%%% 遗传分析仪进行毛细管电泳%
使 用 WD50AD.9K ’Q;
进行分析!系统将各峰值的位置与其泳道中的分子
量内标的位置做分析!得到片段大小% 一个位点的
片段大小代表样品在这个位点的基因型%
&287品种鉴别方法7为了避免试验误差!保证试验
结果的可靠性和可重复性!每个样品进行 $ 次 _(]
和毛细管电泳荧光检测重复% 对于不知父母本的品
种!选取同种的所有品种都扩增出片段的 ’’]位
点#对于已知父母本的杂交品种!根据孟德尔遗传规
律选取 ’’]位点!根据品种间的 ’’]位点的基因型
不同来分析判别品种%
>A结果与分析
$2&7美洲黑杨品种的鉴别7C 对 ’’]引物在 ! 个
美洲黑杨品种中均能扩增出清晰条带"表 8$% ! 个
美洲黑杨品种在 $!$C 和 !? 号 ’’]位点的基因型一
样!在 !!&C!!>!>! 和 ?$ 号 ’’]位点的基因型出现
多态性!其中 ?$ 号 ’’]位点的基因型都不一样%
美洲黑杨.&"!/与美洲黑杨"AI@Q$在 > 个 ’’]位点
?#&
林 业 科 学 !" 卷7
的基因型不同% 美洲黑杨 . $m*+C /(美洲黑杨
.>>e#>/和美洲黑杨"AI@Q$三者之间在 ! 个 ’’]位
点的基因型不同% 美洲黑杨 . &"! / 与美洲黑杨
.$m*+C/和美洲黑杨.>>e#>/在 8 个 ’’]位点的基
因型不同% 如果基于 8 个不同位点来区分这 ! 个品
种的话!那么只需 !!&C!>! 和 ?$ 号引物%
表 BA利用 77+引物扩增美洲黑杨品种的片段大小
C%1?B /&%-#,)0%#$.’*’8%0’")*&"#!38,$’%/8,&E%&’,0’,(9(’)- 77+$&’#,&( KO
引物 _MFADM
品种 /9MFD
)F:#.3+%:#7.$m*+C/
美洲黑杨.>> e#>/
)F:#.3+%:#7.>> e#>/
美洲黑杨.&"!/
)F:#.3+%:#7.&"!/
美洲黑杨
)F:#.3+%:#7"AI@Q$
$ &$? &$? &$? &$?
! &?? $%8 $%& $%& &C! $&8
&C &$" &!% &$" &8> &$" &!% &$" &8!
$C &?> &?> &?> &?>
!> &%? &%? &%? &%? &$?
!? &$% &$% &$% &$%
>! &"% &#" &"% &#" &"%
?$ $%? $&" &?" $$> $%% $%! &??
$2$7欧洲黑杨品种的鉴别7? 对 ’’]引物在 > 个美
洲黑杨品种中均能扩增出清晰条带"表 !$% > 个欧洲
黑杨品种在 $!$C 和 8% 号 ’’]位点的基因型一样!在
!!&C!!C!>8!C$ 和 C> 号 ’’]位点的基因型出现多态
性!其中 ! 号 ’’]位点的基因型都不一样% 欧洲黑杨
.+&$/!.+&>8/和.+&"$/与欧洲黑杨 (m$ 和 (m8 在
# 个 ’’]位点的基因型不同% 欧洲黑杨.+&>8/与欧
洲黑杨.+&"$/在 8 个 ’’]位点的基因型不同% 欧洲
黑杨.+&$/与欧洲黑杨.+&>8/和.+&"$/在 ! 个 ’’]
位点的基因型不同% 欧洲黑杨 (m$ 与欧洲黑杨 (m8
在 > 个 ’’]位点的基因型不同% 8 个转基因欧洲黑
杨品种与 $ 个非转基因欧洲黑杨品种差异明显"图
&$% 如果基于 ! 个不同位点来区分这 > 个品种!那么
只需 !!&C!C$!>8 或 C> 号引物%
表 KA利用 77+引物扩增欧洲黑杨品种的片段大小
C%1DKA/&%-#,)0%#$.’*’8%0’")*&"#!30/4+( E%&’,0’,(9(’)- 77+$&’#,&( KO
引物 _MFADM
品种 /9MFD
)F’%(*& .+&$/
欧洲黑杨.+&>8/
)F’%(*& .+&>8/
欧洲黑杨.+&"$/
)F’%(*& .+&"$/
欧洲黑杨
)F’%(*&"(m$$
欧洲黑杨
)F’%(*&"(m8$
$ &$? &$? &$? &$? &$?
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&C &$# &!$ &$C &!! &$# &!$ &!% &!%
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8% $%C $%C $%C $%C $%C
!C $%% $&! $%% $&! $%% $&! $&& $&!
>8 &C% &?# &C! $%% &C! $%% &?# $%%
C$ $$> $>! $$> $>! $$C $>" $$C $$> $>&
C> &"% &C# &"$ &CC &"$ &CC &"$ &"$ &C#
$287杂交品种的鉴别7>C 对 ’’]引物中有 && 对
’’]引物在.森海 & 号/和.森海 $ 号/$ 个品种及其
父母本中均能扩增出清晰条带!有 C 对 ’’]引物在
.丹红杨/和.巨霸杨/$ 个品种及父母本中均能扩
增出清晰条带!&>!8?!#% 和 C% 号 ’’]位点是青杨
特有的位点!> 号 ’’]位点是美洲黑杨.>>e#>/特有
的位点"表 >$%
.森海 & 号/和.森海 $ 号/在 C% 和 >! 号"图 $$
’’]位点的基因型不同% .丹红杨/和.巨霸杨/在 !
个 ’’]位点的基因型不同% .森海 & 号/和 .丹红
杨/在 > 个 ’’]位点的基因型不同% .森海 $ 号/和
.丹红杨/在 8 个 ’’]位点的基因型不同% .森海 &
号/和.巨霸杨/在 8 个 ’’]位点的基因型不同%
.森海 $ 号/和.巨霸杨/在 $ 个 ’’]位点的基因型
不同% 只需 &C!!>!>! 和 #& 号引物就可以区分这 !
个同一母本不同父本的品种!区分 8 个亲本需要 "
和 &C 号引物% .丹红杨/的父母本在 $ 和 !> 号 ’’]
位点上均没有 &%? KO 和 &$? KO 这 $ 个基因型 "图
8!图 !$%
BA结论与讨论
本研究的试验材料包括杨树的黑杨派" ’DN<6
%"&
7第 # 期 冯锦霞等& 利用荧光 ’’]标记鉴别杨树品种
图 &7欧洲黑杨 > 个品种的 !C 号 W(_=~&8? ’’]位点的基因型
SFH6&7+02!C W(_=~&8? ’’]10N4;HD50
C%1DYA/&%-#,)0%#$.’*’8%0’")*&"# E%&’,0’,(%)5$%&,)0(9(’)- 77+$&’#,&( KO
引物 _MFADM
品种 /9MFD
SDA91DO9MD5<)F:#.3+%:#7.>> e#>/
父本7青杨"/$
=91DO9MD5<)F-&3"&0&’&
子代 7.森海 & 号/
\L;OMF5H. ’D5@9F&/
子代7.森海 $ 号/
\L;OMF5H. ’D5@9F$/
$ &$? &$? &$? &$?
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引物 _MFADM
品种 /9MFD
SDA91DO9MD5<)F:#.3+%:#7.>>e#>/
父本7美洲黑杨.$m*+C/"/$
=91DO9MD5<)F:#.3+%:#7.$m*+C/
.丹红杨/
\L;OMF5H. 9^5@05H/
.巨霸杨/
\L;OMF5H.34K9/
$ &$? &$? &%? &$? &$?
&C &$" &8> &$" &!% &$" &8> &$" &!%
$C &?> &?> &?> &?>
!> &%? &%? &%? &$? &%?
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>! &#" &"% &"% &#" &#"
C8 &%! &#$ &%! &%! &%! &#$
#& &!C &>$ &!C &>$ &>$ &>$
> &"$ ) ) )
77",)-为空白!即没有扩增结果% ,)- AD95;K195‘! 50LM9HAD5<9AO1FLFN9
林 业 科 学 !" 卷7
图 $7.森海 & 号/和.森海 $ 号/及其父母本的 >! 号 W(_=~&!>! ’’]位点的基因型
SFH6$7+06>! W(_=~!>! ’’]10N4;HD50
SFH687+06$ W(_=~&%8" ’’]10N4;HD50
C&-&9&"&-&$"青杨$!结果 "表 8!! 和 >$表明杨树
不同派间的 ’’]位点基因型差异明显!每个派的样
本均有特异带!表明 ’’]标记可用于不同派间品种
的鉴别!进一步说明 ’’]标记可用于杨树分派的分
子系统学与派间杂交的研究%
目前!转基因产品的检测方法主要是基于插入
的外源基因和表达产物的基础上!包括 +^-检测方
法和蛋白质检测方法"贺熙勇等! $%%C$% 本研究通
过对转基因和非转基因的欧洲黑杨 > 个品种的 ’’]
分析!转基因与非转基因的欧洲黑杨品种在一些
’’]位点的基因型差异明显!说明 ’’]标记也可用
于鉴别通过基因工程手段获得的品种%
杂交品种的谱系关系分析结果发现&.丹红杨/
在 $ 和 !> 号 $ 个 ’’]位点上的基因型不符合孟德
尔遗传规律!造成这个结果的可能原因有 8 种&一是
$"&
7第 # 期 冯锦霞等& 利用荧光 ’’]标记鉴别杨树品种
图 !7.丹红杨/和.巨霸杨/及其父母本的 !> 号 W(_=~&8"# ’’]位点的基因型
SFH6!7+06!> W(_=~&8"# ’’]10N4;HD50
用的真正父本#二是在人工控制授粉时!花粉可能不
纯或被污染!造成美洲黑杨.$m*+C/不是.丹红杨/
的父本#三是参试的.丹红杨/植株发生了突变% 由
于本试验没有对其他.丹红杨/植株进行 ’’]分析!
所以这个原因还不清楚!还需要继续研究% 但说明
’’]标记用于杨树品种亲子鉴定的潜力%
杂种谱系关系的分析表明&有父母本作为背景!
可更准确地知道子代间的差异和基因组变化的情
况% 建议在植物新品种的申请文件中!包含育种者
提供的候选品种及其亲本品种的 +^-指纹图谱数
据和图片!用于建立新品种数据库!以便在新品种审
定时查询及在品种权有争议时进行鉴定 "李汝玉
等! $%%%$!从而保护育种者和种植者的利益%
无论是通过人工控制授粉杂交的常规育种手
段!还是通过现代转基因工程手段获得的杨树品种!
’’]分子标记都能准确地将它们区别!进一步证明
了 ’’]标记在 +^-水平上能科学(准确地判断特
定品种的特异性!为进一步探讨 ’’]标记在品种
k^’ 测试中的的直接应用提供了基础% 目前!品种
鉴定还是以生物学特性鉴定为主!但对于无性繁殖
的无性系品种和表型差异不明显的品种!更适合应
用分子标记技术来进一步鉴别% 所以为了提高鉴别
品种的精度!可以用分子标记技术与表型分析相结
合的方法%
由于 ’’]等分子标记分析方法的重复性和再
现性不稳定!不同实验室之间差异较大!为此!有必
要制定利用分子标记分析技术的统一规范和标准!
保持试验方法的一致性和稳定性!提高不同实验室(
不同操作人员之间试验结果的重复性和再现性% 目
前国家林业局植物新品种保护办公室已建立了 $ 个
植物新品种分子测试实验室!为进一步开展分子标
记技术在植物新品种测试和管理上的应用奠定了良
好基础% 今后的重点是为不同树木种类筛选合适的
生化标记"同工酶$和分子标记" +^-$!研制植物品
种分子标记测试指南!构建林木品种分子标记描述
数据库等!更好地为新品种测试与鉴定提供补充依
据!直至直接用于 k^’ 测试"G@D5H#3&.F! $%%"$%
参 考 文 献
高建明! 张守攻! 齐力旺!等6$%%#6杨树重要品种 "无性系 $的
-S._指纹分析6云南植物研究! $C "&$ & C> B?%6
郝晨阳! 王兰芬! 贾继增6$%%>6’’]荧光标记和银染技术的比较分
析6作物学报! "$$ & &!! B&!?6
贺熙勇! 陈善春! 彭爱红6$%%C6转基因植物的分子检测与鉴定方
法及进展6热带农业科技! 8& "&$ & 8? B!!6
胡建军! 李淑梅! 卢孟柱!等6$%%"6转 R<基因欧洲黑杨抗虫稳定性
及其对天敌昆虫的影响6林业科学研究! $%">$ & #># B#>?6
李汝玉! 宋国安! 杨平平6$%%%6利用 ’’]标记进行品种权有争议
品种的鉴定6种子! "&$ & ## B#"6
李金花! 宋红竹! 周春江!等6$%%?6北方地区黑杨派栽培品种的
-S._指纹分析6林业科学研究! $$ "$$ & $%" B$&$6
梁海永! 刘彩霞! 刘兴菊!等6$%%>6杨树品种的 ’’]分析及鉴定6
河北农业大学学报! $C "!$ & $" B8&6
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林 业 科 学 !" 卷7
马常耕6&??>6我国杨树杂交育种的现状和发展对策6林业科学!
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马常耕6$%%!6我国杨树育种中的若干问题商榷6青海农林科技!
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王7琼! 郑勇奇! 周建仁6$%%C6分子标记在林业植物新品种鉴别
中的应用及前景6林业科学! !! "#$ & &C% B&C$6
王7辉! 杨敏生! 朱建峰6$%%C6利用 ’’]对杨属部分种及杂种的
分析鉴定6东北林业大学学报! 8# "&$$ & ! B#6
易红梅! 王凤格! 赵久然!等6$%%#6玉米品种 ’’]标记毛细管电泳
荧光检测法与变性 _-W*银染检测法的比较研究6华北农学
报! $& ">$ & #! B#"6
张7勇! 张守攻! 齐力旺!等6$%%#6杨树)))林木基因组学研究的
模式物种6植物学通报! $8 "8$ & $C# B$?86
张春玲! 李淑梅! 赵自成!等6$%%C6杨树新品种.丹红杨/6林业科
学! !! "&$ & &#?6
张亚东! 胡兴宜! 宋丛文6$%%?6利用新型分子标记 *’,X’’]鉴定
湖北省内的主栽黑杨品种6分子植物育种! " "&$ & &%> B&%?6
张绮纹! 苏晓华! 李金花6&???96中国杨树遗传改良6中国农业科
技导报!"$$ & >! B>C6
张绮纹!苏晓华!李金花!等6&???K6美洲黑杨基因资源收存及其遗
传评价的研究6林业科学! 8>"$$ & 8& B8"6
赵晓平! 荣威恒! 刘玲玉!等6$%%C6> 种杨树种间及品种间同工酶
的比较分析6安徽农业科学! 8# "#$ & $$#$ B$$#!6
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