全 文 ：园 艺 学 报 2013，40（12）：2401–2408 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2013–07–16；修回日期：2013–10–08
基金项目：公益性（农业）行业科研专项（201203076-07）；国家自然科学基金项目（30671358）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：huaping@scau.edu.cn）
香蕉线条病毒衣壳蛋白功能域基因的原核表达
及抗血清制备
陈 秀 1,2，饶雪琴 2，阮小蕾 2，刘福秀 3，李华平 2,*
（1 博罗县农业科学研究所，广东博罗 516100；2 华南农业大学植物病毒研究室，广州 510642；3海南出入境检验检
疫局，海口 570311）
摘 要：制备香蕉线条病毒广东分离物（BSV-GD）的抗血清，可为 BSV-GD 的快速检测和进一步研
究 BSV 编码蛋白的功能提供条件。通过常规分子生物学方法，克隆了 BSV-GD 衣壳蛋白（Coat protein，
CP）功能域基因，构建了该基因的原核表达载体 pET28b-CP，并诱导表达了大小约为 46.5 kD 的融合蛋
白 His-CP。可溶性分析表明该融合蛋白以包涵体形式存在。利用 His 标签纯化试剂盒对目的蛋白进行纯
化、回收，获得了高纯度的融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原免疫健康大耳白兔，成功制备了 BSV-GD
CP 功能域基因编码蛋白的兔抗血清。Western-blotting 分析表明该抗血清具有很强的特异性，间接 ELISA
法检测抗血清效价达 204 800 倍以上，对植物材料的合适检测浓度为 1︰1 600 ~ 1︰6 400。
关键词：香蕉；香蕉线条病毒；衣壳蛋白功能域基因；原核表达；抗血清
中图分类号：S 668.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2013）12-2401-08

Prokaryotic Expression and Antiserum Preparation of Functional Domain
of Banana streak virus Coat Protein Gene
CHEN Xiu1,2，RAO Xue-qin2，RUAN Xiao-lei2，LIU Fu-xiu3，and LI Hua-ping2,*
（1 Boluo County Institute of Agricultural Sciences，Boluo，Guangdong 516100，China；2 Laboratory of Plant Virology，
South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；3 Hainan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，
Haikou 570311，China）
Abstract：In order to provide rapid detection of Banana streak virus Guangdong isolate（BSV-GD）
and to study the virus’ gene function，BSV-GD coat protein（CP）functional domain was cloned，and
prokaryotic expression recombinant plasmid pET28b-CP was constructed by inserting the cloned gene into
the plasmid pET-28b（+）. Induced by IPTG，Escherichia coli Rosseta（DE3）containing pET28b-CP
produced the fusion protein His-CP about 46.5 kD in size. Soluble analysis of the fusion protein indicated
that it was in the inclusion body. The highly purified interest protein was obtained by using the His tag
purification kit. The special polyclonal antibody was generated through the purified protein immunizing
healthy big ear rabbits. Western-blotting analysis showed that the antiserum has very strong specificity.
Indirect enzyme immunoassay suggested the antiserum titer was higher than 1︰204 800. The available
antiserum concentration for virus detection from plant materials was 1︰1 600–1︰6 400.

2402 园 艺 学 报 40 卷
Key words：banana；Banana streak virus；functional domain of coat protein gene；prokaryotic
expression；polyclonal antibody

香蕉线条病（Banana streak disease，BSD）是香蕉生产上的主要病毒病之一，最初 Lassoudière
（1974）在非洲的象牙海岸观察到其症状，但一直误认为是黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，
CMV）的一个株系引起或生理失调引起的。Lockhart（1986）鉴定其病原为香蕉线条病毒（Banana
streak virus，BSV），属于花椰菜花叶病毒科（Caulimoviridae）杆状 DNA 病毒属（Badnavirus）。此
后世界各主要香蕉产区相继报道此病害的发生，在热带地区香蕉生产上由于 BSV 引起的香蕉线条病
可造成 7% ~ 90%的减产，且 BSV 核酸序列存在广泛的寄主基因组整合现象，BSV 的存在对香蕉种
质资源的流通造成了严重影响（Daniells et al.，2001；Lheureux et al.，2007；Gayral et al.，2008，2009）。
在中国大陆，费继峰等（2003）首次发现并报道了广东香蕉产区存在由香蕉线条病毒（BSV）引致
的香蕉线条病。目前的研究认为 BSV 在蕉类中普遍发生（Zhuang et al.，2011；Verma et al.，2012）。
BSV 寄主范围小，不能通过机械摩擦接种来传播，因此不能用传统的指示植物鉴定来检测该病
毒。目前 BSV 检测中常用的方法包括血清学方法、PCR 及其衍伸的免疫捕捉 PCR、环介导等温扩
增、滚环复制等技术和电镜观察等（Harper et al.，1999；Sharman et al.，2000；Gregoire et al.，2006；
James et al.，2011；Peng et al.，2012）。
BSV 基因组包含 3 个 ORF。ORF1 和 ORF2 编码两个小蛋白，ORF3 编码一个大的多聚蛋白，
根据同属病毒基因组特征和氨基酸序列分析，推测此多聚蛋白在蛋白水解酶的作用下分解为运动蛋
白（Movement protein，MP）、衣壳蛋白（Coat protein，CP）、天冬氨酸蛋白酶（Asepartic protease，
AP）、反转录酶（Reverse transcriptase，RT）和 RNA 酶 H（RNase H，RH）（Laco et al.，1995；Hohn
& Futterer，1997）。
目前，除 BSV-CaV ORF3 和 ORF1 基因间隔区存在一启动子序列（Remans et al.，2005）的报
道外，尚无其它有关该病毒基因功能方面的研究报道。BSV 编码的蛋白在病毒的侵染、复制、传播
及与寄主互作过程中具体的生物学功能需要进一步试验研究，而蛋白抗体在蛋白功能的研究中发挥
着重要的作用，所以 BSV 抗血清的制备是相关研究工作开展的重要基础。
本实验室对香蕉线条病毒一个具有代表性的广东分离物（BSV-GD）基因组进行了克隆和序列
测定，结果表明 BSV-GD 分离物完整基因组全长 6 950 bp，共含有 3 个开放阅读框，ORF1、ORF2
和 ORF3 全长分别为 534、405 和 5 130 bp（谢丽君 等，2007），并且已对 BSV-GD 的 ORF1 和 ORF2
基因进行了原核表达并获得了其高效价的多克隆抗血清（何云蔚 等，2009a，2009b）。邱世明等（2007）
从热带作物生物技术国家重点实验室提供的香蕉材料中克隆了长为 640 bp 的 CP 区基因并进行了原
核表达。本研究中以 BSV-GD（GenBank 登录号为 DQ451009）为研究对象，制备 ORF3 的 CP 功能
域基因编码蛋白的多克隆抗血清，以期为 BSV-GD 的快速检测和调查鉴定提供条件，并为进一步研
究其蛋白功能奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验于 2009 年 9 月至 2011 年 6 月在华南农业大学植物病毒研究室进行。
大肠杆菌 Escherichia coli JM109、DH5α、Rosseta（DE3）菌株、原核表达载体 pET-28b（+）、
pCAMBIA-BSV质粒、香蕉植物组织材料由本实验室保存。pMD18-T simple载体、各种酶购自TaKaRa
12 期 陈 秀等：香蕉线条病毒衣壳蛋白功能域基因的原核表达及抗血清制备 2403

公司，DNA 回收试剂盒购自杭州维特洁生物技术有限公司，多聚组氨酸蛋白纯化试剂盒购自德国
MERCK 公司，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔 IgG、His-Bind 树脂为美国 Novagen 公司产
品，购自广州英伟创津生物技术有限公司。
1.2 基因功能域的生物信息学分析
利用蛋白功能域分析软件 PROSITE（http：//www.expasy.ch/prosite/）对 BSV-GD ORF3 的氨基
酸序列进行分析。利用 DNAStar 软件对 BSV-GD ORF3 氨基酸序列与 BSV 其它分离物及同属其它
成员的 ORF3 氨基酸序列进行比对分析，推测 BSV-GD CP 功能域基因的序列。
1.3 BSV-GD CP 功能域基因的克隆和原核表达
根据 BSV-GD CP 功能域基因的序列设计引物 petCP-FP：5′GGATCCTCCAGATGCTGAA
ATGGGTG3′，petCP-RP：5′AAGCTTTTAGGTTTTCTTAACTTCTTC3′，上游引物引入 BamHⅠ酶切
位点，下游引物引入 Hind Ⅲ酶切位点。以 pCAMBIA-BSV 质粒为模板，利用 PCR 法扩增目的基因，
产物回收后克隆到 pMD18-T simple 载体中，重组质粒进行测序鉴定。利用 BamHⅠ和 Hind Ⅲ酶切
位点将经测序正确的 CP 片段克隆到 pET-28b（+）中，获得目的基因的原核表达载体 pET28b-CP。
将原核表达载体 pET28b-CP 转化到表达菌株 E. coli Rosseta（DE3）中。挑取含阳性单菌落接种
到 LB 液体培养基中，培养至 OD600 ≈ 0.6，加入 IPTG 至终浓度为 1 mmol · L-1，于 37 ℃下诱导表达。
分别取诱导时间为 1、3、5、7 h 的菌液 1 mL，12 000 r · min-1 离心 1 min，收集细菌，用 100 μL 灭
菌蒸馏水重悬，并加入 100 μL 2× SDS 的凝胶上样缓冲液，沸水中煮 5 min，分别取 15 μL 上样，进
行 SDS-PAGE 电泳检测目的蛋白表达情况。
1.4 融合蛋白的纯化和浓缩
1.4.1 融合蛋白的可溶性分析
取诱导 4 h 的菌液各 8 mL 装至 2 个 10 mL 的离心管中，12 000 r · min-1 离心 10 min，弃上清液，
尽量吸干液体，每支管中加 1 mL 1× 结合缓冲液，重悬菌体，冰浴超声破碎（功率 400 W，破碎 15
s，15 次，间隔 15 s），4 000 r · min-1 离心 10 min，将上清液小心吸出，沉淀溶解在 1 mL ddH2O 中。
取上清液、沉淀的溶解液各 50 μL 与 50 μL 2× SDS 的凝胶上样缓冲液混合，沸水中煮 5 min，分别
取 20 μL 上样，进行 SDS-PAGE 电泳。
1.4.2 包涵体的纯化
将菌液诱导4 h后，加入100 mg · L-1 的溶菌酶、1/10 体积的1% Triton X-100，30 ℃ 水浴15 min，
12 000 r · min-1 离心 10 min 收集菌体，弃上清液，尽量去除培养基。按 100 mL 培养基所得菌体加
入 40 mL 不含变性剂的 1× 结合缓冲液比例重悬菌体。冰浴超声破碎，重悬菌体，4 000 r · min-1 离
心 10 min，去上清液，将沉淀重悬于 20 mL 1× 结合缓冲液，4 000 r · min-1 离心 10 min，移去上清
液，按每 100 mL 培养基加 5 mL 缓冲液比例，加入含 6 mol · L-1 尿素的 1× 结合缓冲液重悬沉淀，
冰浴 1 h，彻底溶解包涵体，12 000 r · min-1 离心 30 min 去除不溶成分，His-Bind 树脂纯化之前用 0.45
μm 滤膜过滤，收集上清液。
1.4.3 柱层析及蛋白纯化效果检验
按照 MERCK 公司的 His-tag 融合蛋白纯化手册操作说明，准备好 His-Bind 树脂。待结合缓冲
液下降至层析介质表面，小心加入制备好的抽提物，将流速控制为每小时 10 倍体积，依次用 10 倍
体积的 1× 结合缓冲液洗，6 倍体积的 1× 漂洗缓冲液洗，6 倍体积的 1× 洗脱缓冲液洗脱结合蛋白，

2404 园 艺 学 报 40 卷
小心收集洗脱液。取 30 μL 洗脱液与 30 μL 2× SDS 的凝胶上样缓冲液混合，沸水中煮 5 min，取 15 μL
上样，进行 SDS-PAGE 电泳，检验蛋白纯化效果。
包涵体形式存在的融合蛋白在过柱的过程中所使用的缓冲液均含有 6 mol · L-1 尿素，所有操作
在室温下进行。
1.4.4 纯化蛋白的超滤浓缩
将纯化后的蛋白洗脱液加入 4 mL 的 10 K 超滤管中，7 500 r · min-1 离心 10 min，收集超滤管底
部的蛋白，析出的变性蛋白颗粒用少量灭菌去离子水冲洗超滤管壁一并收集。
1.5 融合蛋白抗血清的制备
取约 100 μg 纯化浓缩的融合蛋白，混合等体积福氏完全佐剂，乳化后作为抗原免疫 1 只 2 kg
左右雄性健康大耳白兔。分别进行皮下多点和肌肉混合注射，共免疫 5 次，每次注射 1 ~ 2 mL 乳化
抗原溶液，免疫间隔期为 7 d，最后 1 次免疫采用不加佐剂抗原静脉注射，免疫 7 d 后耳静脉采血，
测定抗血清效价后心脏采血，通过常规方法获取抗血清。
1.6 抗血清的 Western-blotting 及间接 ELISA 分析
采用 Western-blotting 检测抗血清的特异性。SDS－PAGE 凝胶电转移转印于硝酸纤维素膜上，
将所制备的抗血清按 1︰4 000 稀释作为一抗反应 30 min，洗膜 3 次，与 5 000 倍稀释的辣根过氧化
物酶标记的羊抗兔反应 30 min，洗膜后放入预先配制的底物显色液，室温避光显色。
采用间接 ELISA 法进行抗血清效价测定（刘福秀 等，2012）。抗原浓度为免疫注射时的 1/20，
抗血清稀释度为 1︰100 ~ 1︰204 800。
采用间接 ELISA 法测定适合的抗血清工作浓度。取 BSV-GD 阳性植物材料和健康香蕉组织，
加入含 0.5%铜试剂（W/V）的抗原包被液进行研磨，离心后取上清液包被酶联板，抗血清稀释度为
1︰100 ~ 1︰51 200。
2 结果与分析
2.1 香蕉线条病毒 ORF3 基因功能域的生物信息学分析
利用蛋白结构域分析软件 PROSITE 结合序列对 BSV-GD 的 ORF3 序列进行分析，最终推测得
到 CP 基因在 ORF3 中的序列为 559 ~ 905 aa 处，核苷酸序列长为 1 041 bp。
2.2 香蕉线条病毒 CP 功能域基因的原核表达
将 PCR 扩增到的 BSV-GD CP 功能域基因克隆到 pMD18-T simple 中，重组质粒测序结果表明目
的基因序列与原序列完全一致。利用 BamHⅠ和 Hind Ⅲ对质粒双酶切，将目的基因克隆到原核表达
载体载体 pET-28b（+）中，构建了目的基因的原核表达载体 pET28b-CP，转化表达菌株 E. coli Rosseta
（DE3）。
收集经 IPTG 诱导若干小时的含有重组质粒的表达菌液，以经诱导 5 h 的未转化重组质粒的 E.
coli Rosseta（DE3）菌液及未经诱导的含重组质粒的 E. coli Rosseta（DE3）菌液为阴性对照，进行
SDS-PAGE 电泳分析。结果表明含 pET28b-CP 重组质粒的菌株经 1 ~ 7 h 诱导后均可特异性地表达
出大小约 46.5 kD 的目的蛋白，目的蛋白的表达量随诱导时间的延长略有增加（图 1）。


12 期 陈 秀等：香蕉线条病毒衣壳蛋白功能域基因的原核表达及抗血清制备 2405

图 2 SDS-PAGE 进行融合蛋白 His-CPHis-CP 的可溶性分析
M：低分子量蛋白 marker；1：未诱导的转化菌全蛋白；2：诱导
的转化菌全蛋白；3：诱导菌液经超声裂解后的沉淀物；
4：诱导菌液经超声裂解后的上清液。
Fig. 2 Soluble analysis of fusion protein His-CP by SDS-PAGE
M：Protein molecular weight marker（low）；1：Total protein of
uninduced E. coli Rosseta（DE3）containing combined plasmid；
2：Total protein of induced E. coli Rosseta（DE3）containing
combined plasmid；3：The precipitate of disrupted cells；
4：The supernate of disrupted cells.
图 3 纯化融合蛋白 His-CP 的 SDS-PAGE 分析
M：低分子量蛋白 marker；1：未纯化的蛋白
（诱导菌液经超声裂解后的沉淀物）；
2：纯化的 His-CP 融合蛋白。
Fig. 3 Analysis of the purified fusion protein
His-CP by SDS-PAGE
M：Protein molecular weight marker（low）；1：The
unpurified protein（The precipitate of disrupted
cells）；2：The purified protein
by affinity chromatograph.













图 1 转 pET28b-CP 的 E. coli Rosseta（DE3）原核表达产物的 SDS-PAGE 分析
1：经诱导的未转化重组质粒的 E. coli Rosseta（DE3）裂解产物；2：未经诱导的含重组质粒的 E. coli Rosseta（DE3）裂解产物；
3 ~ 6：含重组质粒 pET28b-CP 的 E. coli Rosseta（DE3）分别诱导 1、3、5、7 h 的裂解产物；
M：低分子量蛋白 Marker；箭头示表达的目的蛋白。
Fig. 1 Analysis of prokaryotic expression products of His-CP gene by SDS-PAGE
1：Protein from E. coli Rosseta（DE3）induced by IPTG；2：Protein from uninduced E. coli Rosseta（DE3）containing pET28b-CP；
3–6：Protein from E. coli Rosseta（DE3）containing pET28b-CP induced by IPTG for 1，3，5，7 h；
M：Protein molecular weight marker（low）；
The arrow showed target protein.

2.3 融合蛋白 His-CP 的纯化
诱导表达菌液经超声波裂解，分别收集上清液和沉淀进行 SDS-PAGE 分析后表明，融合蛋白主
要以包涵体的形式存在于菌体沉淀物中，上清液中几乎没有目的蛋白（图 2）。利用 Ni-NTA 亲和树
脂对 His-CP 融合蛋白进行分离、纯化。纯化的融合蛋白经 SDS-PAGE 分析，显示单一的目的条带
（图 3），表明获得了较纯的目的蛋白。










2406 园 艺 学 报 40 卷













图 4 His-CP 融合蛋白抗血清的 Western-blotting 分析
M：EasyWestern 蛋白 marker；1：IPTG 诱导的 E. coli Rosseta（DE）
全蛋白；2：未诱导的转化 pET28b-CP 的 E. coli Rosseta（DE3）
全蛋白；3：IPTG 诱导的转化 pET28b-CP 的
E. coli Rosseta（DE3）全蛋白。
Fig. 4 Analysis of anti-fusion protein His-CP by
Western-blotting
M：EasyWestern protein marker；1：Protein from E. coli Rosseta
（DE3）induced with IPTG；2：Protein from uninduced E. coli
Rosseta（DE3）introduced with plasmid pET28b-CP；
3：Protein from E. coli Rosseta（DE3）
introduced with plasmid
pET28b-CP induced with IPTG.

表 2 间接 ELISA 法测定抗血清工作浓度
Table 2 Determination of working titer of anti-fusion
protein His-CP by indirect ELISA
抗血清稀
释倍数
Antiserum
dilution
times
BSV-GD 阳性植
株 OD492 平均值
BSV-GD positive
plant OD492
average value（P）
健康植株（阴性对
照）OD492 平均值
Healthy plant
（negative control）
OD492 average
value（N）
P/N
100 0.918 0.611 1.503
200 0.899 0.509 1.765
400 0.852 0.461 1.856
800 0.803 0.404 1.989
1 600 0.796 0.375 2.125
3 200 0.743 0.314 2.368
6 400 0.681 0.312 2.182
12 800 0.602 0.302 1.993
25 600 0.533 0.286 1.863
51 200 0.486 0.270 1.798
2.4 融合蛋白抗血清的制备、特异性检测及效
价测定
以纯化的融合蛋白 His-CP 为抗原免疫新
西兰大耳白兔，获得了多克隆抗血清。将所制
备的多克隆抗血清按 1︰4 000 稀释，对诱导培
养的含重组质粒的 E. coli Rosseta（DE3）全蛋
白进行 Western-blotting 检测，结果显示在目的
蛋白的位置有明显杂交带（图 4），说明制备的
抗血清能够与目的蛋白发生抗原－抗体识别反
应，且特异性很强。
用间接 ELISA 法测定抗血清效价。以抗血
清 OD492 平均值（P）与未免疫血清（阴性对照）
OD492 平均值（N）大于 2 倍（P/N > 2）判断为
阳性作为标准，将抗血清稀释至 1︰204 800 倍
时仍具有明显的阳性反应（表 1），表明融合蛋
白 His-CP 在大耳白兔体内具有良好的免疫原
性，所制备的抗血清效价在 204 800 倍以上。
2.5 融合蛋白抗血清工作浓度测定
用间接 ELISA 法测定抗血清工作浓度，将
抗血清作 100 ~ 51 200 倍梯度稀释，结果表明
抗血清稀释倍数在 1 600 ~ 6 400 之间检测效果最好（表 2），此范围内 BSV-GD 阳性植株与健康植株
的 OD492 比值（P/N）均在 2 以上。

















表 1 间接 ELISA 测定融合蛋白 His-CP 抗血清的效价
Table 1 Determination of titer of anti-fusion protein
His-CP by indirect ELISA
抗血清稀
释倍数
Antiserum
dilution
times
抗血清 OD492
平均值
Antiserum
OD492 average
value（P）
未免疫血清（阴性对
照）OD492 平均值
Nonimmune serum
（negative control）
OD492 average
value（N）
P/N
100 1.718 0.261 5.618
200 1.677 0.232 7.228
400 1.657 0.152 10.901
800 1.654 0.118 14.017
1 600 1.648 0.110 14.982
3 200 1.626 0.083 19.590
6 400 1.584 0.077 20.571
12 800 1.504 0.099 15.192
25 600 1.457 0.098 14.867
51 200 1.189 0.080 14.863
102 400 0.929 0.079 11.760
204 800 0.550 0.071 7.747
12 期 陈 秀等：香蕉线条病毒衣壳蛋白功能域基因的原核表达及抗血清制备 2407

3 讨论
杆状 DNA 病毒在寄主植物体内的含量极低（Wambulwa et al.，2013），很难得到纯度较高的病
毒粒子，采用传统的病毒粒子作为抗原来制备抗血清难度较大，因此采用基因体外表达技术获得的
目的蛋白来制备抗血清是一种有效的手段。目前常用的基因体外表达系统主要有：大肠杆菌表达系
统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统等，而大肠杆菌表达系统因具有产
量高，细胞生长速度快，易于操作等优点而被广泛地应用。
香蕉线条病在发病初期其症状表现与 CMV 引起的香蕉花叶病极为相似，所以很难通过单纯的
症状观察来诊断。本试验中发现采用症状观察结合 CP 抗血清的 ELISA 检测可有效检测香蕉线条病
的发生。另外，由于杆状病毒在寄主植物体内分布不一致，病毒浓度的高低受温度等环境条件的影
响，因此选取合适的采样时间和采样部位可以提高检测的灵敏度。中国华南地区 4、5 月份一般温暖
多雨，适合病毒繁殖，植物体内病毒含量相对较高，利于检测。
血清学方法是病毒检测中最常用的技术。由于 BSV 存在广泛的分子变异，不同分离物间基因组
变异较大，血清学相关性较差，不同分离物间很难发生血清学交叉反应（Manoranjitham et al.，2012），
所以 BSV 其它分离物的 CP 抗血清不适宜用于 BSV 广东分离物的检测。本试验中采用大肠杆菌表
达系统对 BSV-GD 的 CP 功能域基因进行了原核表达，并以纯化的原核表达蛋白 His-CP 为抗原免疫
健康大耳白兔，制备了高效价、专化性的兔抗血清，为 BSV 广东分离物的快速检测以及游离病毒的
检测创造了条件，这对今后广东地区 BSV 的调查、鉴定具有重要意义，并且纯化的蛋白和制备的抗
血清为进一步研究 BSV 编码蛋白的功能奠定了基础。此外，由于 BSV 存在广泛的基因组整合现象，
所以单纯的 ELISA 检测并不能真实地反映香蕉植株中是否存在游离病毒。利用免疫电镜技术可以非
常灵敏的观察到病毒粒子（Dahal et al.，1998），多重 IC-PCR 法可有效检测 BSV 游离病毒粒子
（Gregoire et al.，2006），本研究制备的 CP 功能域多克隆抗血清可用于免疫电镜技术和免疫捕捉 PCR
技术。

References
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