全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2008, 35 (11) : 1653 - 1660
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2008 - 09 - 01; 修回日期 : 2008 - 11 - 03
基金项目 : 国家自然科学基金项目 (30400307) ; 辽宁省教育厅基金项目 (2004F084; 20060787)3 E2mail: hmbh@ sina1com
百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研
究
孙红梅 3 , 赵　爽 , 王春夏 , 王锦霞 , 赵　波 , 陈丽静
(沈阳农业大学园艺学院 , 辽宁省设施园艺重点实验室 , 沈阳 110161)
摘 　要 : 经 40% ～75%硫酸铵分级沉淀和 DEAE2Sepharose离子交换层析 , 从兰州百合 (L ilium davidii
var. unicolor) 鳞茎中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 ( PAL) , 纯化倍数为 13119, 酶回收率 4168%。纯化的 PAL
经 SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS2PAGE) 检测为单一蛋白带 , 其亚基分子量约 5817 kD。酶学性质研究
表明 : 百合鳞茎的 PAL不耐碱 , 更不耐酸 ; 随着水浴时间延长和水浴温度提高 , PAL活性逐渐降低 , 但 40
℃水浴 30 m in后酶活性仍保留 47% ; 以 L -苯丙氨酸为底物 , 40 ℃下的 Km值为 411 ×10 - 3 mol·L - 1 ; 金
属离子 Mn2 + 、Fe2 + 、Cu2 + 、Fe3 +促进 PAL活性 , 在供试范围内的最佳处理浓度分别为 110、110、210和
110 mmol·L - 1 , Ag+ 、Co2 + 、Ca2 +抑制其活性 , 其中 Ag+的抑制作用最强。
关键词 : 兰州百合 ; 鳞茎 ; 苯丙氨酸解氨酶 ; 纯化 ; 酶学性质
中图分类号 : S 68212　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 05132353X (2008) 1121653208
Separa tion and Pur if ica tion a s well a s Properties of Phenyla lan ine Am m on ia2
lya se in L ily Bulbs
SUN Hong2mei3 , ZHAO Shuang, WANG Chun2xia, WANG J in2xia, ZHAO Bo, and CHEN L i2jing
( Key Laboratory of Protected Horticulture of L iaoning P rovince, College of Horticu lture, Shenyang A gricultural U niversity,
Shenyang 110161, Ch ina)
Abstract: Phenylalanine ammonia2lyase ( PAL) was isolated and purified from lily (L ilium david ii var.
un icolor) bulbs via p recip itating with ammonium sulphate grading from 40% to 75% and DEAE2Sepharose
ion2exchange chromatography techniques. A 131192fold purification with a yield of 4168% was obtained. The
subunit molecular weight was estimated as 5817 kD by SDS2PAGE. Results of studies on zymological p roper2
ties indicated that PAL in the lily bulbs was not able to endure acid and alkali, especially the former. The
PAL activity declined gradually along with the increasing of temperature and p rolonging of bath duration, how2
ever it still remained 47% after 30 m in at 40 ℃. This revealed that 40 ℃was the op timum bath temperature.
PAL had a Km of 411 ×10 - 3 mol·L - 1 for L2phenylalanine at 40 ℃. Ions such as Mn2 + , Fe2 + , Cu2 + and
Fe3 + enhanced the PAL activity and 110, 110, 210 and 110 mmol·L - 1 were the most effective respectively
within the tested concentrations. Ag+ , Co2 + and Ca2 + inhibited the PAL activity and the impact of Ag+ was
the severest.
Key words: L ilium david ii var. un icolor; bulb; PAL; purification; zymological p roperty
兰州百合 (L ilium david ii var. un icolor) 鳞茎中的酚类物质与鳞茎休眠密切相关 (孙红梅 等 ,
2004a, 2005) , 而苯丙氨酸解氨酶 ( phenylalanine ammonia2lyase, PAL ) 是酚类物质代谢的关键酶
(欧阳光察和薛应龙 , 1988; Holger & Georg, 2004)。以蛋白质的结构和功能为基础 , 从分子水平认
识生命现象 , 已经成为现代生物学发展的主要方向。研究蛋白质 , 首先要得到高度纯化并具有生物活
园 　　艺 　　学 　　报 35卷
性的目的物质。然而 , 迄今为止 , 关于植物生命过程中 PAL活性动态变化的研究较多 , 有关蛋白质
分离、纯化和鉴定方法的系统研究尚少。目前 , 国内外研究者已经从甘薯 ( Tanaka & U ritan, 1997)、
油菜 (姜红林和梁颖 , 2006) 和银杏 (刘卫红 等 , 2004) 等多种植物以及部分微生物如酵母 (江柯
等 , 2004)、细菌 (Jane et al. , 2005)、原核生物 (Xiang & B radley, 2005) 中分离纯化得到 PAL,
但对百合中 PAL的分离纯化研究尚未见报道。本试验中从兰州百合鳞茎中分离纯化出 PAL, 并对其
基本性质进行了研究 , 旨为今后进行该酶的结构与功能分析、催化机理及酶基因克隆等工作打下基
础 , 为深入研究酚类物质与百合鳞茎休眠的关系以及鳞茎休眠的生理机制提供依据。
1　材料与方法
111　试验材料
供试材料为休眠期较长的兰州百合鳞茎 , 于 2006年 4—10月在沈阳农业大学园艺科研基地栽培 ,
常规管理 , 花蕾透色后去除花蕾 , 于 2006年 10月 1日地上植株全部枯萎后取样。选鳞片饱和紧密、
无病虫害、大小一致的鳞茎 , 取淀粉含量较低 (孙红梅 等 , 2004b) 的内部鳞片 (含顶芽部分 ) , 液
氮速冻后放入 - 50 ℃超低温冰箱中保存备用。
112　试验设计与测定方法
11211　粗酶液的提取 　取鳞片组织 , 以 5倍体积 pH 815、浓度为 0105 mol·L - 1的 Tris2HCl (含 1
mmol·L - 1 EDTA , 20 mmol·L - 1巯基乙醇和 015% PVP) 为提取缓冲液 , 在冰浴条件下迅速研磨 , 四
层纱布过滤后于 4 ℃下 12 000 r·m in - 1离心 30 m in, 弃沉淀取上清液即为粗酶提取物。
11212　硫酸铵分级沉淀 　将硫酸铵研磨成粉末后缓慢加入慢速而均匀搅拌的粗酶液中至 40%饱和
度 , 静置 3 h, 于 4 ℃下 10 000 r·m in - 1离心 20 m in, 弃去沉淀 ; 再加硫酸铵于上清液中至 70%饱和
度 , 静置 3 h, 于 4 ℃下 10 000 r·m in - 1离心 20 m in, 弃去上清液收集沉淀。
11213　透析脱盐 　以 10 mL pH 815的 Tris2HCl缓冲液 (含 0101 mol·L - 1 Tris2HCl, 1 mmol·L - 1
EDTA, 20 mmo·L - 1巯基乙醇和 015%甘油 ) 复溶沉淀 , 再以 20倍体积的相同缓冲液于 4 ℃下透析 ,
更换缓冲液至缓冲液中 SO4 2 - 基本消失 , 然后用 PEG浓缩备用。
11214　离子交换条件的优化 　取透析后的酶液 , 以小试管法 (汪家政和范明 , 2002) 进行柱层析。
pH: 各称取离子交换层析的柱材料 DEAE2Sepharose Fast Flow 110 g, 分别用 pH 510、515、610、
615、710、715、810、815和 910的含 0105 mol·L - 1 NaCl的 0101 mol·L - 1 Tris2HCl缓冲液平衡 , 各
保留 1 mL溶液 , 然后加入 014 mL酶液 , 搅拌均匀 , 静置 30 m in, 取上清液 , 5 000 r·m in - 1离心 15
m in后 , 取上清液测酶活性和蛋白质含量。
离子强度 : 各称取 DEAE2Sepharose Fast Flow 110 g, 分别用含 0105、0110、0115、0120、0125、
0130、0135、0140、0145、0150 mol·L - 1 NaCl, pH为 815的 0101 mol·L - 1 Tris2HCl缓冲液平衡 , 各
保留 1 mL溶液 , 然后加入 014 mL酶液 , 搅拌均匀 , 静置 30 m in, 取上清液 , 5 000 r·m in - 1离心 15
m in后 , 取上清液测酶活性和蛋白质含量。
11215　DEAE2Sepharose Fast Flow 柱层析 　按优化的条件进行柱层析试验。将 DEAE2Sepharose Fast
Flow用 pH 815、1 mol·L - 1的 Tris2HCl快速达到平衡 , 再用 pH 815、0101 mol·L - 1的 Tris2HCl平衡 ,
紫外检测仪检测 , 至稳定后开始加样。加样后用同样的缓冲液洗涤杂蛋白 , 再以含 0145 mol·L - 1
NaCl的 pH 815、0101 mol·L - 1的 Tris2HCl缓冲液进行洗脱 , 洗脱流速为 015 mL·m in - 1 , 紫外检测
仪检测。当蛋白峰出现后用自动部分收集器收集 , 测定酶活性。收集酶活性高的部分 , 放入透析袋
中 , 以 pH 815、0101 mol·L - 1的 Tris2HCl缓冲液平衡过夜 , 检测溶液中没有 Cl- 后以 PEG浓缩 , 在
- 20 ℃保存备用。
11216　SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 　SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 PAL分子量 , 分离胶质量分数为
4561
　11期 孙红梅等 : 百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究 　
12% , 浓缩胶质量分数为 5% , 以 pH 813的 Tris -甘氨酸为电泳缓冲液。取 DEAE2Sepharose Fast Flow
纯化前后的 PAL酶液各 20μL, 各加入 20μL的样品缓冲液 (含 SDS、巯基乙醇、蔗糖和溴酚蓝 ) 混
合后沸水浴 3 m in, 冷却后点样。标准蛋白的使用与样品处理相同。稳压 220 V, 浓缩胶 15 mA, 分离
胶 35 mA电泳 (郭尧君 , 1999)。
11217　酶学性质研究 　pH耐受性的研究 : 将加入底物 (L -苯丙氨酸 ) 的酶液在 pH 410和 pH 1010
的硼砂缓冲液中于 40 ℃水浴依次保温 5、10、20、30和 60 m in进行反应。温度耐受性研究 : 将加入
底物的酶液分别置于 40、50、60、70、80、90和 100 ℃水浴下分别保温 5、10、20和 30 m in, 测定
290 nm的光密度值 , 对照采用相同的反应体系 , 但不加底物。以每 mL酶液每 m in增加 0101的 OD
值为 1个酶活单位 (U) , 以计算所得的酶活性与酶在 pH 818的硼砂缓冲液中反应相同时间的活性的
百分比分别作图和作表。
PAL动力学曲线与 Km值的测定 : 分别用 215、5、10、20、30、40、50、60 mmol·L - 1的 L - 苯
丙氨酸作为底物与酶液 40 ℃水浴保温 30 m in, Hanes2Woolf作图法求 Km值 (吴士良 等 , 2004)。
金属离子对酶活性影响的试验 : 将 9种金属离子的终浓度设定为 015、1、2、4 mmol·L - 1 , 加
入底物和酶液后于 40 ℃水浴 30 m in, 以每 mL酶液每 m in增加 0101的 OD值为 1个酶活单位 (U ) ,
对照不加底物和任何离子。
2　结果与分析
211　离子交换条件的优化结果
由图 1可知 , 随着缓冲液 pH值增大 , 上清液 PAL活性增强 , 而蛋白质含量下降 , 说明 DEAE2
Sepharose Fast Flow对于蛋白质的吸附能力随着 pH 的增大而增强 , pH 为 815时 , 吸附能力最强 ,
PAL的活性也达到最大值 , 随后降低 , 因此最适平衡缓冲液的 pH为 815。
由图 2可以看出 , 随着 NaCl浓度的增大 , 上清液中蛋白质的含量逐渐增大 , 即缓冲液中 Cl- 的
大量增加 , 破坏了 DEAE2Sepharose Fast Flow原有的离子组成 , 带阴离子的蛋白质分子被洗脱下来 ,
这个过程随着 Cl- 增加而不断增强 , 达到一定程度后不再变化。
根据对银杏 (刘卫红 等 , 2004) 和红酵母 (江柯 等 , 2004) 的研究 , 在 0～015 mol·L - 1 NaCl
的浓度范围内就能够将 PAL很好地洗脱出来 , 本试验中当 NaCl达到 0145 mol·L - 1时 , PAL的活性
达到最大值 , 洗脱效果最好 (图 2)。
5561
园 　　艺 　　学 　　报 35卷
　　综上 , 确定 pH 815, 含 0145 mol·L - 1 NaCl的 0101 mol·L - 1的 Tris2HCl缓冲液为最佳洗脱条件。
212　PAL的分离纯化及鉴定
图 3为利用层析凝胶 DEAE2Sepharose Fast Flow对 PAL粗酶液进行离子交换层析的洗脱曲线 , 共
有两个蛋白峰 , 第 1个峰是上样流出液 , PAL活性较小 , 基本上是杂质 ; 第 2个是 0145 mol·L - 1
NaCl的洗脱峰 , PAL的活性峰与蛋白峰重叠 , 说明 PAL在此时洗脱 , 为纯化的 PAL蛋白质。
图 3　PAL在 D EAE2Sepharose Fa st Flow层析柱上的洗脱图
F ig. 3　Elution prof iles of PAL on D EAE2Sepharose Fa st Flow
取盐析后的粗酶液和经 DEAE2Sepharose Fast Flow层析后纯化的 PAL进行 SDS2PAGE检测 , 粗酶
液有 10条带 , 纯化后的酶液为一条单一的蛋白带 , 其位置同粗酶液的第 4条带的位置相同 (图 4) ,
分子量约为 5817 kD, 与原核细胞中纯化出的 PAL亚基分子量相同 (Xiang & B radley, 2005)。
图 4　PAL的 SD S2PAGE图谱
1. 经 DEAE2Sepharose Fast Flow柱纯化后的 PAL; 2. 盐析后的 PAL粗酶液 ; M. 标准蛋白分子量 ( kD) , 从上到下为 :
兔磷酸化酶 b 9712, 牛血清蛋白 6614, 卵清蛋白 4413, 碳酸苷酶 2910, 胰蛋白酶抑制剂 2011。
F ig. 4 Electrophoretogram of the fraction of PAL by SD S2PAGE
1. PAL after DEAE2Sepharose Fast Flow; 2. PAL after sulphate salting2out ; M. Protein molecular
weight marker ( kD) : Phosphatase b 9712, bovine serum album in 6614, egg albumen 4413,
carbonic acid glucoside enzyme 2910, tryp sin inhibitor 2011.
据报道 , PAL由 4个大小的亚基构成 (欧阳光察和薛应龙 , 1988) , 由此可推测全酶的分子量在
235 kD左右 , 大于甘蓝型油菜的 184 kD (姜红林和梁颖 , 2006) , 小于番茄的 304 kD (孙旭东和荣
6561
　11期 孙红梅等 : 百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究 　
瑞芬 , 2006) 和红酵母的 320 kD (江柯 等 , 2004) , 在大多数已知 PAL的分子量 220～340 kD范围
内 (程水源 等 , 2003)。经过一系列的分离纯化 , 蛋白质得率为 0135 % , 酶的得率为 4168 % , 纯
化倍数为 13119 (表 1)。
表 1　百合鳞茎中 PAL纯化结果
Table 1　The result of PAL isola tion and pur if ica tion from lily bulb
样品
Material
总蛋白含量 /mg
Total p rotein
content
总酶活性 /U
Total enzyme
activity
酶比活力 /
(U·mg - 1 )
Ratio activity
蛋白质回收率 /%
Protein
returns2ratio 酶活回收率 /%Enzymereturns2ratio 纯化倍数Purificationmultip le
粗酶液 Raw enzyme 12183 5 988189 466168 100100 100100 1
上清液 7196 4 570122 573189 62106 76131 1123
Supernatant fluid [ 40% (NH4 ) 2 SO4 ]
沉淀 0138 371111 971106 2198 6120 2108
Precip itation[ 75% (NH4 ) 2 SO4 ]
DEAE2Sepharose Fast Flow 0105 280100 6 156150 0135 4168 13119
213　PAL的酶学性质
21311　pH耐受性 　在碱性范围内 , PAL对 pH的耐受性强于酸性范围内的耐受性 (图 5) , 而且在反
应初始阶段 , pH 1010的 PAL活性显著高于 pH 410时的活性。随着反应时间延长 , 酶活性下降 , 但
仍以 pH 1010的活性较高。反应 60 m in后 PAL活性都降到最小值。
图 5　不同 pH值和水浴时间对酶活性的影响
F ig. 5　Effects of d ifferen t pH of buffer and ba th dura tion on PAL activ ity
21312　最适温度及温度耐受性 　如表 2所示 , 水
浴 5 m in后 , 40、50、60、70、80 ℃处理的酶活
性仍残存 88%以上 , 下降并不明显 , 90和 100 ℃
处理的酶活性分别有 57%和 40% ; 在 90和 100
℃水浴 10 m in、80 ℃水浴 20 m in后 , 酶活性丧
失 ; 在 60和 70 ℃水浴 30 m in后 , 还分别有 16%
和 13%的活性残存。
由此可见 , 百合鳞茎中的 PAL有一定的耐热
性。
表 2　PAL 对于不同水浴温度的耐受性
Table 2　The tolerance of PAL to d ifferen t ba th tem pera ture
水浴温度 /℃
Bath temperature
PAL活性百分比 /% PAL activity percentage
5 m in 10 m in 20 m in 30 m in
40 97 ±317 83 ±410 69 ±211 47 ±113
50 97 ±319 83 ±410 67 ±210 42 ±110
60 94 ±112 30 ±110 26 ±116 16 ±112
70 89 ±318 24 ±213 17 ±117 13 ±110
80 88 ±311 22 ±112 0 ±016 0 ±014
90 57 ±410 0 ±210 0 ±110 0 ±017
100 40 ±210 0 ±110 0 ±015 0 ±013
7561
园 　　艺 　　学 　　报 35卷
21313　百合鳞茎 PAL的 Km值 　以 L - 苯丙氨酸
为底物 , 在不同浓度下测定 PAL活性 , 用 Hanes2
Woolf法作图得一直线 (图 6) , 其延长线与横轴
的截距为 - Km , 计算得出百合鳞茎 PAL的 Km值
为 411 ×10 - 3 mol·L - 1。已纯化的多数 PAL的 Km
值在 013 ×10 - 4 ～115 ×10 - 2 mol·L - 1 , 如水稻为
5194 ×10 - 4 mol·L - 1 ; 小麦 PAL 的 Km 有 2个 ,
分别为 01625 ×10 - 4和 311 ×10 - 4 mol·L - 1 (欧阳
光察 等 , 1985) ; 红酵母为 3187 ×10 - 4 mol·L - 1
(江柯 等 , 2004 ) ; 油菜的两个 Km 值分别为
1101 ×10 - 3和 01778 ×10 - 3 mol·L - 1 (姜红林和
梁颖 , 2006)。百合鳞茎 PAL 的 Km 在上述范围
内居中 , 说明其与底物 L -苯丙氨酸亲和性一般。
图 6　PAL催化 L - 苯丙氨酸降解的 Hanes2W oolf图
F ig. 6　Hanes2W oolf plot of PAL in
genera tion of L 2phenyla lan ine
21314　金属离子对百合鳞茎 PAL的影响 　研究 9种离子对 PAL活性的影响 , 结果 (图 7) 表明 :
Mn2 + 、Cu2 + 、Fe3 +和 Fe2 + 4离子对 PAL活性有不同程度的促进作用 , 且都呈单峰曲线 , 在供试范围
内最佳处理浓度分别为 : 110、210、110和 110 mmol·L - 1。Ag+ 、Co2 + 、Ca2 +对 PAL活性有不同程
度的抑制作用 , 其中 Ag+的抑制作用最显著 , 随着离子浓度增加抑制作用增强 ; Co2 + 、Ca2 +在供试
范围内都呈单峰曲线 , 在 015 mmol·L - 1时抑制作用达到最强。在供试范围内 , Na+随着浓度的升高 ,
对 PAL的作用由抑制变为促进作用 , 而 Mg2 +随着浓度升高对 PAL的作用由促进变为抑制。
图 7　不同金属离子对 PAL活性的影响
横坐标 1～0依次为 : MnCl2、CuCl2、AgCl、CoCl2、CaCl2、NaCl、FeCl3、FeSO4、MgCl2 和对照。
F ig. 7　Effects of d ifferen t ion s on PAL activ ity
Abscissa 1 - 0 indicate MnCl2 , CuCl2 , AgCl, CoCl2 , CaCl2 , NaCl, FeCl3 , FeSO4 , MgCl2 and control, respectively.
3　讨论
从离子交换的洗脱条件来看 , 多数研究直接使用了碱性范围内 (pH 810～819) 任一 pH的 Tris2
HCl缓冲液进行洗脱 , 洗脱离子 (NaCl) 浓度一般选择 015 mol·L - 1左右 (姜红林和梁颖 , 2006; 孙
旭东和荣瑞芬 , 2006)。刘卫红等 (2004) 以银杏叶为试材的研究表明 , 最适洗脱缓冲液的 pH值为
819, 最佳洗脱离子 (NaCl) 浓度为 015 mol·L - 1。本试验中对百合鳞茎内 PAL分离纯化的洗脱条件
进行了系统研究 , 结果表明 pH 815、含 0145 mol·L - 1 NaCl的 0101 mol·L - 1的 Tris2HCl缓冲液为最
佳洗脱条件 , 表明不同材料之间存在差异 , 也可能与酶液浓度和缓冲液性质有关。离子交换剂有阳离
8561
　11期 孙红梅等 : 百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究 　
子交换剂 (羧甲基纤维素 , 即 CM -纤维素 ) 和阴离子交换剂 (二乙氨基乙基纤维素 , 即 DEAE纤维
素 )。本试验中使用 DEAE2Sepharose Fast Flow柱材料进行层析试验 , 与对红酵母 (江柯 等 , 2004)
的研究中所用的柱材料相同。刘卫红等 (2004)、孙旭东和荣瑞芬 (2006) 分别在银杏叶片和番茄果
实上的研究也都使用了 DEAE纤维素。鉴于目前鳞茎类植物的 PAL系统研究尚为空白 , 本研究的结
果可为其他变态器官的相关研究提供参考。酶分离纯化的材料一般认为经过光诱导或黄化处理效果更
佳 , 今后的研究将考虑以刚萌发鳞茎的顶芽为试材 , 为鳞茎类作物 PAL的深入研究提供依据。
酶学性质研究表明 , 百合鳞茎的 PAL最适反应温度为 40 ℃, 略低于山药的 45 ℃ (江力 等 ,
2006) 和银杏的 50 ℃ (王燕 等 , 2004) , 这可能与植物的起源和生长适应性有关。不同种类的金属
离子及同一金属离子的不同浓度 , 对百合鳞茎的 PAL活性有明显影响 , 其中 Fe3 + 、Cu2 + 、Fe2 +的显
著促进作用 , 可能是金属离子作为辅基与酶蛋白相互结合的结果 , 而 Ag+和 Co2 +等重金属离子的抑
制现象与一般蛋白质的变性理论相符合 , 与 Ba2 +对甘蓝型油菜 PAL的抑制作用相似 (姜红林和梁颖 ,
2006)。Ca2 +在信号转导和许多生理代谢活动中起着重要的调节作用 , 其作用机理较复杂 , 有待于进
一步研究。
影响 PAL基因表达的因素较多 , 如水分 (许丽颖 等 , 2007)、机械损伤 ( Kao et al. , 2002)、不
同光质 (Dennis et al. , 2004; 王莉 等 , 2007)、壳聚糖 (W ajahatullah et al. , 2003 ) 和麦角甾醇
( Stephanie et al. , 2006) 等 , 已经在紫叶李 (许丽颖 等 , 2007)、紫萍 (Dennis et al. , 2004)、红
景天 (王莉 等 , 2007) 等植物上得到证实 , 而在植物变态器官方面的研究尚少。分离和纯化 PAL并
进行酶学性质研究 , 可以为全面调控 PAL活性奠定基础 , 进而调控酚类物质代谢 , 最终实现人工调
节百合鳞茎的休眠 , 并为其他变态器官的休眠机制研究提供理论依据。
References
Cheng Shui2yuan, Chen Kun2song, L iu W ei2hong, Du He2wei. 2003. Regulation and exp ression of the PAL in p lant and its outlook. Journal of
Fruit Science, 20 (5) : 351 - 357. ( in Chinese)
程水源 , 陈昆松 , 刘卫红 , 杜何为. 2003. 植物苯丙氨酸解氨酶基因的表达调控与研究展望. 果树学报 , 20 (5) : 351 - 357.
Dennis C G, Lan L G, JerryW M, A lfredo J H. 2004. Effects of a PAL inhibitor on phenolic accumulation and UV2B tolerance in Spirodela in ter2
m edia ( Koch. ) . Journal of Experimental Botany, 55 (398) : 919 - 927.
Guo Yao2jun. 1999. Protein electrophoresis technology. Beijing: Science Press. ( in Chinese)
郭尧君. 1999. 蛋白质电泳技术. 北京 : 科学出版社.
Holger R, Georg E S. 2004. Structural basis for the entrance into the phenylp ropanoid metabolism catalyzed by phenylalanine ammonia2lyase. The
Plant Cell, 16 (12) : 3426 - 3436.
Jane S W , Marie T, David J C. 2005. The gene stlA encodes a phenylalanine ammonia2lyase that is involved in the p roduction of a stilbene antibi2
otic in hotorhabdus lum inescens TT01. M icrobiology, 151: 2543 - 2550.
J iang L i, Yuan Huai2bo, Zhang Shi2jie, J iang Han2hu. 2006. Study on the characteristics of phenylalanine ammonia2lyase in yam. Food Science,
27 (10) : 36 - 40. ( in Chinese)
江　力 , 袁怀波 , 张世杰 , 江汉湖. 2006. 山药苯丙氨酸解氨酶特性的研究. 食品科学 , 27 (10) : 36 - 40.
J iang Hong2lin, L iang Ying. 2006. Studies on purification and p roperties of phenylalanine ammonia2lyase ( PAL) in B rassica napus. Chinese Ag2
ricultural Science Bulletin, 22 (7) : 282 - 286. ( in Chinese)
姜红林 , 梁　颖. 2006. 甘蓝型油菜苯丙氨酸解氨酶的分离纯化与性质研究. 中国农学通报 , 22 (7) : 282 - 286.
J iang Ke, Lu Tao, Zhao De2li, Xia Kai, Yang Ya2li, Yang Shun2kai, L iu Cheng2jun. 2004. Purification and p roperties of phenylalanine ammo2
nia2lyase from R hodotoru la sp. A1401. Journal of Sichuan University: Natural Science Edition, 41 (4) : 865 - 868. ( in Chinese)
江　柯 , 卢　涛 , 赵德立 , 夏　凯 , 杨亚力 , 杨顺凯 , 刘成君. 2004. 红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究. 四川大学
学报 : 自然科学版 , 41 (4) : 865 - 868.
Kao Y Y, Harding S A, Tsai C J. 2002. D ifferential exp ression of two distinct phenylalanine ammonia2lyase genes in condensed tannin2accumula2
ting and lignifying cells of quaking aspen. Plant Physiology, 130 (2) : 796 - 807.
9561
园 　　艺 　　学 　　报 35卷
L iu W ei2hong, W ang Yan, Du He2wei, Cheng Shui2yuan. 2004. Study on the conditions of isolating and purifying L2phenylalanine ammonia2lyase
( PAL) in Ginkgo biloba leaves. Journal of Hubei Agricultural College, 24 (3) : 196 - 198. ( in Chinese)
刘卫红 , 王　燕 , 杜何为 , 程水源. 2004. 银杏叶苯丙氨酸解氨酶分离纯化条件的研究. 湖北农学院学报 , 24 (3) : 196 - 198.
Ouyang Guang2cha, Ying Chu2yan, Wo Shao2gen, Xue Ying2long. 1985. Studies on p lant phenylalanine ammonia2lyase ( PAL) Ⅵ. Purification
and some p roperties of PAL from etiolated seedlings of rice (O ryza sativa) and wheat ( Triticum aestivum ) . Acta Photophysiologica Sinica, 11
(2) : 204 - 214. ( in Chinese)
欧阳光察 , 应初衍 , 沃绍根 , 薛应龙. 1985. 植物苯丙氨酸解氨酶的研究Ⅵ. 水稻、小麦 PAL的纯化及基本特性. 植物生理学报 ,
11 (2) : 204 - 214.
Ouyang Guang2cha, Xue Ying2long. 1988. Physiological role and regulation of phenylp ropanoid metabolism in p lant. Plant Physiology Communica2
tions, 24 (3) : 9 - 16. ( in Chinese)
欧阳光察 , 薛应龙. 1988. 植物苯丙烷代谢的生理意义及调控. 植物生理学通讯 , 24 (3) : 9 - 16.
Stephanie R, Estelle L, Jean2M ichel P, Janine B, Gabriel R. 2006. Early changes in membrane permeability, p roduction of oxidative burst and
modification of PAL activity induced by ergo sterol in cotyledons ofM im osa pudica. Journal of Experimental Botany, 57 (6) : 1245 - 1252.
Sun Hong2mei, L i Tian2lai, L i Yun2fei. 2004a. Physiologicalmechanism of metabolism of carbohydrate, phenols, free am ino acid and endogenous
hormones in m iddle scales of L ilium david ii var. unicolor bulbs stored at low temperature for dormancy release. Scientia Agriultura Sinica, 37
(11) : 1777 - 1782. ( in Chinese)
孙红梅 , 李天来 , 李云飞. 2004a. 低温解除休眠过程中兰州百合鳞茎酚类物质含量及相关酶活性变化. 中国农业科学 , 37 (11) :
1777 - 1782.
Sun Hong2mei, L i Tian2lai, L i Yun2fei. 2004b. Starch metabolism and sp routing of bulb in L ilium david ii var. unicolor stored at different cold
temperatures. Acta Horticulturae Sinica, 31 (3) : 337 - 342. ( in Chinese)
孙红梅 , 李天来 , 李云飞. 2004b. 不同贮藏温度下兰州百合种球淀粉代谢与萌发关系初探. 园艺学报 , 31 (3) : 337 - 342.
Sun Hong2mei, L i Tian2lai, L i Yun2fei. 2005. Physiology mechanism of metabolism s in the m iddles scales of L ilium davidii var. unicolor bulbs
stored at low temperature for dormancy release. Scientia Agriultura Sinica, 38 (2) : 376 - 382. ( in Chinese)
孙红梅 , 李天来 , 李云飞. 2005. 低温解除休眠过程中兰州百合中部鳞片物质变化的生理机制. 中国农业科学 , 38 (2) : 376 - 382.
Sun Xu2dong, Rong Run2fen. 2006. Separation and purification of PAL from harvested tomato peel after induced by UV2C irradiation. Academ ic
Periodical of Farm Products Processing, (8) : 67 - 70, 74. ( in Chinese)
孙旭东 , 荣瑞芬. 2006. 短波紫外线诱导采后番茄苯丙氨酸解氨酶的分离纯化. 农产品加工·学刊 , (8) : 67 - 70, 74.
Tanaka Y, U ritan I. 1997. Purification and p roperties of phenylalanine ammonia2lyase in cut2injured sweet potato. Journal of B iochem istry, 81
(4) : 963 - 970.
W ajahatullah K, Balakrishnan P, Donald L S. 2003. Chitosan and chitin oligomers increase phenylalanine ammonia2lyase and tyrosine phenylala2
nine ammonia2lyase in soybean leaves. Journal of Plant Physiology, 160 (8) : 859 - 863.
W ang J ia2zheng, Fan M ing. 2002. Manual of p rotein technology. Beijing: Science Press. ( in Chinese)
汪家政 , 范　明. 2002. 蛋白质技术手册. 北京 : 科学出版社.
W ang L i, Shi L ing2ling, L iu Yu2jun. 2007. Effects of different light treatments on growth and PAL activity of the suspension2cultured cells of
Rhodiola fastig ia ta. Scientia Silvae Sinicae, 43 (6) : 52 - 56. ( in Chinese)
王　莉 , 史玲玲 , 刘玉军. 2007. 不同光质对长鞭红景天悬浮细胞生长及苯丙氨酸解氨酶活性的影响. 林业科学 , 43 (6) : 52 - 56.
W ang Yan, L iu W ei2hong, Du He2wei, Cheng Shui2yuan. 2004. Study on the general p roperties of L2phenylalanine ammonia2lyase ( PAL) from
Ginkgo biloba Leaves. Hubei Agricultural Science, (5) : 72 - 74. ( in Chinese)
王　燕 , 刘卫红 , 杜何为 , 程水源. 2004. 银杏叶苯丙氨酸解氨酶基本特性的研究. 湖北农业科学 , (5) : 72 - 74.
W u Shi2liang, Q ian Hui, Zhou Ya2jun. 2004. Experimental tutorial of biochem istry and molecular biology. Beijing: Science Press. ( in Chinese)
吴士良 , 钱　晖 , 周亚军. 2004. 生物化学与分子生物学试验教程. 北京 : 科学出版社.
Xiang L K, B radley S M. 2005. B iochem ical characterization of a p rokaryotic phenylalanine ammonia2lyase. Journal of Bacteriology, 187 (12) :
4286 - 4289.
Xu L i2ying, He Yu2p ing, W ang Gang, Zhao He2xiang, Zhao Q i2jun, Guo Tai2jun. 2007. Effect of water stress on p igment content and PAL activi2
ty of purp le leaf p lum. Journal of J ilin Agricultural University, 29 (2) : 168 - 172. ( in Chinese)
许丽颖 , 赫玉苹 , 王　刚 , 赵和祥 , 赵启军 , 郭太君. 2007. 水分胁迫对紫叶李叶片色素含量与 PAL活性的影响. 吉林农业大学学
报 , 29 (2) : 168 - 172.
0661