全 文 ：园 艺 学 报 2004，31(2)：221～223
Acta Horticulttrae Sinica
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甜樱桃砧木吉塞拉(Gisela)叶片再生体系研究
黄文江 ’ 刘庆忠 樊圣华 赵红军 马锋旺
( 山东省果树研究所，泰安271000； 西北农林科技大学园艺学院，杨凌712100)
摘 要：以甜樱桃矮化砧木 ‘Gisela 5’和 ‘Gisela 6’的组培苗为试材，研究建立叶片的离体再生体
系。结果表明，Gisela 6的再生能力高于Gisela 5；叶片正面接触培养基比背面接触培养基更有利于分化再
生。用新梢顶端1—3节新展开的叶片制备外植体，分别接种在WPM+BA 7 mg／L+IBA 0．3 mg／L和WPM
+BA 5 mg／L+IBA 0．5 mg／L的培养基上，黑暗处理15 d，Gisela 5的最高分化频率为75．1％，Gisela 6为
100％。再生芽苗在三角瓶中生根容易，移人大田后生长正常。
关键词：樱桃；砧木；矮化；离体叶片；再生体系；组织培养
中图分类号：S 663．1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X(2004)02-0221-03
Studies on System of Plant Regeneration from Leaf Explant of Cherry Rootstocks
Huang Wenjiang ，Liu Qingzhong ，Fan Shenghua ，Zhao Hongjun ，and Ma Fengwang
( Shandong Institute of Pomology，Taian 271000，China； College of Horticulture．Northwestern Science and Technology
University ofAgriculture and Forestry，Yangling 712100，China)
Abstract：An efficient and simple method for shoots regeneration from in vitro leaves of ‘Gisela 5’ and
‘Gisela 6’ (Pmn cerasus×P．canescens)was developed．Factors influencing in vitro leaf regeneration
were studied．The ability to regenerate shoot from in vitro leaves of‘Gisela 6’ was much greater than that of
‘Gisela 5’：Optimal results were obtained by culturing leaves adaxial side down on WPM medium containing
BA 5 ms／L+IBA 0．5 mg／L and BA 7 mg／L+IBA 0．3 mg／L respectively in the dark for 15 days．Shoot re-
generation rate of ‘Gisela 6’ reached up to 10o％ and that of ‘Gisela 5’ was 75．1％ ．Th e regeneration
shot WaS easy to rooting and to transplant to the field．
Key words：Cherry；Rootstock；Dwarf；In vitro leaf；Regeneration；Tissue culture
1 目的、材料与方法
樱桃的离体再生较困难，仅有个别品种能获得离体再生植株 卜引。本研究以甜樱桃矮化砧木
‘Gisela 5’和 ‘Gisela 6’为试材，研究了影响离体叶片再生的因素，建立了完整的离体叶片再生体
系。按刘庆忠等 的方法建立Gisela无菌微繁体系。取生根试管苗顶端叶片制备外植体，去掉叶柄后
沿与中脉垂直的方向横切3刀，分别按正面和背面接种在培养基上。离体再生培养基为WPM添加不
同浓度的BA和IBA，pH 5．6。培养环境的光照强度为1500 lx，光照16 h／d，温度 (25±2)oC。
2 结果与分析
2．1 不定芽的发生动态
接种后10 d，叶片明显增大，卷曲呈筒状。叶片基部叶柄切口处产生少量愈伤组织；15 d时叶片
中脉及中脉附近的切口上形成绿色的瘤状愈伤组织，其结构密实，生长缓慢；叶片的正面和背面接触
培养基的形态变化无明显差异。接种后4周左右，从愈伤组织中分化出绿色小芽 (图版，1)
， 以后
收稿日期：2003—06—30；修回日期：2003—08—12
基金项目：山东省科技厅科技攻关项目 (991010306)；山东省农业良种产业化工程项目 (2ooo一3oo9)
通讯作者 Coresponding author
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园 艺 学 报 31卷
不定芽发生频率迅速上升，平均再生不定芽数也迅速增加形成簇生芽，8周后个别处理的叶片再生率
达70％以上，平均再生不定芽数最高可达30个 (图版，2)。
2．2 激素配比对叶片再生的影响
试验结果表明，BA是Gisela叶片再生所必需的，不添加 BA的培养基上叶片不能分化不定芽。BA
与生长素 (IAA或NAA)配比显著提高了Gisela叶片的再生频率 (图1)。在最适 BA浓度时添加IBA
使Gisela 5和Gisela 6的再生频率分别从28．3％和37．1％增至75．1％和 100％。图 1也表明：IBA和
NAA对诱导Gisela离体叶片再生效果不同：低浓度 (<0．3 mg／L)时NAA的诱导活性较强，而高浓度
(>0．5 mg／L)时IBA的诱导活性强于NAA。总的看来，IBA更能促进Gisela系的离体叶片再生，IBA
可使Gisela 6的叶片再生频率高达100％，而NAA
只有 83．3％。不同基因型所需适宜的植物生长调
节剂配比有明显差异。Gisela 5在 WPM+BA 7
mg／L+IBA 0．3 mg／L的培养基上再生频率最高为
71．9％；而Gisela 6则是在 WPM+BA 5 mg／L+
IBA 0．5 mg／L的培养基上再生频率最高为 100％。
外植体平均再生不定芽数也随激素配比而变化，
再生频率低者，外植体平均再生芽数也较低。
2．3 黑暗处理对离体叶片再生的影响
离体叶片接种后置黑暗处是叶片再生的关键。
从表 1可以看出，接种后不经黑暗处理而直接在
光下培养，叶片的再生频率显著降低。Gisela 5和
Gisela 6的再生频率分别降至21．3％、50．3％，
与最高的再生频率相比，降低了近50个百分点。
黑暗处理15 d，叶片的再生频率达到最高。
2．4 叶片放置方式对叶片再生的影响
叶片的正面接触培养基，Gisela 5的离体叶片
再生频率为71．1％，Gisela 6为 100％。而叶片背
面接触培养基接种时二者的再生频率分别为
53．8％和63．1％，可见再生频率有明显差异?接
种方式对外植体分化不定芽数量的影响较小，都
有随再生频率升高而分化芽数增多的趋势。
2．5 叶龄对 Gisela再生的影响
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生长素浓度
Concenlration ofau~n(rag／L)
图1 生长素对 Gisela叶片再生频率的影响
Fig． 1 Efect of auxin on the regeneration rate
from leaves of Gisela
表1 黑暗时间处理对Gise|a叶片离体再生的影响
Table1 Efect oftinlein dark onthe regeneration of adventitious
shootfrom leaves ofGisela
表2的结果表明，外植体的叶龄极显著影响再生频率。完全展开的老叶外植体再生频率不到
30％，而新梢顶端1—3节新展开的嫩叶外植体，Gisela 5的再生率为70．3％，Gisela 6为 100％。未
展开的幼叶介于二者之间 (表2)。
表2 叶龄对叶片再生的影响
Table 2 Efect ofleafage on the regeneration from in vitro leaves ofGisela
品种 培养基
Cuhivars Media(ms／L)
未展开叶F。ld leaves
。
展
un
开
g e
叶
xpana 1．ng 1．eaves 斋u lIy展ex开Da nded．1eaves I
再生频率
Regeneration
rate(％)
Gisela 5 WPM +BA 7+IBA 0．3 30
． 1
Gisela 6 WPM +BA 5+IBA 0．5 54
． 1
Mean
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num ber o f 生频 M
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2期 黄文江等：甜樱桃砧木占塞拉 ((,isela)叶片再生体系研究 223
2．6 试管苗生根及移栽
由叶片分化得到的不定梢，在增殖培养基上培养3周，剪取苗高约大于 1 cm以上新梢接种在 1／2
MS+IBA 0．3 mg／L+NAA 0．1 mg／L的生根培养基上，先进行10 d黑暗培养，然后转移到光下培养3～4
周后，不定梢能形成良好的根系 (图版，3)，生根率达90％。Gisela 5和Gisela 6在同一生根培养基上
生根状况无明显差异。试管苗长出2～3条根后，及时开瓶炼苗并移栽到基质 (蛭石)中，4～5 d后小
植株开始长出新叶，然后露天锻炼3～10 d，再移栽于温室 (图版，4)，成活率达94．8％。
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2
图版说明：1．Gisela叶片光培养 15 d，形成绿色小芽；2 WPM添加 BA 5 mg／L+IBA 0．5 mg／L培养基上Gisela 6分化形成簇生芽；
3．再生小苗诱导不定根；4．再生植株移栽于温室：
Explanation of plates：1．In vitro leaves of Gisela exposure under light fnr 1 5(1ays．shoot formation on excised leaves：2．Leaf segment of Gisela
6 cultured on medium with BA 5 mg／L+IBA 0．5 mg／L differentiated shoot multiplication；3．Induce of roots of Gisela shoots；4 Regenerated
pIants were transplanted into the greenhouse．
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