全 文 ：杨树皮储藏蛋白基因启动子的克隆和功能研究 3
蒋 浩 秦红敏 田颖川
k中国科学院微生物研究所 北京 tsss{sl
⁄¨ ¤± • qŠ¤¥µ¬¨¯
( Πλαντ Πατηολογψ ∆επτ . , Υνιϖερσιτψ οφ Φλοριδα , Γαινεσϖιλλε , ΦΛ . vuytt ΥΣΑ)
摘 要 } 杨树树皮储藏蛋白 …≥°是类似种子储藏蛋白的氮素储藏物 o冬季在韧皮部薄壁细胞中大量积累 o
是落叶树氮代谢中的重要成分 ∀为了研究 …≥°基因启动子在转基因植物中的表达特性 o探索其在植物基因
工程研究中潜在的应用价值 o我们用 °≤ • 方法从美洲黑杨基因组中 ⁄‘„ 扩增得到了 …≥„ 启动子片段 ∀与
Š˜≥基因融合构建中间载体后 o转化烟草 o获得了一批 °≤ • 检测为阳性的转化再生植株 ∀经 Š˜≥组织化学
检测 o发现若干转基因烟草的茎和叶柄韧皮部以及叶脉都呈 Š˜≥染色阳性 o初步证明杨树 …≥°基因启动子
确有韧皮部表达特性 o可介导 Š˜≥基因在转基因烟草韧皮部特异表达 ∀
关键词 } 杨树 o韧皮部特异性启动子 o Š˜≥基因 o转基因烟草
收稿日期 }t||{2sv2uw ∀
基金项目 }国家自然科学基金资助项目并得到国际科学与文化中心kŒ≤≥≤l世界实验室的部分资助 ∀
3作者感谢中国科学院遗传所陈毓华帮助进行显微照相 ∀
ΧΛΟΝΙΝΓ ΟΦ Α ΠΡΟΜΟΤΕΡ ΦΡΑΓΜΕΝΤ ΟΦΒΑΡΚ ΣΤΟΡΑΓΕ ΠΡΟΤΕΙΝ ΓΕΝΕ ΦΡΟΜ
ΠΟΠΥΛΥΣ ∆ΕΛΤΟΙ∆ΕΣ ΑΝ∆ ΙΤΣ ΦΥΝΧΤΙΟΝ ΙΝ ΤΡ ΑΝΣΓΕΝΙΧ ΤΟΒΑΧΧΟ ΠΛΑΝΤΣ
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(Ινστιτυτε οφ Μιχροβιολογψ, Αχαδε µια Σινιχα Βειϕινγtsss{s)
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( Πλαντ Πατηολογψ ∆επτ . Υνιϖερσιτψ οφ Φλοριδα . Γαινεσϖιλλε ΦΛ vuytt , ΥΣΑ)
Αβστραχτ : …¤µ®¶·²µ¤ª¨ ³µ²·¨¬±k…≥°l ²©³²³¯¤µo¤±¬·µ²ª¨ ± µ¨¶¨µ√¨¶¬°¬¯¤µ·²¶¨ §¨¶·²µ¤ª¨ ³µ²·¨¬±o³¯¤¼¶¤±
¬°³²µ·¤±·µ²¯¨¬±·«¨ ±¬·µ²ª¨ ± ° ·¨¤¥²¯¬¶° ²©§¨¦¬§∏²∏¶·µ¨ ¶¨q׫¨ ¼ ³µ¨¶¨±·¬± ¤¯µª¨ ∏´¤±·¬·¬¨¶¬±·«¨ ³«¯²¨ °
³¤µ¨±¦«¼°¤¦¨¯¯¶¬± º¬±·¨µqŒ± ²µ§¨µ·² ¯¨ ¤µ± ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ³¤··¨µ± ²© …≥° ª¨ ±¨ ³µ²°²·¨µ¬± ·µ¤±¶ª¨ ±¬¦
³¯¤±·¶o¤±§·² ¬¨³¯²µ¨ ¬·¶³²·¨±·¬¤¯ ¤³³¯¬¦¤·¬²±¬± ³¯¤±·ª¨ ±¨ ·¬¦ ±¨ª¬±¨ µ¨¬±ª©²µ³«¯²¨ °2¶³¨¦¬©¬¦ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©
¬±·¨µ¨¶·¨§ª¨ ±¨ ¶q …≥° ª¨ ±¨ ³µ²°²·¨µ©µ¤ª° ±¨·º¤¶¤°³¯¬©¬¨§ ¥¼ °≤ • ° ·¨«²§©µ²° Ποπυλυσ δελτοιδεσ
ª¨ ±²°¨⁄‘„ qŒ±·¨µ° §¨¬¤·¨ √ ¦¨·²µº¤¶¦²±¶·µ∏¦·¨§¥¼ ¬±¶¨µ·¬±ª·«¨ ³µ²°²·¨µ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ∏³¶·µ¨¤° ²© Š˜≥
ª¨ ±¨ ¬± ³…Œtut oµ¨¶∏¯·¬±ª¬±·«¨ µ¨³¯¤¦¨ ° ±¨·²©·«¨ ²µ¬ª¬±¤¯ ≤¤ ∂ vx ≥ ³µ²°²·¨µ¥¼ ·«¨ …≥° ³µ²°²·¨µq
• ª¨¨ ±¨ µ¤·¨§·²¥¤¦¦² ³¯¤±·¶²¥·¤¬±¨ §¥¼·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼ °≤ • ·²¶¨¯¨ ¦··«¨ ³∏·¤·¬√¨·µ¤±¶2
ª¨ ±¬¦³¯¤±¶q ‹¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ²¯¦¤¯¬½¤·¬²± ²© Š˜≥ ¤¦·¬√¬·¼¬±§¬¦¤·¨§·«¤·…≥° ³µ²°²·¨µ¦²∏¯§¦²±©¨µ¤³«¯²¨ °2
¶³¨¦¬©¬¦ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© Š˜≥ ª¨ ±¨ q
Κεψ Ωορδσ: Ποπυλυσ δελτοιδεσo°«¯²¨ °2¶³¨¦¬©¬¦³µ²°²·¨µoŠ˜≥ ª¨ ±¨ o ×µ¤±¶ª¨ ±¬¦·²¥¤¦¦² ³¯¤±·¶
韧皮部是植物维管组织的一部分 o由于负责植物体内糖等有机养分从叶到其它组织器官的运输而
成为许多植物病虫害的直接侵害目标 ∀目前植物基因工程中常用的组成型表达启动子 o控制抗虫基因
第 vx卷 第 x期t | | |年 | 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤ „∞
∂ ²¯1vx o ‘²1x
≥ ³¨qot | | |
在植物体内各部位平均表达 o难以在受侵害的靶组织如韧皮部形成较高的作用浓度 ∀如果利用韧皮部
特异表达启动子调节目的基因在韧皮部高效特异地表达 o就可以更经济 !更有效地发挥某些目的基因
的作用 ∀另一方面 o研究植物基因组织特异表达的调控方式对于了解植物组织器官分化及基因调控规
律也具有重要的意义 ∀
树皮储藏蛋白 …≥°k¥¤µ®¶·²µ¤ª¨ ³µ²·¨¬±l在温带落叶树的氮代谢中扮演着重要角色 ∀夏末秋初 o源
于叶中蛋白的氨基酸转运到树皮中 o由韧皮部薄壁细胞合成 …≥° ~来年春天 o这些蛋白又分解成氨基
酸 o转运到新芽中 o为快速持续的生长提供充足的氮源 ∀ …≥°的这些特点与种子储藏蛋白非常相似 }第
一 o冬天的树皮中 …≥°大量积累 o夏天则分解掉 o与种子储藏蛋白在种子休眠时沉积而在种子萌发时消
失同样都受严格的时序调控 ~第二 o树皮薄壁细胞中积累 …≥°的细胞器与种子中积累种子储藏蛋白的
细胞器非常相似 ~第三 o二者氨基酸组成极为相似 ∀看来 o…≥°与种子储藏蛋白有非常相似的生理功
能 o二者基因的时序表达与组织特异性表达可能有相似的调控方式 ∀
虽然 …≥°基因已有全序列发表k≤²¯¨°¤± ετ αλqot||vl o但其启动子在植物中的表达特性未见报
道 ∀为了研究 …≥°基因启动子在植物中的表达特点 o探索其在植物基因工程中潜在的应用价值 o根据
已发表的序列设计引物 o用 °≤ • 方法从美洲黑杨基因组中扩增并克隆了 …≥°基因启动子片段 ∀通过
与 Š˜≥基因融合构建成中间载体后在转基因烟草中研究了其介导 Š˜≥基因在韧皮部特异表达的特
点 ∀为以后构建抗蛀干害虫的或抗病转基因树种及研究树皮中基因的表达调控提供了一个可供选择
的启动子元件 ∀
t 材料与方法
111 材料
t1t1t 菌种和质粒 大肠杆菌 ⁄‹xΑo根癌农杆菌 …„wwsw 由本实验室保存 ~³…Œtut 质粒购自
≤ ²¯±¨ ·¨¦«公司 ~³…¯ ∏¨¶¦µ¬³·≥Žk n l购自 ≥·µ¤·¤ª¨ ±¨ 公司 ∀
t1t1u 植物材料 美洲黑杨k Ποπυλυσ δελτοιδεσl无菌苗由中国林业科学研究院林业研究所韩一凡研究
员提供 ~烟草 ‘≤{|种子由本实验室保存 ∀
t1t1v 试剂及仪器 限制性内切酶及修饰酶购自 …²¨ «µ¬±ª¨µ ¤±±«¨¬°公司 o°µ²° ª¨¤公司 o˜≥…公
司或 Š¬¥¦²…• 公司 ~同位素≈Αp vx ≥ §„×° o≈Αp vu §≤ ×°购自 ‘∞‘公司 ~⁄‘„ 测序试剂盒购自 °«¤µ2
°¤¦¬¤公司和 ˜≥…公司 ~°≤ • 引物由上海生工生物技术公司合成 ~פ´ ⁄‘„聚合酶购自上海生工公司 ~
柱离心式 ⁄‘„ 回收试剂盒购自上海华顺生化试剂公司 ∀其它试剂购自 ≥¬ª°¤公司或国内有关公司 !
厂家 ∀
112 方法
t1u1t 植物总 ⁄‘„的提取 将叶片在液氮中研磨至粉状 o迅速转移到预热至 ys ε 提取缓冲液ku h
≤ × „…~t1w °²¯r‘¤≤¯~s qu h u p巯基乙醇 ~us °°²¯r∞⁄× „ ~tss °°²¯r ×µ¬¶q≤ k¯³‹{ qsl ~s qx h
°∂ °l中k按鲜重每克叶片加 x ∗ z1x °提取缓冲液l o轻轻摇匀 oys ε 保温 vs °¬±∀稍冷却后加等体积
的氯仿 ~异戊醇kuwΒtl抽提 otssssµr°¬±离心 tx °¬±∀上清液用平头吸头转移到新的离心管中 o加 urv
体积的异丙醇于 w ε 沉淀数 «oxsssµr°¬±离心 ts °¬±o用洗涤缓冲液kzy h乙醇 ~ts °°²¯r乙酸铵l将
沉淀洗两次 o干燥后溶于适量双蒸水中即可用于酶切或 °≤ • ∀
t1u1u …≥°基因启动子片段的克隆 质粒提取 !限制性内切酶酶解 !大肠杆菌 ⁄‹xΑ感受态细胞的制
备和大肠杆菌转化参照文献k≥¤°¥µ²²® ετ αλ. , t|{|l ∀
…≥°启动子引物 }
x. }≤ × ≤ „„Š≤ × × ≤ „× ŠŠŠ× ŠŠ≤≤ ŠŠ„„„„„
v. }× „× ŠŠ„× ≤≤ „„≤ × Š≤ × × × Š× ŠŠ„„× Š„× Š
取 uˏk约 xs±ªl杨树总 ⁄‘„为模板 o在 xsˏ反应体系中k每种 §‘×°终浓度为 s1u °°²¯ro相
应的启动子特异性引物浓度各 s1xΛ°²¯rl o先于 |w ε 预变性 w °¬±o后以 |w ε t °¬±oxx ε t °¬±ozu ε t
zw x期 蒋 浩等 }杨树皮储藏蛋白基因启动子的克隆和功能研究
°¬±进行 vs个反应循环 o最后 zu ε 延伸 { °¬±∀扩增产物经 t h琼脂糖凝胶电泳检查后 o进行氯仿抽
提 !乙醇沉淀纯化 ∀ °≤ • 扩增产物的纯化 o酶解及向大肠杆菌克隆参照文献k≥¤°¥µ²²® ετ αλ. ,t|{|l进
行 ∀对筛选到的重组子利用 ³…¯ ∏¨¶¦µ¬³·≥Žk n l上的 ×v !×z 引物 o按测序盒厂家推荐的方法对全长启
动子进行测序 ∀
t1u1v 中间载体的构建及根癌农杆菌的转化 ktl中间载体的构建 将 …¤°‹ ´r‹¬±§ ¶酶切的启动
子片段用柱离心式 ⁄‘„ 回收试剂盒纯化后 o以 tsΒt的摩尔比与 …¤°‹ ´r‹¬±§¶双酶切的 ³… ´tut
载体进行连接反应 o转化大肠杆菌 ⁄‹xΑ~从含 Ž¤±xs±ªr°的 …平板上挑取单菌落进行酶切鉴定 ∀
kul根癌农杆菌的转化 参照文献k贾盘兴等 ot||ul进行 ∀
t1u1w 烟草的转化及再生 参照文献k贾盘兴等 ot||ul进行 ∀
t1u1x 转化再生植株的 °≤ • 检测 ktl烟草 ⁄‘„ 的小规模提取 取 ts ∗ us °ª叶片 o用液氮在 t1x
°∞°管中研碎后 o加入 xssˏ提取缓冲液 o然后参照 t1u1t方法进行 ∀kul转基因烟草的 °≤ • 检测
参照 t1u1t方法进行 ∀
t1u1y 转基因烟草 Š˜≥活性的组织化学定位 参照 ¨©©¨µ¶²±k¨©©¨µ¶²±ot|{zl的方法进行 ∀
u 结果与讨论
211 ΒΣΠ基因启动子的克隆

图 t 美洲黑杨 …≥°基因
启动子的 °≤ • 扩增
ƒ¬ªqt °≤ • ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²± ²©·«¨
…≥° ª¨ ±¨ ³µ²°²·¨µ²© Π. δελτοιδεσ
以美洲黑杨总 ⁄‘„为模板 o按/材料和方法0所述进行 °≤ • o结果产生
一个约 {xs¥³的片段k图 tl o与预期大小相符 ∀
通过粘性末端连接k…¤°‹ ´r‹¬±§¶l将 …≥°启动子片段插入 ³…¯ ∏¨2
¶¦µ¬³·≥Žk n l多克隆位点中 o转化大肠杆菌后 o分别挑选了 tu个白色菌落 ∀
经酶切和 °≤ • 鉴定k电泳结果的照片略l o证明都是有 …≥°启动子片段插入
的阳性克隆 o重组质粒命名为 ³≥Ž…≥° ∀
212 ΒΣΠ启动子片段的序列分析
利用 ³…¯ ∏¨¶¦µ¬³·≥Žk n l上的 ×v !×z 引物对 ³≥Ž…≥°进行测序 o所得结
果与已发表的序列的比较见图 u所示 ∀
美洲黑杨 …≥°启动子序列与发表序列基本一致k≤²¯¨°¤± ετ αλ. ,t||vl o
同源性达 |z1y h ∀其间微小的差别可能属于栽培品种间的差别 ~但也不排
除 °≤ • 出现个别错配的可能性 ∀
…≥°启动子有富含 „r× 的区域和富含 „r× 的重复序列 ∀一个长达 t|
¥³的富含 „r× 的重复序列 }Š≤ „Š× × × × × „„× × × × × × × × o分别位于 wts
和 yvz处 ~还有重复 w次的 }„× × × × × × × ×kwu ozu owus oywz处l !„Š× × × ×2
× „„ktuv owtu oyv| oyzu处l ~重复 v次的 × × × × „„× × ×kwtx oxuv oywu处l ~
此外还有许多重复次数不等 !长度在 y ∗ ts¥³间的 „r× 富含重复序列 ∀对
于这些 „r× 富含序列 o通常的解释是 „r× 对易于解链 o有利于转录的起始 ∀
在大多数植物启动子中 „r× 富含序列都和基因转录活性的正调控有关 ∀法
国菜豆的 Β2菜豆蛋白kΒ2³«¤¶¨²¯¬±l基因启动子中的 „r× 富含序列融合到 ≤¤ ∂ vx≥ p |s启动子上游
能导致 Š˜≥基因在转基因烟草中表达量提高k…∏¶·²¶ετ αλ. ,t|{|l ~豌豆 Š≥u基因启动子一个 vv¥³ „r
× 富含序列的缺失可导致转基因烟草中 Š˜≥活性下降 ts倍k×­¤§¨ ± ετ αλ. ,t||wl ∀类似的例子也存
在于豌豆µ¥¦¶p v„基因k¤° ετ αλ. ,t||sl !≤²± „基因k≠¤°¤°²·² ετ αλ. ,t||xl和大豆热激蛋白基因
Š°«¶³tz qx∞启动子的 „r× 富含序列中k≤½¤µ±¨ ¦®¤ ετ αλ. ,t|{{l ∀ „r× 富含序列作为负调控因子存在
的报道 o则见于 Νιχοτιανα πλυ µ βαγινοφολια中叶绿体 ¤r¥结合蛋白k≤¤¥p ∞l基因k≤¤¶·µ¨¶¤±¤ ετ αλ. ,
t|{{l和植物凝集素 °‹ „ p 基因启动子k•¬ªª¶ ετ αλ. ,t|{|l ∀ …≥°基因启动子中这些 „r× 富含序列
与基因表达调控的关系 o是个值得研究的问题 ∀
{w 林 业 科 学 vx卷
图 u 本研究所得美洲黑杨 …≥°基因启动子ktl与发表序列kul的比较
ƒ¬ªqu ≤²°³¤µ¬¶²± ²©·«¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶¥¨·º¨¨ ±·«¨ …≥° ª¨ ±¨ ³µ²°²·¨µµ¨ª¬²± ©µ²°
Π. δελτοιδεσ ²¥·¤¬±¨ §¬±·«¬¶º²µ®ktl ¤±§·«¨ ³∏¥¯¬¶«¨ §²±¨ kul
°≤ • 引物以下划线标出 ׫¨ °≤ • ³µ¬° µ¨¶¤µ¨ ∏±§¨ µ¯¬±¨ §~ × „× „ ¥²¬以双下划线
标出 × „× „ ¥²¬¬¶∏±§¨µ ¬¯±¨ § º¬·« §²∏¥¯¨ ¬¯±¨ ¶~相同的碱基以短横线标出 ׫¨
§¨¯¨·¬²± ¶¬·¨¶¤µ¨ ∏±§¨ µ¯¬±¨ § º¬·« ²¯±ª ¬¯±¨ ¶~缺失碱基以长横线在底部标出 ≥«²µ·
¬¯±¨ ¶µ¨³µ¨¶¨±·¬§¨ ±·¬¦¤¯ ¥¤¶¨¶q „ 表达开始转录的位置 • ³¨µ¨¶¨±·¶·«¨ ·µ¤±¶¦µ¬³·¬²±
¶·¤µ·¶¬·¨ q
图 v 携带 …≥°基因启动子 p Š˜≥嵌合基因的中间载体的构建
ƒ¬ªqv ≤²±¶·µ∏¦·¬²± ²©¬±·¨µ° §¨¬¤·¨ √ ¦¨·²µ³……≥°2° «¤µ¥²µ¬±ª …≥° ª¨ ±¨ ³µ²°²·¨µ
2Š˜≥ ¦«¬° µ¨¬¦ª¨ ±¨
„¥¥µ¨√¤·¬²±}…t o…¤°‹ Œ~∞t o∞¦²• Œ~ ‹t o ‹¬±§ŒŒŒ~°t o°¶·Œ~≥° o≥°¤Œ~
≥³o≥³«Œ~≥¶o≥¶·Œ~ ÷¥o ÷¥¤Œq
213 中间载体的构建
中间载体的结构及构建过程见图 v
所示 o用美洲黑杨 …≥°基因启动子取代
°…Œtut的 vx≥启动子后构建成的中间
载体命名为 ³……≥°2° ∀该中间载体中
…≥°启动子片段为 {wu¥³o× „× „¥²¬位
于 z|s ∗ z|y¥³处 oŠ˜≥基因的起始密
码子在 …≥° 转录起始位点下游 uu ¥³
处 ∀此中间载体转入根癌农杆菌
…„wwsw后 o即可用于烟草的转化 ∀
214 转基因烟草的分析
u1w1t 转基因烟草的 °≤ • 检测 中
间载体 ³……≥°2°通过农杆菌 …„wwsw
介导转化烟草 ‘≤{| 无菌苗 o经分化 !
生根培养以后 o获得了 vs 余株再生植
株 ∀按/材料与方法0t1u1y部分所述 o
检测了 vs株转化再生植株 o其中 tu株
为 °≤ • 阳性 o综合结果如图 w 所示 ∀
图 w结果表明这 tu株植株很可能为有
启动子 p Š˜≥基因插入的转基因植株 ∀
u1w1u 转基因烟草 Š˜≥活性的组织化
学定位 对 °≤• 阳性的转基因烟草做
了 Š˜≥活性的组织定位 o在 tu株 °≤•
阳性的转 …≥°启动子 p Š˜≥基因的烟
草中 o检测到了 w株有 Š˜≥ 染色活性
k编号为 ≠w !≠tt !≠ty !≠uvl o其中染色
最强的 ≠tt在茎韧皮部k图 x p §l !叶柄
韧皮部k图 x p ¦l和叶脉k包括中脉和侧
脉 o图 x p l¨都有明显的 Š˜≥活性 o而作为对照的转 ³…Œtut的烟草为明显的强组成型表达k图 x p ¤o¥l o非
转基因烟草则无 Š˜≥活性k图片略l∀这表明美洲黑杨 …≥°基因启动子可以介导 Š˜≥基因在烟草韧皮部
组织特异性表达 ~从显色时间和显色强
度大致判断 o该启动子在烟草中的启动
效率低于 ≤¤ ∂ vx≥启动子 ∀
以上结果表明 o…≥°基因启动子不
但在杨树中可介导 …≥°在杨树中表达 o
而且可介导外源基因在其它转基因植
物k如烟草l中进行韧皮部特异性表达 ∀
从而可作为对树木进行基因工程研究
的一个有用的表达调控元件 ∀对启动
子的顺式调控元件的分析及该启动子
与其它韧皮部特异表达启动子的比较
还有待进一步的研究 ∀
|w x期 蒋 浩等 }杨树皮储藏蛋白基因启动子的克隆和功能研究
图 w 转 …≥°2Š˜≥基因的烟草的 °≤ • 检测
ƒ¬ªqw °≤ • §¨·¨¦·¬²± ²©µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§·²¥¤¦¦² ³¯¤±·¶·µ¤±¶©²µ° §¨¥¼ …≥°
³µ²°²·¨µ2Š˜≥ ª¨ ±¨
t ∗ tu分别对应编号为 ≠w o≠| o≠tt o≠tx o≠ty o≠t{ o≠t| o≠us o≠ut o≠uu o
≠uv o≠uz的转基因植株 ¤±¨ ¶t ∗ tu oµ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§ ³¯¤±·¶±∏°¥¨ µ¨§ ≠w o≠| o
≠tt o≠tx o≠ty o≠t{ o≠t| o≠us o≠ut o≠uu o≠uv o≠uz oµ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ ~tv 为阴性
对照k转 ³…Œtut的 ‘≤{|l tv o±¨ ª¤·¬√¨¦²±·µ²¯k‘≤{| ·µ¤±¶©²µ° §¨¥¼ ³…Œtut ~
tw为阳性对照k美洲黑杨基因组 ⁄‘„ltw o³²¶¬·¬√¨¦²±·µ²¯kª¨ ±²°¬¦⁄‘„ ²©
Π. δελτοιδεσl ~ 为 t®¥分子量 ¤µ®¨ µ  ot®¥ ⁄‘„ ¤¯§§¨µq
图 x 转 …≥°° p Š˜≥基
因烟草中 Š˜≥活性的组
织化学定位
ƒ¬ªqx ‹¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ²¯¦¤¯2
¬½¤·¬²± ²© Š˜≥ ¤¦·¬√¬·¼ ¬±
·µ¤±¶ª¨ ±¬¦·²¥¤¦¦² ³¯¤±·¶ ¬¨2
³µ¨¶¶¬±ª …≥°° p Š˜≥ ª¨ ±¨
¤q转 ³…Œtut对照植株的叶
柄横切 ¤q≤µ²¶¶¶¨¦·¬²± ²©·«¨
³¨·¬²¯¨²©¦²±·µ²¯ ³¯¤±··µ¤±¶2
©²µ° §¨ º¬·« ³…Œtut ~ ¥q转
³…Œtut对照植株的茎横切
¥q≤µ²¶¶¶¨¦·¬²± ²© ·«¨ ¶·¨°
²© ¦²±·µ²¯ ³¯¤±··µ¤±¶©²µ° §¨
º¬·«³…Œtut ~³……≥° p ° 转
基因叶柄横切k¦l≤µ²¶¶¶¨¦2
·¬²± ²© ³¨·¬²¯¨k¦l ~茎横切
k§l }叶片 k l¨ ≥·¨°k§l ¤±§
¯¨ ¤©k l¨ ²© ·«¨ ³¯¤±··µ¤±¶2
©²µ° §¨ º¬·«³……≥° p ° q
参 考 文 献
贾盘兴 o蔡金科等 q微生物遗传学实验技术 q科学出版
社 ot||u ots{ ∗ ttv
…∏¶·²¶   o Š∏¬¯·¬±¤± o²µ§¤±² ετ αλ. • ª¨∏¯¤·¬²± ²©
Β p ª¯∏¦∏µ²±¬§¤¶¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¬± ·µ¤±ª¨ ±¬¦ ·²¥¤¦¦²
³¯¤±·¶¥¼ ¤± „r× p µ¬¦«o χισ p ¤¦·¬±ª ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ©²∏±§
∏³¶·µ¨¤° ²© ¤ ƒµ¨±¦« ¥¨ ¤± Β p ³«¤¶¨²¯¬± ª¨ ±¨ q × «¨
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