全 文 ：武汉植物学研究 2002, 20( 3) : 213～218
Journal of Wuhan Botanical Research
贯叶连翘总提取物对谷氨酸棒状杆菌和
粪产碱杆菌的抗菌作用
李　宏1, 2　邹国林1

( 1.武汉大学生命科学学院, 武汉　430072; 2.重庆教育学院生命科学与化学系, 重庆　400067)
摘　要: 报道了经光照和未经光照处理后贯叶连翘总提取物对谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌的作用, 结果表明,总
提取物对谷氨酸棒状杆菌有强烈的抑菌和杀菌作用,对粪产碱杆菌有抑菌作用;其抑菌或杀菌作用与其浓度有关,
且不需光照。
关键词: 贯叶连翘; 总提取物; 谷氨酸棒状杆菌; 粪产碱杆菌; 抗菌作用
　　中图分类号: Q946. 887　　　　　文献标识码: A　　　　　文章编号: 1000-470X ( 2002) 03-0213-06
Antibacterial Effect of the Total Extract of Hypericum perf oratum L.
on Corynebacterium glutamicum and Alcaligenes f aecalis
LI Hong
1, 2
, ZOU Guo-Lin
1*
( 1. Coll eg e of L if e S ci ences, W uhan Univ er si ty, Wuhan　430072, Chin a;
2. Dep artment of L if e S ci ence and Chemistry , Chongqing Coll eg e of E du cation, C hongqing　400067, China)
Abstract: This paper studied the effect o f the total ext ract of Hyper icum perf oratum L. on
Corynebacter ium glutamicum and A lcaligenes f aecal is w ith illumination and w ithout illuminat ion.
The r esult show ed that the total ex t ract had st rong bactericidal ef fect on Corynebacterium gluta-
micum and inhibitor y ef fect on Alcaligenes f aecali s and the ef fect depended on its concentrat ions
but w as independent o f illum inat ion.
Key words : Hyp ericum p erf oratum L. ; Total ext ract ; Corynebacterium glutamicum; Alcal igenes
f aecal is; Ant ibacterial effect
　　贯叶连翘 Hypericum perf oratum L. ( HPL )总
提取物有抗抑郁作用[ 1] ; 其成分金丝桃素( Hyper -
icin )经光照处理后有抗肿瘤及人免疫缺损病毒
( HIV)的作用 [ 2, 3]。欧美等国对此方面研究较多,但
对 HPL 抗菌作用的研究却寥寥无几。金丝桃素经光
照后虽有抗肿瘤作用,但无抗菌作用[ 4]。迄今为止,
尚无其总提取物 ( TEHPL )抗菌作用的报道。因
TEHPL 已用于临床治疗抑郁症[ 5] ,如果还能抗菌,
将会扩大其在临床上的应用范围。所以,笔者以谷氨
酸棒状杆菌为革兰氏阳性菌的代表,粪产碱杆菌为
革兰氏阴性菌的代表,研究了 TEHPL 的抗菌作用,
结果报道如下。
1　材料和方法
1. 1　材料
谷氨酸棒状杆菌( Corynebacterium glutamicum
AB97007 )、粪 产 碱 杆 菌 ( A lcaligenes f aecalis
AB95003)来源于武汉大学菌种保藏中心。培养基配
方: 水 1 000 mL, 蛋白胨 10 g , 牛肉膏 10 g , NaCl
5 g , 葡萄糖 1 g , pH 7. 2。1 000 mL 固体培养基, 加


收稿日期: 2001-10-09,修回日期: 2002-03-25。
作者简介: 李宏(1963- ) ,女,讲师,武汉大学生命科学学院硕士研究生,现从事生物化学方面研究。现在通讯地址:重庆教育学院, 400067。
通讯作者。Author for correspondence.
18 g 琼脂。53WB分光光度计(上海光学仪器厂)。
1. 2　TEHPL的制备
于花期采 HPL 植株顶端 25 cm 部分,干燥, 粉
碎。50 g HPL 用醇提取法提取: 95%乙醇作溶剂,于
索氏提取器中回流至乙醇无色 [ 6] , 每半天收集 1次
提取物并更换 1次溶剂, 合并提取物。室温减压除提
取物中乙醇和水, 至每隔 1 h 称量时重量减少小于
0. 1 mg 为止,得 3. 811 9 g 褐色膏状 TEHPL , 得率
7. 6% 。不同量T EHPL 分别溶于 40%乙醇, 配成浓
度分别为0. 1、1. 0和 10. 0 mg / mL 的TEHPL原液。
1. 3　TEHPL的抑菌及杀菌作用测定
1. 3. 1　处理设计
经检测,谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌对数期
培养物 OD 640 nm ( Opt ical Density ) 为 0. 2 时, 进行
T EHPL 处理,具体处理设计见表 1。
表 1　TEHPL对谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌的处理设计
Table 1　T reatm ent design o f the effects of T EHPL on Corynebacter ium glutamicum and A lcaligenes f aecalis
处理代号
Samples
TEHPL
浓度( mg / mL )
Concentrat ions
加入量 ( mL )
Volum e
谷氨酸棒状杆菌
( mL )
Corynebacterium
glutamicum
粪产碱杆菌
( mL )
A lcaligenes
f aecalis
40%乙醇
( mL )
40% Ethano l
液体培养基
( m L )
L iquid
medium
GH0. 1 0. 1 8 132
GH1. 0 1. 0 8 132
GH10. 0 10. 0 8 132
GCK溶 132 8
GCK空 132 8
FH0. 1 0. 1 8 132
FH1. 0 1. 0 8 132
FH10. 0 10. 0 8 132
FCK溶 132 8
FCK空 132 8
　　2种菌培养物经 TEHPL 处理后, 于 4℃ 静置
1 h以便 T EHPL 进入细菌细胞。为探讨光照对
TEHPL 抑菌作用的影响程度, 本实验对上述处理
后的混合物等分为 2, 并分别进行光照和不光照处
理。光照处理: 37℃水浴下, 180W 光照 1 h; 不光照
处理: 37℃黑暗恒温箱中静置 1 h。
所有处理均重复 2 次, 在 37℃黑暗摇床上
( 150 r/ m in ) 培养 24 h, 其间每隔 2 h 检测 1 次
OD640 nm, 每隔 4 h 观察 1 次活菌数 CFU ( Colony
Fo rming U nit ) , 并在培养 4 h和 24 h 时检测总菌数
TCC( T otal Cell Count )。
1. 3. 2　TEHPL 的抑菌及杀菌作用参数的检测方
法
OD640 nm检测: 每隔 2 h 取样在 640 nm 波长处
检测 OD 值, 分别用含相同浓度 TEHPL 原液、40%
乙醇的液体培养基或纯液体培养基作空白对照,最
后求出 2个重复样品的平均 OD 640 nm值。
CFU检测: 10倍稀释法。每个样品取稀释度为
10- 3、10- 4、10- 5、10- 6、10- 7菌悬液 0. 1 mL 于培养
皿中,倒入 45℃的固体培养基, 混匀, 静置, 凝固后
倒置, 37℃培养 48 h。每个稀释度做 3个重复, 计数
CFU, 取 CFU 在 30～300的平板求出各样品 CFU
平均值。
TCC 检测: 美蓝染液[ 7] 离心 ( 5 000 r / min )
20 m in取上清液, 以消除未溶的染料颗粒在 TCC 检
测中的干扰。每个样品取稀释度为 10- 3、10- 4、10- 5
菌悬液 2 mL 于试管中, 沸水浴加热 10 min杀死细
菌。各取 0. 1 mL 上述已加热的菌悬液于不同试管
中, 分别加 0. 9 mL 美蓝上清液混匀。染色 10 m in
后,取此混合菌液于血球计数板中,将此血球计数板
于垫湿滤纸的加盖白瓷盘中静置 20 m in 后计数
T CC。每个稀释度重复计数3次, 求出各样品平均
T CC值。
MBC ( Minimum Bactericidal Concentration )
检测:参照刘健等的试管 2倍稀释法 [ 8]稍加改进, 把
一系列浓度(见表 4)的 TEHPL 原液 50
L 分别加
入盛 0. 95 mL 谷氨酸棒状杆菌或粪产碱杆菌培养
物( OD 640 nm= 0. 2)的试管中,与此同时,分别做 2种
菌的溶剂对照和空白对照。按处理设计进行光照和
不光照处理,每种处理做 2组重复。将所有试管置黑
暗摇床上( 150 r/ m in) 37℃培养 24 h,取 50
L 培养
液涂布于不含 TEHPL 的固体培养基平板上培养
48 h,无细菌生长的平板所对应的最低 TEHPL 浓
214 武 汉 植 物 学 研 究　　　　　　　　　　　　　　　　第 20 卷　　
度即为最低杀菌浓度( M BC, mg / mL)。
2　结果与分析
2. 1　TEHPL处理谷氨酸棒状杆菌、粪产碱杆菌后
的 OD640 nm值
TEHPL 处理谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌
后,分别进行光照和不光照处理,且每隔 2 h 检测一
次 OD640 nm值,结果见图 1～图 4。
图 1　TEHPL处理谷氨酸棒状杆菌后的 OD值(光照)
Fig. 1　OD values of Corynebacter ium glutamicum
samples containing TEHPL at differ ent concentr ations
w ith illumination
图 2　TEHPL处理谷氨酸棒状杆菌后的 OD 值(不光照)
Fig. 2　OD values of Corynebacter ium glutamicum
samples containing TEHPL at differ ent concentr ations
w ithout illuminat ion
图 3　TEHPL处理粪产碱杆菌后的 OD值(光照)
Fig. 3　OD va lues of A lcaligenes f aecalis
samples containing TEHPL at differ ent concentr ations
w ith illumination
图 4　TEHPL处理粪产碱杆菌后的 OD值(不光照)
Fig. 4　OD va lues of A lcaligenes f aecalis samples
containing TEHPL at differ ent concent rations
without illumination
从图 1～图 4可以看出, 2种供试细菌均以只加
入液体培养基的空白对照( CK空 )生长最好, 加入
40%乙醇的溶剂对照( CK溶)对生长略有影响。而用
T EHPL 的 3个浓度处理 2 种供试菌,不同时段检
测OD640 nm值,均小于CK空和 CK溶,说明T EHPL 对
2种供试菌均有抑制作用, 以高浓度的抑制作用更
强;从光照与否对 TEHPL 的抑菌活性看,不光照的
抑菌活性更强。
2. 2　TEHPL处理谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌
后的 CFU检测
对T EHPL 处理过的谷氨酸棒状杆菌和粪产碱
杆菌,每隔 4 h 取样 1 次, 经 10 倍稀释法稀释后于
固体培养基上培养 48 h,然后检测 CFU ,结果见表 2
和表 3。
从表 2和表 3可见, 2种供试菌在正常培养基
中均比在加入了乙醇的培养基中生长更好( n1/ n0>
1) , T EHPL 有抑菌作用( n2 / n0< 1、n3 / n0< 1、n4 / n0
< 1) ,且其浓度越高,抑菌作用越强( n3/ n2< 1、n4 / n3
< 1)。这些结果与图 1～图 4的结果一致。此外, 无
论光照与否, GH10. 0的 CFU/ mL 以及它与 CK溶 的
比值分别在培养至 8 h 和 12 h时降至零, 而 FH10. 0
的相应值在 24 h 后未降至零, 说明高浓度 T EHPL
对谷氨酸棒状杆菌有杀菌作用,但对粪产碱杆菌有
抑菌而无杀菌作用。并且光照降低了 T EHPL 的抑
杀作用。
215　第 3 期　　　　　　　　　李 宏等: 贯叶连翘总提取物对谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌的抗菌作用
表 2　TEHPL处理谷氨酸棒状杆菌后的 CFU
Table 2　CFU of Corynebacter ium glutamicum samples t reat ed w ith
the tota l ex tr act of Hyp er icum perf oratum L . ( T EHPL )
取样时间
T ime
光照与否
I llum ination o r da rk
GCK溶 ( n0) GCK空( n1) n1/ n0 GH 0. 1( n2) n2/ n0 GH1. 0( n3) n3/ no GH 10. 0( n4) n4/ no n3/ n2 n4/ n3
4 h 光照 I llum ination 1. 97×108 2. 88×108 1. 462 2. 18×107 0. 111 1. 51×107 0. 077 1. 70×104 0 0. 693 0. 001
不光照 Dark 2. 02×108 2. 62×108 1. 297 2. 04×107 0. 101 1. 03×107 0. 051 4. 00×103 0 0. 505 0
8 h 光照 I llum ination 2. 42×108 3. 89×108 1. 607 4. 33×107 0. 179 8. 23×106 0. 034 2. 07×103 0 0. 190 0
不光照 Dark 2. 33×108 3. 04×108 1. 305 1. 95×107 0. 084 6. 86×106 0. 029 0 0 0. 352 0
12 h 光照 I llum ination 4. 01×108 5. 33×108 1. 330 8. 17×107 0. 204 7. 13×106 0. 018 0 0 0. 087 0
不光照 Dark 4. 30×108 6. 56×108 1. 526 1. 81×107 0. 042 5. 81×106 0. 014 0 0 0. 321 0
16 h 光照 I llum ination 4. 44×108 6. 80×108 1. 532 9. 03×107 0. 203 6. 74×106 0. 015 0 0 0. 075 0
不光照 Dark 4. 51×108 7. 71×108 1. 710 1. 07×107 0. 024 4. 09×106 0. 009 0 0 0. 382 0
20 h 光照 I llum ination 4. 24×108 8. 43×108 1. 988 1. 36×108 0. 321 5. 20×106 0. 012 0 0 0. 038 0
不光照 Dark 5. 15×108 8. 66×108 1. 682 8. 32×106 0. 016 3. 61×106 0. 007 0 0 0. 434 0
24 h 光照 I llum ination 3. 90×108 8. 39×108 2. 151 1. 74×108 0. 446 3. 88×107 0. 099 0 0 0. 223 0
不光照 Dark 4. 19×108 8. 15×108 1. 945 3. 70×107 0. 088 2. 27×106 0. 005 0 0 0. 061 0
表 3　TEHPL处理粪产碱杆菌后的 CFU
Table 3　CFU of A lcaligenes f aecalis samples t reated w ith
the tota l ex tr act of Hyp er icum perf oratum L . ( T EHPL )
取样时间
T ime
光照与否
I llum ination o r da rk
FCK溶( n0) FCK空 ( n1) n1/ n0 FH0. 1( n2) n2/ n0 FH 1. 0( n3) n3/ no FH10. 0( n4) n4/ no n3/ n2 n4/ n3
4 h 光照 I llum ination 1. 20×106 1. 66×106 1. 383 8. 00×105 0. 667 5. 50×105 0. 458 2. 22×105 0. 185 0. 688 0. 404
不光照 Dark 1. 30×106 1. 90×106 1. 462 7. 31×105 0. 562 4. 73×105 0. 364 2. 03×105 0. 156 0. 647 0. 429
8 h 光照 I llum ination 2. 43×107 5. 00×107 2. 058 4. 00×106 0. 165 2. 51×106 0. 103 1. 86×105 0. 008 0. 628 0. 074
不光照 Dark 2. 86×107 5. 37×107 1. 878 6. 66×105 0. 233 4. 50×105 0. 016 1. 79×105 0. 006 0. 676 0. 398
12 h 光照 I llum ination 3. 16×107 9. 30×107 2. 943 7. 50×106 0. 237 3. 67×106 0. 116 1. 74×105 0. 006 0. 489 0. 047
不光照 Dark 3. 40×107 9. 15×107 2. 691 4. 00×105 0. 012 3. 21×105 0. 009 1. 58×105 0. 005 0. 803 0. 492
16 h 光照 I llum ination 3. 44×107 1. 16×108 3. 372 1. 20×107 0. 349 9. 30×106 0. 270 1. 40×105 0. 004 0. 775 0. 015
不光照 Dark 5. 01×107 1. 38×108 2. 754 9. 51×105 0. 019 8. 11×105 0. 016 1. 31×105 0. 003 0. 853 0. 162
20 h 光照 I llum ination 5. 83×107 1. 10×108 1. 887 3. 60×107 0. 618 1. 12×107 0. 192 1. 26×105 0. 002 0. 311 0. 011
不光照 Dark 7. 50×107 1. 15×108 1. 533 1. 63×106 0. 022 9. 15×105 0. 012 9. 90×104 0. 001 0. 561 0. 108
24 h 光照 I llum ination 5. 39×107 9. 97×107 1. 850 3. 10×107 0. 575 1. 41×107 0. 262 1. 10×105 0. 002 0. 455 0. 008
不光照 Dark 7. 17×107 1. 04×108 1. 450 3. 30×106 0. 046 1. 58×106 0. 022 8. 85×104 0. 001 0. 479 0. 056
2. 3　培养 4 h、24 h 时谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆
菌的TCC
结果见图 5和图 6。由图可见, 无论是否光照,
在培养至 24 h 时,样品 GH 0. 1、GH1. 0和 FH 0. 1、FH1. 0
的 T CC 均增加, 但分别小于 GCK溶、FCK溶的相应
T CC; GH10. 0的 T CC 几乎下降至零; FH10. 0的 TCC
只略有下降。说明低浓度 TEHPL 对 2种菌均有抑
制作用,而高浓度 T EHPL 对粪产碱杆菌有较强抑
菌作用,对谷氨酸棒状杆菌有杀菌作用。
216 武 汉 植 物 学 研 究　　　　　　　　　　　　　　　　第 20 卷　　
A. 光照处理, 培养 4 h; B. 不光照处理,培养 4 h; C. 光照处
理, 培养 24 h; D. 不光照处理,培养 24 h
A . 4 h after incubation w ith illuminat ion; B. 4 h aft er incuba-
tion without illumination; C. 24 h after incuba tion w it h illu-
mination; D . 24 h after incubation without illumination
图 5　谷氨酸棒状杆菌各样品的 TCC
Fig. 5　TCC o f all the samples of Corynebacterium glutamicum
A. 光照处理,培养 4 h; B.不光照处理, 培养 4 h; C. 光照处
理,培养 24 h; D .不光照处理, 培养 24 h
A . 4 h a fter incubat ion with illumination; B. 4 h after incuba-
tion w ithout illuminat ion; C. 24 h after incubation w ith illu-
minat ion; D. 24 h after incubat ion w ithout illumination
图 6　粪产碱杆菌各样品的 TCC
Fig. 6　TCC o f all the samples of A lcalig enes f aecalis
　
表 4　MBC检测结果
T able 4　Result o f MBC measur ement
细菌菌株
Bacterial str ains
TEHPL 　　原液浓度( mg / mL )
Concentr ations o f TEHPL stock solutions
1. 0 1. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 4. 0 4. 5 5. 0 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7. 5 8. 0 8. 5 9. 0 9. 5 10. 0 10. 5 11. 0 11. 5 12. 0 12. 5 13. 0 13. 5 14. 0 14. 5 15. 0
对 照
Contr ols
CK溶 CK空
谷氨酸棒状杆菌(光照处理)
Corynebacterium glutamicum
( Illumina tion)
谷氨酸棒状杆菌(未经光照处理)
Corynebacterium glutamicum
( Dark)
粪产碱杆菌(光照处理 )
Alcaligenes faecal is
( Illumina tion)
粪产碱杆菌(未经光照处理)
Corynebacterium glutamicum
( Dark)
+ + + + + + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
+ + + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ +
+ +
+ +
+ +
　注: + 表示经培养后试管中有存活的细菌; - 表示经培养后试管中无存活的细菌。
　Notes : + Means there w ere survival bacterial cells in the test tub es after in cubat ion. - Mean s th ere w ere not any
su rvival bacterial cell s in th e tes t tubes af ter incubation .
2. 4　MBC检测结果
从表 4 可知, 光照处理后 T EHPL 抗谷氨酸棒
状杆菌的 MBC 是 0. 225 mg / mL, 未经光照处理的
是 0. 150 mg / mL, 但在 T EHPL 原液浓度高达
15. 0 mg/ mL 的试管中仍有存活的粪产碱杆菌, 说
明 T EHPL 对前者不必光照也具有杀菌作用,而对
后者只有抑菌作用,该结果与前面的结果是一致的。
3　讨论
样品GH0. 1 (或 FH0. 1 )、GH1. 0 (或 FH1. 0 )、GH10. 0
(或 FH 10. 0 ) 中 T EHPL 的实际终浓度分别只有
0. 005 7 、0. 057 1、0. 571 4 mg/ mL, 前 2 种浓度在
OD 640 nm检测、CFU 检测和 T CC 检测中对谷氨酸棒
状杆菌有抑菌作用, 后一浓度有杀菌作用, 这与
T EHPL 对该菌的 MBC 分别是 0. 225 mg / mL 和
0. 150 mg/ mL 的结果一致;这 3种浓度在前 3项检
测中对粪产碱杆菌仅表现抑制作用, 与 MBC 检测
中 T EHPL 高达 15. 0 mg / mL 也不杀菌的结果一
致。各项检测均表明 T EHPL 对谷氨酸棒状杆菌的
抑杀作用依赖于其浓度且不需光照; 它对粪产碱杆
菌虽无杀菌作用,但有抑菌作用,其作用强弱也与浓
度有关,不需光照。
由于 HPL 中的金丝桃素的抗肿瘤和抗病毒(包
括 HIV )作用依赖于光照条件[ 2, 9, 10] , 而金丝桃素受
217　第 3 期　　　　　　　　　李 宏等: 贯叶连翘总提取物对谷氨酸棒状杆菌和粪产碱杆菌的抗菌作用
强光照射易引起光敏性皮炎(光敏化副作用) [ 11] ,这
一副作用限制了其抗肿瘤、抗病毒作用在临床上的
应用。虽然研究人员进行了大量研究欲消除这一副
作用,但迄今为止尚未取得突破性进展。所以光敏化
副作用使其抗多种肿瘤和病毒的作用一直停留在研
究阶段。但因T EHPL 的抗抑郁作用不需光照处理,
所以避免了其中金丝桃素引起的这一副作用,在临
床上得到了广泛应用[ 12]。例如, 德国每日处方在
1996年 1年中就开出 131. 5百万剂 T EHPL 用于
治疗轻度到中度抑郁症[ 13] ,表明 T EHPL 在临床上
应用的安全性已得到认可。而本实验中发现 T EH-
PL 具有抗菌作用且不必光照,因此用于临床作抗菌
药对人体既是安全的, 又可避免光敏化副作用, 还可
控制病人因细菌感染可能引起的抑郁症状, 具有较
好的临床应用价值。
我国有着丰富的 HPL 资源,如果能将其开发成
抗菌和抗抑郁药物,既可有效利用植物资源,对人民
健康事业做出一份贡献,还能带来较大的经济效益。
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