全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2010, 36(12): 2062−2072 http://www.chinacrops.org/zwxb/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn
本研究由国家重点基础研究发展计划 (973计划 )项目 (2006CB1017, 2009CB1184, 2010CB1259), 国家高技术研究发展计划 (863计划 )项目
(2006AA1001, 2009AA1011), 国家自然科学基金项目(30671266), 国家科技支撑计划项目(2006BAD13B05-7), 高等学校创新引智计划项目
(B08025), 国家重点实验室开放基金项目(ZW2009005), 江苏博士后科研计划项目(0901045C), 江西科技支撑计划项目(2009BNB06700)和江西
教育科技项目(GJJ10672)和江西农业科技项目(Ny0901)资助。
*
通讯作者(Corresponding author): 盖钧镒, E-mail: sri@njau.edu.cn, Tel: 025-84395405
第一作者联系方式: E-mail: celuck@163.com
Received(收稿日期): 2010-03-04; Accepted(接受日期): 2010-08-04.
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2010.02062
大豆异黄酮组分 HPLC 快速分析技术及其在豆腐加工中的应用
王春娥 1,2 赵团结 1 盖钧镒 1,*
1 南京农业大学大豆研究所 / 国家大豆改良中心 / 作物遗传与种质创新国家重点实验室, 江苏南京 210095; 2 九江学院生命科学学
院, 江西九江 332000
摘 要: 大豆异黄酮育种与大豆制品加工研究需要进行大批量样品 12种异黄酮组分的快速定量分析。在前人研究基
础上利用 Agilent 1100高效液相色谱(HPLC)系统, 以大豆品种南农 95C-13为材料, 研究大豆苷元、大豆苷、乙酰基
大豆苷、丙二酰基大豆苷、染料木苷元、染料木苷、乙酰基染料木苷、丙二酰基染料木苷、黄豆苷元、黄豆苷、乙
酰基黄豆苷、丙二酰基黄豆苷等 12 种标准品外标法快速定量技术。从样品制备与色谱条件对分析 12 种异黄酮组分
的准确度和分离度入手, 确定分析流程, 以(科丰 1 号×南农 1138-2)的 184 个重组自交系(NJRIKY)为材料, 研究豆腐
加工中总量和各组分的变化特点。(1)样品以 80%甲醇水溶液 50℃超声 1 h提取; 色谱条件为, 检测波长 254 nm, 柱
温 36℃, 流速 2.0 mL min–1, 进样量 10 μL, 流动相 0.1%(V/V)乙酸水溶液(A)和 100%甲醇(B), 0~2 min, 27% B
(V/V)→2~3 min, 27%~38% B→3~10 min, 38% B→10~12 min, 38%~39% B→12~14 min, 39% B→14~15 min, 39~27% B
梯度洗脱; 在 15 min 内将 12 个组分良好分离, 各组分峰面积与其相应浓度均呈良好线性关系(R2为 0.9976~0.9999);
加标回收率均大于 99%, 变异系数低于 2%。(2)NJRIKY群体籽粒、豆乳、豆腐异黄酮总量和组分的大量分析验证了
HPLC 快速技术的效果。籽粒异黄酮总含量(3 695.00 μg g–1)在豆乳加工中平均 85.15%转入豆乳(3 146.12 μg g–1),
14.85% (548.88 μg g–1)进入豆渣。传统豆腐加工通过硫酸钙絮凝, 只有 17.32% (639.89 μg g–1)转入豆腐, 67.83%
(2 506.23 μg g–1)留在黄浆水中。豆乳中 12种组分含量比籽粒中稍低, 均以丙酰基染料木苷含量最高; 而豆腐中乙酰
基染料木苷和乙酰基黄豆苷缺失, 以染料木苷元与大豆苷元含量较高。大豆科丰 1号与南农 1138-2杂交重组后家系
间的异黄酮遗传变异增大, 增加了对其遗传改良的潜力。
关键词: 大豆; 异黄酮组分; 高效液相色谱(HPLC); 梯度洗脱; 豆乳; 豆腐
Establishment of A Rapid HPLC Method for Quantifying Isoflavone
Components and Its Application in Tofu Processing
WANG Chun-E, ZHAO Tuan-Jie, and GAI Jun-Yi*
1 Soybean Research Institute, Nanjing Agricultural University / National Center for Soybean Improvement / National Key Laboratory for Crop Genet-
ics and Germplasm Enhancement, Nanjing 210095, China; 2 College of Life Science, Jiujiang University, Jiujiang 332000, China
Abstract: A rapid, precise, and stable quantifying method of isoflavone components is the key to quality soy–food processing and
genetic improvement of quality soybeans. A quick procedure used Agilent 1100 high performance liquid chromatograph (HPLC)
system with the diode array detection (DAD) and Zorbax SB-C18 packed column (5 μm, 4.6 ID × 150 mm) using external stan-
dards of isoflavone components, including daidzein, daidzin, 6”-O-acetyldaidzin, 6”-O-malonyldaidzin, genistein, genistin,
6”-O-acetylgenistin, 6”-O-malonylgenistin, glycitein, glycitin, 6”-O-acetylglycitin and 6”-O-malonylglycitin was established for
measuring the 12 isoflavones in soybean seeds and its processing products. The procedure includes the following key points: 80%
methanol aqueous solution under ultrasonication for 1 h at 50℃ was chosen; for separation of the 12 isoflavone components
within 15 min, the mobile phase of 0.1% acetic acid (V/V) aqueous solvent A and 100% methanol solvent B with the flow rate of
第 12期 王春娥等: 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用 2063
2.0 mL min–1, injection volume at 10 μL, column temperature at 36℃ and detection wavelength at 254 nm were selected; and the
linear gradient extraction of 0–2 min, 27% B (V/V)→2−3 min, 27−38% B→3–10 min, 38% B→10–12 min, 38–39% B→12–14
min, 39% B→14–15 min, 39%–27% B was adopted. The procedure was linear (R2 = 0.9976–0.9999), precise (CV or RSD ranged
from 0.90% to 3.35% for 2 232 samples from NJRIKY), accurate [recoveries were more than 99.00% for the different concentra-
tions of the 12 isoflavones (CV of 0.22%–1.40%)], robust (inter-day CV of 0.24%–3.95%) and rapid (less than 15 min for 12
isoflavones resolved). The procedure was verified to be effective by a large sample determination of isoflavone components in
soybean seed, soymilk and tofu using the soybean population of NJRIKY. The data indicated that the isoflavones were 3 695.00
μg g–1 in seed, among them 14.85% (548.88 μg g–1) were transferred to the residual, 85.15% (3 146.12 μg g–1) to soymilk, but
only 17.32% (639.89 μg g–1) to tofu while 67.83% (2 506.23 μg g–1) to whey under the traditional tofu processing with CaSO4 as
coagulant. The 12 isoflavone components in soymilk was somewhat less than those in seeds with 6”-O-Malonylgenistin the high-
est in the both, while in tofu 6”-O-Acetylgenistin and 6”-O-Acetylglycitin were deficient but with high contents of genistein and
daidzein. In addition, there was an enlarged genetic variation of the 12 isoflavone components among the lines, indicating the
increased genetic potential for quality improvement due to recombination between Kefeng 1 and Nannong 1138-2.
Keywords: Soybean; Isoflavone component; High performance liquid chromatograph (HPLC); Gradient elution; Soymilk; Tofu
大豆异黄酮是重要的植物保护素 , 由大豆苷
元、大豆苷、乙酰基大豆苷、丙二酰基大豆苷、染
料木苷元、染料木苷、乙酰基染料木苷、丙二酰基
染料木苷、黄豆苷元、黄豆苷、乙酰基黄豆苷和丙
二酰基黄豆苷等 12种组分组成, 是大豆及其制品的
重要保健成分。越来越多的研究表明大豆异黄酮具
有降低胆固醇含量、预防前列腺癌与乳腺癌及骨质
疏松、减轻更年期综合症等生物功效[1-7]。但不同组
分其功效有差异[4-7], 近期报道认为黄豆苷类成分的
功效更好[5-6]。因此大豆及其制品中异黄酮组分的准
确测定是大豆品质育种及大豆制品加工业的基础之
一。
已报道的大豆异黄酮定量分析技术主要有高效
液相色谱法 [8-20](high performance liquid chromato-
graph, HPLC)与液-质联用法[21-22](HPLC-MS)。后者
具有高分离、高分辨能力、高灵敏度等优点, 但仪
器费用高, 不便于大批量样品测定。前者具有分离
效果好、重现性好、准确度高、分析速度快、自动
化程度高等优点, 被广泛采用。但目前多数文献报
道 HPLC 分析技术仅可测得部分异黄酮 [9-15], 而
且异黄酮提取基本是在较高温度 [11-16]和较强酸
度[9,11,14-16]下进行, 致使丙二酰型异黄酮在提取时遭
到破坏, 不能得到其真实含量。Wang等[8]、Jackson
等[19]和孙君明等[20]利用 HPLC 常规技术测定 12 种
异黄酮组分, 但样品异黄酮提取时间(>120 min)与
色谱检测时间(>60 min)均较长; Rostagno等[18]建立
利用整体色谱柱(monolithic columns) HPLC 技术可
在 10 min内使 12种异黄酮分离, 但目前其柱效稳定
性还未确定, 不仅价格昂贵, 且难购买。大豆异黄酮
育种和豆制品加工业需要对大批量的大豆种质及加
工产品进行异黄酮 12种组分快速、准确的定量分析。
理想的测定技术要求提取充分、分离快、结果准确、
重复性好、成本低。已报道的大豆异黄酮 12种组分同
时准确测定程序复杂[8,21], 周期长[20], 成本高[18,21-22],
难以实现大批量样品快速定量检测。
因为异黄酮的保健功能, 国际上商品豆腐包装
均标注有豆腐中异黄酮的含量, 以表明豆腐的营养
囯保健品质。中国是传统豆制食品的加工与消费大 ,
商品豆腐的品质评价还主要集中在口感与色度上 ,
迄今还没有对其内含营养成分大豆异黄酮进行标识,
大豆异黄酮研究也还集中在部分豆制品样品含量的
检测上, 也未见高含异黄酮豆腐加工专用品种的报
道。因此, 查明豆腐加工中异黄酮总量和组分的动
向, 对改进豆腐加工技术、遗传改良加工专用品种,
实现我国豆腐类食品大豆异黄酮含量标识化具有实
际意义。
本研究在前人研究基础上 , 采用常规色谱柱
(packed columns) (Zorbax SB-C18柱, 5 μm, 4.6 ID×
150 mm) HPLC分析技术, 改进样品制备(即样品中
异黄酮的提取或样品预处理或前处理)方式, 优化色
谱条件 , 缩短检测时间 , 降低分析成本 , 建立适于
大批量样品 12种异黄酮组分定量分析流程。在此基
础上利用科丰 1 号×南农 1138-2 衍生的重组自交系
群体(NJRIKY)研究其豆乳和豆腐加工前后 12种异黄
酮组分的变化, 为大豆异黄酮育种与豆制品加工技
术的改进提供依据。
1 材料与方法
1.1 供试材料与田间试验
异黄酮 HPLC分析技术改进所用的试验材料为南
农 95C-13, 取自 2004年的一项资源的随机区组试验。
豆腐加工前后异黄酮组分变化研究所用材料为
科丰 1 号×南农 1138-2 衍生的 184 个重组自交家系
(NJRIKY)及其亲本。该组材料遗传基础控制在 2个
2064 作 物 学 报 第 36卷
亲本而又有充分的重组变异, 家系和群体都是良好
的试材。2004 和 2005 年连续 2 年夏季在国家大豆
改良中心试验站种植 , 完全随机区组设计 , 3 次
(2004年)或 4次(2005年)重复, 3行区, 行长 2 m, 行
距 0.5 m, 条播。重复间田间表现相对一致, 故取其
中一次重复的种子进行分析。
1.2 主要仪器与试剂
Agilent 1100 型高效液相色谱系统 (Agilent
Technologies, USA)(包括四元泵(G1311A)、在线真空
脱气机(G1322A)、DAD 检测器(G1315B)、柱温箱
(G1316A)、自动进样器(G1313A))、Zorbax SB-C18
柱(5 μm, 4.6 ID× 150 mm) (Agilent Technologies,
USA)、1.5 mL 色谱自动进样小瓶 (Agilent Tech-
nologies, USA)、Milli-Q 超纯水系统 (Millipore,
USA)、离心机 (BECKMAN Coulter Avanti J-25I,
USA)、KQ-300DB型数控超声波清洗器(中国昆山市
超声仪器有限公司)、多头控温搅拌器(江苏省金坛市
环宇科学仪器厂, 30 磁头)、分析天平(Sartorius BS
2000S, Germany)、有机相针式滤器(13 mm × 0.45
μm)(ANPEL, 中国上海)、移液器(GILSON S.A.S.,
France)。
甲醇(HPLC 级, Merck, Germany)、乙酸(HPLC
级, TEDIA, USA)、超纯水(Milli-Q纯水系统)。标准
品来源与含量见表 1。
1.3 标准储备液与混合标准溶液的配制
1.3.1 标准储备液 以少量甲醇分别将上述 12
个标准品溶解, 转至 12个 10 mL容量瓶, 甲醇定容,
–20℃保存备用。
1.3.2 混合标准溶液 取 12种单标储备液各 1 mL
于 25 mL容量瓶, 以甲醇定容, –20℃保存备用。
1.4 样品制备
准确称取经 FOSS样品磨 50 s磨碎的大豆南农
95C-13、NJRIKY籽粒干豆粉 0.10 g (另取 0.10 g于
铝盒置 125℃烘箱烘至恒重测定含水量 , 湿豆腐
1.00 g、生豆乳 2.0 mL[23]), 置 15 mL离心管, 以 80%
甲醇溶液定容至 10 mL (料液比 1∶100), 于 50℃超
声(频率 40 kHz, 功率 300 W)辅助提取 1 h, 经
14 800 × g离心 10 min, 取上清液约 1 mL过 0.45 μm
滤膜(有机相针式滤器)注入 Agilent自动进样专用小
瓶(1.5 mL), –20℃保存待上机检测。
1.5 色谱条件
色谱柱为 Aglient Zorbax SB-C18 柱(4.6 mm
ID×150 mm, 5 μm); 柱温 36℃; 进样量 10 μL; 流动
相为 0.1% (V/V)乙酸水溶液(A)和 100%甲醇(B); 流
速 2 mL min–1; 以 0~2 min 27% B (V/V), 2~3 min
27%~38% B, 3~10 min 38% B, 10~12 min 38%~39%
B, 12~14 min 39% B, 14~15 min 39%~27% B梯度洗
脱; 柱后 3 min (样品洗脱分离后让流动相 A和 B按
起始浓度运行冲洗色谱柱 3 min, 以备检测下一个样
品); 检测波长为 254 nm (DAD)。
1.6 大豆异黄酮 12种组分鉴定指标
以每 1 g干大豆籽粒中或 1 g干大豆籽粒加工产
品中异黄酮的量为鉴定指标(单位为 μg g–1)。异黄酮
总含量或异黄酮含量(TISF 或 ISF)指大豆异黄酮 12
种组分的总和。豆渣异黄酮含量=籽粒异黄酮含量－
豆乳异黄酮含量 , 黄浆水异黄酮含量=豆乳异黄酮
表 1 大豆异黄酮 12 种组分的标准样品
Table 1 Name and standards of 12 isoflavone components
异黄酮组分
Isoflavone component
代号
Code
标准样品来源与含量
Source and content of standards
大豆苷元 Daidzein De Fluka, Sigma-Aldrich Co. USA, ≥98%
大豆苷 Daidzin D Fluka, Sigma-Aldrich Co. USA, ≥95%
乙酰基大豆苷 6”-O-Acetyldaidzin AD FUJICCO, Japan, ≥90%
丙二酰基大豆苷 6”-O-Malonyldaidzin MD FUJICCO, Japan, ≥90%
染料木苷元 Genistein Ge Sigma, Sigma-Aldrich Co. USA, ≥98%
染料木苷 Genistin G Fluka, Sigma-Aldrich Co. USA, ≥99%
乙酰基染料木苷 6”-O-Acetylgenistin AG FUJICCO, Japan, ≥90%
丙二酰基染料木苷 6”-O-Malonylgenistin MG FUJICCO, Japan, ≥90%
黄豆苷元 Glycitein GLe Sigma, Sigma-Aldrich Co. USA, ≥97%
黄豆苷 Glycitin GL FUJICCO, Japan, ≥95%
乙酰基黄豆苷 6”-O-Acetylglycitin AGL FUJICCO, Japan, ≥90%
丙二酰基黄豆苷 6”-O-Malonylglycitin MGL FUJICCO, Japan, ≥90%
第 12期 王春娥等: 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用 2065
含量－豆腐异黄酮含量。以下试验样品制备、色谱
条件与鉴定指标无说明时均与上同。
1.7 HPLC分析技术的试验设计
试验 1为样品前处理, 以大豆南农 95C-13籽粒
干豆粉为试样, 设置 12 个处理即 80%甲醇/水分别
室温振荡提取 30 min (处理 T1, 以下类推)、60 min
(T2)与 90 min (T3); 室温超声 30 min (T4)、60 min
(T5)与 90 min (T6); 50℃超声 30 min (T7)、60 min (T8)
和 90 min (T9)与 80 ℃超声 30 min (T10)、60 min
(T11)和 90 min (T12), 用于测定提取对各种大豆异
黄酮提取含量的影响。试验重复 3次。
试验 2 为流动相的确定, 以混合标准溶液为试
样, 设计 8 种不同流动相对大豆异黄酮分离程度的
影响,分别为(1)水(A)、80%甲醇/水(B); (2)水(A)、80%
乙醇/水(B); (3) 0.1%醋酸/水(A)、80%甲醇/水(B);
(4)0.1%醋酸/水(A)、80%乙醇/水(B); (5)水(A)、100%
甲醇(B); (6)水(A)、100%乙醇(B); (7)0.1%醋酸/水
(A)、100%甲醇(B); (8) 0.1%醋酸 /水(A)、100%乙
醇(B)。
试验 3 为柱温, 以混合标准溶液为试样, 比较
柱温分别为室温、24、26、30、32、34、36、38、
40、42、44、46、48、50、52、54和 56℃对异黄酮
12种组分分离程度的影响。
试验 4 为洗脱梯度, 试验 21 种(略)洗脱方式对
异黄酮 12个组分分离程度的影响。
试验 5 为准确度, 分别以 4 种不同的混合标样
(方案见表 5 的“加入量”)加入南农 95C-13 试样中,
比较其回收率, 确定提取的准确度。试验重复 3次。
试验 6 为精确度与稳定性 , 以大豆品种南农
95C-13籽粒干豆粉为试样, 测定大豆异黄酮 12个组
分日内 5次重复(重复间间隔 4 h)、连续 3日间(每日
重复 3次的均值间, 重复间间隔 4 h)稳定性。
试验 7 以 NJRIKY 家系及其亲本 2004 年和
2005年籽粒与其加工产品为材料, 检测 12种异黄酮
组分, 考察优化后 HPLC 分析方法的精确性, 分析
豆乳和豆腐加工前后异黄酮组分的变化。试验重复
2次。
1.8 数据分析
(1) 应用 ChemStation Rev. A. 08.03软件, 依据
12种异黄酮标准样品的洗脱时间和最大吸收光谱定
性, 以在 DAD 254 nm波长的吸收光谱下吸收值为
基础, 根据标准曲线计算样品中的各个异黄酮组分
的准确含量。
(2) 参考《试验统计方法》 [24], 采用 SAS 9.0
MEANS程序进行联合统计分析, CORR程序进行相
关分析。
2 结果与分析
2.1 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析流程的建立
2.1.1 提取条件的比较和选择 文献报道的异黄
酮提取方法较多, 主要为在高温[11-16]或室温[20]下的
酸[8-9,11,14-16,20]提取、搅拌振荡下的盐酸乙腈[8-9]混合
液或甲醇[12-13]提取、超声下的甲醇[12-13,17]或乙醇[18]
或酸[14]提取等。高温、强酸均会降解丙酰基类异黄
酮, 自然条件下则可能提取时间长或不能充分提取,
影响异黄酮测定结果的准确性。试验 1 结果(表 2)
表明 80%甲醇/水 50℃超声 60 min (T8)、90 min (T9),
80℃超声 60 min与 90 min (T12)均具有较高的提取
率(表 2 粗体部分), 但 80℃超声乙酰基与丙酰基类
异黄酮含量下降 , 加标回收率异常 (表 3), 均低于
93% (可能是温度太高导致乙酰基与丙酰基类异黄
酮组分降解所致), 50℃超声 90 min(T9)的提取率总
量略高于 50℃超声 60 min (T8), 但未至显著水平,
且仅 80%甲醇/水 50℃超声 60 min(T8)的 12种异黄
酮加标回收率均大于 99%(表 3), 与金米聪等[22]超声
的最佳时间与温度不一致, 可能是溶剂与超声仪功
率差异所致。因此选择 80%甲醇/水 50℃超声 60 min
提取(T8)。
2.1.2 色谱条件的比较和选择 以下试验均以
12种异黄酮标准品配制的混合标样为试样。
(1) 检测波长: 通过 DAD 在线扫描, 扫描范围
为 200~400 nm, 结果 12种大豆异黄酮的最大吸收波
长均在 254 nm 附近, 与 Klejdus 等[12-14,18-19]结果相
同。因此选择 DAD检测波长为 254 nm。
(2) 流动相: 试验 2结果表明, 处理(3)、(4)、(7)
和(8) 4 种流动相均能使 12 种大豆异黄酮获得较好
的分离 , 其中处理 (7)分离效果最理想 (图 1-C), 与
Cesar 等[14]结果相同。因此选取处理(7) 0.1%醋酸/
水(A)、100%甲醇(B)为试验流动相。
(3) 柱温: 试验 3 结果表明, 柱温 46℃时(图
1-B), 12种异黄酮虽较快较好分离, 但第 3种组分(G)
峰未出完基线已出现漂移现象; 柱温 56℃时基线严
重漂移(图 1-A); 柱温 26℃时(图 1-D), 基线平稳, 但
15 min内, 第 12种组分(Ge)峰未出完; 柱温 36℃时
分离效果最理想(图 1-C, 图 2-C), 与 Klejdus 等[12]结
果一致。因此选取检测柱温为 36℃。
2066 作 物 学 报 第 36卷
表 2 不同提取条件的异黄酮组分含量
Table 2 Contents of isoflavone components under different extraction conditions (μg g–1)
组分
Isoflavone
T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12
De 1.38 16.76 17.01 13.33 11.58 18.30 13.62 19.63 34.63 59.59 259.23 292.03
D 104.32 121.06 115.65 135.91 110.27 146.53 147.09 348.58 338.25 354.46 392.50 422.79
AD 7.02 10.43 7.43 19.05 8.26 7.59 10.41 8.36 27.90 4.97 57.03 44.30
MD 247.99 298.94 304.51 323.46 279.25 400.54 392.22 938.71 804.01 254.48 703.24 541.01
Ge 7.57 11.88 20.42 5.87 12.76 11.62 18.37 20.32 75.31 24.20 27.13 89.99
G 206.77 186.70 214.80 217.82 220.76 244.73 254.97 532.95 522.64 254.98 502.08 590.63
AG 45.82 8.36 38.10 51.15 100.69 40.28 125.95 93.79 169.44 94.00 51.39 120.87
MG 663.40 675.63 707.90 745.66 727.36 792.51 840.00 1942.38 1888.34 1620.15 1643.95 1518.81
GLe 5.97 8.69 8.68 5.06 8.38 4.63 4.82 19.09 26.76 33.79 100.78 212.59
GL 114.80 108.19 123.89 119.93 115.65 126.48 140.16 167.95 275.15 245.16 270.92 177.09
AGL 14.40 24.66 30.55 25.60 38.39 48.52 58.27 32.99 37.00 46.79 20.91 27.57
MGL 148.57 151.18 168.48 164.65 155.60 192.68 215.71 409.75 389.78 283.28 390.94 321.43
TISF 1568.00 1622.50 1757.44 1827.48 1788.97 2034.42 2221.59 4534.51 4589.20 3275.85 4420.10 4359.13
T1, T2, ⋯⋯, T12分别代表 12个处理, 详见正文。粗体为异黄酮提取含量较高的处理; TISF为异黄酮各组分总和。
T1, T2, and T3 stand for shaking at room temperature for 30, 60, and 90 min in 80% methanol aqueous solution, T4, T5, and T6 denote
ultrasonication at room temperature for 30, 60, and 90 min, T7, T8 and T9 denote ultrasonication at 50℃ for 30, 60, and 90 min, T10, T11,
and T12 denote ultrasonication at 80℃ for 30, 60, and 90 min, respectively. Boldface indicates the treatments with higher extractions of
isoflavone components; TISF stands for the total contents of 12 isoflavone components.
表 3 不同提取条件的回收率
Table 3 Recovery under different extraction conditions
测定值 Measured value (μg mL–1) 回收率 Recovery (%) 组分
Component
加入量
Addeda mount
(μg mL–1) T8 T9 T11 T12 T8 T9 T11 T12
De 18.00 18.27 19.21 20.21 19.38 101.49 106.74 112.29 107.66
D 20.00 19.92 20.32 20.32 21.71 99.59 101.61 101.61 108.55
AD 20.00 19.87 20.36 18.36 15.77 99.37 101.79 91.79 78.85
MD 20.00 20.13 17.70 18.00 16.22 100.65 88.50 90.00 81.10
Ge 20.00 19.94 21.72 21.72 20.19 99.68 108.61 108.61 100.95
G 20.00 20.06 20.56 20.56 21.88 100.31 102.80 102.80 109.41
AG 20.00 20.31 20.13 17.13 13.67 101.54 100.66 85.66 68.37
MG 20.00 19.85 17.74 14.74 14.89 99.26 88.72 73.72 74.44
GLe 12.80 12.80 13.78 13.78 11.77 100.04 107.62 107.62 91.96
GL 40.00 39.92 41.10 41.10 38.62 99.79 102.76 102.76 96.54
AGL 20.00 19.94 18.47 16.47 15.57 99.69 92.36 82.36 77.87
MGL 20.00 19.83 17.53 14.53 16.40 99.13 87.67 72.67 82.01
粗体为异黄酮回收率最高的处理。
Boldface indicates the extraction condition with highest recovery.
(4) 流速: 试验了 0.5~3.0 mL min–1范围的多种
流速对大豆异黄酮分离的影响, 结果表明流速 2.0
mL min–1时分离效果最理想。因此选取检测流动相
流速 2.0 mL min–1。
(5) 洗脱梯度: 试验了 21 种洗脱方式发现, 同
一流动相洗脱梯度细微的差异, 将导致 12种异黄酮
组分不同的分离结果(图 2)。0~2 min 27% B (V/V),
2~3 min 27%~38% B, 3~10 min 38% B, 10~12 min
38%~39% B, 12~14 min 39% B, 14~15 min 39~27%
B的洗脱梯度, 12种大豆异黄酮 15 min内得到理想
的分离效果(图 2-C), 因此, 以此洗脱梯度作为检测
12种异黄酮色谱流动相的洗脱方式。
2.1.3 标准工作曲线及检出限 12种大豆异黄酮
均具有良好的线性(表 4), 相关系数 r 均大于 0.999,
保留时间的 CV (RSD, relative standard deviation or
coefficient of variation)为 0.11~0.12, 其检测限与定
第 12期 王春娥等: 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用 2067
图 1 柱温对 12 种异黄酮组分分离的效果
Fig. 1 Effects of different column temperature on chromatographic separation of 12 isoflavone components
CT表示柱温。CT stands for column temperature.
图 2 不同洗脱梯度对 12 种异黄酮组分分离的影响
Fig. 2 Effects of different gradient profile of mobile phase on chromatographic separation of 12 isoflavone components
量限的 CV为 0.54%~2.02%。说明本方法灵敏度与精
确度均较理想。
2.1.4 方法的准确度、精确度与稳定性试验 试
验 5结果(表 5)显示异黄酮各组分的平均加标回收率
为 99.13%~100.65%, CV (RSD)为 0.22%~1.40%, 表
明该分析流程具有较高的准确度。
表 5(试验 6的结果)显示, 12个组分日内 5次重
复的 CV在 0.17%~2.74%间, 说明测定结果都具有良
好的精密度, 连续 3日间(每日重复 3次的均值间)CV
为 0.24%~3.95%, 表明其稳定性也理想。
以上试验结果表明, 以下流程可作为大豆籽粒
及豆腐与豆乳 12种大豆异黄酮定量分析技术。精确
称取经 FOSS样品磨 50 s磨碎的豆粉 0.10 g (湿豆腐
1.00 g、豆乳 2.0 mL), 置于 15 mL离心管, 以 80%
甲醇溶液定容至 10 mL (料液比为 1∶100), 于 50℃
超声(频率 40 kHz, 功率 300 W) 1 h, 经 14 800 × g
离心 10 min, 取上清液过 0.45 μm 滤膜注入自动进
样专用小瓶, 色谱条件为 Zorbax SB-C18 柱(5 μm,
4.6 ID × 150 mm), 柱温 36℃, 检测波长 254 nm
(DAD), 进样体积 10 μL, 流动相为 0.1% (V/V)乙酸
水溶液(A)和 100%甲醇(B), 流速为 2 mL min–1, 以
0~2 min 27% B (V/V), 2~3 min 27%~38% B, 3~10
min 38% B, 10~12 min 38%~39% B, 12~14 min 39%
B, 14~15 min 39%~27% B梯度洗脱。柱后 3 min。
2.2 豆乳和豆腐加工前后异黄酮含量的变化
表 6 是以本方法对科丰 1 号×南农 1138-2 衍生
的 184个重组自交家系(NJRIKY)及其亲本的大豆籽
粒与其加工产品中异黄酮含量 2004 和 2005 年连续
2068 作 物 学 报 第 36卷
表 4 DAD 254 nm 检测 12 种异黄酮化合物标样结果
Table 4 Validation data for determination of isoflavone standards at 254 nm by DAD
组分
Component
tR
(min)
CV of tR
(%)
回归方程
Regression equation
R2 LOD (μg mL–1)
LOQ
(μg mL–1)
CV of LOQ
(%)
De 8.16 0.11 Y = 2803.60X + 0.38 0.9997 0.04 0.13 0.98
D 2.82 0.12 Y = 2392.00X + 1.48 0.9995 0.12 0.40 1.05
AD 6.25 0.11 Y = 2097.60X + 0.12 0.9995 0.03 0.10 0.54
MD 4.82 0.11 Y = 1577.60X – 0.66 0.9999 0.13 0.43 0.21
Ge 13.70 0.12 Y = 3324.70X – 0.53 0.9999 0.22 0.73 1.67
G 4.19 0.11 Y = 2884.00X + 1.03 0.9999 0.13 0.43 2.02
AG 11.09 0.11 Y = 1392.80X – 2.60 0.9976 0.13 0.43 1.99
MG 6.64 0.11 Y = 1614.40X + 0.72 0.9998 0.02 0.07 1.34
GLe 10.21 0.11 Y = 1939.00X + 3.34 0.9995 0.03 0.10 1.53
GL 3.33 0.11 Y = 3946.00X + 5.23 0.9998 0.01 0.03 0.74
AGL 7.53 0.11 Y = 1374.40X + 0.34 0.9997 0.02 0.07 0.78
MGL 5.26 0.11 Y = 1136.00X – 0.64 0.9995 0.17 0.57 0.90
tR：保留时间; LOD：检测限; CV：变异系数; LOQ：定量限。
tR: retention time; LOD: limit of detection (3S/N); CV: coefficient of variation (n=5); LOQ: limit of quantification (10S/N).
表 5 测定方法的加标回收率和稳定性
Table 5 Recovery and robustness of the determination procedure
指标
Indicator
处理
Treatment
De D AD MD Ge G AG MG GLe GL AGL MGL
1 4.50 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 3.20 10.00 5.00 5.00
2 9.00 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 10.00 6.40 20.00 10.00 10.00
3 13.50 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 9.60 30.00 15.00 15.00
加入量
Added amount
(μg mL–1)
4 18.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 12.80 40.00 20.00 20.00
1 4.48 4.98 5.00 4.93 4.96 4.97 4.98 5.00 3.18 9.97 4.97 4.93
2 8.94 9.98 9.94 10.10 9.99 9.97 9.94 9.98 6.45 19.86 9.91 9.95
3 13.46 15.25 15.31 15.28 14.87 15.01 14.92 14.88 9.60 29.84 15.00 15.26
测定值
Measured value
(μg mL–1)
4 18.27 19.92 19.87 20.13 19.94 20.06 20.31 19.85 12.80 39.92 19.94 19.83
1 99.50 99.67 99.96 98.55 99.14 99.46 99.68 99.99 99.36 99.73 99.34 98.56
2 99.30 99.79 99.41 100.99 99.89 99.65 99.39 99.77 100.73 99.32 99.13 99.52
3 99.71 101.68 102.05 101.86 99.13 100.05 99.45 99.18 100.04 99.46 99.97 101.72
4 101.49 99.59 99.37 100.65 99.68 100.31 101.54 99.26 100.04 99.79 99.69 99.13
X 100.00 100.18 100.20 100.51 99.46 99.87 100.01 99.55 100.04 99.58 99.53 99.73
回收率
Recovery
(%)
ECV % 1.00 1.00 1.26 1.40 0.39 0.38 1.02 0.39 0.56 0.22 0.37 1.38
X (μg g–1) 19.63 351.62 8.52 956.45 20.42 538.39 95.00 1946.60 19.25 166.46 33.03 409.16日内稳定性
Intra-day robustness ECV % 1.43 1.22 2.74 0.17 1.43 0.66 1.15 0.31 1.79 1.26 2.62 0.21
X (μg g–1) 19.83 348.58 8.36 938.71 20.62 532.95 93.79 1942.38 19.09 167.95 32.99 409.75日间稳定性
Inter-day robustness CV % 2.04 1.74 3.95 0.24 2.04 0.93 1.63 0.43 2.56 1.77 2.88 0.29
1、2、3和 4分别代表不同处理, 方案即为本表的“加入量”; ECV: 误差变异系数。
1, 2, 3, and 4 stand for four treatments, respectively; ECV: error coefficient of variation.
2年试验的联合统计分析结果。
2.2.1 测定方法的验证 表 6 显示大豆籽粒、豆
乳与豆腐中各异黄酮组分 ECV (或 RSD)仅为 0.90%~
3.35%, 进一步证实本检测方法具有良好的精确性。
2.2.2 异黄酮总含量在加工产品中的分配及其变异
不同家系每克大豆干籽粒加工成豆腐, 其异黄
酮总含量(3 695.00 μg g–1)平均 14.85%(548.88 μg g–1)
进入豆渣, 85.15%进入豆乳(3 146.12 μg g–1), 再由豆
乳加工成豆腐, 只有 17.32%(639.89 μg g–1)进入豆腐,
67.83%(2 506.23 μg g–1)则进入黄浆水流失。表明大
豆籽粒异黄酮在豆腐(硫酸钙凝絮豆腐)加工中大部
分(豆渣与黄浆水中总平均为 82.68%)流失。因而
第 12期 王春娥等: 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用 2069
表 6 大豆籽粒异黄酮在加工产品中的变化
Table 6 Total and individual isoflavone content and variation in processing products (μg g–1 Seeds)
统计数
Statistic
TISF De D AD MD Ge G AG MG GLe GL AGL MGL
大豆籽粒 Soybean seed (μg g–1 Seeds)
X 3695.00 18.02 270.91 33.88 644.18 25.07 522.19 17.08 1556.74 20.73 102.67 38.47 445.07
ECV % 1.07 1.72 2.47 2.15 2.09 2.03 1.32 1.76 1.45 1.74 1.18 1.35 1.51
GCV % 29.23 46.39 67.35 58.51 57.04 55.72 35.97 47.88 39.52 47.29 32.24 36.95 41.03
Min 1797.11 4.62 52.47 7.05 160.52 5.94 225.40 2.77 790.81 5.92 53.79 9.27 110.32
Max 6944.98 38.12 865.53 84.97 1566.11 60.17 1089.30 49.11 3540.17 47.18 309.45 94.71 894.80
豆乳 Soymilk (μg g–1 Seeds)
X 3146.12 14.66 240.16 31.11 488.84 22.16 479.79 18.03 1343.47 17.51 87.19 34.83 368.36
ECV % 1.16 1.84 2.51 2.25 2.23 2.08 1.46 1.50 1.51 1.83 1.54 1.38 1.59
GCV% 31.66 50.19 68.43 61.65 60.68 57.02 39.88 41.31 41.14 49.41 41.76 37.94 43.18
Min 1468.34 3.50 41.94 4.99 103.80 4.85 193.81 2.44 629.16 3.91 32.46 6.85 77.28
Max 6024.88 33.31 757.70 79.22 1249.65 50.61 1039.83 38.34 3060.86 41.69 293.83 84.37 758.29
%† 85.15 81.35 88.65 91.82 75.89 88.39 91.88 105.56 86.30 84.47 84.92 90.54 82.76
豆腐 Tofu (μg g–1 Seeds)
X 639.89 168.09 35.18 43.41 24.28 197.79 85.23 ND 3.04 45.02 27.46 ND 10.40
ECV % 0.90 1.08 2.33 2.46 3.05 1.65 1.49 1.97 1.82 3.35 1.63
GCV % 24.42 29.45 63.85 67.44 83.58 44.88 40.52 57.88 49.57 91.26 45.32
Min 294.33 58.36 7.10 5.08 2.17 62.48 29.38 0.81 12.72 3.43 1.62
Max 1021.27 277.69 102.12 123.20 78.82 428.14 155.80 7.88 107.75 95.80 24.48
%† 17.32 932.80 12.99 128.13 3.77 788.95 16.32 0.20 217.17 26.75 2.34
ECV: 误差变异系数; GCV: 遗传变异系数; †: 占籽粒异黄酮含量的百分率或异黄酮得率; ND: 未测到。
ECV: error coefficient of variation; GCV: genetic coefficient of variation; †: percentage relative to isoflavone content in seed; ND: not
detected.
不去黄浆水的内脂豆腐加工可保留更多异黄酮, 另
一方面也说明硫酸钙豆腐加工废水(料)是提取异黄
酮的重要原料。
NJRIKY 家系 2004 年与 2005 年两年籽粒大豆
异黄酮总含量(TISF)平均为 3 695.00 μg g–1, 家系间
变幅为 1 797.11~6 944.98 μg g–1, 遗传变异系数为
29.23%, 亲本科丰 1号与南农 1138-2分别为 4 083.82
μg g–1和 3 655.83 μg g–1, 说明杂交重组后籽粒异黄
酮含量遗传变异增大。其加工产品豆乳与豆腐中异
黄酮含量变幅分别为 1 468.34~6 024.88 μg g–1 和
294.33~1 021.27 μg g–1, 家系间遗传变异系数分别
为 31.66%和 32.42%, 科丰 1 号与南农 1138-2 分别
为 3 431.82 μg g–1与 3 220.12 μg g–1和 717.96 μg g–1
和 553.64 μg g–1杂交重组后豆乳与豆腐中异黄酮含
量遗传变异也很大。说明籽粒、豆乳与豆腐中异黄
酮总含量均存在较大的杂交重组和遗传改良的潜力。
2.2.3 异黄酮各组分在豆乳和豆腐加工前后的变化
豆乳和豆腐加工前后异黄酮组分个数与各组分
含量发生变化。表 6 显示在籽粒和豆乳中均检测到
12种异黄酮组分, 两者各组分相差约 9.5%~24.1%。
但豆腐中未检测到 AG与 AGL, 只检测到其他 10种
组分, 而且 D、MD、G、MG、GL、MGL均大幅度
降低, De、Ge、GLe则大幅度增加。
籽粒 12种组分中, MG含量(1 556.74 μg g–1)最
高, De含量最低(18.02 μg g–1); 豆乳中类同于籽粒,
以MG含量最高(1 343.47 μg g–1), De含量最低(14.66
μg g–1); 豆腐中则以 Ge、De 含量最高 , 分别为
197.79和 168.09 μg g–1, AG、AGL最低, 均在定量限
之下。因而豆腐制作中 AG 与 AGL 几乎完全降解,
MG降解到仅 3.04 μg g–1, 而 De由豆乳中 14.66 μg
g–1增加至豆腐中的 168.09 μg g–1, 这可能由于豆腐
制作中高温煮浆(>95 )℃ 导致 AG、AGL、MG 等的
降解, 使苷元类异黄酮增加。
豆乳和豆腐加工前后 12 种异黄酮家系间遗传
变异系数发生变化。豆乳中遗传变异系数以 D最高,
为 68.43%, AGL最小, 为 37.94%; 豆腐中遗传变异
系数以 GL最高, 为 91.26%, De最小, 为 29.45%。
而籽粒中 D的遗传变异系数最高, 为 67.35%, GL最
2070 作 物 学 报 第 36卷
低, 为 32.24%。表明加工因素, 如水浸泡、高温和
硫酸钙凝絮等对组分有影响, 导致家系间遗传变异
的改变。
综上, 豆乳和豆腐加工前后异黄酮组分变化研
究表明 , 籽粒大豆异黄酮总平均(TISF)为 3 695.00
μg g–1, 变幅为 1 797.11~6 944.98 μg g–1。不同家系
每克大豆籽粒加工成豆腐过程中, 其总异黄酮平均
14.85%进入豆渣中, 变幅为 11.30%~21.07%, 平均
85.15%由豆乳获得, 变幅为 78.93%~88.70%, 由豆
乳加工成豆腐, 豆腐中平均只从籽粒获得 17.32%的
异黄酮, 变幅为 5.61%~43.03%, 籽粒中平均 67.83%
异黄酮进入黄浆水, 变幅为 38.67%~81.45%。不同家
系异黄酮 12 种组成在各产品中转移均有很大差异,
总含量遗传变异系数在豆乳与豆腐中分别为 37.94%~
8.43%与 29.45%~91.26%。说明科丰 1号与南农 1138-
2杂交重组后异黄酮含量存在遗传改良潜力。
3 讨论
3.1 关于大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术的
改进
本研究对大豆异黄酮 12种组分HPLC常规定量
分析技术在验证前人技术基础上重点改进样品制备
方式, 优化色谱条件, 达到大量、快速、准确(相对)
分析大豆 12 种异黄酮组分的目的。(1)样品于 80%
甲醇/水 50℃超声 60 min 后离心过滤待测, 相比
Wang 等[1]和 Jackson 等[19]分别以乙腈和盐酸混合水
溶液室温搅拌 2 h和室温涡旋振荡过夜、过滤, 滤液
于 30℃旋转蒸发器干燥后再以 80%甲醇水溶液溶解
待测及孙君明等[20]以乙酸乙醇混合水溶液在室温摇
床提取 24 h 后离心过滤待测, 简化了程序, 缩短了
提取时间。(2)优化的色谱条件, 使 15 min 内 12 种
异黄酮得以良好分离(图 1-C), 与Wang等[1,19-20]色谱
检测时间 60~70 min相比, 加速了色谱检测进程, 单
台仪器的检测样品数达 3~4 倍。此外, (3)本方法以
80%甲醇/水溶剂提取, 相比Wang等[1,19]以乙腈和盐
酸混合液提取; 以乙酸水溶液、甲醇为流动相, 相比
Wang等[8-20]以乙酸水溶液、乙腈或乙酸乙腈混合液
为流动相, 极大地降低了分析过程所用化学试剂的
毒性强度(乙腈毒性 10倍于甲醇)。(4)相比 Rostagno
等[18] HPLC整体色谱柱法、Stürtz 等[21]和金米聪等[22]
HPLC-MS法昂贵的仪器费用, 极大地降低了分析成
本。因此本方法可用于大批量样品定量分析的大豆
异黄酮遗传育种与现代豆制品加工。
3.2 关于豆乳和豆腐加工前后异黄酮 12 种组分的
变化
对 NJRIKY 遗传群体豆乳与豆腐加工前后大豆
异黄酮组分变化的研究表明, 豆制品加工产品异黄
酮组分中苷元形式异黄酮含量因高温而增加(如豆
腐中的 De 由豆乳中 14.66 μg g–1增加至 168.09 μg
g–1), 乙酰基、丙二酰基形式异黄酮则相反(如豆腐中
的 MG由豆乳中 1 343.47 μg g–1降解至 3.04 μg g–1,
豆腐中的 AG与 AGL分别由豆乳中的 18.03 μg g–1
和 34.83 μg g–1降解至检测限之下), 与 Kao等[25]报
道 3 种苷元组分随大豆吸涨温度增加的研究结果相
似。此外乙酰基形式染料木苷 AG 的含量还因水溶
液浸泡而增加(生豆乳中 AG 由籽粒的 17.08 μg g–1
增加为 18.03 μg g–1), 与 Jackson等[19]报道由于加工
苷元类、苷类、乙酰基类异黄酮组分增加, 丙酰基
类异黄酮减少的结果类似。
本研究豆乳与豆腐中平均异黄酮总含量占籽粒
比分别为 85.15%和 17.32%, Jackson 等[19]的研究结
果为 54%与 36%, 二者差异较大, 主要原因可能是
本研究中籽粒粉碎充分、生豆乳制作过程中未去浸
泡水, 使豆乳中保留了较高含量的异黄酮; 而豆腐
制作是以过饱和硫酸钙溶液凝固, 去除大量黄浆水
(与 Kao 等[25]报道硫酸钙凝絮豆腐中异黄酮总含量
随硫酸钙浓度的增加而减少相吻合), Jackson 等[19]
以葡糖酸内酯凝固制作的豆腐, 保留了大量的黄浆
水, 从而得到较高异黄酮含量豆腐。由此表明, 豆
乳、豆腐中异黄酮含量存在很大的工艺改良潜力。
本研究豆腐中未检测到乙酰基黄豆苷 AGL, 与
Jackson等[19]和 Kao等[25]的研究结果一致; 检测到了
Kao 等[25]未检测到的乙酰基大豆苷 AD(与 Jackson
等[19]结果相同), 但未检测到 Jackson等[19]与 Kao等[25]
均检测到的乙酰基染料木苷AG, 这可能是研究材料
不同所致, 有待进一步研究。
本研究显示科丰 1号与南农 1138-2杂交重组后
家系之间豆腐豆乳中异黄酮得率增大了遗传变异 ,
如豆腐中异黄酮总含量及其各组分的 GCV 为
29.45%~91.26%, 表明对豆制品加工产品异黄酮组
分杂交重组后遗传改良的潜力很大, 进一步研究其
遗传机制对异黄酮育种有实际意义。
4 结论
本研究中建立的大豆异黄酮组分 HPLC 快速分
析技术使 12个组分在 15 min内良好分离, 各组分峰
第 12期 王春娥等: 大豆异黄酮组分 HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用 2071
面积与其相应浓度均呈良好线性关系(R2为 0.9976~
0.9999); 加标回收率均大于 99%, RSD低于 2%。样
品制备与色谱检测时间比以往方法分别缩短了 1 倍
与 3 倍。该流程简便、快速、精确、稳定。在加工
中, 群体籽粒异黄酮平均总含量(3 695.00 μg g–1)的
14.85%(548.88 μg g–1)进入豆渣 , 85.15%进入豆乳
(3 146.12 μg g–1); 仅 17.32%(639.89 μg g–1)进入豆腐,
67.83%(2 506.23 μg g–1)流失于黄浆水。豆乳中 12种
组分含量比籽粒中稍低, 均以丙酰基染料木苷含量
最高; 而豆腐中乙酰基染料木苷和乙酰基黄豆苷缺
失, 以染料木苷元与大豆苷元含量较高。大豆科丰 1
号与南农 1138-2杂交重组后增大了异黄酮家系间的
遗传变异, 增加了对其遗传改良的潜力。
References
[1] Coward L, Barnes N C, Setchell K D R, Barnes S. Genistein,
daidzein, and their β-glycoside conjugates: antitumer isoflavones
in soybean foods from American and Asian diets. J Agric Food
Chem, 1993, 41: 1961–1967
[2] Howes L G, Howes J B, Knight D C. Isoflavone therapy for
menopausal flushes: a systematic review and meta-analysis.
Maturitas, 2006, 55: 203–211
[3] Ma D F, Qin L Q, Wang P Y, Katoh R. Soy isoflavone intake in-
creases bone mineral density in the spine of menopausal women:
meta-analysis of randomized controlled trials. Clinic Nutr, 2008,
27: 57–64
[4] Boerma H R, SpechtJ E. Soybeans: Improvement, Production,
and Uses. Madison, Wisconsin, USA: American Society of
Agronomy, Inc., Crop Science Society of America, Inc. and Soil
Science Society of America, Inc. Publishers, 2004. pp 1047–1117
[5] Clubbs E A, Bomser J A. Glycitein activates extracellular sig-
nal-regulated kinase via vascular endothelial growth factor re-
ceptor signaling in nontumorigenic (RWPE-1) prostate epithelial
cells. J Nutr Biochem, 2007, 18: 525–532
[6] Lee S, Mathieu P, Zhong Y, Murphy P A, Hendrich S. Isoflavone
glycitein diminished plasma cholesterol in female Golden Syrian
hamsters. J Agric Food Chem, 2007, 55: 11063–11067
[7] Tanaka M, Fujimoto K, Chihara Y, Torimoto K, Yoneda T, Ta-
naka N, Hirayama A, Miyanaga N, Akaza H, Hirao Y. Isoflavone
supplements stimulated the production of serum equol and de-
creased the serum dihydrotestosterone levels in healthy male
volunteers. Prostate Cancer Prostatic Dis, 2009, 12: 247–252
[8] Wang H, Murphy P A. Isoflavone content in commercial soybean
foods. J Agric Food Chem, 1994, 42: 1666–1673
[9] Wang G, Kuan S S, Francis O J, Ware G M, Garman A S. A sim-
plified HPLC method for the determination of phytoestrogens in
soybean and its processed products. J Agric Food Chem, 1990, 38:
185–190
[10] West L G, Birac P M, Pratt D E. Separation of the isomeric
isoflavones from soybean by high performance liquid chroma-
tography. J Chromatogr, 1978, 150, 266–268
[11] Penalvo J L, Nurmi T, Adlercreutz H. A simplified HPLC method
for total isoflavones in soy products. Food Chem, 2004, 87:
297–305
[12] Klejdus B, Mikelova R, Petrlova J, Potesil D, Adam V, Stiborova
M, Hodek P, Vacek J, Kizek R, Kuban V. Evaluation of isofla-
vone aglycon and glycoside distribution in soy plants and soy-
beans by fast column high-performance liquid chromatography
coupled with a diode-array detector. J Agric Food Chem, 2005,
53: 5848–5852
[13] Klejdus B, Mikelova R, Petrlova J, Potesil D, Adam V, Stiborova
M, Hodek P, Vacek J, Kizek R, Kuban V. Determination of
isoflavones in soy bits by fast column high-performance liquid
chromatography coupled with UV-visible diode-array detection. J
Chromatogr A, 2005, 1084: 71–79
[14] Cesar I da C, Braga F C, Soares C D V, Nunan E de A, Pianetti G
A, Condessa F A, Barbosa T A F, Campos L M M. Development
and validation of a RP-HPLC method for quantification of
isoflavone aglycones in hydrolyzed soy dry extracts. J Chroma-
togr B, 2006, 836: 74–78
[15] Ju X-R(鞠兴荣), Yuan J(袁建), Wang H-F(汪海峰). Determina-
tion of isoflavone in extract of soybean by HPLC. J Chin Cereals
Oil Assoc (中国粮油学报), 2000, 15(4): 26–29 (in Chinese with
English abstract)
[16] Zhang X-B(张晓波), Wu Y(吴岩), Lin H(林红). Study on
method of hydrolyze isoflavone in soybean by HPLC. Cereals
Oil (粮食与油脂), 2006, 4 :19–21 (in Chinese with English ab-
stract)
[17] He J-C(何继春), Wei W(卫巍). Four-samples instant determina-
tion methods of soy isoflavones. Cereals Oil (粮食与油脂), 2001,
7: 46–47 (in Chinese with English abstract)
[18] Rostagno M A, Palma M, Barroso C G. Fast analysis of soy
isoflavones by high-performance liquid chromatography with
monolithic columns. Anal Chimica Acta, 2007, 582: 243– 249
[19] Jackson C J C, Dini J P , Lavandier C, Rupasingh H P V, Faulk-
ner H, Poysa V, Buzzell D, DeGrandis S. Effects of processing
on the content and composition of isoflavones during manufac-
turing of soy beverage and tofu. Proc Biochem, 2002, 37:
1117–1123
[20] Sun J-M(孙君明), Sun B-L(孙宝利), Han F-X(韩粉霞), Yan
S-R(闫淑荣), Yang H(杨华), Kikuchi A. A rapid HPLC method
for determination of 12 isoflavone components in soybean seeds.
Sci Agric Sin (中国农业科学), 2009, 42(7): 2491–2498 (in Chi-
nese with English abstract)
[21] Stürtz M, Lander V, Schmid W, Winterhalter P. Quantitative de-
termination of isoflavones in soy based nutritional supplements
by high-performance liquid chromatography. J Consumer Protect
Food Safety, 2008, 3: 127–136
[22] Jin M-C(金米聪), Gong W-J(龚文杰), Ma J-M(马建明). Deter-
mination of 12 soybean isoflavones in soybeans and soy-based
foods by high performance liquid chromatography and liquid
2072 作 物 学 报 第 36卷
chromatography-mass spectrometry. Chin J Health Lab Tech (中
国卫生检验杂志), 2005, 15(8): 900–903 (in Chinese with Eng-
lish abstract)
[23] Wang C-E(王春娥), Gai J-Y(盖钧镒). A study on measurement
technology of tofu and soymilk output for large amount of mini-
specimen in laboratory. Soybean Sci (大豆科学), 2007, 26(2):
223–229 (in Chinese with English abstract)
[24] Gai J-Y(盖钧镒). Methods of Experimental Statistics (试验统计
方法). Beijing: China Agriculture Press, 2000 (in Chinese)
[25] Kao T H, Lu Y F, Hsieh H C, Chen B H. Stability of isoflavone
glucosides during processing of soymilk and tofu. Food Res Intl,
2004, 37: 891–900
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