全 文 :园 艺 学 报 2011,38(增刊):2589 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期:2011–07–26
基金项目:国家自然科学基金项目(31071791)
* E-mail:liyuhong73@126.com;weng4@wisc.edu;Tel:13299058821(李玉红)
黄瓜矮生基因(cp)的遗传分析和精细定位
李玉红 1,*,Yiqun Weng2,*
(1西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌 712100;2 Horticulture Department,University of Wisconsin-Madison,WI
53706,USA)
目前生产上主栽的黄瓜品种大多节间长,植株高,使栽培群体的通风透光受到影响。因此,缩
短黄瓜的节间长度,使其植株矮化,对于栽培生产具有重要的理论和实际意义。
以黄瓜矮生材料 PI308915(短节间)及蔓生品系 PI249561(长节间)为父、母本杂交得 F1,F1
连续自交分别得 F2和 F3。在幼苗期和成株期调查矮生植株与蔓生植株的分离情况,计算 F2群体矮
生植株与蔓生植株的分离比例并进行卡平方测验。以 150株的 F2︰3群体为 cp基因初步定位的构图群
体,采用 SSR、CAPS、dCAPS或 Indel标记对基因进行定位。用 JoinMap 3.0软件对基因型数据进
行分析,确定目标基因和分子标记之间的连锁关系。在初步定位的基础上,利用目的基因两侧翼标
记筛选与初步定位相同亲本构建的 1 119株的 F2代群体中的重组单株。然后在目的基因两侧翼标记
内通过对 STS片段测序等手段开发 CAPS、dCAPS或 Indel等新的标记,再用新开发的标记检测筛
选出的重组单株,对重组单株进行自交得到 F3代。对于 F2代是蔓生的重组单株,则其 F3株系种植
20 ~ 60株进行 CpCp或 Cpcp基因型鉴定。通过对重组单株 F3代的表型寻找与短节间性状(矮生)
紧密连锁乃至共分离的分子标记。在矮生基因精细定位的染色体区段进行基因功能预测和分析。
cp基因的遗传分析表明,PI308915与 PI249561的 F1代均表现为正常的蔓生植株,F2代群体中
蔓生植株与矮生植株的分离比例均符合 3︰1,表明矮生性状是由单隐性基因控制,是质量性状。在
2 355对 SSR引物中,共筛选出 273对多态性引物,其中 195对 SSR引物被用来进行连锁分析,其
中 185对 SSR引物被整合到黄瓜的 7条染色体上。其中 cp基因定位于黄瓜的第 4染色体上,距离
两端的分子标记 UW084196 和 UW084212分别为 2.5和 0.6 cM。通过开发新的 Indel、Caps标记及
增大 F2群体至 1 269株时,最终筛选出 2个与 cp基因共分离的标记 ckx-indel和 UW084979,cp基
因及共分离的标记距离侧翼标记 UW084680和 UW084686的距离分别为 0.1和 0.5 cM。在 9930的
Scaffold 000032片段上,物理距离为 220 kb。利用 FGENESH程序对此区段的基因进行结构预测,
发现共有 28个基因。通过基因同源序列比对,发现在 28个基因中细胞分裂素氧化酶基因(CKX)
有可能是目标基因。随即对双亲的 CKX 进行全长测序,结果表明,CKX 在 PI308915 和 PI249561
上的 DNA全长分别为 4 127和 4 229 bp,与 PI249561相比,PI308915在外显子部位有 3个碱基的
缺失,在内含子区域有 11个 SNP位点及 6个 Indel。而 CKX基因是否是导致黄瓜矮生的基因还需
要试验进一步证实。
关键词:黄瓜;矮生基因; 遗传分析;精细定位
中图分类号:S 642.2 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2011)S-2589-01