全 文 ：第 wu卷 第 y期
u s s y年 y 月
林 业 科 学
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∂²¯1wu o‘²1y
∏±qou s s y
不同寄主上的蔗扁蛾 Œ×≥分析
沈 杰t 高其康u 沈幼莲v 楼兵干u
kt1 浙江省森林植物防治检疫站 杭州 vtsssw ~u1 浙江大学 杭州 vtssu| ~
v1 浙江省慈溪市森林植物检疫站 慈溪 vtxvssl
关键词 } 蔗扁蛾 ~内转录间隔区 ~寄主 ~检疫
中图分类号 }≥zt{1z ~±|y 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussylsy p stwt p sw
收稿日期 }ussx p sx p s| ∀
ΙΤΣ Αναλψσισ οφ ΘυαραντινεΙνσεχτ Οπογονα σαχχηαρι
kΛεπιδοπτερα} Ηιεροξεστιδαεl φροµ ∆ιφφερεντ Ηοστσ
≥«¨ ±¬¨t Š¤² ±¬®¤±ªu ≥«¨ ± ≠²∏¯¬¤±v ²∏…¬±ªª¤±u
kt1 Φορεστ Πεστ Χοντρολανδ Θυαραντινε Στατιον οφ Ζηεϕιανγ Προϖινχε Ηανγζηου vtsssw ~ u1 Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ Ηανγζηου vtssu| ~
v1 Χιξι Φορεστ Πεστ ΧοντρολΣτατιον οφ Ζηεϕιανγ Χιξι vtxvssl
Αβστραχτ } ׫¨ ¬±·¨µ±¤¯ ·µ¤±¶¦µ¬¥¨§¶³¤¦¨µkŒ×≥l ²© Οπογονα σαχχηαρι o¤¬°³²µ·¤±· ∏´¤µ¤·¬±¨ ³¨¶·o©µ²° §¬©©¨µ¨±·«²¶·¶º¤¶
¶·∏§¬¨§¥¼ ∏¶¬±ª·«¨ ¶³¨¦¬¤¯ ³µ¬°¨ µ¶§¨¶¬ª±¨ §¥¼·«¨ «¬ª«¯¼¦²±¶¨µ√¨ §µ¨ª¬²±¶¨ ∏´¨±¦¨ ²©t{≥ ¤±§u{≥µ⁄‘„ µ¨ª¬²±o¤±§·«¨ Œ×≥
¶¨ ∏´¨±¦¨¶²© Οπογονα σαχχηαρι ©µ²° §¬©©¬µ¨±·«²¶·¶º¨ µ¨ ¦²°³¤µ¨§q׫¨ ·²·¤¯ ¯¨ ±ª·«²© Οqσαχχηαρι Œ×≥t oŒ×≥u ¤±§x1{≥µ⁄‘„
¬¶|{z ¥³q׫¨ ¤√¨ µ¤ª¨ ²©Šn ≤ ¦²±·¨±·¶¬¶wz1u h q¨±ª·«²©Œ×≥t ¤±§Œ×≥u ©µ¤ª°¨ ±·¬¶wwv ¥³¤±§vx{ ¥³q׫¨ Œ×≥t ¤±§
Œ×≥u ©µ²° §¬©©¨µ¨±·«²¶·¶¤µ¨ ¬§¨±·¬¦¤¯ ²µ∏±¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¬©©¨µ¨±¦¨ q
Κεψ ωορδσ} Οπογονα σαχχηαρι o¬±·¨µ±¤¯ ·µ¤±¶¦µ¬¥¨§¶³¤¦¨µo«²¶·o ∏´¤µ¤±·¬±¨
蔗扁蛾k Οπογονα σαχχηαριl o隶属鳞翅目k¨³¬§²³·¨µ¤l 辉蛾科k‹¬¨µ²¬¨¶·¬§¤¨ l扁蛾属k Οπογοναlk杨集昆等 o
t||zl o是近年来从境外传人我国的一种重要林业危险性有害生物k程桂芳等 ot||zl ∀该虫寄主广泛 o据资料
报道k商晗武等 oussvl o目前已发现寄主植物 u{科 {z种 {变种 o其中 o国外报道 uw科 y种 w变种 o国内 tw科
xx种 u变种 o主要危害巴西木k ∆ραχαενα φραγρανσl !发财树k Παχηιρα µαχροχαρπαl !风梨kΑνανασχοµοσυσl !一品红
k Ευπηορβια πυλχηερριµαl !朱顶兰kΑµαρψλλισϖιτταταl !木棉k Βοµβαξ µαλαβαριχυµl !大王椰子k Ροψστονεα ρεγιαl等观
赏植物 o我省新发现还能危害柳树k Σαλιξ ¶³ql !紫藤k Ωιστερια σινενσισl !龙爪槐k Σοπηοραϕαπονιχα √¤µq πενδυλαl
等本地绿化树种 ∀它已对我国花卉苗木和林业生产造成严重威胁 ∀为控制疫情扩散蔓延 o国家林业局将其
列入了林业检疫性有害生物名单 ∀
核糖体 ⁄‘„序列的测定和比对 o为大量生物的系统发育和亲缘关系的鉴定提供了有价值的数据 o并已
经在大量生物中应用 ∀特别是核糖体 ⁄‘„ 基因k±∏¦¯¨ ¤µµ¬¥²¶²°¤¯ ⁄‘„ o±µ⁄‘„l的内转录间隔区kŒ±·¨µ±¤¯
×µ¤±¶¦µ¬¥¨§≥³¤¦¨µ¶oŒ×≥l已成为系统与进化生物学研究中的重要分子标记 o具有种的特异性 ∀这是由于 Œ×≥
区进化速度远快于别的保守区k¦²±¶¨µ√¨ §µ¨ª¬²±l o在不同种或同种不同群体之间的 Œ×≥序列也会发生变异 ∀
Œ×≥之所以成为理想的测序区域 !成为系统与进化研究中的重要分子标记 o主要基于以下几方面原因 }第一 o
作为 t{≥ p u{≥ µ⁄‘„的一个组成部分 oŒ×≥在核基因组中是高度重复的 o而且通过不等交换和基因转换 o这些
重复单位间已发生了位点内或位点间的协调进化k¦²±¦¨µ·¨§ √¨²¯∏·¬²±l k∞¯ §¨µετ αλqot||xl ∀µ⁄‘„基因在同一
物种内部进化是一致的 o因而单一个体内的µ⁄‘„ 拷贝间的序列差异非常有限 ∀相比之下 o物种之间则显示
出一定的序列差异水平 ∀不同 Œ×≥拷贝间的序列趋于相近或完全一致 o这就为对 °≤• 扩增产物直接测序奠
定了理论基础k‹¶¬¤² ετ αλqot||x ~„¬±²∏¦«¨ ετ αλqot||zl ~第二 oŒ×≥t !Œ×≥u分别位于 t{≥ ) x1{≥µ⁄‘„ !x1{≥ )
u{≥ µ⁄‘„之间 o而从细菌 !真菌到高等植物的 t{≥ !x1{≥ !u{≥ µ⁄‘„的序列又高度保守 o这样就可以用与它们
序列互补的通用引物对 Œ×≥区进行 °≤• 扩增 !测序k‹¶¬¤² ετ αλqot||x ~ „¬±²∏¦«¨ ετ αλqot||zl ~第三 ot{≥ !
x1{≥ !u{≥ µ⁄‘„基因序列进化缓慢 o但它们之间的 Œ×≥序列的进化则相当迅速 ∀因此 o对它的演化进度评价
既有一般生物学意义又有特殊生物含义 ~第四 o它足够大 o能够提供充足的系统构建所需要的特征 ∀
从 Š¨ ±…¤±®数据库中的 Œ×≥序列不难发现 oŒ×≥的研究已越来越受到重视 o在昆虫纲中 o已注册的 Œ×≥序
列已有 w xst 条k截止 ussx 年 w 月 u{ 日l o其中为鳞翅目的仅为 tv{ 条 o占 v1sy h o没有鳞翅目辉蛾科
‹¬¨µ²¬¨¶·¬§¤¨ 的信息 ∀本文针对来自于 x种不同寄主的蔗扁蛾进行 Œ×≥序列分析 o以研究其分子进化规律 ∀
1 材料与方法
t1t 材料 试验所用的蔗扁蛾幼虫分别采集于舟山的垂柳k Σ q βαβψλονχαl !紫藤 !萧山的龙爪槐 !发财树
k Παχηιρα µαχροχαρπαl和巴西木 ∀将所采集的幼虫在实验室的培养皿中均用番茹饲养 o直至化蛹 ∀
t1u ⁄‘„提取 取上述源自各种寄主的蔗扁蛾蛹各 u头 o分别于液氮中研磨成粉状 o转入 t1x °离心管
中 o加 vs ˏ提取液 „kt h ≥⁄≥ oxs°°²¯#pt×µ¬¶q‹≤¯ oux °°²¯#pt‘¤≤¯ oux °°²¯#pt ∞⁄ׄl o充分研磨 ~yx ε
水浴 wx °¬±k中间混匀 u次l ~加入等体积提取液 …kv °²¯ #pt Ž„¦³‹ z1ul o冰上放置 t «以上 ~tu sss µ#
°¬±pt ots °¬±离心 o转移上清液至新管 ~加入等体积饱和酚 o轻混匀 otu sss µ#°¬±pt ots °¬±离心 o转移上清液
至新管 ~加入 u倍体积预冷无水乙醇 o混匀放置 p us ε ot «以上 ~tu sss µ#°¬±pt离心 tx °¬±o小心倾尽上清
液 o收集沉淀 o用 zs h乙醇洗 t次 ~重复上步骤用 zs h乙醇洗 o晾干沉淀 ~每管加入 us ˏ水 o充分溶解后用
‘°p u紫外分光光度计定量测定并用琼脂糖凝胶电泳观察其质量 op us ε 保存备用 ∀
t1v 基因组 ⁄‘„浓度测定 取 ⁄‘„提取液 u ˏ稀释到 uss ˏo用 ‘° p u紫外分光光度仪测定 „uys和
„u{s的值 o计算 ⁄‘„的浓度和质量 ∀
另取 u ˏ经 t1s h琼脂糖凝胶电泳 o与 Κ⁄‘„Π‹¬±§ ¶ 比较确定所提取 ⁄‘„的片段大小 ∀
t1w 内转录间隔区kŒ±·¨µ±¤¯ ×µ¤±¶¦µ¬¥¨§≥³¤¦¨µ¶oŒ×≥l引物设计 通过对 ‘≤…Œ Š¨ ±…¤±®数据库中有关昆虫 t{≥
µ⁄‘„和 u{≥ µ⁄‘„的生物信息学分析 o选择一对保守性强的核酸序列作为蔗扁蛾 Œ×≥扩增的 °≤• 引物 ∀
t1x °≤• 反应体系和循环参数 Œ×≥t p x1{≥ µ⁄‘„ pŒ×≥u片断 °≤• 扩增采用引物 ’≥t和 ’≥u ∀引物由上海
生工生物工程技术服务有限责任公司合成 ∀反应体系为 tss ˏ含 t ≅ °≤• 反应缓冲液 !t1x °°²¯#pt ª≤¯ u !
s1u °°²¯#pt §‘×°¶!s1x Λ°²¯ #pt的 t对引物 ! uss ±ª模板 ⁄‘„ 和 x∏ פ´ ⁄‘„ 聚合酶 o扩增反应在 
• ¶¨¨¤µ¦«公司的 ¬±¬¦¼¦¯ µ¨°×≤ p uux型 °≤• 仪上进行 o循环参数为 }|w ε 预变性 v °¬±o然后为 ux轮循环 o每
轮循环在 |w ε 变性 t °¬±ox{ ε 退火 t °¬±ozu ε 延伸 u °¬±oux轮循环结束后 o在 zu ε 延伸 { °¬±o最后在
w ε 停止反应 ∀
t1y °≤• 扩增产物检测 从每一反应中各取 { ˏ反应液 o加在 t h琼脂糖凝胶板上电泳 o经 ∞…染色 o紫外
灯下检测 °≤• 扩增物的有效性 o并拍照记录 ∀
t1z 核糖体 ⁄‘„ Œ×≥序列测定 °≤• 产物用 ∂¬·¤ª¨ ±¨ ⁄‘„ 清洁试剂盒进行纯化 ∀纯化按 ∂¬·¤ª¨ ±¨ 公司提供
的使用方法进行 o纯化后的 °≤• 产物于 p us ε 保存备用 ∀ °≤• 纯化产物直接进行双向测序 o序列测定在浙
江大学分析测试中心生物大分子实验室的  ª¨…¤¶¨ t sss ⁄‘„ 测序仪上进行 ∀测序引物为 ’≥t和 ’≥u ∀双
向测序结果用 ≥¨ ´¤± k⁄‘„≥·¤µŒ±¦ql软件进行拼接并输出全序列 o用序列多重对齐软件包 ≤˜≥ׄ÷ 对序
列进行对准 ∀
t1{ 基于µ⁄‘„ Œ×≥序列系统树分析 系统发育分析用 ≤¯ ∏¶·¤¯÷ t1{ o以膜翅目昆虫 Μεσοχηορυσ¶³q为外群 o采
用邻接法k±¨ ¬ª«¥²µ2­²¬±¬±ª °¨ ·«²§l构建系统树 ∀
2 结果分析
u1t 蔗扁蛾 Œ×≥扩增的 °≤• 引物 通过对 ‘≤…Œ Š¨ ±…¤±®数据库中与鳞翅目 t{≥ µ⁄‘„ 和 Œ×≥t有关的核酸
序列进行比对分析 l o确立了 t{≥ 近 Œ×≥t 端 p t{x 碱基 k¥³l 处的引物序列 k ’≥tl 为 xχ p
׊„×ׄ≤Š×≤≤≤׊≤≤≤××× p vχ ∀为了验证该引物的设计的可靠性 o将该引物在 ‘≤…Œ中进行短序列 …¯¤¶·±搜
索k≥ ¤¨µ¦«©²µ¶«²µ·o±¨ ¤µ¯¼ ¬¨¤¦·°¤·¦«¨¶l o结果表明 ’≥t引物能与昆虫纲中已注册的 uz目中的 v yys个种或亚
种中 t{≥ µ⁄‘„序列中至少 t|个碱基完全配对 ∀同样鳞翅目 u{≥ µ⁄‘„ 和 Œ×≥u有关的 wv条核酸序列进行比
对分析 o确立了 Œ×≥u端 u{≥区的引物k’≥ul为 xχ p ×≤≤×≤≤≤׊„×≤׊„ŠŠ≤≤„„≤ p vχ o经短序列 …¯¤¶·±搜索发
现能与鳞翅目中已注册的 ws条序列中至少 t|个碱基完全配对 ∀
u1u 蔗扁蛾基因组 ⁄‘„ 蔗扁蛾基因组 ⁄‘„经 t1s h琼脂糖凝胶电泳 o与 Κ⁄‘„Π‹¬±§ ¶比较 o来自不同寄
主的蔗扁蛾基因组 ⁄‘„长度约为 uv ®¥o琼脂糖凝胶电泳结果k图 tl表明所提的基因组 ⁄‘„的质量较好 o多
uwt 林 业 科 学 wu卷
数菌株的 „uysΠ„u{s比值在 t1{左右 o适合作进一步的 Œ×≥序列的 °≤• 扩增 ∀
u1v 不同寄主蔗扁蛾 Œ×≥的 °≤• 扩增 对来自巴西木 !发财树 !柳树 !紫滕和盘槐的 x个 ⁄‘„模板进行 °≤•
扩增 o扩增产物经 t1s h琼脂糖凝胶电泳并与标准分子量比较 o其 ⁄‘„片段长度均为 t1u ®¥k图 ul ∀
u1w 序列比对分析 从表 t可见 o来自 x种寄主的蔗扁蛾 Œ×≥t序列长度为 wwv ¥³oŒ×≥u的长度为 vx{ ¥³o整
个 Œ×≥结构区域的长度为 |{z ¥³o可此可计算出 °≤• 扩增的长度应为 t uss ¥³∀各序列的 Š n ≤ 含量差异不
显著 o在 wz1t h ∗ wz1x h之间 ∀对各序列间经两两比对表明 o它们相互间高度相似 o相似率均超过 ||1w h o与
膜翅目姬蜂的相似性仅为 xx h左右k表 ul ∀不同寄主中获得的蔗扁蛾 Œ×≥序列中的碱基发生改变全部集中
在 Œ×≥t区和 Œ×≥u区 o具体发生改变碱基及其位置见表 v ∀它们之间的变对上述 x个基因组模板进行的系统
树分析后构建的系统树k图 vl表明 o尽管来自不同寄主林木 o它们在系统进化上仍然高度一致 o不因寄主林
木的改变而有所变化 ∀
图 t 基因组 ⁄‘„的琼脂糖凝胶电泳图谱
ƒ¬ªqt „±¤¯¼¶¬¶²©·¨°³¯¤·¨ ⁄‘„ ¥¼ ¤ª¤µ²¶¨ ª¨¯ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶
 }¤µ®kΚ⁄‘„Π‹¬±§ ¶l ~t }巴西木 ∆ q φραγρανσ~
u }发财树 Πq µαχροχαρπα ~v }垂柳 Σ q βαβψλονχα ~
w }紫藤 Ω q σινενσισ~x }龙爪槐 Σ qϕαπονιχα √¤µq πενδυλα q
图 u 不同寄主上蔗扁蛾 Œ×≥ °≤• 产物的
琼脂糖凝胶电泳图谱
ƒ¬ªqu „±¤¯¼¶¬¶²©Œ×≥ °≤• ³µ²§∏·¶¥¼ ¤ª¤µ²¶¨ ª¨¯ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶
 }¤µ®~t }巴西木 ∆ q φ ραγρανσ~
u }发财树 Πq µαχροχαρπα ~v }垂柳 Σ q βαβψλονχα ~
w }紫滕 Ω q σινενσισ~x }龙爪槐 Σ qϕαπονιχα √¤µq πενδυλα q
表 1 不同寄主上蔗扁蛾 ΙΤΣ序列概况
Ταβ . 2 Τηε ουτλινε οφ Ο . σαχχηαρι ΙΤΣ σεθυενχε φροµ διφφερεντ ηοστ
寄主
‹²¶·
采集地
• ª¨¬²±
Š n ≤含量
≤²±·¨±·²© Š n ≤Πh
碱基数 …¤¶¨ ¯¨ ±ª·«Π¥³
Œ×≥t x1{≥ Œ×≥u ײ·¤¯
巴西木 ∆ q φραγρανσ 萧山 ÷¬¤²¶«¤± wz1t wwv t{y vx{ |{z
发财树 Πq µαχροχαρπα 萧山 ÷¬¤²¶«¤± wz1x wwv t{y vx{ |{z
垂 柳 Σ q βαβψλονχα 舟山 «²∏¶«¤± wz1t wwv t{y vx{ |{z
紫 藤 Ω q σινενσισ 舟山 «²∏¶«¤± wz1t wwv t{y vx{ |{z
龙爪槐 Σ qϕαπονιχα √¤µq πενδυλα 舟山 «²∏¶«¤± wz1v wwv t{y vx{ |{z
表 2 不同寄主上蔗扁蛾 ΙΤΣ序列的相似性比较
Ταβ . 3 Χοµ παρισον οφ σιµιλαριτψ Ο . σαχχηαρι ΙΤΣ σεθυενχεφροµ διφφερεντ ηοστ
编号 ‘²q 寄主 ‹²¶· 相似百分率 °¨ µ¦¨±·¶¬°¬¯¤µ¬·¼¬± ∏³³¨µ·µ¬¤±ª¯ Π¨hst su sv sw sx „…szt|uy
st 巴西木 ∆ q φραγρανσ 333 ||1x ||1{ tss1s ||1x xx1x
su 发财树 Πq µαχροχαρπα 333 ||1w ||1x ||1v xx1x
sv 垂 柳 Σ q βαβψλονχα 333 ||1{ ||1w xx1v
sw 紫 藤 Ω q σινενσισ 333 ||1x xx1x
sx 龙爪槐 Σ qϕαπονιχα √¤µq πενδυλα 333 xx1w
外来群 ’∏·ªµ²∏³ „…szt|uy 333
3 讨论
t{≥ ) u{≥核糖体 ⁄‘„基因的内转录间隔区kŒ×≥l作为一种重要的生物物种系统与进化研究的重要分子
标记 o这种分子标记常具有种的特异性 ∀蔗扁蛾作为一种重要的检疫性害虫 o明确其具有种特异性的分子标
记对于发展除了形态鉴定之外新的鉴定手段是非常必要的 ∀本文在充分利用了 t{≥和 u{≥ µ⁄‘„重复序列
vwt 第 y期 沈 杰等 }不同寄主上的蔗扁蛾 Œ×≥分析
表 3 不同寄主上蔗扁蛾 ΙΤΣ序列发生变异的碱基
Ταβ . 3 ς αριατιονσ βασε παιρσ οφ Ο . σαχχηαρι ΙΤΣ σεθυενχε φροµ διφφερεντ ηοστ
位点
²¦¬
寄主 ‹²¶·
巴西木
∆ qφραγρανσ
发财树
Πqµαχροχαρπα
垂 柳
Σ qβαβψλονχα
紫 滕
Ωqσινενσισ
龙爪槐
Σ qϕαπονιχα
√¤µq πενδυλα
t{x „ „ × „ „
utx „ „ × „ „
Œ×≥t uxw × „ × × ×
uyz × ≤ × × ≤
uy| × × × × ≤
zu{ „ Š „ „ „
zxx ) zxy ŠŠ ŠŠ ŠŠ ŠŠ ≤≤
Œ×≥u {su Š Š Š Š ≤
{zu × ≤ × × ×
{|t „ Š „ „ „
在物种间高度保守的特性 o设计合成了
’≥t和 ’≥u引物 o经 Š¨ ±…¤±®的 …¯¤¶·±
生物信息学分析和实际的 °≤• 扩增试
验 o证明这种引物设计思路完全可行 ∀
尤其是 ’≥t引物 o通用性非常强 o几乎
能覆盖整个昆虫纲的昆虫所注册的Œ×≥
序列 ∀
对来源于巴西木 !发财树 !垂柳 !
紫藤和龙爪槐的蔗扁蛾的 Œ×≥序列分
析表明 o蔗扁蛾在长期的进化过程中 o
种内的 Œ×≥序列的相似性均在 || h以
上 o几乎没有发生质的变化 o这说明在
蔗扁蛾的进化过程中 o寄主植物的影响
不是关键因素 ∀明确了蔗扁蛾的 Œ×≥
图 v 不同寄主上蔗扁蛾 Œ×≥序列的系统树
ƒ¬ªqv °«¼¯²ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¨¨²© Οq σαχχηαρι Œ×≥ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶©µ²° §¬©©¨µ¨±·«²¶·
序列后 o为作者进一步设计专一性蔗
扁蛾种特异性 °≤• 引物提供了生物信
息学基础 o并可针对Œ×≥的可变区Œ×≥t
和 Œ×≥u的序列 o与 Š¨ ±…¤±®中已有的
核酸序列进行比对 o从蔗扁蛾的Œ×≥中
找出与其他物种尤其是昆虫类序列变
异最大的序列区域作为蔗扁蛾专一性
引物的参照 ∀对设计合成的系列引物
进行尽可能的广泛验证并不断完善 ∀
当然从理论上要设计一对或若干对种
特异性引物并不难 o关键是要经过大量的实践检验 o这是费时 !费力和费钱的工作 ∀
参 考 文 献
程桂芳 o杨集昆 qt||z q蔗扁蛾 ) ) ) 巴西木上的一种新害虫 q植物保护 ouvktl }vv p vx
商晗武 o祝增荣 o赵 琳 o等 qussv q外来害虫蔗扁蛾的寄主范围 q昆虫知识 owsktl }xx p x|
杨集昆 o程桂芳 qt||z q中国新记录的辉蛾科及蔗扁蛾的新结构k鳞翅目 o谷蛾总科l q武夷科学 otv }uw p vs
„¬±²∏¦«¨  o…¤¼¨ µ• qt||z q’±·«¨ ²µ¬ª¬±¶²©·«¨ ·¨·µ¤³¯²¬§…µ²°∏¶¶³¨¦¬¨¶k¶¨¦·¬²± …µ²°∏¶o°²¤¦¨¤¨ l }¬±¶¬ª«·¶©µ²°¬±·¨µ±¤¯ ·µ¤±¶¦µ¬¥¨§¶³¤¦¨µ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©
±∏¦¯ ¤¨µµ¬¥²¶²°¤¯ ⁄‘„ q Š¨ ±²°¨owskxl }zvs p zwv
⁄¤√¬¶⁄ • o°¨ ±¤∞qt||s q…¬²¯²ª¼¤±§°²µ³«²¯²ª¼²©·«¨ ¥¤±¤±¤°²·«oΟπογονασαχχηαριk…²­¨µl o¤±§¬·¶¬±·µ²§∏¦·¬²±¬±·² ƒ¯ ²µ¬§²k¨³¬§²³¨µ¤}׬±¨ ¬§¤¨ l q°µ²¦
∞±·≥²¦ • ¤¶«o|ukwl }x|v p yt{
∞¯ §¨µ • o×∏µ±¨ µ… q≤²±¦¨µ·¨§ √¨²¯∏·¬²± ²©µ¨³¨·¬·¬√¨ ⁄‘„ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶¬± ∏¨®¤µ¼²·¨¶q ±∏¤µ·• √¨ …¬²¯ ot||x ozs }u|z p vt|
‹¶¬¤² ≤ o≤«¤·¨µ·²± ‘o„¶¤¼ Ž‹ o ετ αλqt||x q°«¼¯²ª¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¶²©·«¨ °²±²¶³¨¦¬¨¶²© º«¨ ¤··µ¬¥¨ o×µ¬·¬¦¨¤¨ k°²¤¦¨¤¨ l ¥¤¶¨§²± ±∏¦¯ ¤¨µµ⁄‘„
kŒ×≥l ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ q׫¨ ²µ„³³¯ Š¨ ±¨ ·o|s }v{| p v|{
k责任编辑 朱乾坤l
wwt 林 业 科 学 wu卷