全 文 ：植物科学学报　 ２０１４ꎬ ３２(４): ３７１~３８２
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
　 　 ＤＯＩ: １０􀆰 ３７２４ / ＳＰ􀆰 Ｊ􀆰 １１４２􀆰 ２０１４􀆰 ４０３７１
抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的
克隆、 表达分析及功能鉴定
曹 婧１∗ꎬ 徐栋生１∗ꎬ 黄代红１ꎬ 袁军文１ꎬ２ꎬ 赵 娟１ꎬ 王文艳１ꎬ 兰海燕１∗∗
(１. 新疆大学生命科学与技术学院ꎬ 新疆生物资源基因工程重点实验室ꎬ 乌鲁木齐 ８３００４６ꎻ
２. 新疆生产建设兵团种子管理总站ꎬ 乌鲁木齐 ８３００１１)
摘　 要: 抱茎独行菜(Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ Ｌ.)为十字花科具典型粘液质繁殖体植物ꎬ 而 ＴＴＧ１ 基因(Ｔｒａｎｓｐａ￣
ｒｅｎｔ ｔｅｓｔａ ｇｌａｂｒａ １)所编码的蛋白是调控种皮细胞分化并影响粘液质释放的转录因子ꎮ 目前关于 ＴＴＧ１ 基因在粘
液质繁殖体植物中的研究报道较少ꎬ 为探究 ＴＴＧ１ 基因在抱茎独行菜粘液质发育中的作用ꎬ 本研究利用同源克
隆技术获得抱茎独行菜 ＴＴＧ１ 基因 ｃＤＮＡ 开放阅读框(ＯＲＦ)序列ꎬ 命名为 ＬｐＴＴＧ１ꎮ 序列分析表明ꎬ 该基因
ＯＲＦ全长为 １０３２ ｂｐꎬ 编码 ３４３个氨基酸ꎬ 含有 ＷＤ４０基序ꎻ ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析结果显示ꎬ 该基因在抱茎独行菜各
组织中均有表达ꎬ 反映了该基因功能的多样性ꎻ 免疫组织化学定位结果表明ꎬ ＬｐＴＴＧ１在种子发育过程中内珠被
和外珠被的表达水平变化与外珠被粘液质的合成过程相一致ꎬ 推测该基因可能参与调控抱茎独行菜种皮的发育
及粘液质的形成ꎮ 将 ＬｐＴＴＧ１ 基因转化拟南芥ꎬ 该基因的过量表达显著促进了粘液质合成途径下游基因 Ａｔ￣
ＭＵＭ４在角果中的表达ꎬ 表明该基因有可能参与粘液质合成途径调控ꎬ 并促进下游产物 ＭＵＭ４ 的产生ꎮ 然而ꎬ
对 ＬｐＴＴＧ１转基因拟南芥与野生型植株表型的比较发现ꎬ 两者种子形态及粘液质分泌与释放方式均无显著差异ꎬ
这可能是因为抱茎独行菜种皮发育和粘液质形成是一个多基因调控的复杂过程ꎬ 某一基因的过量表达也许不会
引起明显的表型变化ꎮ
关键词: 抱茎独行菜ꎻ 粘液质合成ꎻ 免疫组化ꎻ ＴＴＧ１基因ꎻ ｑＲＴ￣ＰＣＲ
中图分类号: Ｑ７８　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１４)０４￣０３７１￣１２
　 　 　 收稿日期: ２０１４￣０２￣１２ꎬ 退修日期: ２０１４￣０３￣１９ꎮ
　 基金项目: 国家自然科学基金(３０８６００２０)ꎻ 中国教育部留学回国学者基金项目(２００６￣２００８)ꎮ
　 作者简介: 曹婧(１９９０－)ꎬ 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 研究方向为植物抗逆分子生物学(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｊｉｎｇｙｕ９０２１７＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎻ 徐栋生(１９８８－)ꎬ
男ꎬ 博士研究生ꎬ 研究方向为植物抗逆分子生物学(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｘｕｄｏｎｇｓｈｅｎｇ１１２２＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
　 ∗为共同第一作者ꎮ
　 ∗∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ􀆰 Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌａｎｈａｉｙａｎ＠ｘｊｕ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ)ꎮ
Ｃｌｏｎｉｎｇꎬ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｃｏａｔ
Ｍｕｃｉｌａｇｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅ ＴＴＧ１ ｆｒｏｍ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ
ＣＡＯ Ｊｉｎｇ１∗ꎬ ＸＵ Ｄｏｎｇ￣Ｓｈｅｎｇ１∗ꎬ ＨＵＡＮＧ Ｄａｉ￣Ｈｏｎｇ１ꎬ ＹＵＡＮ Ｊｕｎ￣Ｗｅｎ１ꎬ２ꎬ
ＺＨＡＯ Ｊｕａｎ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｗｅｎ￣Ｙａｎ１ꎬ ＬＡＮ Ｈａｉ￣Ｙａｎ１∗∗
(１. Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ
Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００４６ꎻ ２. Ｓｅｅｄ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｃｏｒｐｓꎬ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍꎬ ａｎ ａｎｎｕａｌ ｈｅｒｂ ｐｌａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅꎬ ｈａｓ ａ ｔｙｐｉｃａｌ
ｍｙｘｏｓｐｅｒｍｙ. Ｔｈｅ ＴＴＧ１ (Ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ ｔｅｓｔａ ｇｌａｂｒａ １) ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒꎬ ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｔｏ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｃｉｌａｇｅ
ｒｅｌｅａｓｅ. Ｔｉｌｌ ｎｏｗꎬ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ＴＴＧ１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｙｘｏｓｐｅｒｍｙ ｐｌａｎｔｓ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｒａｒｅｌｙ ｒｅｐｏｒｔｅｄ.
Ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ＴＴＧ１ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎꎬ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ＬｐＴＴＧ１ ｆｒｏｍ Ｌ. ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ
ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ. Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ＯＲＦ ｏｆ ｔｈｅ ＴＴＧ１ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｌ. ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ
ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｃｌｏｎｉｎｇꎬ ａｎｄ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｂｅ １０３２ ｂｐ ｌｏｎｇꎬ ｅｎｃｏｄｅｄ ３４３ ｐｕｔａｔｉｖｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ
ａｎｄ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆｓꎬ ｎａｍｅｄ ａｓ ＬｐＴＴＧ１. Ｔｈｅ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＬｐＴＴＧ１
ｗａｓ ｗｉｄｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｌ. ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍꎬ ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｒｅｆｌｅｃｔ ｄｉｖｅｒｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
ｏｆ ＬｐＴＴＧ１. Ｍｏｒｅｏｖｅｒꎬ ｉｍｍｕｎｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬｐＴＴＧ１
ｃｈａｎｇｅｄ ｉｎ ｉｎｎｅｒ ａｎｄ ｏｕｔｅｒ ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｉｎ
ｏｕｔｅｒ ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔ ｃｅｌｌ ｌａｙｅｒｓꎬ ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ＬｐＴＴＧ１ ｍａｉｎｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ
ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｔｈｅｎ ａｐｐｌｉｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ＬｐＴＴＧ１ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＭＵＭ４ ( ｗｈｉｃｈ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ) ｉｎ ｓｉｌｉｑｕｅꎬ ｗｈｉｃｈ ｍｅａｎｓ ＬｐＴＴＧ１
ａｔｔｅｎｄｓ ｔｏ ｔｈｅ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｒａｔｅｓ ｍｏｒｅ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｄｕｃｔ￣ＭＵＭ４ ｉｎ
ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ. Ｉｎ ｏｕｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬ ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｓｅｅｄ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｐａｔｔｅｒｎꎬ ｏｒ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＬｐＴＴＧ１
ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｌｉｎｅ ａｎｄ ＷＴꎬ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ. Ｏｎｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｘｐｌａｎａｔｉｏｎ ｍａｙ ｂｅ ｔｈａｔ
ｍｕｃｉｌａｇｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｓ ａ ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓꎬ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ
ｍａｎｙ ｇｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｄｕｎｄａｎｃｙꎬ ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｏｆ
ｔｈｅｍ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｍａｙ ｎｏｔ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｃｈａｎｇｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍꎻ Ｍｕｃｉｌａｇｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓꎻ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎꎻ ＴＴＧ１ ｇｅｎｅꎻ
ｑＲＴ￣ＰＣＲ
　 　 种皮粘液质是由外种皮细胞的高尔基体产生并
分泌到胞腔或胞壁层的果胶类多糖物质[１ꎬ２]ꎬ 干燥
种子遇水后粘液质立刻释放ꎬ 形成透明胶质包被整
个种子ꎬ 此类种子即为粘液质繁殖体[３]ꎮ 抱茎独
行菜(Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ Ｌ.)为十字花科(Ｃｒｕ￣
ｃｉｆｅｒａｅ)独行菜属(Ｌｅｐｉｄｉｕｍ)一年或二年生草本植
物ꎬ 其种子为典型粘液质繁殖体ꎬ 广泛分布于新疆
干旱荒漠区的各种生境ꎮ 粘液质的存在对粘液繁殖
体种子的储存、 扩散、 萌发、 防御及幼苗生长等均
具有重要生物学意义[４－７]ꎬ 是粘液质繁殖体植物适
应荒漠环境的有效对策之一ꎮ ＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴ
ＴＥＳＴＡ ＧＬＡＢＲＡ１ (ＴＴＧ１) 基因编码一个经典的转
录因子 ＷＤ４０￣ｒｅｐｅａｔ 蛋白ꎬ 此蛋白家族在许多植
物的主要器官均有表达ꎬ 在信号转导、 细胞周期调
控、 ＲＮＡ剪接、 囊泡运输和转录等方面行使重要
功能[８]ꎮ 在拟南芥粘液质合成和释放过程中ꎬ
ＴＴＧ１基因是位于种皮分化及粘液质产生调控途径
上游的调控因子[８]ꎮ 对拟南芥 ＴＴＧ１基因的相关研
究显示ꎬ 该基因在拟南芥主要器官中均有表达ꎻ 在
种子种皮形成的初始阶段不发挥作用ꎬ 但在粘液质
分泌细胞形成过程中表达ꎬ 对维持细胞分化、 外种
皮细胞质小柱的形成以及种子吸水后粘液质的释放
等过程具有重要作用[９]ꎮ 然而ꎬ 目前对于其它粘
液繁殖体中的 ＴＴＧ１基因还鲜见报道ꎬ 克隆抱茎独
行菜 ＴＴＧ１基因并分析其在不同组织及角果不同发
育阶段的表达情况ꎬ 可为研究种子粘液质形成的分
子机制提供理论依据ꎮ
拟南芥(Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ)是十字花科具
粘液繁殖体的代表种及模式植物ꎬ 前人通过分子生
物学、 结构化学及形态观察等方法ꎬ 对其种皮及粘
液分泌细胞的结构、 粘液质的产生及分泌、 粘液质
的组成等方面进行了较为深入和系统的研究ꎬ 已取
得较大进展[１０－１７]ꎮ 拟南芥种皮粘液质的形成是种
皮外层细胞协调分化过程的一部分[４ꎬ１８]ꎬ 目前已从
拟南芥中分离到一些粘液质突变体(简称 ｍｕｍ)ꎬ
如 ｍｕｍ１、 ｍｕｍ２[１４]、 ｍｕｍ３[１０ꎬ１４]、 ｍｕｍ４[１０ꎬ１９]、
ｍｕｍ５[１０ꎬ１５]、 ａｐ２[２０]、 ｔｔｇ１[９ꎬ２１]、 ｔｔｇ２[２２]、 ｇｌ２[２３]、
ｍｙｂ６１[９]、 ｔｔ８[２４]、 ｅｇｌ３[２５]等ꎬ 这些材料为深入研
究种皮细胞分化、 粘液质生物合成及分泌的分子机
制奠定了基础ꎮ 一些经典的转录因子参与了外种皮
的发育ꎬ 其突变体种子在水合状态下不能释放粘液
质ꎬ 如 ＡＰＥＴＡＬＡ２ (ＡＰ２)基因功能缺失的拟南芥
不能形成细胞质小柱(拟南芥表皮细胞中的一个结
构)ꎬ 且不能合成粘液质[２０]ꎻ ＧＬＡＢＲＡ２ (ＧＬ２)是
表皮细胞质小柱形成及吸涨后粘液质释放必不可少
的基因[２１]ꎮ 而 ＴＴＧ１ 基因在拟南芥表皮细胞分化
２７３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
过程中具有重要作用[２６]ꎬ 它能够调控表皮毛和根
毛的形态发生、 花青素的生物合成及种皮发育过程
中粘液质的积累[２７－２９]ꎻ 该基因突变体形成的细胞
质小柱异常且粘液质遇水不能释放[９]ꎮ 据报道ꎬ
ＴＴＧ１ 基因是粘液质合成信号途径上游的调控因
子[８]ꎬ 并与其它基因相互作用ꎬ 调控下游相关基
因 ＴＴＧ２、 ＭＵＭ２、 ＭＵＭ４等的表达[１１ꎬ２２]ꎮ 我们前
期的研究结果显示ꎬ 抱茎独行菜外种皮细胞发育及
种皮粘液质形成的细胞生物学过程与同科植物拟南
芥具有明显差异ꎮ 通过观察发现ꎬ 抱茎独行菜外种
皮发育及粘液质形成和释放与拟南芥[２ꎬ６]所经历的
细胞质重排、 火山状细胞质小柱形成、 围绕火山产
生粘液质“口袋”等一系列过程不同的是ꎬ 抱茎独
行菜种子外种皮不发生细胞质重排ꎬ 其种皮扫描结
构也不是火山状ꎮ 抱茎独行菜外种皮(外珠被)最
外层细胞在发育成熟过程中不断增大ꎬ 且其内切向
壁和纵向壁均增厚ꎬ 而外切向壁保持初生壁(便于
粘液质释放)ꎻ 外种皮最外层及其紧邻内层细胞在
成熟发育过程中合成大量造粉体(通过形态和碘染
观察)ꎬ 当造粉体逐渐消失ꎬ 最外层就成为一层死
细胞ꎬ 其中充满了吸水后可以释放的粘液质(此粘
液质具有一定的结构ꎻ 未发表数据)ꎮ 粘液质的合
成与释放是一个复杂的过程ꎬ 涉及许多调控因子和
相关功能基因[３０]ꎮ ＴＴＧ１ 基因位于粘液质合成途
径上游ꎬ 尽管在拟南芥中已明确该基因的主要功
能ꎬ 但其在抱茎独行菜粘液质形成和分泌过程中的
作用尚不清楚ꎮ
为探究 ＴＴＧ１基因在抱茎独行菜粘液质繁殖体
中的相关功能ꎬ 本实验利用同源克隆方法获得了抱
茎独行菜 ＴＴＧ１基因 ＯＲＦ序列(简称为 ＬｐＴＴＧ１)ꎬ
并将其克隆到原核表达载体 ｐＥＴ３０ａ(＋)中ꎬ 获得
重组质粒 ｐＥＴ３０ａ￣ＬｐＭＵＭ４ 并转化至大肠杆菌
ＢＬ２１ꎬ 重组蛋白 ＬｐＴＴＧ１ 经诱导表达及纯化后免
疫新西兰兔制备了多克隆抗体ꎬ 随后对抱茎独行菜
种皮发育过程进行免疫组织化学定位研究ꎮ 同时ꎬ
通过荧光定量 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 检测 ＬｐＴＴＧ１ 基因在抱茎
独行菜不同组织及不同发育阶段角果中的表达模
式ꎬ 以及转基因拟南芥株系中 ＬｐＴＴＧ１过表达对粘
液质调控途径下游基因 ＭＵＭ４ 的影响ꎬ 最后观察
比较过表达 ＬｐＴＴＧ１拟南芥株系和野生型拟南芥的
种子形态及粘液质释放的方式ꎬ 并推测与分析
ＬｐＴＴＧ１基因在抱茎独行菜种皮粘液质形成过程中
的作用ꎬ 以期为种子粘液质形成的分子机制提供理
论依据ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 实验材料及处理
抱茎独行菜(Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ)成熟种子
于 ２００５年 ６ 月采自新疆古尔班通古特沙漠南缘ꎬ
干燥后冷藏(４℃)备用ꎮ 于当年选择地表温度相对
较低的深秋季节(１０ 月下旬)ꎬ 将抱茎独行菜种子
露地播种到新疆大学生命科学与技术学院院内试验
地中ꎮ 当花苞微张且最长的雄蕊高过柱头时ꎬ 用不
同颜色标记角果基部并记录授粉时间(ｄａｙ ａｆｔｅｒ
ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎꎬ 以下简称为 ＤＡＰ)ꎮ 收集 ０ ~１８ ＤＡＰ
不同发育阶段的角果进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ检测ꎮ
野生型拟南芥为 Ｃｏｌｕｍｂｉａ 生态型ꎬ ｔｔｇ１ 突变
体(编号为 ＣＳ８９)购自哥伦比亚俄亥俄州立大学拟
南芥生物资源中心(ＡＢＲＣ)ꎮ 种子经表面灭菌后播
于 ＭＳ 培养基ꎬ 约 １０ ｄ 左右能明显观察到两片真
叶出现时ꎬ 将幼苗移入花盆(蛭石 ∶ 珍珠岩 ＝ １ ∶
３)ꎬ 于 ２２℃、 １６ ｈ光照 / ８ ｈ黑暗条件下培养ꎮ
１􀆰 ２　 总 ＲＮＡ提取及 ｃＤＮＡ制备
用 ＲＮＡｐｒｅｐ Ｐｕｒｅ Ｐｌａｎｔ Ｋｉｔ (Ｂｉｏｔｅｋｅ)试剂盒
提取抱茎独行菜新鲜叶片(１００ ｍｇ)的总 ＲＮＡꎮ 按
照 ＴＡＫＡＲＡ 反转录酶 Ｍ￣ＭＬＶ 说明书步骤ꎬ 在
２０ μＬ体系中ꎬ 加入 ８００ ｎｇ总 ＲＮＡꎬ 以 ｏｌｉｇｏ(ｄＴ)
１５为引物ꎬ 于 ４２℃ 孵育 １ ｈ合成 ｃＤＮＡꎮ
１􀆰 ３　 基因克隆及生物信息学分析
根据ＧｅｎＢａｎｋ发表的拟南芥与油菜 ＴＴＧ１基因
ｃＤＮＡ全长序列 (ＮＭ１８０７３９􀆰 ２与 ＥＦ１７５９３２. １)设计
同源引物(上游引物: ５′￣ＧＣＧＧＴＡＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＡ￣
ＡＴＴＣＡＧＣＴＣ￣３′和下游引物: ５′￣ＧＣＧＴＣＧＡＣＣＴ￣
ＣＡＡＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＧＣＴＧＣ￣３′)ꎬ 克隆抱茎独行
菜 ＬｐＴＴＧ１ 基因开放阅读框序列 (ＯＲＦ)ꎬ 且在
上、 下游引物中分别引入 ＫｐｎⅠ和 ＳａｌⅠ酶切位点
(下划线部分)ꎬ 还在上游引物酶切位点后面引入
起始密码子附近的 ＫＯＺＡＫ 序列(ＡＣＣＡ)ꎬ 以增强
外源基因 ＴＴＧ１ 在转基因植株中的表达ꎮ 运用
ｍｕｌｔｉ￣ａｌｉｇｎｍｅｎｔ和 ＢＬＡＳＴ 程序分析不同 ＴＴＧ１ 基
３７３　 第 ４期　 　 　 　 　 　 曹 婧等: 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的克隆、 表达分析及功能鉴定
因的序列同源性以及氨基酸序列ꎬ 并使用在线服务
器程 序 Ｐｒｏｔｓｃａｌｅ ( ｈｔｔｐ: / / ａｕ􀆰 ｅｘｐａｓｙ􀆰 ｏｒｇ / ｃｇｉ￣
ｂｉｎ / ｐｒｏｔｓｃａｌｅ􀆰 ｐｌ)计算 ＬｐＴＴＧ１ 蛋白推测分子量ꎻ
采用软件 ＳＭＡＲＴ ４􀆰 ０ (ｈｔｔｐ: / / ｓｍａｒｔ􀆰 ｅｍｂｌ￣ｈｅｉｄｅｌ￣
ｂｅｒｇ􀆰 ｄｅ / ) 和 ＭｏｔｉｆＳｃａｎ ( ｈｔｔｐ: / / ｍｙｈｉｔｓ􀆰 ｉｓｂ￣ｓｉｂ.
ｃｈ / ｃｇｉ￣ｂｉｎ / ｍｏｔｉｆ＿ｓｃａｎ)分别分析 ＬｐＴＴＧ１ 蛋白功
能结构域及基序ꎮ
１􀆰 ４　 原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备
将 ＬｐＴＴＧ１ 基因编码区插入原核表达载体
ｐＥＴ３０ａ的多克隆位点ꎬ 构建重组质粒 ｐＥＴ３０ａ￣
ＬｐＴＴＧ１ꎬ 诱导表达带 Ｈｉｓ 标签的融合蛋白以备后
续纯化ꎮ ｐＥＴ３０ａ￣ＬｐＴＴＧ１ 含诱导型 Ｔ７ 启动子及
终止子ꎬ 并以卡那霉素抗性基因作为选择标记ꎮ 重
组蛋白 ＬｐＴＴＧ１ 经诱导表达和纯化后免疫新西兰
兔ꎬ 用弗氏不完全佐剂增强免疫反应ꎬ 每次免疫加
强间隔 １周ꎬ 共免疫 ３次ꎮ 通过 ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔ检测抗体的效价和特异性ꎮ
１􀆰 ５　 转基因植株的获得和检测
将 ＬｐＴＴＧ１基因 ＯＲＦ 序列插入植物表达载体
ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 的多克隆位点ꎬ 获得重组载体
ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１￣ＬｐＴＴＧ１ꎮ 采用冻融法将重组质粒
ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１￣ＬｐＴＴＧ１ 转入农杆菌 ＥＨＡ１０５ꎬ 利
用花序浸染法转化拟南芥野生型植株[３１]ꎮ 收集拟
南芥 Ｔ０代种子ꎬ 播种到含 ３０ ｍｇ / Ｌ 潮霉素与
３００ ｍｇ / Ｌ链霉素的 ＭＳ 培养基上ꎬ 培养 ８ ~ １０ ｄ
后ꎬ 将阳性苗移至无抗生素的 ＭＳ培养基上ꎬ 恢复
培养 １周后再移栽至花盆中(蛭石 ∶ 珍珠岩 ＝ １ ∶
３)ꎮ 分别提取野生型拟南芥及其抗性植株莲座叶
的基因组 ＤＮＡ和总 ＲＮＡꎬ 利用 ＬｐＴＴＧ１特异性(非
ＡｔＴＴＧ１)引物(上游引物: ５′￣ＣＴＣＣＴＣＣＡＣＴＣＧＴＴＣ￣
ＣＧＧＣＣＡＡＡＧＧ￣３′ꎬ 下游引物: ５′￣ＣＣＡＧＧＣＡＡＴ￣
ＧＴＣＧＴＧＡＡＣＣＴＣＣＴＴＡ￣３′) 进行 ＰＣＲ、 ＲＴ￣ＰＣＲ
扩增ꎮ ＰＣＲ 扩增体系为 ２０ μＬꎬ 反应条件: ９４℃
预变性 ５ ｍｉｎꎻ ９４℃ 变性 ５０ ｓꎬ ５５℃ 退火 ５０ ｓꎬ
７２℃ 延伸 ４５ ｓꎬ ３０个循环ꎻ ７２℃ 延伸 ５ ｍｉｎꎮ
１􀆰 ６　 目的基因的表达分析
１􀆰 ６􀆰 １　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析 ＬｐＴＴＧ１ 基因在抱茎独行
菜不同组织和不同发育阶段角果中的表达模式
分别提取抱茎独行菜根、 茎、 叶、 角果等不同
组织及不同发育阶段角果 ( １、 ５、 ８、 １１、 １５
ＤＡＰ)的总 ＲＮＡꎬ 并利用 ＧｅｎｅＡｍｐ ５７００ 实时
ＰＣＲ系统及 ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)进行定量
ＰＣＲ 分析ꎮ ＰＣＲ 扩增程序: ９５℃预变性 ２ ｍｉｎꎻ
９５℃变性 ３０ ｓꎬ ６２℃退火 ３０ ｓꎬ ７２℃延伸 ３０ ｓꎬ ４０
个循环ꎮ 以抱茎独行菜的 β ￣ａｃｔｉｎ基因为内参(上游
引物: ５′￣ＣＣＡＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＴ￣３′ꎬ
下游引物: ５′￣ＴＧＡＧＡＣＡＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＡＡＴ￣
３′)ꎮ
１􀆰 ６􀆰 ２　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析 ＡｔＭＵＭ４ 基因在转基因拟
南芥不同组织中的表达模式
分别提取野生型和过表达 ＬｐＴＴＧ１ 拟南芥根、
茎、 叶、 角果等不同组织的总 ＲＮＡꎬ 并利用特异引物
(上游引物: ５′￣ ＧＴＧＡＧＧＧＡＣＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＧＣＴ￣３′ꎬ
下游引物: ５′￣ ＡＧＡＣＡＣＴＧＴＡＣＴＴＣＣＴＣＴＣＴＧＧＴＧ￣３′)
对 ＡｔＭＵＭ４进行扩增ꎬ ＰＣＲ 扩增程序: ９５℃预变
性 ２ ｍｉｎꎻ ９５℃变性 ３０ ｓꎬ ６０℃退火 ３０ ｓꎬ ７２℃延
伸 ３０ ｓꎬ 共 ４０ 个循环ꎮ 以拟南芥的 β ￣ａｃｔｉｎ 基因
作为内参ꎮ
１􀆰 ６􀆰 ３　 ＬｐＴＴＧ１ 在抱茎独行菜种子发育过程中的
免疫组织化学定位
用 ４％多聚甲醛固定液固定 ０ ~ ２０ ＤＡＰ 的角
果ꎬ 于 ４℃静置 ２４ ｈ 后制作石蜡切片ꎮ 利用超薄
切片机 Ｌｉｃａ ＲＭ２１２６将其切成厚度 ５~１０ μｍ 的切
片ꎬ 展平至载玻片上ꎮ 与抗体孵育之前ꎬ 用 １％牛
血清白蛋白(ＢＳＡ)配置的 １０％山羊血清缓冲液
(ｐＨ ７􀆰 ４)于 ３７℃孵育载玻片 １５ ｍｉｎꎮ 将一抗(抗
β￣１ꎬ３￣Ｄ￣ｇｌｕｃａｎ抗体)按 １ ∶ １００ 稀释后ꎬ 在每张
切片组织上滴加 １００ μＬꎬ ３７℃孵育 １ ｈꎻ 然后用加
入 Ｔｗｅｅｎ￣２０的磷酸盐缓冲液(ＰＢＳＴꎬ ｐＨ ７􀆰 ４)洗
脱ꎬ 再将按 １ ∶ ５００稀释辣根过氧化物酶(ＨＲＰ)标
记的山羊抗兔二抗ꎬ 滴加到每张切片组织上
(１００ μＬ)ꎬ ３７℃孵育 １ ｈꎻ 最后按照二氨基联苯胺
(ＤＡＢ)染色试剂盒说明书对切片组织进行染色ꎬ
并置于光学显微镜 Ｍｏｔｉｃ Ｂ５ ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ ｓｅｒｉｅｓ
(Ｂｏｃｋ Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ.ꎬ Ｃａｎａｄａ)下观察、 拍照ꎮ
１􀆰 ７　 目的基因的功能分析
利用体式显微镜(Ｎｉｋｏｎ ＳＭＺ ８００ꎬ Ｊａｐａｎ)观
察拟南芥野生型、 ｔｔｇ１突变体及 ＬｐＴＴＧ１过表达株
系种子形态ꎬ 并通过钌红(针对多聚糖的染料)染
色观察种子种皮粘液质的释放过程及着色程度ꎮ
４７３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
１􀆰 ８　 数据分析
本实验所有数据均采用 ３ 次重复并取其平均
值ꎬ 使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４􀆰 ０２(Ｇｒａｐｈ￣
Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅꎬ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏꎬ ＣＡ)软件对数据进行分
析ꎻ 对独立样本数据采用未配对 ｔ检验和单因素方
差分析ꎬ 若差异显著则在 Ｐ ＝ ０􀆰 ０５水平上进行多
重比较 Ｔｕｋｅｙ检验ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 ＬｐＴＴＧ１的 ｃＤＮＡ克隆
通过同源克隆获得抱茎独行菜 ＬｐＴＴＧ１ 基因
ｃＤＮＡ的开放阅读框序列(ＯＲＦ)ꎬ ＢＬＡＳＴ 分析显
示该基因 ＯＲＦ 全长为 １０３２ ｂｐꎬ 编码 ３４３ 个氨基
酸ꎬ 分子量为 ３８􀆰 １１ ｋＤꎬ 等电点为 ４􀆰 ７１ꎮ 多序列
比对结果表明ꎬ 抱茎独行菜 ＬｐＴＴＧ１ 基因与 Ｇｅｎ￣
Ｂａｎｋ公布的拟南芥 ＡｔＴＴＧ１ 以及油菜 (Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｎａｐｕｓ) ＢｎＴＴＧ１ 核酸序列分别具有 ８８􀆰 ９５％与
７９􀆰 ５５％的同源性ꎬ 氨基酸序列分别有 ９６􀆰 ７９％与
９１􀆰 ５５％的同源性ꎮ 抱茎独行菜、 拟南芥[２８]、 油
菜[３２]ＴＴＧ１ 氨基酸序列之间 ｂｌａｓｔ 结果如图 １ 所
示ꎬ 其中方框内的序列是 ＷＤ４０ 蛋白家族的必要
基序(表 １)ꎬ 这说明从抱茎独行菜中克隆得到了
ＴＴＧ１基因ꎮ
２􀆰 ２　 抱茎独行菜 ＬｐＴＴＧ１基因的表达分析
２􀆰 ２􀆰 １　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析
为了解 ＬｐＴＴＧ１基因在抱茎独行菜不同组织中
的表达水平ꎬ 分别提取抱茎独行菜根、 薹、 莲座
叶、 抱茎叶及角果的总 ＲＮＡ 进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 表达
检测ꎬ 结果显示ꎬ 抱茎独行菜 ＴＴＧ１基因在不同组
织中均有表达(相对表达量为 １􀆰 ０~３􀆰 ２１)ꎬ 反映了
该基因功能的多样性(图 ２)ꎮ ＬｐＴＴＧ１ 相对转录水
平在根中最高ꎬ 抱茎叶中最低ꎬ 然而单因素方差分
析显示不同组织中的表达量无显著差异 ( Ｐ ＝
０􀆰１１９４)ꎮ 为探究 ＬｐＴＴＧ１ 基因在抱茎独行菜种子
成熟过程中的表达情况ꎬ 分别采集授粉后 １、 ５、
８、 １１、 １５ ｄ的角果提取总 ＲＮＡ 并进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ
表达检测ꎮ 结果显示(图 ３)ꎬ ＬｐＴＴＧ基因的 ｍＲＮＡ
积累量在角果发育后期(授粉后 １１ ~ １５ ｄ)上升趋
势更为明显ꎬ 但不同发育阶段之间无显著差异
(Ｐ ＝ ０􀆰 ０７６０)ꎮ
２􀆰 ２􀆰 ２　 免疫组织化学定位分析
为进一步探究抱茎独行菜不同发育阶段角果中
ＬｐＴＴＧ１蛋白表达水平的变化ꎬ 制作了石蜡切片并
纯化重组蛋白 ＬｐＴＴＧ１ 制备了多克隆抗体(数据未
列出)ꎬ 经一抗(抗 β￣１ꎬ３￣Ｄ￣ｇｌｕｃａｎ 抗体)和 ＨＲＰ
标记的山羊抗兔二抗分别孵化切片组织后染色ꎮ 据
Ａｔ: 拟南芥ꎻ Ｂｎ: 油菜ꎻ Ｌｐ: 抱茎独行菜ꎻ Ｃｏｎ: 氨基酸保守序列ꎻ 方框Ⅰꎬ Ⅱꎬ Ⅲꎬ Ⅳ: ＷＤ４０基序ꎮ
Ａｔ: Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａꎻ Ｂｎ: Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓꎻ Ｌｐ: Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍꎻ Ｃｏｎ: Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓꎻ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｘｅｓ ｍａｒｋｅｄ ｗｉｔｈ Ⅰꎬ Ⅱꎬ Ⅲꎬ Ⅳ ｉｎｄｉｃａｔｅ ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆｓ.
图 １　 ３种十字花科植物 ＴＴＧ１氨基酸序列多重比对结果
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＴＴＧ１ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ ｓｐｅｃｉｅｓ
５７３　 第 ４期　 　 　 　 　 　 曹 婧等: 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的克隆、 表达分析及功能鉴定
表 １　 ＬｐＴＴＧ１蛋白结构域、 重复序列、 基序及其特性预测
Ｔａｂｌｅ １　 Ｃｏｎｆｉｄｅｎｔｌｙ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｄｏｍａｉｎｓꎬ ｒｅｐｅａｔｓꎬ
ｍｏｔｉｆｓ ａｎｄ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｐＴＴＧ１
名称
Ｎａｍｅ
开始
Ｂｅｇｉｎ
结束
Ｅｎｄ
期望值
Ｅ￣ｖａｌｕｅ
ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆ Ⅰ Ｆｒｏｍ ６６ Ｔｏ １１１ ３􀆰 ４２ｅ ＋ ０１
ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆ Ⅱ Ｆｒｏｍ １１８ Ｔｏ １６３ ４􀆰 ４８ｅ － ０２
ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆ Ⅲ Ｆｒｏｍ １６６ Ｔｏ ２０４ １􀆰 ５２ｅ － ０４
ＷＤ４０ ｍｏｔｉｆ Ⅳ Ｆｒｏｍ ２５５ Ｔｏ ２９５ １􀆰 ６６ｅ － ０５
Ｓｉ: 角果ꎻ Ｒｌ: 莲座叶ꎻ Ｂｔ: 薹ꎻ Ｃｌ: 抱茎叶ꎻ Ｒｔ: 根ꎮ 以 β ￣ａｃｔｉｎ为
内参计算相对表达水平ꎬ 误差线表示 ３ 次重复平均值的标准误
差ꎬ 相同小写字母表示在 Ｐ ＝ ０􀆰 ０５水平上差异不显著ꎮ
Ｓｉ: Ｓｉｌｉｃｌｅꎻ Ｒｌ: Ｒｏｓｅｔｔｅ ｌｅａｆꎻ Ｂｔ: Ｂｏｌｔꎻ Ｃｌ: Ｃｌａｓｐｉｎｇ ｌｅａｆꎻ Ｒｔ:
Ｒｏｏｔ􀆰 Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｌｄ ｉｓ ｇｉｖｅｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ β ￣ａｃｔｉｎ. Ｔｈｅ ｅｒｒｏｒ
ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎ (ｎ＝３) . Ｔｈｅ
ｓａｍｅ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅ￣
ｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｔ Ｐ ＝ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ.
图 ２　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析抱茎独行菜不同组织 ＬｐＴＴＧ１的表达
Ｆｉｇ􀆰 ２　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬｐＴＴＧ１
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ
5
4
3
2
1
0
6
Lp
TT
G
1 Lp
TT
G
1
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#
$
%
R
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e
ex
pr
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si
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le
ve
l o
f
ge
ne
&()*+
( )Different developmental stages DAP
1 5 8 11 15
a
a a
a
a
以 β ￣ａｃｔｉｎ为内参计算相对表达水平ꎬ 误差线表示 ３次重复平均值
的标准误差ꎬ 相同小写字母表示在 Ｐ＝ ０􀆰 ０５水平上差异不显著ꎮ
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｌｄ ｉｓ ｇｉｖｅｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ β ￣ａｃｔｉｎ. Ｔｈｅ ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ
ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎ (ｎ＝３) . Ｔｈｅ ｓａｍｅ
ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｔ Ｐ ＝ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ.
图 ３　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析抱茎独行菜不同发育
阶段角果中 ＬｐＴＴＧ１的表达
Ｆｉｇ􀆰 ３　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ＬｐＴＴＧ１ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ
Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ ｓｉｌｉｃｌｅ
甲苯胺蓝染色部位ꎬ 可将抱茎独行菜粘液质的形成
及种皮分化过程分为 ４个阶段: 首先ꎬ 在种皮发育
早期(０ ~ ４ ＤＡＰ)ꎬ 表层细胞均含有细胞核、 中央
大液泡及被挤压到边缘的细胞质ꎻ 其次ꎬ 在 ５ ~ ７
ＤＡＰ阶段ꎬ 表皮细胞开始产生粘液质但仍存在造
粉体ꎻ 第三ꎬ 在 ８ ~ １２ ＤＡＰ阶段ꎬ 表皮细胞中的
造粉体和内容物逐渐消失ꎻ 最后的 １３ ~ １８ ＤＡＰ
阶段ꎬ 表皮细胞变成匀质的粘液细胞ꎬ 此时种子完
全成熟ꎮ
免疫组织化学定位分析结果显示ꎬ 在刚结束授
粉的成熟胚珠阶段ꎬ 各层珠被细胞形态大小一致
(图 ４: Ａ)ꎬ 与空白血清作为阴性对照的染色结果
相比(图 ４: Ｂ)ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 在各层珠被细胞中均有
表达ꎬ 且表达量一致(图 ４: Ｃ)ꎮ 随后ꎬ 两层外珠
被细胞开始分化并产生造粉体(图 ４: Ｄ)ꎬ 和空白
对照相比(图 ４: Ｅ)ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 在内外珠被各层细
胞和胚中均有表达ꎬ 在外珠被表皮细胞中的表达量
最高ꎬ 且集中在细胞核周围(图 ４: Ｆ)ꎮ 外珠被两
层细胞的造粉体继续积累(图 ４: Ｇ)ꎬ 与空白对照
相比(图 ４: Ｈ)ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 仍在外珠被表皮细胞中
围绕细胞核高表达(图 ４: Ｉ)ꎮ 授粉后 ８ ~ １５ ｄ 的
角果ꎬ 外珠被表皮细胞产生粘液质ꎬ 造粉体退化、
减少并呈锥状堆积ꎬ 内珠被退化、 层数减少(图 ４:
Ｊ)ꎬ 与空白对照相比(图 ４: Ｋ)ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 在内外
珠被各层细胞和胚中都有表达ꎻ 在珠被(种皮)各
层细胞中ꎬ ＬｐＴＴＧ１在外珠被两层细胞中的表达量
有所下降ꎬ 内珠被最外层细胞中表达量突然增高(图
４: Ｌ)ꎮ 随后ꎬ 外珠被表皮细胞产生大量的粘液质ꎬ
造粉体退化、 减少ꎬ 几乎完全消失ꎬ 内珠被只剩下
细胞质浓厚的栅栏层(图 ４: Ｍ)ꎬ 和空白对照相比
(图 ４: Ｎ)ꎬ ＬｐＴＴＧ１在胚中仍有表达ꎬ 但在种皮细
胞中的表达量已显著降低(图 ４: Ｏ)ꎮ 最后ꎬ 在成
熟种子的外种皮中 ＬｐＴＴＧ１的表达量降至最低ꎮ
２􀆰 ３　 抱茎独行菜 ＬｐＴＴＧ１基因的功能分析
为探究 ＬｐＴＴＧ１在抱茎独行菜种皮分化及粘液
质形成中的作用ꎬ 构建了植物表达载体 ｐＣＡＭ￣
ＢＩＡ１３０１￣ＬｐＴＴＧ１并转化拟南芥ꎮ 提取转基因拟南
芥 Ｔ１ 代植株的基因组 ＤＮＡꎬ 并以抱茎独行菜
ＴＴＧ１ ｃＤＮＡ 的特异性引物(选择抱茎独行菜和拟
南芥 ＴＴＧ１ ｃＤＮＡ序列中差异最大的区段分别设计
６７３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
A B C
D E F
G H I
J K L
M N O
in
oi
n
ep
ep
ii
oi
oi oi
oi n
ii
am
am
am
am
ii
ii
ep
ep
ep
ep
ep
m
m
m
sep
sep
sep
sep
2.5 mμ5 mμ 5 mμ
5 mμ 5 mμ 5 mμ
5 mμ 5 mμ 5 mμ
5 mμ 5 mμ 5 mμ
5 mμ 5 mμ 5 mμ
图片示抱茎独行菜种子横切面ꎮ Ａꎬ Ｄꎬ Ｇꎬ Ｊꎬ Ｍ: 用甲苯胺蓝染色作为对照ꎻ Ｂꎬ Ｅꎬ Ｈꎬ Ｋꎬ Ｎ: 用空白血清作为阴性对
照ꎻ Ｃꎬ Ｆꎬ Ｉꎬ Ｌꎬ Ｏ: 与抗 ＬｐＴＴＧ１血清相互作用的样本ꎻ ｉｎ: 珠被ꎻ ｉｉ: 内珠被ꎻ ｏｉ: 外珠被ꎻ ｅｐ: 表皮ꎻ ｓｅｐ: 亚表皮ꎻ ｎ:
细胞核ꎻ ａｍ: 造粉体ꎻ ｍ: 粘液质ꎮ
Ａｌｌ ｐｉｃｔｕｒｅｓ ａｒｅ ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ ｓｅｅｄｓ􀆰 Ａꎬ Ｄꎬ Ｇꎬ Ｊꎬ Ｍ ａｒｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈ ａｒｍｏｕｒ ａｎｉｌｉｎｅ ｂｌｕｅ
ｓｔａｉｎｉｎｇꎻ Ｂꎬ Ｅꎬ Ｈꎬ Ｋꎬ Ｎ ａｒｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈ ｂｌａｎｋ ｓｅｒｕｍꎻ Ｃꎬ Ｆꎬ Ｉꎬ Ｌꎬ Ｏ ａｒｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ￣ＬｐＴＴＧ１ ｓｅｒｕｍꎻ
ｉｎ: Ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔꎻ ｉｉ: Ｉｎｎｅｒ ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔꎻ ｏｉ: Ｏｕｔｅｒ ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔꎻ ｅｐ: Ｅｐｉｄｅｒｍｉｓꎻ ｓｅｐ: Ｓｕｂｅｐｉｄｅｒｍａｌꎻ ｎ: Ｎｕｃｌｅｕｓꎻ ａｍ:
Ａｍｙｌｏｐｌａｓｔｓꎻ ｍ: Ｍｕｃｉｌａｇｅ.
图 ４　 抱茎独行菜 ＬｐＴＴＧ１在种皮各发育阶段的免疫组织化学定位
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＬｐＴＴＧ１ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｓｅｅｄ
ｃｏａｔ ｉｎ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ
７７３　 第 ４期　 　 　 　 　 　 曹 婧等: 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的克隆、 表达分析及功能鉴定
上、 下游引物ꎬ 并确认只能扩增出各自的相应片
段)进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ 结果显示ꎬ 在预期位置扩增
出了目的条带(图 ５: Ａꎬ ４６０ ｂｐ)ꎮ 挑选 ＰＣＲ 阳
性植株提取总 ＲＮＡꎬ 以抱茎独行菜 ＴＴＧ１ ｃＤＮＡ特
异性引物进行 ＲＴ￣ＰＣＲ扩增ꎬ 检测外源基因在拟南
芥中的表达(图 ５: Ｂ)ꎬ 确认获得了转基因株系ꎮ
A
B
M
M
1
1
2
2
3
3
4
4
5
5
2000
2000
750
750
500
500
250
250
bp
bp
Ｍ: ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２０００ꎻ １ ~ ４: 转基因植株ꎻ ５: 野生型
植株ꎮ
Ｍ: ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２０００ꎻ １ ~ ４: Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ􀆰 ５:
Ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｐｌａｎｔ.
图 ５　 ＬｐＴＴＧ１转基因植株基因组 ＰＣＲ(Ａ)和
ＲＴ￣ＰＣＲ(Ｂ)检测
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ＰＣＲ (Ａ) ａｎｄ ＲＴ￣ＰＣＲ (Ｂ)
ｏｆ ＬｐＴＴＧ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ
　 　 为探究 ＬｐＴＴＧ１过量表达对粘液质合成途径中
其它相关基因的影响ꎬ 分析了野生型 (ＷＴ) 和
ＴＴＧ１过表达拟南芥植株(ＴＯＰ)不同组织(根、 薹、
叶、 角果)中 ＴＴＧ１ 下游基因 ＡｔＭＵＭ４ 的表达变
化ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 结果显示ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 在拟南芥中过
量表达显著增强了角果中 ＡｔＭＵＭ４ 的表达(图 ６ꎬ
Ｐ < ０􀆰 ０５)ꎬ 表明该基因在转基因株系中表达且参
与角果发育过程相关事件ꎮ
为进一步明确 ＴＴＧ１基因在种皮分化及粘液质
沉积中的作用ꎬ 观察了拟南芥野生型、 ｔｔｇ１突变体
及 ＴＴＧ１过表达株系种子形态及粘液质释放过程ꎮ
结果显示ꎬ ｔｔｇ１ 突变体种子花青素合成能力下降
(图 ７: Ａ１)且几乎不分泌粘液质(图 ７: Ａ２ꎬ Ａ３)ꎻ
而过表达株系与野生型种子表皮细胞的形态、 粘液
质的释放方式及数量等均无显著差异(图 ７: Ⅰꎬ
Ⅱꎬ Ⅲ)ꎮ
40
30
20
10
0
a
b
c
c c c c c
WT
TOP
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M
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4
Si Rl Bt Rt
&()
Different tissues
Ｓｉ: 角果ꎻ Ｒｌ: 莲座叶ꎻ Ｂｔ: 薹ꎻ Ｒｔ: 根ꎮ ＷＴ: 野生型ꎻ ＴＯＰ:
ＴＴＧ１过表达植株ꎮ 以 β￣ａｃｔｉｎ为内参计算相对表达水平ꎬ 误差
线表示平均值的标准误差ꎬ 不同小写字母表示在 Ｐ< ０􀆰 ０５水平
差异显著ꎮ
Ｓｉ: Ｓｉｌｉｑｕｅｓꎻ Ｒｌ: Ｒｏｓｅｔｔｅ ｌｅａｆꎻ Ｂｔ: Ｂｏｌｔꎻ Ｒｔ: Ｒｏｏｔ. ＷＴ: Ｗｉｌｄ
ｔｙｐｅꎻ ＴＯＰ: ＴＴＧ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｎｔ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｌｄ ｉｓ
ｇｉｖｅｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ β￣ａｃｔｉｎ. Ｔｈｅ ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎ (ｎ ＝ ３) . Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒ
ｏｎ ｔｈｅ ｂａｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓ￣
ｓｕｅｓ ａｔ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ.
图 ６　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析野生型和 ＬｐＴＴＧ１转基因
拟南芥植株 ＡｔＭＵＭ４基因表达
Ｆｉｇ􀆰 ６　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＭＵＭ４
ｉｎ ＬｐＴＴＧ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ＷＴ ｐｌａｎｔｓ
ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ
３　 讨论
本实验通过同源克隆得到了抱茎独行菜种皮粘
液质调控基因 ＴＴＧ１的 ｃＤＮＡ序列ꎬ 并对其进行了
初步的功能鉴定ꎮ ＬｐＴＴＧ１ 基因 ＯＲＦ 序列及氨基
酸序列的多重比对结果显示ꎬ ＬｐＴＴＧ１、 拟南芥
ＡｔＴＴＧ１和油菜 ＢｎＴＴＧ１ 基因具有较高同源性ꎬ 且
不同 ＴＴＧ１基因编码的 ＷＤ４０ 蛋白拥有共同基序ꎮ
ｑＲＴ￣ＰＣＲ和免疫定位分析显示ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 与抱茎
独行菜角果发育、 种皮分化及粘液质合成相关ꎮ 该
基因过量表达增加了转基因拟南芥粘液质调控途径
下游基因 ＡｔＭＵＭ４ 的转录水平ꎬ 但对种子形态及
粘液质分泌与释放方式无显著影响ꎮ
有研究表明ꎬ 拟南芥粘液质的合成与分泌是一
个复杂过程ꎬ 涉及许多调控因子和相关功能基因ꎬ
ＡｔＴＴＧ１ 就是位于该调控网络上游的一个调控基
因[９ꎬ３３]ꎮ ＡｔＴＴＧ１含有 ４个 ＷＤ 序列ꎬ 形成功能性
β￣螺旋折叠结构最少需要 ４ 个 ＷＤ 重复序列(也称
Ｔｒｐ￣Ａｓｐ或 ＷＤ４０ 基序ꎬ 通常由大约 ４０ 个氨基酸
残基构成ꎬ 存在保守的 ＧＨ 和 ＷＤ 序列) [３４]ꎮ ＷＤ
重复序列蛋白由一个很大的基因家族编码ꎬ 在拟南
８７３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
Ａ１ꎬ Ａ２ꎬ Ａ３: ｔｔｇ１突变体种子ꎻ Ｂ１ꎬ Ｂ２ꎬ Ｂ３: 野生型种子ꎻ Ｃ１ꎬ Ｃ２ꎬ Ｃ３: ＴＴＧ１过表达植株种子ꎮ
Ａ１ꎬ Ａ２ꎬ Ａ３: Ｓｅｅｄｓ ｏｆ ｔｔｇ１ ｍｕｔａｎｔꎻ Ｂ１ꎬ Ｂ２ꎬ Ｂ３: Ｓｅｅｄｓ ｏｆ ＷＴꎻ Ｃ１ꎬ Ｃ２ꎬ Ｃ３: Ｓｅｅｄｓ ｏｆ ＴＴＧ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｎｔ.
图 ７　 ＬｐＴＴＧ１过表达植株、 ｔｔｇ１突变体和野生型拟南芥种子的形态(Ⅰ)、
水合作用(Ⅱ)和钌红染色(Ⅲ)结果
Ｆｉｇ􀆰 ７　 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ ｄｒｙ ｓｅｅｄ (Ⅰ)ꎬ ａｎｄ ｓｅｅｄｓ ａｆｔｅｒ ｈｙｄｒａｔｉｏｎ (Ⅱ)
ａｎｄ ｒｕｔｈｅｎｉｕｍ ｒｅｄ ｓｔａｉｎｉｎｇ (Ⅲ) ｏｆ ＬｐＴＴＧ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｎｔꎬ
ｔｔｇ１ ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ＷＴꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ
芥中已鉴定出 ５９种[３４ꎬ３５]ꎮ 到目前为止ꎬ 推测所有
ＷＤ蛋白在一系列细胞事件中均具有调控作用[３５]ꎮ
本研究结果显示ꎬ ＬｐＴＴＧ１与拟南芥氨基酸序列具
有高度同源性ꎬ 也具有 ４ 个 ＷＤ 重复序列ꎬ 推测
抱茎独行菜 ＴＴＧ１蛋白与拟南芥 ＴＴＧ１ 蛋白具有相
似的多重生物学功能ꎮ
ＡｔＴＴＧ１在各器官均有表达ꎬ 调控多种性状ꎬ
如表皮毛与根毛发生、 种子花青素合成、 种皮发育
及粘液质的形成与释放等[１１ꎬ３６－３８]ꎮ 本实验发现抱
茎独行菜 ＴＴＧ１基因能在不同组织中表达且转录水
平无显著差异ꎬ 这可能暗示了该基因功能的多样
性[２７]ꎮ 此外ꎬ ｑＲＴ￣ＰＣＲ结果显示 ＬｐＴＴＧ１ 基因的
ｍＲＮＡ在角果中逐渐积累ꎬ 表明该基因可能在角
果和种子成熟过程中发挥作用ꎮ 拟南芥 ＴＴＧ１基因
负责调控种皮发育和粘液质合成[３３]ꎮ ＬｐＴＴＧ１ 免
疫组织化学分析揭示了该蛋白的变化趋势ꎬ 即: 早
期在内珠被和外珠被细胞均有表达ꎬ 随后外珠被细
胞内的表达增强ꎬ 最后只在表皮和亚表皮细胞之间
表达ꎬ 表达模式与种皮分化和粘液质合成相一致ꎮ
然而在种子发育中后期ꎬ ＬｐＴＴＧ１ 蛋白表达量降
低ꎬ 这与角果发育中 ＬｐＴＴＧ１ 的 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 结果不
相符ꎮ 我们在研究过程中注意到ꎬ 抱茎独行菜种子
表皮和亚表皮细胞是独特的细胞类型ꎬ 在发育后期
会演变成无生命的细胞层ꎬ 从而导致其中的标记强
度变弱ꎮ 除了种子本身ꎬ 角果其它组织和细胞都会
进入正常的后期发育ꎬ ＬｐＴＴＧ１蛋白将会影响这些
９７３　 第 ４期　 　 　 　 　 　 曹 婧等: 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的克隆、 表达分析及功能鉴定
组织细胞的花青素合成等[３６－３８]ꎮ
ＡｔＭＵＭ４编码一种 ＮＤＰ￣Ｌ￣鼠李糖合成酶基
因ꎬ 调节拟南芥种皮的分化及粘液质合成ꎬ 是转录
因子 ＴＴＧ１级联途径下游的靶基因ꎮ 本研究通过构
建过表达 ＬｐＴＴＧ１转基因拟南芥植株ꎬ 分析了该基
因的表达情况ꎬ 结果显示ꎬ ＡｔＭＵＭ４ 在野生型和
转基因株系角果中表达量最高(与其它组织相比)ꎬ
而且 ＬｐＴＴＧ１在拟南芥中的过量表达显著增强了角
果中 ＡｔＭＵＭ４ 基因的表达ꎬ 显示 ＬｐＴＴＧ１ 在拟南
芥中获得了表达ꎬ 并促进了下游基因 ＭＵＭ４ 的表
达增强ꎬ 由此参与了粘液质合成途径的调控ꎮ
本实验中拟南芥野生型及 ＬｐＴＴＧ１过表达转基
因株系的种子形态及粘液质释放方式无显著差异ꎬ
原因可能是拟南芥粘液质的合成与分泌过程较为复
杂ꎬ 受众多功能冗余的基因共同调控ꎬ 因此只增加
种皮发育过程中某一基因的转录水平并不会引起明
显的表型变化ꎮ 先前类似的研究显示ꎬ 过表达
ＡｔＴＴＧ１的拟南芥并未出现多余毛状体的发育[３９]ꎮ
以上结果也可能是由于粘液质合成所需的其它底物
(例如 ＵＤＰ￣半乳糖醛酸)供应不足ꎬ 而该底物的合
成不受 ＬｐＴＴＧ１上调表达影响ꎮ
本研究结果揭示抱茎独行菜 ＴＴＧ１基因可能与
拟南芥 ＴＴＧ１基因具有相似的功能ꎬ 因为 ＬｐＴＴＧ１
与抱茎独行菜角果发育、 种皮分化及粘液质的合成
密切相关ꎻ 此外ꎬ 该基因明显激活了转基因拟南芥
角果中粘液质调控基因 ＡｔＭＵＭ４ 的表达ꎮ 为了深
入解析抱茎独行菜 ＴＴＧ１在种子发育和粘液质合成
中的作用ꎬ 还需开展功能互补实验ꎬ 将 ＬｐＴＴＧ１转
化到 ｔｔｇ１突变体中进一步验证该基因的功能ꎮ
参考文献:
[ １ ] 　 Ｇｕｔｔｅｒｍａｎ Ｙꎬ Ｓｈｅｍ￣Ｔｏｖ Ｓ. Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｕｓ ｓｅｅｄ ｃｏａｔｓ ｏｆ Ｐｌａｎｔａｇｏ ｃｏｒｏｎｏｐｕｓ
ｉｎｈａｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｎｅｇｅｖ Ｄｅｓｅｒｔ ｏｆ Ｉｓｒａｅｌ [ Ｊ] . Ｉｓｒ Ｊ
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ １９９６ꎬ ４４(２): １２５－１３３.
[ ２ ] 　 Ｗｅｓｔｅｒｎ ＴＬꎬ Ｓｋｉｎｎｅｒ ＤＪꎬ Ｈａｕｇｈｎ ＧＷ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｓｅｃｒｅｔａｒｙ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｓｅｅｄ ｃｏａｔ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２０００ꎬ １２２(２): ３４５－３５６.
[ ３ ] 　 马君玲ꎬ 刘志民. 粘液繁殖体及其生态功能[Ｊ] . 生
态学杂志ꎬ ２００６ꎬ ２５(１１): １４００－１４０４.
[ ４ ] 　 Ｂｅｅｃｋｍａｎ Ｔꎬ Ｄｅ Ｒｙｃｋｅ Ｒꎬ Ｖｉａｎｅ Ｒꎬ Ｉｎｚｅ Ｄ. Ｈｉｓｔｏ￣
ｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ａｒａｂｉ￣
ｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[Ｊ] . Ｊ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓꎬ ２０００ꎬ １１３(２):
１３９－１４８.
[ ５ ] 　 Ｙｏｕｎｇ ＪＡꎬ Ｅｖａｎｓ ＲＡ. Ｍｕｃｉｌａｇｉｏｕｓ ｓｅｅｄ ｃｏａｔｓ[Ｊ] .
Ｗｅｅｄ Ｓｃｉꎬ １９７３ꎬ ２１: ５２－５４
[ ６ ] 　 Ｗｉｎｄｓｏｒ ＪＢꎬ Ｓｙｍｏｎｄｓ ＶＶꎬ Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ Ｊꎬ Ｌｌｏｙｄ
ＡＬ. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ: ｍｏｒｐｈｏ￣
ｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｏｕｔｅｒ ｉｎｔｅｇｕｍｅｎｔ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｊꎬ ２０００ꎬ ２２(６): ４８３－４９３.
[ ７ ] 　 Ｈｕａｎｇ Ｚꎬ Ｂｏｕｂｒｉａｋ Ｉꎬ Ｏｓｂｏｒｎｅ ＤＪꎬ Ｄｏｎｇ Ｍꎬ Ｇｕｔ￣
ｔｅｒｍａｎ Ｙ. Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｃｔｉｎ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｕｃｉ￣
ｌａｇｅ ａｎｄ ｄｅｗ ｉｎ ｒｅｐａｉｒｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏ ＤＮＡ ｏｆ ｓｅｅｄｓ
ａｄａｐｔｅｄ ｔｏ ｄｅｓｅｒｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ[Ｊ]. Ａｎｎ Ｂｏｔ￣Ｌｏｎｄｏｎꎬ
２００８ꎬ １０１(２): ２７７－２８３.
[ ８ ] 　 Ｓｍｉｔｈ ＴＦꎬ Ｇａｉｔａｔｚｅｓ Ｃꎬ Ｓａｘｅｎａ Ｋ. Ｔｈｅ ＷＤ ｒｅｐｅａ￣
ｔｅｄ: ａ ｃｏｍｍｏｎ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ｆｏｒ ｄｉｖｅｒｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
[Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉꎬ １９９９ꎬ ２４ (５): １８１ －
１８５.
[ ９ ] 　 Ｐｅｎｆｉｅｌｄ Ｓꎬ Ｍｅｉｓｓｎｅｒ ＲＣꎬ Ｓｈｏｕｅ ＤＡꎬ Ｃａｒｐｉｔａ ＮＣꎬ
Ｂｅｖａｎ ＭＷ. ＭＹＢ６１ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｄｅｐｏ￣
ｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００１ꎬ １３(１２): ２７７７－２７９１.
[１０] 　 Ｗｅｓｔｅｒｎ ＴＬꎬ Ｂｕｒｎ Ｊꎬ Ｔａｎ ＷＬꎬ Ｓｋｉｎｎｅｒ ＤＪ. Ｉｓｏｌａ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｔａｎｔｓ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎ
ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２００１ꎬ １２７ ( ３):
９９８－１０１１.
[１１] 　 Ｗｅｓｔｅｒｎ ＴＬꎬ Ｙｏｕｎｇ ＤＳꎬ Ｄｅａｎ ＧＨ. ＭＵＣＩＬＡＧＥ￣
ＭＯＤＩＦＩＥＤ４ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｅｃｔｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
ｅｎｚｙｍｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＡＰＥＴＡＬＡ２ꎬ
ＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴ ＴＥＳＴＡ ＧＬＡＢＲＡ１ꎬ ａｎｄ ＧＬＡＢＲＡ２
ｉｎ ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ
２００４ꎬ １３４(１): ２９６－３０６.
[１２] 　 Ｕｓａｄｅｌ Ｂꎬ Ｋｕｓｃｈｉｎｓｋｙ ＡＭꎬ Ｒｏｓｓｏ ＭＧ. ＲＨＭ２ ｉｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｐｅｃｔｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅ￣
ｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２００４ꎬ １３４ ( １):
２８６－２９５.
[１３] 　 Ｗｉｌｌａｔｓ ＷＧꎬ ＭｃＣａｒｔｎｅｙ Ｌꎬ Ｋｎｏｘ ＪＰ. Ｉｎ￣ｓｉｔｕ ａｎａｌｙ￣
ｓｉｓ ｏｆ ｐｅｃｔｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｓｅｅｄ ｍｕｃｉｌａｇｅ
ａｎｄ ａｔ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[Ｊ] .
Ｐｌａｎｔａꎬ ２００１ꎬ ２１３(１): ３７－４４.
[１４] 　 Ｄｅａｎ Ｇꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｈꎬ Ｔｅｗａｒｉ Ｊ. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＭＵＭ２ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ β￣ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｗｉｔｈ ｃｏｒ￣
ｒｅｃｔ ｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００７ꎬ １９
０８３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
(１２): ４００７－ ４０２１.
[１５] 　 Ｍａｃｑｕｅｔ Ａꎬ Ｒａｌｅｔ ＭＣꎬ Ｌｏｕｄｅｔ Ｏ. Ａ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃ￣
ｃｕｒｒｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ａｆ￣
ｆｅｃｔｓ ａ β￣Ｄ￣ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｔｈａｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｈｙ￣
ｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｒｈａｍｎｏｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｎ Ｉ ｉｎ ｓｅｅｄ
ｍｕｃｉｌａｇｅ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００７ꎬ １９(１２): ３９９０－４００６.
[１６] 　 Ｍａｃｑｕｅｔ Ａꎬ Ｒａｌｅｔ ＭＣꎬ Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇｅｒ Ｊ. Ｉｎ￣ｓｉｔｕꎬ
ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏ￣
ｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｍｕｃｉｌａｇｅ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２００７ꎬ ４８(７): ９８４－９９９.
[１７] 　 Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ Ｃꎬ Ｂａｕｅｒ Ｓꎬ Ｂｒｉｎｉｎｓｔｏｏｌ Ｇ. Ｔｏｗａｒｄ ａ
ｓｙｓｔｅｍｓ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｗａｌｌｓ
[Ｊ]. Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００４ꎬ ３０６(５７０５): ２２０６－２２１１.
[１８] 　 Ｇｕｉｍｉｌ Ｓ. ａｎｄ Ｄｕｎａｎｄ Ｃ. Ｐａｔｔｅｒｎｉｎｇ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ: Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ
ｃｏｍｐｌｅｘ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ｐａｔｈｗａｙ[ Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ ２００６ꎬ １１(１２): ６０１－ ６０９.
[１９] 　 Ｏｋａ Ｔꎬ Ｎｅｍｏｔｏ Ｔꎬ Ｊｉｇａｍｉ Ｙ. Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ＲＨＭ２ / ＭＵＭ４ꎬ ａ ｍｕｌｔｉｄｏｍａｉｎ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＵＤＰ￣Ｄ￣ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏ ＵＤＰ￣Ｌ￣ｒｈａｍ￣
ｎｏｓｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ[Ｊ] . Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍꎬ ２００７ꎬ ２８２(８):
５３８９－ ５４０３.
[２０] 　 Ｊｏｆｕｋｕ ＫＤꎬ ｄｅｎ Ｂｏｅｒ ＢＧＷꎬ Ｍｏｎｔａｇｕ ＭＶꎬ Ｏｋａ￣
ｍｕｒｏ ＪＫ. Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ ｓｅｅｄ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｂｙ ｔｈｅ ｈｏｍｅｏｔｉｃ ｇｅｎｅ ＡＰＥＴＡＬＡ２
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １９９４ꎬ ６(９): １２１１－１２２５.
[２１] 　 Ｋｏｏｒｎｎｅｅｆ Ｍ. Ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｏｆ ｔｔｇ ｍｕ￣
ｔａｎｔｓ[Ｊ] . Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ Ｉｎｆ Ｓｅｒｖꎬ １９８１ꎬ １８: ４５－５１.
[２２] 　 Ｊｏｈｎｓｏｎ ＣＳꎬ Ｋｏｌｅｖｓｋｉ Ｂꎬ Ｓｍｙｔｈ ＤＲ. ＴＲＡＮＳＰＡ￣
ＲＥＮＴ ＴＥＳＴＡ ＧＬＡＢＲＡ２ꎬ ａ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ａｎｄ ｓｅｅｄ
ｃｏａｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｇｅｎｅ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓꎬ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ
ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００２ꎬ １４
(６): １３５９－１３７５.
[２３] 　 Ｒｅｒｉｅ ＷＧꎬ Ｆｅｌｄｍａｎｎ ＫＡꎬ Ｍａｒｋｓ ＤＭ. Ｔｈｅ ＧＬＡ￣
ＢＲＡ２ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｈｏｍｅｏ￣ｄｏｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅ￣
ｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ａｒａｂｉ￣
ｄｏｐｓｉｓ[Ｊ] . Ｇｅｎｅ Ｄｅｖꎬ １９９４ꎬ ８(１２): １３８８－１３９９.
[２４] 　 Ｂａｕｄｒｙ Ａꎬ Ｃａｂｏｃｈｅ Ｍꎬ Ｌｅｐｉｎｉｅｃ Ｌ. ＴＴ８ ｃｏｎｔｒｏｌｓ
ｉｔｓ ｏｗｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａ ｆｅｅｄｂａｃｋ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｖｏｌ￣
ｖｉｎｇ ＴＴＧ１ ａｎｄ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ＭＹＢ ａｎｄ ｂＨＬＨ ｆａｃ￣
ｔｏｒｓꎬ ａｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｄ ｃｅｌｌ￣ｓｐｅｃｉfiｃ ａｃｃｕｍｕｌａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ flａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｊꎬ ２００６ꎬ ４６(５): ７６８－７７９.
[２５] 　 Ｎｅｓｉ Ｎꎬ Ｄｅｂｅａｕｊｏｎ Ｉꎬ Ｊｏｎｄ Ｃꎬ Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ Ｇꎬ
Ｃａｂｏｃｈｅ Ｍꎬ Ｌｅｐｉｎｉｅｃ Ｌ. Ｔｈｅ ＴＴ８ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ
ｂａｓｉｃ ｈｅｌｉｘ￣ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘ ｄｏｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＤＦＲ ａｎｄ ＢＡＮ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｓｉｌｉｑｕｅｓ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２０００ꎬ １２ (１０): １８６３－１８７８.
[２６] 　 Ｒａｍｓａｙ ＮＡꎬ Ｇｌｏｖｅｒ ＢＪ. ＭＹＢ￣ｂＨＬＨ￣ＷＤ４０ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ[Ｊ] .
Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ ２００５ꎬ １０(２): ６３－７０.
[２７] 　 Ｇａｌｗａｙ ＭＥꎬ Ｍａｓｕｃｃｉ ＪＤꎬ Ｌｌｏｙｄ ＡＭꎬ Ｗａｌｂｏｔ Ｖꎬ
Ｄａｖｉｓ ＲＷꎬ Ｓｃｈｉｅｆｅｌｂｅｉｎ ＪＷ. Ｔｈｅ ＴＴＧ ｇｅｎｅ ｉｓ ｒｅ￣
ｑｕｉｒｅｄ ｔｏ ｓｐｅｃｉｆｙ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｐａｔ￣
ｔｅｒｎｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｒｏｏｔ [ Ｊ ] . Ｄｅｖ Ｂｉｏｌꎬ
１９９４ꎬ １６６(２): ７４０－７５４.
[２８] 　 Ｗａｌｋｅｒ ＡＲꎬ Ｄａｖｉｓｏｎ ＰＡꎬ Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ Ｗｉｎｆｉｅｌｄ ＡＣꎬ
Ｊａｍｅｓ ＣＭꎬ Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ Ｎꎬ Ｂｌｕｎｄｅｌｌ ＴＬꎬ Ｅｓｃｈ ＪＪꎬ
Ｍａｒｋｓ ＤＭꎬ Ｇｒａｙ ＪＣ. Ｔｈｅ ＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴ ＴＥＳＴＡ
ＧＬＡＢＲＡ１ ｌｏｃｕｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ｄｉｆｆｅ￣
ｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ Ａｒａｂｉ￣
ｄｏｐｓｉｓꎬ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ＷＤ４０ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌｌꎬ １９９９ꎬ １１(７): １３３７－１３４９.
[２９] 　 Ｍａｓｕｃｃｉ ＪＤꎬ Ｒｅｒｉｅ ＷＧꎬ Ｆｏｒｅｍａｎ ＤＲꎬ Ｚｈａｎｇ Ｍꎬ
Ｇａｌｗａｙ ＭＥꎬ Ｍａｒｋｓ ＭＤꎬ Ｓｃｈｉｅｆｅｌｂｅｉｎ ＪＷ. Ｔｈｅ ｈｏ￣
ｍｅｏｂｏｘ ｇｅｎｅ ＧＬＡＢＲＡ２ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｏｓｉｔｉｏｎ￣
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ
ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[ Ｊ] . Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ １９９６ꎬ
１２２(４): １２５３－１２６０.
[３０] 　 Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ａꎬ Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ Ｊꎬ Ｈｕｏ ＹＪꎬ Ｌｌｏｙｄ Ａ.
ＴＴＧ１ ｃｏｍｐｌｅｘ ＭＹＢｓꎬ ＭＹＢ５ ａｎｄ ＴＴ２ꎬ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｕ￣
ｔｅｒ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ[ Ｊ] . Ｄｅｖ Ｂｉｏｌꎬ ２００９ꎬ
３２(５): ４１２－４２１.
[３１] 　 Ｃｌｏｕｇｈ ＳＪꎬ Ｂｅｎｔ ＡＦ. Ｆｌｏｒａｌ ｄｉｐ: ａ ｓｉｍｐｌｉfiｅｄ ｍｅ￣
ｔｈｏｄ ｆｏｒ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｊꎬ １９９８ꎬ １６ (６):
７３５－７４３.
[３２] 　 Ｌｕ Ｊꎬ Ｌｉ ＪＮꎬ Ｌｅｉ Ｂꎬ Ｗａｎｇ ＳＧꎬ Ｃｈａｉ ＹＲ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ
ＴＴＧ１ ｇｅｎｅｓ ｒｅｖｅａｌ ｇｅｎｕｓ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｒｅ￣
ｆｅｒｅｎｃｅꎬ ｅｘｔｒｅｍｅ ｐｒｏｔｅｉｎ￣ｌｅｖｅｌ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｆａｓｔ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｏｒｇａｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ[ Ｊ ] . Ｇｅｎｅｓ
Ｇｅｎｏｍꎬ ２００９ꎬ ３１(２): １２９－１４２.
[３３] 　 Ｚｈａｎｇ Ｆꎬ Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ａꎬ Ｚｈａｏ Ｍꎬ Ｐａｙｎｅ ＣＴꎬ Ｌｌｏｙｄ
Ａ. Ａ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｂＨＬＨ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
ｉｎ ａｌｌ ＴＴＧ１￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
[Ｊ] . Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ２００３ꎬ １３０(２０): ４８５９－４８６９.
[３４] 　 Ｙｕ ＬＨꎬ Ｇａｉｔａｔｚｅｓ Ｃꎬ Ｎｅｅｒ Ｅꎬ Ｓｍｉｔｈ ＴＦ. Ｔｈｉｒｔｙ￣ｐｌｕｓ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｆｒｏｍ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｍｏｔｉｆ[Ｊ] . Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｓｃｉꎬ ２０００ꎬ ９(１２): ２４７０－２４７６.
１８３　 第 ４期　 　 　 　 　 　 曹 婧等: 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的克隆、 表达分析及功能鉴定
[３５] 　 Ｌｉ Ｄꎬ Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｒ. ＷＤ￣ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ: ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎ￣
ｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ [ Ｊ] . Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉꎬ ２００１ꎬ ５８(１４): ２０８５－２０９７.
[３６] 　 Ｌａｒｋｉｎ ＪＣꎬ Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ ＤＧꎬ Ｌｌｏｙｄ Ａꎬ Ｐａｐａｒｏｚｚｉ
ＥＴꎬ Ｍａｒｋｓ ＭＤ. Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＧＬＡＢＲＯＵＳ１ ａｎｄ
ＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴ ＴＥＳＴＡ ＧＬＡＢＲＡ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉ￣
ｄｏｐｓｉｓ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ
１９９４ꎬ ６(８): １０６５－１０７６.
[３７] 　 Ｌｉ ＳＦꎬ Ｍｉｌｌｉｋｅｎ ＯＮꎬ Ｐｈａｍ Ｈꎬ Ｓｅｙｉｔ Ｒꎬ Ｎａｐｏｌｉ Ｒꎬ
Ｐｒｅｓｔｏｎ Ｊꎬ Ｋｏｌｔｕｎｏｗ ＡＭꎬ Ｐａｒｉｓｈａ ＲＷ. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉ￣
ｄｏｐｓｉｓ ＭＹＢ５ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｕｃｉ￣
ｌａｇｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓꎬ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ ａｎｄ ｔｒｉ￣
ｃｈｏｍｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００９ꎬ ２１
(１): ７２－８９.
[３８] 　 Ｓｚｙｍａｎｓｋｉ ＤＢꎬ Ｊｉｌｋ ＲＡꎬ Ｐｏｌｌｏｃｋ ＳＭꎬ Ｍａｒｋｓ ＭＤ.
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＧＬ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｌｅａｖｅｓ
ａｎｄ ｔｒｉｃｈｏｍｅｓ[Ｊ] . Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ １９９８ꎬ １２５(７):
１１６１－１１７１.
[３９] 　 Ｐａｙｎｅ Ｔꎬ Ｚｈａｎｇ Ｆꎬ Ｌｌｏｙｄ ＡＭ. ＧＬ３ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ
ｂＨＬＨ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＧＬ１ ａｎｄ
ＴＴＧ１[Ｊ] . Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２０００ꎬ １５６(３): １３４９－１３６２.
(责任编辑: 刘艳玲)
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２８３ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷