全 文 ：园艺学报，2016，43 (1)：47–54.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0368；http：//www. ahs. ac. cn 47
DlSx-AF4S标记在柿及其杂交后代性别鉴定中
的有效性研究
张平贤 1，何 欢 1，罗正荣 1,3，杨 勇 2，王仁梓 2，张青林 1,3,*
（1 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉 430070；2 西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100；
3大别山特色资源开发湖北省协同创新中心，湖北黄冈 438000）
摘 要：柿（Diospyros kaki Thunb.）优良品种一般仅开雌花且单性结实能力强，早期剔除雄性后代
是提高育种效率的重要措施。在柿的近缘种君迁子（D. lotus L.）中已经筛选出一个与雄性性状紧密连锁
的 DlSx-AF4S 标记，但其在包括栽培柿及其杂交后代性别鉴定中的有效性尚不完全明确。利用该标记对
268 份相关试材进行性别鉴定，并与其花性观察结果相比较。结果表明：（1）116 份柿（D. kaki）种质中除
‘罗田甜柿’、‘兴义水柿’、‘甘百目’、‘商城冬柿’外，其余 112 份试材的 DlSx-AF4S 标记鉴定结果与其
田间性别表现一致，鉴别率 96.6%；（2）11 个柿（D. kaki）杂交组合共 118 份 F1 代中有 51 份进入成花状
态，DlSx-AF4S 标记检测与已知花性的 46 份试材一致，鉴别率 90.2%；（3）DlSx-AF4S 标记在‘华柿 1
号’ב罗田甜柿’F1 代中呈现近 1︰1 分离；（4）DlSx-AF4S 标记在柿和君迁子之外的其他供试柿属植物
中也表现出良好的通用性。以上结果表明，DlSx-AF4S 标记可用于柿及其杂交后代雄性性别的早期鉴定。
关键词：柿；DlSx-AF4S；SCAR；雄性；性别决定
中图分类号：S 665.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2016）01-0047-08

Validation of Male Sex-linked DlSx-AF4S Marker in Persimmon and F1
Progenies
ZHANG Ping-xian1，HE Huan1，LUO Zheng-rong1,3，YANG Yong2，WANG Ren-zi2，and ZHANG
Qing-lin1,3,*
（1Key Laboratory of Horticultural Plant Biology，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China；2College of
Horticulture，Northwest A & F University，Yangling，Shaanxi 712100，China；3Hubei Collaborative Innovation Center for
the Characteristic Resources Exploitation of Dabie Mountains，Huanggang，Hubei 438000，China）
Abstract：Most of commercial persimmon（Diospyros kaki Thunb.）cultivars bear only female flowers
and are strongly parthenocarpic. It is necessary to develop a rapid technique for identifying and elimination
of male progenies which has been regarded as an important strategy for enhancing breeding efficiency.
Recently，a SCAR（Sequence Characterized Amplified Region）marker DlSx-AF4S，tightly related to male
progeny has been developed from Date plum（D. lotus L.）. However，it remained undetermined whether
this marker can be employed to identify Diospyros L. and its hybrids. In this study，phenotype observation
and DlSx-AF4S genotyping were carried out using 268 accessions，including D. kaki，F1 progenies and

收稿日期：2015–07–24；修回日期：2015–12–11
基金项目：国家自然科学基金项目（31471846）；公益性行业（农业）科研专项（201203047）；国家科技基础性工作专项（2012FY110100）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：zhangqinglin@mail.hzau.edu.cn）
Validation of male sex-linked DlSx-AF4S marker in persimmon and F1 progenies.
Zhang Ping-xian，He Huan，Luo Zheng-rong，Yang Yong，Wang Ren-zi，Zhang Qing-lin.
48 Acta Horticulturae Sinica，2016，43 (1)：47–54.
some related species. All of the D. kaki genotypes，with the exception of‘Luotian Tianshi’，‘Xingyi
Shuishi’，‘Amahyakume’and‘Shangcheng Dongshi’，displayed consistent results between DlSx-AF4S
amplification and sex phenotype. A total of 118 F1 progenies were produced from 11 crosses，among which
51 individuals had flowered. In the flowering plants，DlSx-AF4S profiles of 46（90.2%）plants were
identical to the field observation of flower gender. The segregation of DlSx-AF4S in‘Huashi 1’×
‘Luotian Tianshi’F1 population fitted to 1︰1. High transferability of DlSx-AF4S was observed in other
species related to D. kaki and D. lotus. Taken together，these results indicated that the DlSx-AF4S marker
could be used to distinguish male plants from female ones of persimmon at an early stage.
Key words：Diospyros kaki；DlSx-AF4S；SCAR；male；sex determination

柿属（Diospyros L.）包含 500 余种，其中柿（D. kaki Thunb.）、君迁子（D. lotus L.）、油柿（D.
oleifera Cheng）、老鸦柿（D. rhombifolia Hemsl.）及美洲柿（D. virginiana L.）是常见的栽培种（Duangjai
et al.，2006）。柿是柿属植物作为接穗品种栽培的代表种，君迁子常作为砧木利用（Luo & Wang，
2008）。根据果实能否自然脱涩及其性状遗传特点可将现有柿品种分为表现质量性状遗传特点的完全
甜柿（Pollination Constant Non-astringent，PCNA）和表现数量性状遗传特点的非完全甜柿
（non-PCNA）两大类。PCNA 可细分为自然脱涩性状受显性基因位点控制的中国原产完全甜柿（简
称“中国甜柿”或 CPCNA）和自然脱涩性状受隐性基因位点控制的日本原产完全甜柿（简称“日
本甜柿”或 JPCNA）；non-PCNA 包括不完全甜柿（Pollination Variant Non-astringent，PVNA）、不
完全涩柿（Pollination Variant Astringent，PVA）和完全涩柿（Pollination Constant Astringent，PCA）
（Akagi et al.，2011）。
柿属植物花性表现常见有 4 类：1）完全雌株，全株仅开雌花，大多数栽培品种均属此类；2）
雌雄同株异花，例如‘禅寺丸’、‘西村早生’等；3）完全雄株，全株仅开雄花，自然界极为少见，
华中农业大学柿研究团队在湖北大别山发现若干类型； 4）三全同株，亦即雌花、雄花和完全花共
存，自然界极为少见，例如‘夫妇柿’。选育仅开雌花且单性结实能力强的完全甜柿品种是中国柿品
种改良计划的重要目标。柿 F1 代实生苗通常 5 ~ 8 年才能开花结果；有些雌雄同株异花的品种，如
优质完全甜柿‘太秋’，当树势较弱时常出现雄花着生过多的现象，成为影响产量的限制因素。如能
早期剔除具雄花的杂交后代个体，将显著节约育种成本。目前在许多雌雄异株的果树植物，如猕猴
桃（Gill et al.，1998）、番木瓜（Urasaki et al.，2002）、山葡萄（唐美玲 等，2008）及海枣（Dhawan
et al.，2013）等均开发出与性别连锁的 SCAR（Sequence Characterized Amplified Region）标记。Akagi
等（2014）利用 BSA（Bulk Segregant Analysis）-AFLP 技术获得与君迁子（雌雄异株）雄性性状紧
密连锁的 SCAR 标记 DlSx-AF4S，但该标记在中国原产柿品种及其杂交后代，以及其他柿属植物性
别鉴定中的有效性尚未完全明确。本研究中以已知花性的柿种质（基因型）、柿 F1 代单株及其他柿
属植物为试材，探讨 DlSx-AF4S 在除君迁子以外的柿属植物性别鉴定中的有效性。
1 材料与方法
所用柿属材料共 268 份，其中 116 份柿（D. kaki Thunb.）种质采自华中农业大学柿圃（湖北武
汉）和国家果树种质柿圃（陕西杨凌）（表 1）；杂交后代单株 118 份（其中已知花性 51 份）采自华
中农业大学柿圃（湖北武汉）（表 2）；君迁子（D. lotus L.）、浙江柿（D. glaucifolia L.）、金枣柿（D.
张平贤，何 欢，罗正荣，杨 勇，王仁梓，张青林.
DlSx-AF4S 标记在柿及其杂交后代性别鉴定中的有效性研究.
园艺学报，2016，43 (1)：47–54. 49
zhejiangensis Li）、油柿（D. oleifera Cheng）、美洲柿（D. virginiana L.）、老鸦柿（D. rhombifolia Hemsl.）
和野柿（D. kaki var. silvestris Mak.）等 7 个种（表 3）共 34 份柿属植物亦采自华中农业大学柿圃（湖
北武汉）。2014 年 5—7 月，取幼嫩叶片，冰盒保存，快速送回实验室并液氮处理，存于–80 ℃冰箱。
DlSx-AF4S 标记扩增参考 Akagi 等（2014）的方法，并稍作改进。正向引物 DlSx-AF4-3F
（5′-ACATCCAAAGTTCTGGAGAATCA-3′）；反向引物 DlSx-AF4-3R（5′-ATTGGTGCTTGGTCAAA
CATATC-3′），由上海生工生物工程有限公司合成。20 μL PCR 反应体系含 1 × Buffer，1.5 mmol · L-1
Mg2+，正向和反向引物各 400 nmol · L-1，400 μmol · L-1 dNTPs，20 ng 模板 DNA，1 U Taq 酶。PCR
程序为：94 ℃预变性 2 min；98 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35 个循环；最后 72 ℃ 7 min。
PCR 扩增产物采用 1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。
花后至休眠期调查柿树花性；夏季观察花、果特征；冬季以宿存花梗或果梗作为补充判断依据。
2 结果与分析
2.1 DlSx-AF4S标记在已知花性柿种质性别鉴定中的通用性
DlSx-AF4S 标记在 116 份已知花性柿种质中的扩增结果显示（图 1 示部分结果，全部结果见表
1）：8 份完全雄株的鉴定结果与田间花性调查一致；25 份雌雄同株异花的种质中除‘甘百目’、‘商
城冬柿’、‘兴义水柿’3 个材料外均可扩增出雄性特异谱带；83 份雌株种质中除‘罗田甜柿’（具
偶开雄花的能力）外均不呈现 DlSx-AF4S 标记条带。116 份供试柿种质中有 112 份试材的鉴定结果
与田间花性调查结果吻合，鉴定率为 96.6%。

图 1 48 份柿属种质 DlSx-AF4S 标记扩增图谱
1. 君迁子 L2（♂）；2. 君迁子 T（♂）；3. 君迁子 L4-1（♀）；4. 君迁子 847（♀）；5. 雄株 1 号（♂）；6. 雄株 2 号（♂）；7. 雄株 3 号（♂）；
8. 雄株 8 号（♂）；9. 雄株 11 号（♂）；10. 雄株 9 号（♂）；11. 雄株 10 号（♂）；12. 太秋（♂♀）；13. 花御所（♂♀）；14. 禅寺丸（♂♀）；
15. 山富士（♂♀）；16. 华柿 1 号（♂♀）；17. 台湾正柿（♂♀）；18. 襄阳牛心柿（♂♀）；19. 树头红（♂♀）；20. 罗田甜柿（♀）；
21. 鄂柿 1 号（♀）；22. 阳丰（♀）；23. 富有（♀）；24. 平核无（♀）；25. 四沟柿（♀）；26. 小果甜柿（♀）；27. 90-1-10（♀）；28. 磨盘柿（♀）；
29. 恭城水柿（♀）；30. 沙谷 1 号（♀）；31. 沙谷 2 号（♀）；32. 丹城柿（♀）；33. 海库曼（♀）；34. H1-35（♂）；35. H1-54（♀）；36. H1-32
（♂）；37. H1-68（♀）；38. H3-2（♂）；39. H3-9（♀）；40. H2-8（♂）；41. H2-9（♀）；42. 浙江柿（♂）；43. 浙江柿（♀）；
44. 美洲柿（♂）；45. 老鸦柿（♂）；46. 金枣柿（♀）；47. 野柿（♀）；48. 油柿（♂♀）；M. DL600 ladder marker.
Fig. 1 Profile of DlSx-AF4S marker amplification in 48 Diospyros L. genotypes
1. Date plum L2（♂）；2. Date plum T（♂）；3. Date plum L4-1（♀）；4. Date plum 847（♀）；5. Male 1（♂）；6. Male 2（♂）；7. Male 3（♂）；
8. Male 8（♂）；9. Male 11（♂）；10. Male 9（♂）；11. Male 10（♂）；12. Taishuu（♂♀）；13. Hana-gosho（♂♀）；14. Zenjimaru（♂♀）；
15. Yamafuji（♂♀）；16. Huashi 1（♂♀）；17. Taiwan Zhengshi（♂♀）；18. Xiangyang Niuxinshi（♂♀）；19. Shutouhong（♂♀）；20. Luotian
Tianshi（♀）；21. Eshi 1（♀）；22. Youhou（♀）；23. Fuyuu（♀）；24. Hiratanenashi（♀）；25. Yotsumizo（♀）；26. Xiaoguo Tianshi（♀）；
27. 90-1-10（♀）；28. Mopanshi（♀）；29. Gongcheng Shuishi（♀）；30. Sagoksi 1（♀）；31. Sagoksi 2（♀）；32. Danseongsi（♀）；
33. Hyakume（♀）；34. H1-35（♂）；35. H1-54（♀）；36. H1-32（♂）；37. H1-68（♀）；38. H3-2（♂）；39. H3-9（♀）；40. H2-8（♂）；
41. H2-9（♀）；42. Chekiang persimmon（♂）；43. Chekiang persimmon（♀）；44. Common persimmon（♂）；
45. Diamond leaf persimmon（♂）；46. Jinzaoshi（♀）；47. Silvestris persimmon（♀）；
48. Oily persimmon（♂♀）；M. DL600 DNA ladder marker.

Validation of male sex-linked DlSx-AF4S marker in persimmon and F1 progenies.
Zhang Ping-xian，He Huan，Luo Zheng-rong，Yang Yong，Wang Ren-zi，Zhang Qing-lin.
50 Acta Horticulturae Sinica，2016，43 (1)：47–54.
表 1 柿 116 份基因型材料的花性及 DlSx-AF4S 标记
Table 1 List of 116 persimmon genotypes and their sexuality phenotype by field observation and DlSx-AF4S marker
种质名称 Accession 花性 Sexuality DlSx-AF4S 脱涩类型 Type 原产地 Origin
雄株 1 号 Male 1 ♂ + 中国 China
雄株 2 号 Male 2 ♂ + 中国 China
雄株 3 号 Male 3 ♂ + 中国 China
雄株 8 号 Male 8 ♂ + 中国 China
雄株 9 号 a Male 9a ♂ + 中国 China
雄株 10 号 a Male 10a ♂ + 中国 China
雄株 11 号 Male 11 ♂ + 中国 China
站房后雄株 Zhanfanghou Male ♂ + 中国 China
甘秋 Kanshuu ♂♀ + JPCNA 日本 Japan
花御所 Hana-gosho ♂♀ + JPCNA 日本 Japan
太秋 Taishuu ♂♀ + JPCNA 日本 Japan
晚御所 Oku-gosho ♂♀ + JPCNA 日本 Japan
禅寺丸 Zenjimaru ♂♀ + PVNA 日本 Japan
西村早生 Nishimura-wase ♂♀ + PVNA 日本 Japan
正月 Shougatsu ♂♀ + PVNA 日本 Japan
赤柿 Akagaki ♂♀ + PVNA 日本 Japan
甘百目 Amahyakume ♂♀ – PVNA 日本 Japan
山富士 Yamafuji ♂♀ + PVA 日本 Japan
保山烘柿 Baoshan Hongshi ♂♀ + PCA 中国 China
壁山牛心柿 Bishan Niuxinshi ♂♀ + PCA 中国 China
杭州小油柿 Hangzhou Xiaoyoushi ♂♀ + PCA 中国 China
河西大果 Hexi Daguo ♂♀ + PCA 中国 China
黑心柿 Heixinshi ♂♀ + PCA 中国 China
盘县水柿 Panxian Shuishi ♂♀ + PCA 中国 China
商城冬柿 Shangcheng Dongshi ♂♀ – PCA 中国 China
什样景柿 Shiyang Jingshi ♂♀ + PCA 中国 China
树头红 Shutouhong ♂♀ + PCA 中国 China
台湾正柿 Taiwan Zhengshi ♂♀ + PCA 中国 China
襄阳牛心柿 Xiangyang Niuxinshi ♂♀ + PCA 中国 China
小八胡 Xiaobahu ♂♀ + PCA 中国 China
兴义水柿 Xingyi Shuishi ♂♀ – PCA 中国 China
偃师天生柿 Yanshi Tianshengshi ♂♀ + PCA 中国 China
华柿 1 号 a Huashi 1a ♂♀ + PVA 中国 China
次郎 Jirou ♀ – JPCNA 日本 Japan
富有 Fuyuu ♀ – JPCNA 日本 Japan
骏河 Suruga ♀ – JPCNA 日本 Japan
前川次郎 Maekawa-jirou ♀ – JPCNA 日本 Japan
若杉系次郎 Watasugikei-jirou ♀ – JPCNA 日本 Japan
上西早生 Uenishi-wase ♀ – JPCNA 日本 Japan
松本早生 Matsumoto-wase ♀ – JPCNA 日本 Japan
藤原御所 Fujiwara-gosho ♀ – JPCNA 日本 Japan
夕红 Yubeni ♀ – JPCNA 日本 Japan
新秋 Shinsyuu ♀ – JPCNA 日本 Japan
阳丰 Youhou ♀ – JPCNA 日本 Japan
伊豆 Izu ♀ – JPCNA 日本 Japan
早秋 Soshu ♀ – JPCNA 日本 Japan
平核无 Hiratanenashi ♀ – PVA 日本 Japan
四沟柿 Yotsumizo ♀ – PCA 日本 Japan
湘西甜柿 Xiangxi Tianshi ♀ – JPCNA 中国 China
四方甜柿 Sifang Tianshi ♀ – CPCNA 中国 China
小果甜柿 Xiaoguo Tianshi ♀ – CPCNA 中国 China
野生甜柿 2 号 Yesheng Tianshi 2 ♀ – CPCNA 中国 China
宝盖甜柿 Baogai Tianshi ♀ – CPCNA 中国 China
小宝盖甜柿 Xiaobaogai Tianshi ♀ – CPCNA 中国 China
罗田甜柿 b Luotian Tianshib ♀ + CPCNA 中国 China
鄂柿 1 号 b Eshi 1b ♀ – CPCNA 中国 China
90-1-15 ♀ – CPCNA 中国 China
90-1-34 ♀ – CPCNA 中国 China
90-1-37 ♀ – CPCNA 中国 China
张平贤，何 欢，罗正荣，杨 勇，王仁梓，张青林.
DlSx-AF4S 标记在柿及其杂交后代性别鉴定中的有效性研究.
园艺学报，2016，43 (1)：47–54. 51
续表 1
种质名称 Accession 花性 Sexuality DlSx-AF4S 脱涩类型 Type 原产地 Origin
90-3-99 ♀ – CPCNA 中国 China
97-2-2 ♀ – CPCNA 中国 China
97-3-4 ♀ – CPCNA 中国 China
90-1-10 ♀ – PVNA 中国 China
斤柿 Jinshi ♀ – PCA 中国 China
白柿 Baishi ♀ – PCA 中国 China
白旋柿 Baixuanshi ♀ – PCA 中国 China
扁柿 Bianshi ♀ – PCA 中国 China
长安烧柿 Chang’an Shaoshi ♀ – PCA 中国 China
大红袍 Dahongpao ♀ – PCA 中国 China
砀山牛心柿 Dangshan Niuxinshi ♀ – PCA 中国 China
灯笼柿 Denglongshi ♀ – PCA 中国 China
鹅黄柿 Ehuangshi ♀ – PCA 中国 China
富平尖柿 Fuping Jianshi ♀ – PCA 中国 China
富平牛心柿 Fuping Niuxinshi ♀ – PCA 中国 China
恭城水柿 Gongcheng Shuishi ♀ – PCA 中国 China
箍箍柿 Gugushi ♀ – PCA 中国 China
黑柿 Heishi ♀ – PCA 中国 China
黑心柿 2 号 Heixinshi 2 ♀ – PCA 中国 China
红面柿 Hongmianshi ♀ – PCA 中国 China
怀胎柿 Huaitaishi ♀ – PCA 中国 China
江西涩柿 b Jiangxi Seshib ♀ – PCA 中国 China
轿顶柿 Jiaodingshi ♀ – PCA 中国 China
九月青 Jiuyueqing ♀ – PCA 中国 China
兰田水柿 Lantian Shuishi ♀ – PCA 中国 China
莲花柿 Lianhuashi ♀ – PCA 中国 China
临潼火晶柿 Lintong Huojingshi ♀ – PCA 中国 China
临潼青柿 Lintong Qingshi ♀ – PCA 中国 China
耧耧柿 Louloushi ♀ – PCA 中国 China
驴奶头 Lünaitou ♀ – PCA 中国 China
马板掌 Mabanzhang ♀ – PCA 中国 China
满城莲花柿 Mancheng Lianhuashi ♀ – PCA 中国 China
帽儿柿 Maoershi ♀ – PCA 中国 China
没皮柿 Meipishi ♀ – PCA 中国 China
梅花柿 Meihuashi ♀ – PCA 中国 China
磨盘柿 1 号 Mopanshi 1 ♀ – PCA 中国 China
磨盘柿 2 号 Mopanshi 2 ♀ – PCA 中国 China
牛眼柿 Niuyanshi ♀ – PCA 中国 China
荥阳八月黄 Xingyang Bayuehuang ♀ – PCA 中国 China
社黄柿 Shehuangshi ♀ – PCA 中国 China
宿县牛心柿 Suxian Niuxinshi ♀ – PCA 中国 China
胎里红 Tailihong ♀ – PCA 中国 China
铜盆柿 Tongpenshi ♀ – PCA 中国 China
围脖柿 Weiboshi ♀ – PCA 中国 China
襄汾八月黄 Xiangfen Bayuehuang ♀ – PCA 中国 China
休宁扁柿 Xiuning Bianshi ♀ – PCA 中国 China
腰心柿 Yaoxinshi ♀ – PCA 中国 China
耀县升底柿 Yaoxian Shengdishi ♀ – PCA 中国 China
一口甜 Yikoutian ♀ – PCA 中国 China
永济馒头柿 Yongji Mantoushi ♀ – PCA 中国 China
郧阳大火罐 Yunyang Dahuoguan ♀ – PCA 中国 China
郧阳冻柿 Yunyang Dongshi ♀ – PCA 中国 China
宝盖柿 Baogaishi ♀ – PCA 中国 China
沙谷 1 号 Sagoksi 1 ♀ – PCA 韩国 Korea
沙谷 2 号 Sagoksi 2 ♀ – PCA 韩国 Korea
丹城柿 Danseongsi ♀ – PCA 韩国 Korea
海库曼 Hyakume ♀ – PVNA 美国 USA
注：a 含有极少量的完全花；b 偶开雄花；CPCNA：中国原产完全甜柿；JPCNA：日本原产完全甜柿；PVNA：不完全甜柿；PVA：不
完全涩柿；PCA：完全涩柿。Note：a bearing very few hermaphrodite flowers sporadically；b bearing few male flowers occasionally；CPCNA：
Chinese pollination constant non-astringent；JPCNA：Japanese pollination constant non-astringent；PVNA：Pollination variant non-astringent；PVA：
Pollination variant astringent；PCA：Pollination constant astringent.

Validation of male sex-linked DlSx-AF4S marker in persimmon and F1 progenies.
Zhang Ping-xian，He Huan，Luo Zheng-rong，Yang Yong，Wang Ren-zi，Zhang Qing-lin.
52 Acta Horticulturae Sinica，2016，43 (1)：47–54.
2.2 DlSx-AF4S标记在 118 份柿杂交F1 代个体性别鉴定中的通用性
在供试 11 个杂交组合共计 118 份杂交 F1 代单株中，有 51 份花性已知；除 H1-25、H1-26、
H3-4、H3-11、H4-1 等试材外，DlSx-AF4S 标记检测结果与田间花性表型一致（表 2），鉴定符合
率为 90.2%。此外，‘华柿 1 号’ב罗田甜柿’杂交组合 75 个 F1 代单株的 DlSx-AF4S 标记分离
比例基本符合 1︰1 卡方检验结果；由于这些试材尚未开花，其单株分离比例与实际花性的符合度有
待进一步确认。

表 2 柿 11 个杂交组合 118 份 F1 代单株花性与 DlSx-AF4S 标记鉴定结果
Table 2 Sex determination by field phenotype observation and DlSx-AF4S marker amplification
in 118 F1 progenies derived from 11 cross combinations
田间花性调查 Sexuality observation DlSx-AF4S 编号
Code
杂交组合
Cross combination 花性 Gender phenotype 株数 Number 有 Present 无 Absent
H1 华柿 1 号 × 罗田甜柿 Huashi 1 × Luotian Tianshi ♂ 14 13 1（H1-25）b
♂♀ 3 3 0
♀ 12 1（H1-26）a 11
未开花 Unflowered 46 26 20
H2 华柿 1 号 × 雄株 3 号 Huashi 1 × Male 3 ♂ 4 4 0
♂♀ 1 1 0
未开花 Unflowered 4 3 1
H3 鄂柿 1 号 × 罗田甜柿 Eshi 1 × Luotian Tianshi ♂ 9 7 2（H3-4，H3-11）b
♀ 1 0 1
未开花 Unflowered 1 0 1
H4 华柿 1 号 × 雄株 10 号 Huashi 1 × Male 10 ♂ 5 4 1（H4-1）b
H8 华柿 1 号 × 雄株 8 号 Huashi 1 × Male 8 未开花 Unflowered 4 4 0
H9 鄂柿 1 号 × 雄株 1 号 Eshi 1 × Male 1 未开花 Unflowered 1 1 0
H10 磨盘柿 × 雄株 8 号 Mopanshi × Male 8 未开花 Unflowered 4 3 1
H12 磨盘柿 × 雄株 2 号 Mopanshi × Male 2 ♂ 2 2 0
未开花 Unflowered 2 0 2
H14 磨盘柿 × 华柿 1 号 Mopanshi × Huashi 1 未开花 Unflowered 1 0 1
H15 鄂柿 1 号 × 禅寺丸 Eshi 1 × Zenjimaru 未开花 Unflowered 2 1 1
H16 阳丰 × 罗田甜柿 Youhou × Luotian Tianshi 未开花 Unflowered 2 1 1
合计 Total 118 74 44
注：a 含有 DlSx-AF4S 标记谱带的雌株；b 不含 DlSx-AF4S 标记谱带的雄株。
Note：a Male-specific band DlSx-AF4S presented in female individual；b Non male-specific DlSx-AF4S presented in male individual.

2.3 DlSx-AF4S标记在其他柿属植物性别鉴定中的通用性
在柿以外的其他 34 份柿属植物中，11 份君迁子（雄株）、2 份浙江柿（雄株）及 1 份油柿（雌
雄同株）均可扩增出DlSx-AF4S特征谱带，而雌株则没有扩增获得该标记产物（表3）。说明DlSx-AF4S
标记在供试柿属植物性别鉴定中具有通用性。

表 3 部分柿属植物试材花性别及 DlSx-AF4S 标记鉴定
Table 3 Some Diospyros species sexuality identification by DlSx-AF4S marker
田间花性调查 Sexuality observation DlSx-AF4S 物种
Species
倍性
Ploidy 花性 Gender phenotype 株数 Number 有 Present 无 Absent
君迁子 D. lotus 2n = 2x = 30 ♂ 11 11 0
♀ 14 0 14
浙江柿 D. glaucifolia 2n = 2x = 30 ♂ 2 2 0
♀ 1 0 1
金枣柿 D. zhejiangensis 2n = 2x = 30 ♀ 2 0 2
油柿 D. oleifera 2n = 2x = 30 ♂♀ 1 1 0
老鸦柿 D. rhombifolia 2n = 4x = 60 ♂ 1 1 0
美洲柿 D. virginiana 2n = 6x = 90 ♂ 1 1 0
野柿 D. kaki var. silvestris 2n = 6x = 90 ♀ 1 0 1
张平贤，何 欢，罗正荣，杨 勇，王仁梓，张青林.
DlSx-AF4S 标记在柿及其杂交后代性别鉴定中的有效性研究.
园艺学报，2016，43 (1)：47–54. 53
3 讨论
Akagi 等（2014）采用混合群体分离分析法将君迁子（D. lotus L.；2n = 2x = 30）F1 群体按花性
表型分别构建雌性和雄性基因池，通过 AFLP 分析发现有一对引物 E-TGT/M-AAT 可鉴别父本及 F1
雄性单株，因而将其转化成与雄性性状连锁的 DlSx-AF4S 标记。本研究结果表明：该标记在染色体
倍性差异较大的柿属植物雄性鉴定中均有较好的通用性；尤其是该标记对已知花性的柿（D. kaki）
雄性性状个体的鉴定成功率高达 96.6%；而且该标记在已知花性的柿杂交后代中雄性性状的鉴定符
合度达到 90.2%，在 11 个杂交组合除‘华柿 1 号’ב罗田甜柿’、‘鄂柿 1 号’ב罗田甜柿’、‘华
柿 1 号’ב雄株 10 号’外，其余 8 个组合 DlSx-AF4S 鉴定结果与田间花性调查一致；此外，在柿
以外的其他 34 份柿属植物中也具有通用性。以上结果说明，该标记是与柿属植物雄性性状紧密连锁
的 DNA 分子标记，可望成为柿品种遗传改良中杂种性别辅助早期鉴定的分子标记。
长期以来，由于用作完全甜柿杂交亲本的日本甜柿遗传背景狭窄（Kanzaki et al.，2000a，2000b），
且其自然脱涩性状受隐性基因控制，现有的完全甜柿遗传改良计划面临近交退化（Yamada，2005）
和育种周期过长（常规育种周期 12 ~ 19 年）的“瓶颈”，亟待在亲本组合选择和快速遗传改良技术
方面取得突破。
已有研究表明，原产中国中部大别山区的包括‘罗田甜柿’在内的中国甜柿，其自然脱涩性状
受显性基因位点控制（Ikegami et al.，2004，2006），且与日本甜柿独立起源（Du et al.，2009），因
而在完全甜柿遗传改良中更具应用价值（袁录霞 等，2012；裴忺 等，2015）。选育仅开雌花的中国
甜柿品种是中国柿品种遗传改良计划的主要目标之一。利用与君迁子雄性性状连锁的 DlSx-AF4S 标
记，可望早期鉴别和淘汰杂交个体中的雄性类型，从而降低杂种圃的管理成本。如果与 Ikegami 等
（2011）和 Pei 等（2013）报道的与中国甜柿自然脱涩性状连锁的 RO2 标记结合，将进一步淘汰非
目标性状的杂交个体，从而加速中国甜柿遗传改良的进程。

References
Akagi T，Kajita K，Kibe T，Morimura H，Tsujimoto T，Nishiyama S，Kawai T，Yamane H，Tao R. 2014. Development of molecular markers
associated with sexuality in Diospyros lotus L. and their application in D. kaki Thunb. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，
83：214–221.
Akagi T，Katayama-Ikegami A，Yonemori K. 2011. Proanthocyanidin biosynthesis of persimmon（Diospyros kaki Thunb.）fruit. Scientia
Horticulturae，130：373–380.
Dhawan C，Kharb P，Sharma R，Uppal S，Aggarwal R K. 2013. Development of male-specific SCAR marker in date palm（Phoenix dactylifera L.）.
Tree Genetics & Genomes，9：1143–1150.
Doyle J J，Doyle J L. 1987. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochemical Bulletin，19：11–15.
Du X Y，Zhang Q L，Luo Z R. 2009. Development of retrotransposon primers and their utilization for germplasm identification in Diospyros spp.
（Ebenaceae）. Tree Genetics & Genomes，5：235–245.
Duangjai S，Wallnöfer B，Samuel R，Munzinger J，Chase M W. 2006. Generic delimitation and relationships in Ebenaceae sensu lato：Evidence from
six plastid DNA regions. American Journal of Botany，93：1808–1827.
Gill G P，Harvey C F，Gardner R C，Fraser L G. 1998. Development of sex-linked PCR markers for gender identification in Actinidia. Theoretical and
Applied Genetics，97：439–445.
Ikegami A，Eguchi S，Akagi T，Sato A，Yamada M，Kanzaki S，Kitajima A，Yonemori K. 2011. Development of molecular markers linked to the
allele associated with the non-astringent trait of the Chinese persimmon（Diospyros kaki Thunb.）. Journal of the Japanese Society for

Validation of male sex-linked DlSx-AF4S marker in persimmon and F1 progenies.
Zhang Ping-xian，He Huan，Luo Zheng-rong，Yang Yong，Wang Ren-zi，Zhang Qing-lin.
54 Acta Horticulturae Sinica，2016，43 (1)：47–54.
Horticultural Science，80：150–155.
Ikegami A，Eguchi S，Yonemori K，Yamada M，Sato A，Mitani N，Kitajima A. 2006. Segregations of astringent progenies in the F1 populations
derived from crosses between a Chinese pollination-constant nonastringent（PCNA）‘LuoTian TianShi’，and Japanese PCNA and
pollination-constant astringent（PCA）cultivars of Japanese origin. HortScience，41：561–563.
Ikegami A，Yonemori K，Sugiura A，Sato A，Yamada M. 2004. Segregation of astringency in F1 progenies derived from crosses between
pollination-constant，non-astringent persimmon cultivars. HortScience，39：371–374.
Kanzaki S，Yonemori K，Sato A，Yamada M，Sugiura A. 2000a. Analysis of the genetic relationships among pollination-constant and non-astringent
（PCNA）cultivars of persimmon（Diospyros kaki Thunb.）from Japan and China using amplified fragment length polymorphism（AFLP）.
Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，69：665–670.
Kanzaki S，Yonemori K，Sato A，Yamada M，Sugiura A. 2000b. Evaluation of RFLP analysis for discriminating PCNA genotype in some persimmon
cultivars. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，69：702–704.
Luo Z R，Wang R Z. 2008. Persimmon in China：Domestication and traditional utilizations of genetic resources. Advances in Horticultural Science，
22：239–243.
Pei X，Zhang Q L，Guo D Y，Luo Z R. 2013. Effectiveness of the RO2 marker for the identification of non-astringency trait in Chinese PCNA
persimmon and its possible segregation ratio in hybrid F1 population. Scientia Horticulturae，150：227–231.
Pei Xian，Zhang Qing-lin，Guo Da-yong，Liu Ji-hong，Luo Zheng-rong. 2015. Development of genetic improvement in Chinese PCNA persimmon.
Journal of Fruit Science，32 (2)：313–321. (in Chinese)
裴 忺，张青林，郭大勇，刘继红，罗正荣. 2015. 完全甜柿遗传改良研究进展．果树学报，32 (2)：313–321.
Tang Mei-ling，Kong Jin，Xu Xue-feng，Shen Yu-jie，Wang Yi，Li Tian-zhong，Han Zhen-hai. 2008. Screening of the AFLP markers associated to
the sex locus of Vitis amurensis Rupr. and its conversion to SCAR marker. Acta Horticulturae Sinica，35 (2)：195–200. (in Chinese)
唐美玲，孔 瑾，许雪峰，沈育杰，王 忆，李天忠，韩振海. 2008. 山葡萄性别相关 AFLP 标记筛选及 SCAR 标记转化. 园艺学报，
35 (2)：195–200.
Urasaki N，Tokumoto M，Tarora K，Ban Y，Kayano T，Tanaka H，Oku H，Chinen I，Terauchi R. 2002. A male and hermaphrodite specific RAPD
marker for papaya（Carica papaya L.）. Theoretical and Applied Genetics，104：281–285.
Yamada M. 2005. Persimmon genetic resources and breeding in Japan. Acta Horticulturae，685：51–54.
Yuan Lu-xia，Zhang Qing-lin，Guo Da-yong，Luo Zheng-rong. 2011. Characteristics of Chinese PCNA types and their roles in science and industry
of oriental persimmon. Acta Horticulturae Sinica，38 (2)：361–370. (in Chinese)
袁录霞，张青林，郭大勇，罗正荣. 2011. 中国甜柿及其在世界甜柿基因库中的地位．园艺学报，38 (2)：361–370.