全 文 ：© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　艺 　学 　报 　2009, 36 (11) : 1627 - 1634
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 06 - 25; 修回日期 : 2009 - 09 - 14
基金项目 : 国家自然科学基金项目 (30571134)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: zhengxiaoying@ nercv1org)
用于白菜和大白菜品种鉴定的 EST2SSR复合标记
的建立
李　丽 , 郑晓鹰 3
(北京市农林科学院蔬菜研究中心 , 北京 100097)
摘 　要 : 为了有效和全面鉴定白菜和大白菜品种 , 研制了由 3个引物对组成的 6套 EST2SSR复合标记
组合 , 并形成了多重 SSR的最佳实用试验条件。经由这 6套标记组合完全鉴别了 43个白菜和大白菜品种差
异的检测 , 并在 3个大白菜杂交种个体之间的表现一致 , 比较了单引物标记与复合标记的鉴定效率 , 验证
了这套技术和组合可以表达白菜和大白菜品种间多态性、品种内一致性及稳定性和重复性 , 确认其可以高
效准确和全面地鉴别白菜和大白菜品种的真实性和杂交种纯度。
关键词 : 白菜 ; 大白菜 ; EST2SSR复合标记 ; 品种鉴定
中图分类号 : S 63411; S 63413　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2009) 1121627208
The D evelopm en t of M ultiplex EST2SSR M arkers to Iden tif ica tion Ch inese
Cabbage [ B rassica cam pestris L. ch inensis ( L. ) M ak ino and B rassica
cam pestris L. pekinensis ( L our. ) O lsson ] Cultivars
L IL i and ZHENG Xiao2ying3
(B eijing V egetable Research Center of B eijing A cadem y of A griculture and Forestry Sciences, B eijing 100097, Ch ina)
Abstract: In order to identify Chinese cabbage [B rassica cam pestris L. ch inensis (L. ) Makino ] and
[B rassica cam pestris L. pek inensis (Lour. ) O lsson ] cultivars, six multip lex EST2SSR sets made up of three
pairs of p rimers in each set were developed and op tim ized PCR condition for each multip lex SSR s amp lifying.
These six multip lex EST2SSR markers may distinguish the forty2three Chinese cabbage cultivars comp letely and
test the uniform ity within the individuals of three Chinese cabbage hybrids. Efficiency from single p rimer pair
and multip lex p rimer sets were compared. They were measured the extent of diversity between the forty2three
Chinese cabbage cultivars, uniform ity within cultivars and stabilities, repetition. According to the cultivar and
the locus exam ined. These results validated that the six multip lex EST2SSR markers could be used to identifi2
cation Chinese cabbage cultivars and test the purity of hybrids.
Key words: Chinese cabbage; multip lex EST2SSR; cultivars identification
白菜和大白菜是原产于我国并广受欢迎的蔬菜 , 其栽培面积极广 , 可在全国各种气候条件下栽
培。品种的差异直接影响这类蔬菜的生产和使用性能 , 因此品种鉴别尤为重要。对于商用种子的品种
鉴别 , 新品种登记测试以及资源种质遗传多样性分析 , 都非常需要发展一种高效、快速、准确和经济
实用的品种鉴别方式。
经典的鉴定方法是形态标记的田间检测 (孟淑春 等 , 2005) , 上世纪自 90年代以来分子标记作
为一种植物基因组特征分析手段 , 是继形态标记 , 细胞标记和生化标记之后发展起来的一种新的较为
理想的基因标记形式 , 具有许多优势 , 是基于 DNA水平多态性的遗传标记。众所周知 , 目前已使用
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的分子标记技术有十多种 (郭晶心 等 , 2002; L i et al. , 2004; 张书芬 等 , 2006; 忻雅 等 , 2007) ,
SSR技术多态性和重复性较好 , 但是一次试验得到的位点较少。Tommasini 等 (2002) 发展了多重
SSR分析技术 , 并有效地鉴定了油菜品种。
本研究在分子标记最新研究成果的基础上 , 发展 EST2SSR多重标记组合及其检测技术 , 扩大 SSR
标记的多态信息量 , 弥补其位点少的缺陷 , 一次扩增反应可以得到多个多态标记。并在确认品种间多
态性和品种内一致性以及重复性和实用性检测验证的基础上 , 建立了一套用于白菜和大白菜种子真伪
鉴定和纯度检测、种质资源分析的经济实用的鉴定技术。
1　材料与方法
111　材料
试验所用白菜 [B rassica cam pestris L. ch inensis (L. ) Makino ] 和大白菜 [B rassica cam pestris L. pe2
k inensis (Lour. ) O lsson ] 种子来自北京市农林科学院蔬菜研究中心白菜育种组和种质资源库 , 使用的
品种见表 1。试验于 2006年底至 2008年初在北京市农林科学院蔬菜研究中心种子技术分子检测实验
室进行。
表 1　品种名称及编号
Table 1　Cultivar nam e and num ber
样品号
No.
品种名称
Cultivar
种类
Sort
样品号
No.
品种名称
Cultivar
种类
Sort
1 春油 1号 Chunyou 1 白菜 Pakchoi 23 北京桔红心 Beijing Juhongxin 大白菜 Chin. cab.
2 紫冠 1号 Ziguan 1 白菜 Pakchoi 24 桔红 2号 Juhong 2 大白菜 Chin. cab.
3 天津绿 Tianjinlü 白菜 Pakchoi 25 京夏 1号 J ingxia 1 大白菜 Chin. cab.
4 京绿 7号 J inglü7 白菜 Pakchoi 26 京研快菜 J ingyan Kuaicai 大白菜 Chin. cab.
5 京绿 2号 J inglü2 白菜 Pakchoi 27 京翠 70 J ingcui 70 大白菜 Chin. cab.
6 国夏 1号 Guoxia 1 白菜 Pakchoi 28 北京大牛心 Beijing Daniuxin 大白菜 Chin. cab.
7 京冠 1号 J ingguan 1 白菜 Pakchoi 29 快菜 1号 Kuaicai 1 大白菜 Chin. cab.
8 黑叶 2号 Heiye 2 白菜 Pakchoi 30 夏胜 Xiasheng 大白菜 Chin. cab.
9 京冠 2号 J ingguan 2 白菜 Pakchoi 31 二包头 Erbaotou 大白菜 Chin. cab.
10 京绿乌蹋菜 J inglüwutacai 白菜 Pakchoi 32 夏优三号 Xiayou 3 大白菜 Chin. cab.
11 奶白 1号 Naibai 1 白菜 Pakchoi 33 贮藏用白菜 Zhucang Baicai 大白菜 Chin. cab.
12 斗白 1号 Doubai 1 白菜 Pakchoi 34 大核桃纹 Dahetaowen 大白菜 Chin. cab.
13 胶研金秋 J iaoyan J inqiu 大白菜 Chin. cab. 35 青和 1号 Q inghe 1 大白菜 Chin. cab.
14 京春娃菜 2号 J ingchunwacai 2 大白菜 Chin. cab. 36 春早黄心 Chunzao Huangxin 大白菜 Chin. cab.
15 改良京春绿 Gailiang J ingchunlü 大白菜 Chin. cab. 37 河北青麻叶 Hebei Q ingmaye 大白菜 Chin. cab.
16 改良京春白 Gailiang J ingchunbai 大白菜 Chin. cab. 38 矮五头 A iwutou 大白菜 Chin. cab.
17 青杂中丰 Q ingzazhongfeng 大白菜 Chin. cab. 39 大青梢 Daqingshao 大白菜 Chin. cab.
18 黄芽菜 Huangyacai 大白菜 Chin. cab. 40 内蒙八叶齐 Neimeng Bayeqi 大白菜 Chin. cab.
19 秋月 Q iuyue 大白菜 Chin. cab. 41 东京五号 Dongjing 5 大白菜 Chin. cab.
20 北京小杂 60 Beijing Xiaoza 60 大白菜 Chin. cab. 42 怡兴黄蕊 Yixing Huangrui 大白菜 Chin. cab.
21 京秋 65 J ingqiu 65 大白菜 Chin. cab. 43 早熟 5号 Zaoshu 5 大白菜 Chin. cab.
22 京翠 1号 J ingcui 1 大白菜 Chin. cab.
112　D NA的制备
取苗龄 30～40 d的幼苗幼嫩真叶 50～60 mg放入 115 mL离心管 , 加 400μL SDS2DNA提取液
( Tris2HCl pH 715, 200 mmol·L - 1 ; NaCl 250 mmol·L - 1 ; EDTA 215 mmol·L - 1 ; SDS 015% )。玻璃
棒研磨混匀后置 65 ℃水浴 15 m in, 中间振摇混匀 3次 , 加 5 mol·L - 1 KAc 200μL, 混匀后置冰浴 10
m in, 13 000 r·m in - 1离心 30 m in, 取上清液用等体积预冷 ( - 20 ℃) 的异丙醇沉淀 DNA, 沉淀物用
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70%乙醇洗涤 2～3次后溶于 60～80μL消毒双蒸水中过夜 , 参照 Dorokhov和 Klocke (1997) 的方法
提取 DNA。其 OD260 /OD230比值在 119～210左右 , OD260 /OD280比值在 118～210之间 , 用 110% Agrose
凝胶电泳检测提取的 DNA为一条清晰的带 , 表明提取的 DNA分子没有断裂和降解 , 是一条完整的双
链分子 , 纯度符合 PCR扩增的要求。
113　EST2SSR引物设计和筛选
利用澳大利亚植物生物技术中心在网上公布的 SSR引物设计软件 ( PBC Public SSR Primer D iscov2
ery) 对美国国家生物技术信息中心 (NCB I) 发布的十字花科芸薹属 EST信息库进行搜索 , 形成 242
对 SSR引物序列。以白菜和大白菜的 4个自交系 ( P8, P14, P40, P41为 4个大白菜自交系 ) , 和 7
个地方品种 (1、15、18、23、28、37、43见表 1) 从 EST2SSR引物群筛选出 120个多态引物。
114　PCR反应
PCR反应体系为 : 总反应体积为 20μL, 其中包括 10 mmol·L - 1 dNTP 014μL, PCR反应缓冲液
(含 15 mmol·L - 1 Mg2 + ) 2μL, 25 mmol·L - 1MgCl2 014μL, 5 U·μL - 1 10 Taq酶 015μL (购自北京
泽星生物科技有限公司 ) , 模板 DNA 20～200 ng·μL - 1 2μL, 引物取量见表 2。PCR反应在选定的多
态性引物组中选择具有可相容的基因片段大小范围 , PCR扩增条件相近的 SSR引物在 PE9700扩增仪
( PE B iosystem s) 同一个扩增程序上扩增 , 温度从 68 ℃至 58 ℃逐级降低 , 每完成扩增的两个循环 ,
温度降低 1 ℃, 直到降到 58 ℃。采用 Szewc2McFadden等 (1996) 提出的 TD2PCR并略有修改 : 72 ℃
3 m in, 94 ℃ 2 m in后进行 20个迫降循环 : 94 ℃ 1 m in, 68 ℃ 1 m in, 72 ℃ 45 s ( - 1 ℃ /2循环 ) ;
再进行 20个循环 : 94 ℃ 1 m in, 58 ℃ 1 m in, 72 ℃ 45 s, 于 72 ℃ 10 m in后于 4 ℃保存。PCR扩增
产物于 - 20 ℃冰箱保存。
表 2　6组复合标记所用引物的碱基序列及其引物用量
Table 2　The pr im er sequences and PCR reagen t concen tra tion for the six EST2SSR sets
引物组合
MPS
引物序列
Primer sequence (5′- 3′)
用量 /μL
Dosage
引物组合
MPS
引物序列
Primer sequence (5′- 3′)
用量 /μL
Dosage
I GTGATAGCAGTGGTGGAAGT3 310 IV GCTTGACGATCTGTAACCAT 113
GATAATATCAGCCGACGAAG GAGAGCTGCTCATTCATTTC
GATCTCATCGACCCGTACTA 116 CAAGTCTCCTTCAAATCTCG 116
CAGAGATACTGCAGAGGAGG AGTCTCCGCTCTCTTCTTCT
TTCCGTCCCTTCCCTAAACA 019 GAAGAAGTGGCGCTTCAA 216
GAACACTACTGCCCAGAGAACAC CTTAGCAGAGAGCAACCATC
Ⅱ GTTGACTGTGGATGATGTGA 110 V CGGAAGATTGAGAAACACAG 112
TTTCCTCCTCGGTCTCGT GACTTTCAGCTGTAGGGTTG
GAGTTTCGAGGAGTTTCAGA 118 CCCACTCAACACACACTAGA 215
CTTCAAAGTAGAGAGAAGCCC CTCCTTTCAGAGTGACCAAG
CTTCTTACGATGGATTGAGC 116 AACAGCTTTCTCTCTCATGGTTG 118
CCTCTTTCAAGAACTTAGCG AGCATTACACAGAGACG
Ⅲ AGAGAGATCGAGATCCACAA 115 V I ACATGACACACTCTCTGCAA 210
GGCGAGAAAGTTAGTTGCTA GAGGAGAGCAGAGCTAACAG
GACTCTGTCATCATCGTCCT 110 AACTGGTAGAGCAGAAACCA 113
ACACGACAGAACACAAGTGA ATCAGGAGAAACGTGTGTGT
CAGATCTCATCTTCTTCTCTTCTGG 210 GATCACAACTCAACCAGC 212
GAAAGGAGCCAGATCTTCTT CTGTGTTCTTCTTTGGCTTC
　　3 所有正向引物和反向引物的用量均为 20μL扩增体系中的用量 , 所用引物的浓度均为 10 pmol·L - 1 , 表中所列为引物的体积。3 The dosage in 20 μL PCR system of forward p rimers is same as that of reverse p rimers, the concentration of p rimers solution is 10
pmol·L - 1 , the dosage in the table is the volume of each p rimer solution.
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115　电泳分析检测
扩增产物在含有 015 mg·L - 1溴化乙锭的超高分辨率的琼脂糖凝胶 (美国 Am resco公司 ) 上电
泳 , 凝胶浓度为 3%。电泳仪采用北京六一厂生产的 DYY2Ⅲ型电泳仪 , 在 5V·cm - 1的电压下 , 进行
215 h。使用 A lpha Innotech公司 MultimageTM凝胶成像仪进行凝胶扫描成像。
2　结果与分析
211　EST2SSR多态标记引物的筛选以及复合 SSR引物组合的形成
利用白菜和大白菜的 11个品种 , 从 242对引物中筛选出了 120对多态性 SSR引物。图 1为筛选
过程中的电泳图片。在筛选的 120对引物中 , 选择其中 20对扩增带型好、品种间带型差异明显、多
态性丰富的引物形成多重引物组。每个引物组选择了具有可相容的基因片段大小 , 且扩增条件相近的
3个 SSR引物 (图 2) , 在同一个反应条件和扩增程序上扩增 , 选用 Touchdown程序 , 温度从 68～58
℃逐级降低 , 每完成两个循环 , 温度降低 1 ℃, 这个过程促使扩增得到的大小不等的产物片段可以在
模板相对应的区域适当配对 , 得到了多重 SSR2PCR扩增反应的适宜条件。扩增反应中所用的每一组
复合引物的量都不一样 , 其它试剂的用量也有相应的增加。经过大量的筛选和多次重复性的验证 , 最
终确定了将 3对引物组合在一起的适宜条件 , 成功获得 6组鉴定白菜和大白菜品种的多态性 EST2SSR
复合标记组合 (表 2)。
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212　复合 EST2SSR引物组合鉴定白菜和大白菜品种的多态性分析
为了确定复合 EST2SSR标记组合在白菜和大白菜品种鉴定中应用的效果 , 选择了有代表性的 43
个白菜和大白菜品种 , 对上述试验得到的 6组复合 EST2SSR标记组合的多态性及应用于实际检测的
可行性进行了确定性试验验证。结果表明 , 平均每个引物组合产生近 24条带 , 有效多态性带 17条。
6套引物组合共产生 131条带 , 有效多态性带 100条。每套复合引物组合产生的有效多态性带的比例
为 6910% ～8416% , 平均为 7613% (表 3)。图 3和图 4是用复合 EST2SSR引物组合 1和 2分析 43个
白菜和大白菜品种的鉴定结果 , 有效扩增的条带的区域为 100～700 bp, 扩增带清晰、稳定 , 多态性
条带的大小范围也属这一区域。
表 3　复合 EST2SSR引物组合鉴定白菜和大白菜品种的多态性分析
Table 3　Polym orph ic ana lysis of m ultiplex EST2SSR set for cultivars iden tif ica tion of Ch inese cabbage
多重引物组合
Multip lex p rimer sets
(MPS)
总条带数
Total bands
( T)
多态性条带数
Polymorphic bands
( P)
多态率 /%
Polymorphic efficiency
( P /T)
多态信息量 /%
Polymorphism information content
( P IC)
MPS 1 26 22 8416 4716
MPS 2 24 18 7510 3812
MPS 3 　9 　7 7718 5817
MPS 4 16 13 8113 6710
MPS 5 27 20 7411 7410
MPS 6 29 20 6910 7618
合计 Total 131 100 7613 6014
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213　复合 EST2SSR标记品种间差异性及品种内一致性检测
为了验证得到的 6组标记组合的多态性及实际应用于白菜和大白菜种子质量检测的可行性 , 采用
3个不同纯度水平的白菜和大白菜品种的各 50个单株和 3个白菜和大白菜杂交组合 , 鉴定了所选出
的复合 SSR组合在品种内各单株表现的一致性 , 以及杂交种与其亲本的可鉴别用多态性。图 5是引
物组合 5对改良京春绿杂交组合的扩增图 , 改良京春绿在 200 bp和 220 bp之间有多态位点 , 亲本各
只有 1个 200或 220 bp的片段 , 杂交种具有双亲的两条带。图 6是引物组合 1对改良京春绿个体的扩
增图 , 240和 250 bp是其多态的位点 , 每个亲本各只具有 1条带 , 而杂交种具有双亲的 240和 250 bp
大小片段的两条带。图 7是引物组合 5对改良京春白的个体的扩增图 , 230 bp是其多态的位点 , 亲本
59具有 1条宽而呈弥散状的带 , 而杂交种具有 1条细而清晰的带。
采用已知杂交种纯度为 96%的改良京春绿 F1代杂交种 , 用复合 SSR引物组合分析了 50个单株 ,
结果表明 , 在品种遗传特性一致的样品中各个体之间多重 SSR带型表现一致 , 如果样品搀杂其它种
子或其亲本则 SSR带型表现出差异 (图 6)。对杂交种纯度为 95% 的改良京春白 F1代杂交种 , 用复
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合 SSR引物组合分析了 50个单株 , 品种遗传特性一致的样品中各个体之间多重 SSR带型表现一致 ,
样品搀杂了一个没有杂交上的亲本则在 SSR带型上表现出差异 (图 7)。复合 SSR分析结果与此品种
的已知纯度鉴定结果基本符合。由此证明了 EST2SSR复合组合体系在白菜和大白菜品种鉴定和纯度
分析中的实用性。
图 7　引物组合 5对 25个改良京春白 ( 16) 杂交种个体 D NA的扩增结果
亲本 57和 59为对照。图中有 1个个体是杂交种中没有杂交上的亲本 59。
F ig. 7　Am plif ica tion of m ultiplex EST2SSR set 5 screen 25 ind iv idua ls for Ga iliangjingchunba i
There is one other individual (59) . The first samp le 57 and sencond samp le 59 are contrast.
3　讨论
311　复合 EST2SSR标记扩增条件的优化
复合 EST2SSR标记的形成是一个复杂的过程 , 要求单引物扩增所形成的片段要处在不同片段大
小的区域 , 这样形成的复合标记才不会重叠。所以 , 本研究选择了逐步降低 ( Touchdown) 的退火温
度 , 为保证大小不同的引物都可以与模板配合 , 选择了一个合适的退火温度形成 DNA双链。从 68 ℃
逐步降到 58 ℃用了 20个循环 , 每一个循环降低半度 , 这样 , 复合标记中的每对单引物都可以在此扩
增程序中得到特异的扩增片段 , 将不同大小的引物需要不同退火温度的程序统一在一个 Touchdown的
程序中。每一对单引物在扩增反应中的终浓度是不同的 , 以得到清晰扩增片段为准。镁离子、4种脱
氧核甘酸和 DNA合成聚合酶的终浓度都比单引物扩增反应有所增加 , 但并不是越高就可以得到清晰
的条带。试剂过量会形成大量非特异型片段。本研究建立了 6套标准的 EST2SSR复合标记扩增体系。
312　EST2SSR复合引物标记的优势
在众多的分子标记中 , SSR标记的优势是勿庸质疑的 , 但其缺陷是位点少 , 即多态信息量低 , 而
且引物序列的获得要经过大量基因测试过程 , 成本耗费高。利用美国国家生物技术信息中心 (NCB I)
发布的十字花科芸薹属 EST信息库的 EST序列 , 形成 SSR引物的研究工作已经在白菜、油菜和百合
等作物中展开 (忻雅 等 , 2005, 2006; 李小白 等 , 2007; 杨素丽 等 , 2008)。本研究 EST2SSR标记
是利用澳大利亚植物生物技术中心在网上公布的 SSR引物设计软件 ( PBC Public SSR Primer D iscover2
y) 对美国国家生物技术信息中心 (NCB I) 发布的十字花科芸薹属 EST信息库进行搜索 , 便得到了
SSR引物序列 , 这样得到 SSR标记经济快捷。EST2SSR复合标记得到的多态信息量与 AFLP和 SRAP
标记的信息量相当 , 而且比 SRAP稳定 , 比 AFLP的可操作性强 , 简单省时。所以 EST2SSR复合标记
是一种经济、稳定、高效实用的分子标记方法 , 为应用于品种鉴定提供了广阔的前景。
313　单引物标记和多重引物标记鉴定品种效率的比较
理论上 , 每一组复合标记中的单引物标记所能鉴定的品种数是其多态位点的组合数 , 而复合标记
的多态位点数是单引物多态位点之和。如复合标记 3由 3对单引物标记组成 , 每一对单引物标记的多
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态位点为 2个 , 如果只用一对引物来鉴定 , 只能将 3个品种区别开来。但 3对引物组合的复合标记就
有 6个多态位点 , 多态位点为 6的组合数是 82, 所以其复合标记能将 82个品种鉴别开来 , 复合标记
极大地提高了 EST2SSR标记鉴定品种的效率。
References
Dorokhov D B, Klocke E. 1997. A rap id and econom ic technique for RAPD analysis of p lant genomes. Russ J Genet, 33: 443 - 450.
Guo J ing2xin, Zhou Nai2yuan, Ma Rong2cai, Cao M ing2qing. 2002. Genetic diversity in B rassica rapa revealed by AFLP molecular markers. Jour2
nal of Agricultural B iotechnology, 10 (2) : 138 - 143. ( in Chinese)
郭晶心 , 周乃元 , 马荣才 , 曹鸣庆. 2002. 白菜类蔬菜遗传多样性的 AFLP分子标记研究. 农业生物技术学报 , 10 (2) : 138 - 143.
L i L i, Zheng Xiao2ying, Klocke E. 2003. Identification of hybrid purity of tomato (Lycopersicon esculen tum ) using RAPD markers. Guihaia, 23
(2) : 149 - 154.
L i L i, Zheng Xiao2ying, Klocke E. 2004. Variation in some Lycopersicum esculen tum and Capsicum annuum cultivars revealed by RAPD and AFLP
markers. Guangxi Sciences, 11 (3) : 249 - 257.
L i Xiao2bai, ZhangM ing2long, Cui Hai2rui. 2007. Analysis of SSR information in EST resource of oilseed rape. Chinese Jourbal of O il Crop Sci2
ences, 29 (1) : 20 - 25. ( in Chinese )
李小白 , 张明龙 , 崔海瑞. 2007. 油菜 EST资源的 SSR信息分析. 中国油料作物学报 , 29 (1) : 20 - 25.
Meng Shu2chun, Zheng Xiao2ying, L iu Yu2mei, HeW ei2m ing, L iu Pang2yuan. 2005. D iversity analysis of morphological traits in Chinese cabbage
germp lasm resources. Acta Agriculture Boreali2Sinica, 20 (4) : 57 - 61. ( in Chinese)
孟淑春 , 郑晓鹰 , 刘玉梅 , 何伟明 , 刘庞源. 2005. 大白菜种质资源形态形状的多样性分析. 华北农学报 , 20 (4) : 57 - 61.
Szewc2McFadden A K, Kresovich S, B liek SM, M itchellc S E, McFerson J R, 1996. Identification of polymorphic conserved simp le sequence re2
peats ( SSR s) in cultivated B rassica species. Theor App l Genet, 93 (4) : 534 - 538.
Tommasini L, Batley J, A rnold GM, Cooke R J, Donini P, Lee D, Law J R, Lowe C, Moule C, TrickM, Edwards K J. 2002. The development
of multip lex simp le sequence repeat ( SSR) markers to comp lement distinctness, uniform ity and stability testing of rape (B rassica napus L. ) va2
rieties. Theor App l Genet, 106: 1091 - 1101.
Xin Ya, Cui Hai2rui, Yong Pyo2lin, Cui Shui2lian. 2005. Development of EST ( Exp ressed Sequence Tags) marker in Chinese Cabbage and its
transferability to rapeseed. Hereditas, 27 (3) : 410 - 416. ( in Chinese)
忻　雅 , 崔海瑞 , 林荣杓 , 崔水莲. 2005. 白菜的 EST标记及其对油菜的通用性. 遗传 , 27 (3) : 410 - 416.
Xin Ya, Cui Hai2rui, Lu Mei2zhen, Yao Yan2ling, J in J i2qiang, Yong Pyo2lin, Cui Shui2lian. 2006. Data m ining for SSR s in ESTs and EST2SSR
marker development in Chinese Cabbage. Acta Horticulture Sinica, 33 (3) : 549 - 554. ( in Chinese)
忻　雅 , 崔海瑞 , 卢美贞 , 姚艳玲 , 金基强 , 林荣杓 , 崔水莲. 2006. 白菜 EST2SSR信息分析与标记的建立. 园艺学报 , 33
(3) : 549 - 554.
Xin Ya, Cui Hai2rui, Zhang Fan, Yong Pyo2lin. 2007. App lication in analysis Chinese cabbage germp lasm resource by EST2SSR markers. Zhe2
jiang Agricultural Sciences, 6: 628 - 629. ( in Chinese)
忻　雅 , 崔海瑞 , 张　帆 , 林荣杓 , 2007. EST2SSR标记在白菜种质资源分析中的应用. 浙江农业科学 , 6: 628 - 629.
Yang Su2li, M ing Jun, L iu Chun, Mu D ing, L iM ing2yang. 2008. Data m ining for simp le sequence repeats marker development in exp ressed se2
quence tags from L ilium L. Acta Horticulturae Sinica, 35 (7) : 1069 - 1074. ( in Chinese)
杨素丽 , 明　军 , 刘　春 , 穆　鼎 , 李名扬. 2008. 基于 EST信息的百合 SSR标记的建立. 园艺学报 , 35 (7) : 1069 - 1074.
Zhang Shu2fen, Fu Ting2dong, L i Yuan2yuan, Zhu J ia2cheng, W ang J ian2p ing, Ma Chao2zhi. 2006. Polymorphism analysis by sequence2related
amp lified polymorphism markers in B rassica napus L. Acta Agriculture Boreali2Sinica, 21 (1) : 50 - 54. ( in Chinese)
张书芬 , 傅廷栋 , 李媛媛 , 朱家成 , 王建平 , 马朝芝. 2006. SRAP标记分析甘蓝型油菜多态性. 华北农学报 , 21 (1) : 50 - 54.
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