全 文 ：第 16 卷 第 4 期
Vo l. 16 No. 4
草 地 学 报
ACT A AGREST IA SIN ICA
2008年 7 月
Jul. 2008
谷氨酰胺、脯氨酸和激素对苜蓿花药培养的影响
马菊兰1 , 张 博2*
( 1.定西市林业局, 定西市 743000; 2.新疆农业大学草业工程学院,新疆草地资源与
生态自治区重点实验室, 新疆 乌鲁木齐 830052)
摘要: 为提高苜蓿( Med icago sativa L. )花药培养效率, 以小孢子发育处于单核中期到单核靠边期的花药为材料,对
谷氨酰胺、脯氨酸和激素配比对花药培养的影响进行研究。结果表明: 培养基中附加谷氨酰胺或脯氨酸对苜蓿花药
愈伤组织诱导、增殖和分化都是有益的,其中谷氨酰胺 700 mg/ L 或脯氨酸 600 mg/ L 的效果较佳;增殖培养基中附加
2 mg / L 2, 4-D 和 0. 5mg / L 6-BA 配合使用较单独使用更有利于愈伤组织增殖和后期绿苗分化; 分化培养基中附加
0. 5 mg / L NAA 和 2 mg/ L KT 的绿苗分化率较高。
关键词: 苜蓿; 花药培养; 谷氨酰胺 ; 脯氨酸; 激素配比
中图分类号: Q813; S336; S541 文献标识码: A 文章编号: 1007-0435( 2008) 04-0364-06
Effects of Glutamine, Proline, and Exogenous Hormones
on the Anther Culture of Alfalfa
MA Ju-lan1 , ZHANG Bo 2*
( 1. For est ry Bureau of Dingx i, Dingxi 743000, Ch ina;
2. Xin jiang Key Laboratory of Gras sland Resources an d Ecology, College of Grassland Science, Xinjiang
Agricu ltural U niver sity, U rumqi, Xinjiang Vygur Auton omous Region 830052, China)
Abstract: In order to improve the anther culture ef ficiency of alfalfa, ef fects of g lutamine, proline and ex-
ogenous hormones on anther culture w ere studied. Alfalfa anther s w ere used as explants w ith pollen in the
m iddle development stage and / or in the side development stage of single nucleus. The results indicate that
culture medium supplemented w ith g lutamine or pr oline was benefit for the cal lus induct ion, pro liferat ion
and green plant lets dif ferent iat ion and concentrat ion of glutam ine at 700 mg / L or pr oline at 600 mg/ L had
better effect. Callus proliferation medium w ith 2, 4-D at 2 mg/ L and 6-BA at 0. 5 mg/ L in combination obviously
enhanced the callus grow th and green plant lets format ion than singly used. Green plant lets differentiat ion rate w as
better with addit ion of NAA at 0. 5 mg/ L and KT at 2 mg/ L to callus differentiat ion medium.
Key words: Alfalfa; Anther cultur e; Glutamine; Proline; Exogenous hormones
苜蓿(M edicago sativa L. )产量高,营养丰富,
适口性好,是各种畜禽及鱼类喜食的饲草; 同时, 它
生长年限长, 地下根瘤多, 根系发达, 也是优良的改
土培肥植物, 有/牧草之王0的美誉。培育高产和高
品质的苜蓿新品种对发展畜牧业经济, 改善生态环
境都有重要意义。苜蓿是异花授粉植物, 遗传型复
杂,用常规育种方法由于后代性状分离,不易获得性
状稳定的品系。而利用花药培养诱导单倍体植株,
获得加倍单倍体( DH )纯系, 可以缩短育种年限, 同
时提高常规育种的选择效率。本文旨在研究谷氨酰
胺、脯氨酸和激素配比对苜蓿花药培养的影响。
1 材料与方法
1. 1 材料
为消除基因型差异的影响, 取 4 个苜蓿品种
(系)的花药(小孢子发育处于单核中期到单核靠边
期 )等量混合接种。这4个品种(系)为新疆大叶苜
收稿日期: 2007-09-30; 修回日期: 2008-01- 28
基金项目: 新疆维吾尔自治区高技术研究与发展计划项目( 200511102)
作者简介: 马菊兰( 1976- ) ,女,甘肃定西人,硕士研究生,从事植物生物技术育种研究, E-mail: majulan2005@ 126. com; * 通讯作者 Au-
thor for correspondence, E-m ail : xjauzb@ 126. com
第 3期 马菊兰等: 谷氨酰胺、脯氨酸和激素对苜蓿花药培养的影响
蓿(Medicago sativa L. cv. Xinjiang Daye)、新牧 1
号(M . var ia Martyn cv. Xinmu N o. 1)、新品系
KS220-97( M. sativa L. ) 和新品系 E ( M. sativa
L. ) , 新牧 1号是杂花苜蓿,其余均为紫花苜蓿。
1. 2 方法
1. 2. 1 材料处理 晴天早晨 8 B 00- 9 B 00、无露
水时采摘带枝叶的苜蓿枝顶花序, 4 e 低温预处理 3
d。适宜小花用流水缓慢冲洗 30 m in, 在超净工作
台中,用 70%酒精浸泡 2 s, 无菌水漂洗 1次, 0. 1%
升汞溶液浸泡 4 m in,期间用镊子轻轻搅动, 滤去升
汞溶液,无菌水漂洗 5次。
1. 2. 2 培养条件 花药愈伤组织诱导培养条件为
固液双层静置漂浮培养, 25 e ,暗培养。
愈伤组织增殖和分化培养均为 25 e 、固体培
养。愈伤组织增殖培养共 21 d, 第 1- 7 d暗培养,
第 8- 15 d漫散射光培养,第 15- 21 d光照培养;绿
苗分化培养为光照培养, 光照周期 16 h/ d, 光照度
2000 lx。
1. 2. 3 试验内容
1. 2. 3. 1 谷氨酰胺和脯氨酸对苜蓿花药培养的影
响 诱导培养基: Nitsch 培养基 + 1880 mg / L
KNO 3 + 232 mg/ L KH 2PO 4 + 0. 8 mg/ L KI +
0. 025 mg / L CoCl2 # 6H 2O+ 1. 5 mg/ L VB1+ 1. 5
mg/ L VB6 + 2 mg / L 2, 4-D + 0. 5 mg/ L 6-BA +
3% Sucro se+ 3% M altose
增殖培养基: M S 培养基+ 2 mg/ L 2, 4-D+
0. 5 mg/ L 6-BA+ 1. 5% Sucrose + 1. 5% M altose
分化培养基: M S 培养基+ 0. 5 mg / L NAA +
2 mg / L KT + 1. 5% Sucrose+ 1. 5% M altose
诱导和分化培养基中分别附加谷氨酰胺 0 ( CK)、
300、700 mg/ L 或脯氨酸 0 ( CK )、300、600 mg/ L,
增殖培养基中分别附加谷氨酰胺 0 ( CK)、700 mg/
L 或脯氨酸 0 ( CK)、600 mg/ L。
1. 2. 3. 2 激素对苜蓿花药愈伤组织增殖和绿苗分
化的影响
( 1) 2, 4-D 和 6-BA 配比对愈伤组织增殖和后
期分化的影响
增殖培养基 Ñ: M S培养基+ 2 mg / L 2, 4-D +
1. 5% Sucrose+ 1. 5% M altose
增殖培养基 Ò: MS 培养基+ 2 mg / L 2, 4-D+
0. 5 mg/ L 6-BA + 1. 5% Sucrose+ 1. 5% M altose
分化培养基: M S 培养基+ 0. 5 mg / L NAA +
2 mg / L KT + 300 mg/ L Pro + 300 mg / L Gln +
1. 5% Sucro se+ 1. 5% M altose
苜蓿花药培养诱导的愈伤组织分别转移到增殖
培养基Ñ和Ò中,观察 2, 4-D 和 6-BA 对愈伤组织
增殖生长的影响。增殖的愈伤组织转移到分化培养
基中,观察愈伤组织增殖阶段激素配比对后期分化
的影响。
( 2) NAA 和 KT 不同配比对苜蓿花药愈伤组织
分化绿苗的影响
将花药培养诱导出的每个愈伤组织作为一个基
因型。每个愈伤组织在增殖培养基 Ò上培养 20 d
后,分为 0. 5 cm3、大小相同的 3 份, 转移到分化培
养基( M S 培养基+ 0. 5 mg / L N AA + 300 mg/ L
Pro+ 300 mg/ L Gln+ 1. 5% Sucr ose+ 1. 5% Malt-
o se,分别附加 1、1. 5 和 2 mg / L KT)上, 观察 NAA
和 KT 不同浓度配比对愈伤组织分化绿苗的影响。
( 3) KT 和 6-BA 对苜蓿花药愈伤组织生长和
分化的影响
苜蓿花药愈伤组织在增殖培养基 Ò上培养 20
d,转移到无激素培养基( M S+ 3% Sucrose )上培养
15 d,然后再次转移到无激素 MS 培养基上继代培
养 15 d, 之后转移到培养基( MS + 3% Sucro se, 分
别附加 0. 5 mg/ L 6-BA、1 mg / L 6-BA、0. 5 mg/ L
KT 和 1 mg/ L KT)上,观察 6-BA 和 KT 单独作用
对愈伤组织的影响。(在 MS+ 3% Sucr ose 的无激
素培养基上继代培养 2 次, 目的是耗尽愈伤组织在
前期培养中积累的外源激素, 消除外源生长素对试
验的影响)。
1. 2. 4 结果观测和统计方法 从花药接种第 25 d
开始观察统计出愈情况, 培养 60 d 结束。期间将产
生的愈伤组织长约 2 mm 时转入增殖培养基; 增殖
的愈伤组织转到分化培养基上培养 30 d,统计绿苗
分化率。
出愈率= (出愈伤组织总块数/所接花药枚数)
@ 100%
绿苗分化率= (产生绿苗丛数/转移愈伤组织总
数) @ 100%
2 结果与分析
2. 1 谷氨酰胺对苜蓿花药培养的影响
培养基中附加 300和 700 mg / L Gln的出愈率
都比对照高, 以附加 700 mg/ LGln 的出愈率最高,
为 59. 78%, 显著高于对照( 50. 66%) (表 1)。
365
草 地 学 报 第 16卷
表 1 谷氨酰胺对苜蓿花药愈伤组织诱导的影响
T able 1 Effect of g lutamine on the ca llus induction o f alfalfa ant her cultur e
谷氨酰胺浓度 ( mg/ L)
Glutamin e concent ration
接种花药数
No. of in oculated anthers
产生愈伤数
No. of calluses
愈伤组织诱导率 ( % )
Callu s induct ion rate
0 ( CK) 450 228 50. 66cC
300 450 256 56. 89bB
700 450 269 59. 78aA
注:不同大写字母表示差异极显著( P < 0. 01) ,不同小写字母表示差异显著( P < 0. 05) ,下同
Note: Mean s w ith dif ferent capital or small let ters are ext reme-sign ificant ly diff erent at the 0. 01 level or signif icant ly dif feren t at 0. 05 lev-
el , respect ively, same as below
将诱导的愈伤组织长约 2 mm时转移到分别附
加谷氨酰胺 0 ( CK)和 700 mg / L 的增殖培养基上,
观察到愈伤组织在两种增殖培养基上生长速度、颜
色和质地都有差异。在附加谷氨酰胺 700 mg/ L 的
培养基上愈伤组织的生长速度大于对照,培养 20 d
后,体积是对照的 2~ 5 倍, 同时, 愈伤组织表面湿
润,有更多的颗粒状突起, 颜色比对照更绿而鲜艳,
生长状态好于对照。可见,谷氨酰胺有利于苜蓿花
药愈伤组织生长。观察到个别基因型在附加谷氨酰
胺 700 mg/ L 的增殖培养基上分化出绿苗, 而在对
照中没有观察到绿苗分化现象, 初步认为适宜浓度
的谷氨酰胺有促进愈伤组织分化绿苗的作用。
谷氨酰胺可以提高苜蓿花药愈伤组织绿苗分化率
(图1)。将增殖的愈伤组织转移到分别附加谷氨酰胺
0 ( CK)、300和 700 mg/ L 的分化培养基中诱导绿苗
分化, 结果显示附加谷氨酰胺300和 700 mg/ L 的绿
苗分化率分别为 84. 00% 和 94. 00%, 以附谷氨
酰胺 700 mg/ L的绿苗分化率最高, 显著高于对照
( 68. 00%)。
图 1 谷氨酰胺对苜蓿花药愈伤组织分化绿苗的影响
Fig. 1 Effect of glutamine on g reen plantlet differentiation
of anther culture in alfalfa
2.2 脯氨酸对苜蓿花药培养的影响
花药愈伤组织诱导率随培养基中脯氨酸浓度的
增加而上升,以附加脯氨酸 600 mg/ L 的出愈率最高,
为60. 22%,显著高于对照( 51. 56%) (表 2)。
表 2 脯氨酸对苜蓿花药培养愈伤组织诱导的影响
Table 2 Effect of pr oline on the callus induction rate of alfalfa anther culture
脯氨酸浓度 ( mg/ L)
Proline concentration
接种花药数
No. of inoculated anthers
产生愈伤数
No. of calluses
愈伤组织诱导率(% )
Callus induction rate
0 450 232 51. 56cC
300 405 228 56. 30aA
600 450 271 60. 22bB
愈伤组织在附加脯氨酸 600 mg/ L的培养基中生
长速度大于对照,表面湿润,有很多大颗粒状突起,颜
色比对照更绿而鲜艳,生长状况好于对照。可见适宜
浓度的脯氨酸可以促进愈伤组织生长。同时,附加脯
氨酸 600 mg/ L的培养基中个别基因型分化出绿苗,
而在对照中没有观察到分化绿苗的现象,初步认为脯
氨酸有促进愈伤组织分化绿苗的作用。
分化培养基中附加脯氨酸 300和 600 mg/ L 的
绿苗分化率分别为 80. 00%和 92. 00%,以附加脯氨
酸 600 mg/ L 的绿苗分化率最高, 显著高于对照
( 64. 00%) (图 2)。图 3、图 4、图 5为苜蓿花药培养愈
伤组织诱导,增殖和分化图片。
图 2 脯氨酸对苜蓿花药愈伤组织分化的影响
Fig. 2 Effect of pro line on g reen plantlet differentiation
of anther culture
2.3 激素对苜蓿花药愈伤组织生长和分化的影响
2.3. 1 增殖培养基中 2, 4-D 和 6-BA 配比对愈伤组
织生长和后期分化的影响 苜蓿花药愈伤组织在增
366
第 3期 马菊兰等: 谷氨酰胺、脯氨酸和激素对苜蓿花药培养的影响
殖培养基Ñ中生长速度慢, 绿点少,疏松, 表面颗粒状
突起少,而在增殖培养基Ò中生长速度快,绿点率高,
质地紧实,表面大的颗粒状突起多。总体来看,培养
基Ò中的愈伤组织生长状态好于培养基 Ñ。试验认
为,植物生长素和细胞分裂素配合使用较单独使用植
物生长素更有利于愈伤组织增殖。
从表 3可见,从增殖培养基 Ñ中转出的愈伤组织
绿苗分化率为56. 00%,而从增殖培养基 Ò中转出的
愈伤组织分化率为 84. 00%, 差异显著( P< 0. 01)。
试验说明,增殖阶段的激素配比对愈伤组织后期分化
有影响,增殖培养基附加适宜浓度的生长素和细胞分
裂素配合使用较只附加生长素更有利于愈伤组织后
期分化绿苗。
2.3. 2 激素和材料基因型对苜蓿花药愈伤组织分化
绿苗的影响
分化培养基中 NAA浓度一定时,绿苗分化率主
要受 KT 浓度影响,分别接种 90块愈伤组织, KT 浓
度为 1、1. 5和 2 mg/ L 的绿苗分化率分别为64. 44%、
82. 22%和 95. 56%,可见绿苗分化率随 KT 浓度增加
而上升(图 6)。
激素配比为 0. 5 mg/ L NAA加1、1. 5和 2 mg/ L
KT 的分化培养基中都有基因型分化绿苗,分化基因
型比率分别为 60. 00%、80. 00%和 86. 67% (图 7)。
观察到不同基因型对 KT 浓度敏感性不同,要求较高
细胞分裂素的基因型在 KT 1mg/ L 的培养基中不能
分化绿苗,但可以在 1. 5 或 2 mg/ L KT 的培养基中
分化绿苗。对KT 浓度敏感的基因型在 1 mg/ L KT
的培养基中可以分化,但接种到高浓度 KT 的培养基
中,有的基因型仍然可以分化绿苗, 而有的基因型出
现褐化。认为不同的基因型对激素的敏感性和耐受
性不同。
表 3 增殖培养基的激素配比对愈伤组织后期分化绿苗的影响
Table 3 Effect of exogenous hormone combinations in callus proliferation medium on green plantlet differentiation
增殖培养基编号
Priliferation medium no.
转移愈伤组织块数
No. of cal lus t ransferred
分化绿苗丛数
No. of green plantlet
绿苗分化率 ( % )
Green plantlet dif ferent iat ion rate
Ñ 50 28 56. 00
Ò 50 42 84. 00
2. 3. 3 KT 和 6-BA 对苜蓿花药愈伤组织生长的
影响 愈伤组织在附加 2, 4-D 2 mg/ L 和 6-BA 0. 5
mg/ L 的 MS培养基上增殖很快, 转移到无激素 MS
培养基上,初期,愈伤组织仍保持增殖状态,随着培养
时间延长,增殖速度逐渐减缓直至停止增殖,之后再
次转移到无激素 MS培养基上,愈伤组织颜色和生长
状态都发生变化,颜色逐渐变暗直至褐化,生长状态
差,如果不及时转出将最终死亡。分析认为,在无激
素的 MS培养基上初次培养,愈伤组织颜色和生长状
态较好、初期保持增殖状态,是因为前一阶段在培养
基( MS+ 2 mg/ L 2, 4-D+ 0. 5 mg/ L 6-BA)上增殖时
积累有一定量的外源激素,在维持生命活动, 之后再
次转移到无激素的 MS培养基上培养,愈伤组织逐渐
趋向死亡是因为耗尽了积累的外源激素。可见, 苜蓿
花药愈伤组织的内源激素不足以维持它的生命活动。
367
草 地 学 报 第 16卷
将无激素 MS 培养基上培养的、生长状态差的
愈伤组织分别转移到 MS 附加 0. 5 mg / L 6-BA、
1 mg/ L 6-BA、0. 5 mg/ L KT 和 1 mg/ L KT 的培
养基上,观察到愈伤组织生长状况更差, 不增殖, 不
分化,褐化严重, 如果不及时转出将最终死亡。培养
15 d 后连同培养皿一起称重,和刚接种时的重量对
比,结果发现所有的培养皿重量减轻。表 4为 5个基
因型10个重复平均重量减少值。将这些生长状态很
差的愈伤组织转移到增值培养基Ò上, 可以长出新的
愈伤组织。试验说明维持苜蓿花药愈伤组织的生命
活动必须要有外源生长素存在,缺少生长素而只有外
源细胞分裂素时,愈伤组织不能维持生命活动。
3 讨论与结论
试验结果显示谷氨酰胺和脯氨酸对苜蓿花药愈
伤组织诱导、增殖和绿苗分化都有促进作用。前人在
不同植物花药培养研究中对谷氨酰胺和脯氨酸的效
应进行过研究, Olsen[ 1] 将培养基中 20 mM NH4NO3
减至 2 mM ,同时补加 5. 1 mM 谷氨酰胺, 可以提高
大麦花药培养绿苗产量。向发云等 [ 2]在籼稻花药培
养研究中发现诱导培养基中附加脯氨酸600mg / L
表 4 KT和 6-BA 对苜蓿花药愈伤组织生长的影响
Table 4 Effects o f 6-BA and KT on the anther callus gr ow th of alfa lfa
材料基因型
M aterial genoty pe
KT 浓度 ( mg/ L)
KT concent rat ion
减少的重量值( g/皿)
Decreased w eight
6-BA 浓度 ( mg/ L)
6-BA concent rat ion
减少的重量值 ( g/皿)
Decreas ed w eight
1
2
3
4
5
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 0981
0. 0968
0. 0989
0. 0539
0. 0596
0. 0707
0. 0476
0. 0689
0. 0794
0. 0776
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 5
1. 0
0. 0947
0. 0873
0. 0689
0. 0735
0. 0304
0. 0683
0. 1014
0. 0303
0. 0536
0. 0640
可显著提高花药的出愈率。陈英等[ 3]在粳稻花药培
养研究中观察到/ 诱导培养基中补加脯氨酸 100
mg/ L 对提高诱导率有显著效果0。分析认为谷氨
酰胺和脯氨酸促进植物花药培养效率的原因: ( 1)谷
氨酰胺和脯氨酸是蛋白质合成的原料, 培养基中附
加谷氨酰胺和脯氨酸改善了细胞的营养条件。( 2)
脯氨酸是目前所知分布最广和最重要的渗透保护物
质,在干旱、高盐碱、高温、冰冻、紫外线以及重金属
等逆境胁迫条件下, 植物通过提高体内脯氨酸含量
来调节渗透平衡, 从而保护细胞的结构,很多实验证
明脯氨酸的累积与植物对环境胁迫的耐受能力正相
关[ 4, 5]。同时,脯氨酸对小孢子的发育具有重要的
调节功能,含有丰富的脯氨酸是花粉正常发育所必
需的 [ 6] , 雄性不育系花器官中游离脯氨酸含量普遍
低于保持系,认为脯氨酸含量的不足是造成小孢子
败育的原因之一 [ 7]。高等植物中, 脯氨酸通过两种
途径合成, 分别为谷氨酸途径和精氨酸/鸟氨酸途
径,谷氨酰胺是谷氨酸途径合成脯氨酸的底物 [ 8]。
花药离体培养改变了小孢子的正常发育环境, 对小
孢子来说是逆境胁迫, 培养基中附加谷氨酰胺和脯
氨酸提高了小孢子的抗逆能力, 有利于小孢子的存
活和启动雄核发育, 从而提高花药愈伤组织诱导率。
368
第 3期 马菊兰等: 谷氨酰胺、脯氨酸和激素对苜蓿花药培养的影响
( 3) 以谷氨酰胺的形式为细胞提供 N 素营养比
NH +4 和 NO-3 形式更有利, 因为 NH +4 和 NO-3 代
谢产生氨,而高浓度游离氨对植物有毒害作用, 谷氨
酰胺是植物体内贮存和运输氮素、解除氨毒害的最
主要途径之一 [ 9] , 以谷氨酰胺的形式为细胞提供 N
营养是安全和高效的形式。
试验认为,苜蓿花药愈伤组织诱导、增殖和绿苗
分化过程中, 材料基因型、植物生长调节物质对愈伤
组织的诱导和分化都具有重要影响。表现在: ( 1)植
物生长素和细胞分裂素配合使用较单独使用更有利
于愈伤组织增殖; ( 2)增殖阶段的激素配比对愈伤组
织后期分化有影响, 增殖培养基附加适宜浓度的生
长素和细胞分裂素配合使用较只附加生长素更有利
于愈伤组织后期分化绿苗; ( 3)激素配比和材料基因
型是影响苜蓿花药愈伤组织分化绿苗的重要因素。
不同激素配比的分化培养基中愈伤组织的绿苗分化
率不同;同时,不同基因型的愈伤组织, 在相同成分
的分化培养基上,绿苗分化率不同。不同基因型的
材料对激素的敏感性和耐受性不同; ( 4)苜蓿花药愈
伤组织的内源激素不足以维持它的生命活动。维持
苜蓿花药愈伤组织的生命活动必须要有外源生长素
存在,缺少生长素而只有外源细胞分裂素时,愈伤组
织不能维持生命活动。前人研究认为施用生长调节
物质可以影响和改变内源激素水平; 在离体培养过
程中,植物外植体的内源激素水平不断变化,生长素
类等物质存在着极性运输现象, 导致了其体内分布
特异性的改变,这一变化与器官发生和愈伤组织形
成密切相关; 生长素和细胞分裂素之间也存在着相
互影响机制[ 10, 11]。2, 4-D对于愈伤组织的诱导和
生长非常有效,是组织培养中常用的植物生长调节
剂。试验发现适宜浓度的 2, 4-D和6-BA 配合使用
较单独使用 2, 4-D 更有利于苜蓿花药愈伤组织生
长,这与丁路明等[ 12] , 鲍芫等[ 13] 在早熟禾愈伤组织
诱导研究的结论一致。同时, 试验结果显示增殖培
养基中附加 2, 4-D和 6-BA 比仅附加 2, 4-D 更有
利于愈伤组织后期分化绿苗, 认为愈伤组织绿苗分
化率不仅取决于分化培养基激素配比, 而且还受愈
伤组织诱导培养基激素配比的影响,与前人对马蹄
金再生[ 14]研究的结论一致。
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(责任编辑 梁艳萍)
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