全 文 ：箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法
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杨 君1 , 杨云强2
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, 杨永平1 , 胡向阳1
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(1 中国科学院昆明植物研究所 中国科学院青藏高原研究所昆明部 , 云南 昆明 650204;
2 黑龙江八一农垦大学 生命科学技术学院 , 黑龙江 大庆 163319)
摘要 : 建立箭毒木 ( Antiaris toxicaria) 种子总蛋白的提取方法 , 以及可以对其蛋白质组进行分析的双向电
泳条件。通过各种条件的优化与组合 , 建立了以 TCA-丙酮为基础的 Tris-HCl 提取法提取总蛋白 , 第 1 向电
泳为固相 pH 梯度等电聚焦 , 第 2 向电泳为垂直平板 SDS-PAGE 的双向电泳体系。通过对样品制备、样品
溶解、等电聚焦电泳、SDS———聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行分析 , 获得了满意的双
向电泳图谱。在探索适合箭毒木种子蛋白质组学研究双向电泳方法中 , 比较了三氯乙酸 - 丙酮沉淀法、和
Tris-HCl 法 , 以及对双向电泳过程中的关键步骤的改良 , 认为 Tris-HCl 法为最适方法 , 所得图谱背景清晰 ,
蛋白质信息量最大 , 为箭毒木属植物的差异蛋白质组学的后续研究打下了坚实的基础。
关键词 : 箭毒木 ; 样品制备 ; 双向电泳
中图分类号 : Q 945 文献标识码 : A 文章编号 : 0253 - 2700 (2009) 04 - 357 - 06
The Sample Preparation and the Improvement Method of
Two-Dimensional Electrophoresis of Proteins from
Antiaris toxicaria (Moraceae) Seed
YANG Jun1 , YANG Yun-Qiang2 ** , YANG Yong-Ping1 , HU Xiang-Yang1 * * *
( 1 Kunming Instituteof Botany, Chinese Academy of Sciences, Kunming 650204 , China;
2 Heilongjiang Bayi Agricultural University, Collegeof LifeScience, Daqing 163319 , China)
Abstract: We have established the extraction method of the total proteins of Antiaris toxicaria seed and the appropriate
conditions for thetwo-dimensional eiectrophoresis (2-DE) of Antiaris toxicaria seed proteome . Through integratingandop-
timizing various conditions, we also established the 2-DE system including the sample preparation method with Tris-HCL
based on TCA-actone, and the first-dimensional electrophoresiswith immobilized pH gradients isoelectric focusing and the
second dimensional electrophoresiswith vertical electrophoresis of SDS-PAGE . We have gained a good 2-DE map in the
analysis of sample preparation、sample resolution、isoelectric focusing ( IEF)、SDS-PAGE and gel staining . In order to
explore theextractionmethodof proteomeand techniqueof 2-DE , wecomparedtheextractionmethod between theTCA-ac-
tone and theTris-HCl , and improvedthekey steps of 2-DE . TheTris-HCl extractionwas themost appropriate for Antiaris
toxicaria seed proteome analysis because of the highest resolution and more informative 2-DE map . Those were the solid
basis for the later research of studying on the discrepancy expression proteomics of Antiaris toxicaria Seed .
Key words: Antiaris toxicaria; Sample preparation; Two-dimensional eiectrophoresis
箭毒木 ( Antiaris toxicaria Pers . Lesch) 又名大药树、见血封喉 , 为桑科高大乔木 , 是森林中上层
云 南 植 物 研 究 2009 , 31 (4) : 357～362
Acta Botanica Yunnanica DOI : 10 .3724?SP. J . 1143 .2009.09043
?
??
??? ?通迅作者 : Author for correspondence; E-mail : huxiangyang@ mail .kib. ac. cn
收稿日期 : 2009 - 03 - 09 , 2009 - 05 - 26 接受发表
作者简介 : 杨君 ( 1985 - ) 男 , 硕士 , 主要从事植物蛋白组学研究。 ?
杨云强与杨君对本论文具有同等贡献 ?
基金项目 : 国家自然科学基金面上项目 ( 30871704) 和中国科学院百人计划项目
优势种之一 , 树高可达 40 m, 有大板根 , 分布在
海拔 600 ～ 1 500 m 的地 区 ( 文彬 和蔡 传涛 ,
2008) 。在植物区系上 , 箭毒木为热带亚洲成分 ,
在南亚、东南亚均有分布 , 国内主要分布于云
南、广东、广西和海南。箭毒木材质轻 , 可供建
房和做家具 , 木材纤维细长、柔软而强韧 , 可作
为麻类代用品 , 供制绳索和麻袋 ; 树汁有巨毒 ,
在医药上有研究价值 , 属国家三级保护植物 , 被
列入中国珍稀濒危保护植物名录 ( 第 1 册 ) ( 西
南林学院和云南省林业厅 , 1991 )。因此 , 对箭
毒木种子生物学的研究 , 特别是了解该种子作为
顽坳性种子的生物学特性 , 可以帮助探寻该树种
的有效保护对策及相关应用价值。
为深入研究箭毒木在种子萌发过程中蛋白的
差异表达 , 探索顽坳性种子萌发的分子机制 , 其
总蛋白质的提取及双向电泳条件的建立是首要环
节。双向电泳一般包括样品制备、 IEF、平衡、
SDS-PAGE、染色、图谱分析等。双向电泳蛋白
斑点数目直接反映了实验中蛋白质信息的完整
性。双向电泳的成功与否直接关系到后续操作。
而目前由 O′Farrell 于 1975 年创立的蛋白质双向
电泳体系主要适用于微生物和动物细胞的全蛋白
分析 (O′Farrell , 1975 ) , 尚没有对所有的植物样
品都适用的蛋白质样品的制备分析方法。由于箭
毒木种子中蛋白质含量较低 , 且富含酚、醌、色
素及多糖等次生代谢物 , 严重干扰了电泳和分辨
结果。我们在对传统的双向电泳技术的程序及有
关环节进行反复改进和不断优化过程中获得了较
为理想的结果。
1 材料与方法
1 .1 实验材料和仪器
主要试剂 : Tris、NP-40、尿素、硫脲、CHAPS、载
体两性电解质、PH4-7、十二烷基磺酸钠 (SDS)、丙烯酰
胺、甲 叉双 丙 烯 酰 胺、过 硫酸 氨、四 甲 基 二 乙 胺
(TEMED)、考马斯亮蓝 CBB-R250、均购自 Bio Basic Inc
(BBI ) ; 二硫苏糖醇 (DTT) 购自 Promega Corperation; IPG
胶条和碘乙酰胺购自 Bio-Rad 公司 ; 三氯乙酸 ( TCA )、
丙酮、甘油、磷酸、甲醇、乙醇等试剂为国产分析纯 ;
低分子量蛋白质 marker 购自 Fermentars 公司 ; 所用水为
MilliQ超纯水。
仪器 : PH3-10 线性 IPG 胶条 , 聚焦盘 , 水化盘 ,
PROTEAN IEF Cell 一维等 电聚焦仪 , Mini-PROTEAN 3
Electrophoresis Cell 垂直电 泳仪 ( 美国 Bio-Rad 公 司 ) ,
Beckman离心机等。
材料 : 箭毒木种子采自西双版纳热带植物园 , 分为
2 组 , 一组脱水处理 13 天 , 另一组不做处理作为对照
组 , 液氮研磨成粉置于 - 80℃保存备用。
1 .2 实验方法
1 .2 .1 蛋白质提取
TCA-丙酮沉淀法 参照钱小红和贺福初 ( 2003 )
方法 , 将 - 80℃保存的样品准确称取 0.2 g在液氮下研磨
成粉末 , 然后将粉末悬浮在含有 0 .07% DTT和 10%的三
氯乙酸的预冷丙酮溶液中 , 于 - 20℃冰箱中沉淀过夜 ,
然后在 4℃ 16 500 r min- 1 离心 30 min, 倒去上清 , 将沉淀
重悬于含有 0 .07 %的预冷丙酮溶液中 , 4℃ 16 500 r min- 1
离心 30 min, 弃上清 , 重复直至有机相为无色为止。取
沉淀真空干燥 , 用裂解液 (7 mol L - 1 Urea, 2 mol L - 1 thio-
urea, 4 % CHAPS, 60 mmol L - 1 DTT, 0. 5% 两性电解质
PH4-7 , 0 .4 % PMSF ) 溶解沉淀 (按 20μl 裂解液溶解 1 mg
沉淀) , 混匀后于 4℃冰箱中裂解 2 h, 4℃ 16 500 r min- 1
离心 30 min, 取上清 , 再用 3～ 5 倍体积的含有 0 .07%
DTT 的冷丙酮在室温下重新沉淀蛋白质 , 4℃ 16 500 r
min- 1 离心 30 min, 弃上清 , 干燥沉淀 , 再用裂解液溶解
沉淀 , 4℃ 16 500 r min- 1 离心 30 min, 取上清 , 置 - 20℃
保存备用。
Tris-HC1 法 参照黄荟和谷瑞升等 ( 1999 ) 方法
进行部分修改 , 将 - 80℃冷冻种子 , 液氮研磨 , 准确称
取 0.2 g粉末至 10 ml 离心管中 , 加入 PVPP 0.02 g和蛋白
质提取缓冲液 ( 50 mmol Tris-HC1 pH7 .5 , 20 mmol L - 1
KCl , 13 mmol L - 1 DTT ) 2 . 0 ml , 研磨成浆后加入 200μl
NP-40、30μl 0 .1 mol L - 1 的 PMSF , 将样品研磨均匀 , 以
充分溶解蛋白质 , 于 16 500 r min- 1 4℃离心 30 min, 取上
清 , 加入 5 倍体积的预冷 10% TCA/ 丙酮 , 混匀后置 -
20℃沉降蛋白质 2 h, 16 500 r min- 1 4℃离心 30 min, 沉淀
用 80 %含有 0 .07 %DTT 的冷丙酮洗 2 次 , 16 500 r min- 1
4℃离心 30 min, 抽干沉淀 , 置 - 20℃保存或加入样品裂
解液 (7 mol L - 1 Urea, 2 mol L - 1 thiourea, 4 % CHAPS, 60
mmol L - 1 DTT, 0 . 5% 两性电解质 PH4-7 , 0 .4% PMSF ) ,
振荡器震荡 2 min, 16 500 r min- 1 离心 30 min, 取上清即
为待测蛋白质上样液。
1 .2 .2 蛋白质含量测定
采用 Bradford ( Bradford, 1976) 方法以蛋白质裂解液
(7 mol L - 1 尿素 , 2 mol L - 1 硫脲 , 4% CHAPS, 60 mmol L - 1
DTT , 0 . 5% 两性电解质 PH4-7 , 0 .4 % PMSF ) 为空白 ,
1 . 0 mg ml - 1 的牛血清白蛋白 ( BAS) 标准蛋白 (标准蛋
白溶液用蛋白质裂解液配制 ) 为标准 , 参照 O′Farrell
(1975) 的方法操作 , 在紫外可见分光光度计测定 OD595
值 , 用于计算获得的箭毒木蛋白质样品的含量。
853 云 南 植 物 研 究 31 卷
1 .2 .3 1D SDS-PAGE
根据以上测得的蛋白浓度和要取总蛋白的质量 , 计
算所取蛋白质的体积 , 并在 mini—protean III cell 垂直板
电泳仪上进行电泳。
1 .2 .4 双向电泳
第一向等电聚焦电泳 根据浓度测定结果与要取
总蛋白的质量 (500μg) , 计算所取蛋白质的体积 , 并加
入水化液 (7 mol 尿素 , 2 mol 硫脲 , 4 % CHAPS, 65 mmol
DTT , 0 . 2% 两性电解质 PH4-7) , 混匀后使总体积达到
320μl , 被动水化 13 h, 使胶条充分吸胀 , 按表 1 程序进
行第一向等电聚焦电泳。
表 1 等电聚焦电泳程序
Table 1 The procedureof isoelectric focusing
程序
Procedure
电压
Voltage
速度
Speed
时间
Time
作用
Function
S1 ?200 EV 慢速 1h 除盐
S2 ?500 EV 慢速 1h 除盐
S3 ?1000 WV 线性 1h 升压
S4 ?8000 WV 线性 2h 升压
S5 ?8000 WV 快速 60000VH 聚焦
S6 ?500 EV 快速 任意时间 保持
聚焦结束后 , 依次在平衡缓冲液 I [6 mol L - 1 Urea、
2 % SDS、0.375 mol L - 1 Tris-HCl pH 8 .8、 20 % Glycerol、
2 % DTT ] , 平衡缓冲液Ⅱ [ 6 mol L - 1 Urea、 2% SDS、
0 .375 mol L - 1 Tris-HCl pH 8 .8、20% Glycerol、2 .5% Io-
doacetamide] 中缓慢平摇 15 min。
第二向 SDS-PAGE 电泳 第二向 SDS-PAGE , 采用
12 .5%的分离胶 (凝胶厚度 l mm) , 参数设置如下 :
2W?gel, 1 h; 12 - 15W?gel , 6 h
用低熔点琼脂糖封闭胶条与玻璃板之间的空隙 , 加
适量电泳缓冲液 , 进行电泳 , 待溴芬兰跑到凝胶底部
后 , 取出胶块用超纯水洗 3 次 , 每次 10 min。
采用 12%的三氯乙酸溶液进行固定 , 时间为 2 h以上。
染色及检测 用染色液 (用甲醇 45 ml、水 45 ml、
冰乙酸 10 ml 混合液溶解 0 .25 g考马斯亮蓝 R-250) 进行
染色并过夜。
再换用脱色液 (甲醇∶水∶冰乙酸 = 45∶45∶10) 进行脱
色 , 直至凝胶背景变为无色。最后用扫描仪进行扫描分析。
2 结果与分析
2 .1 1D SDS-PAGE 结果分析
称取等量的箭毒木种子 , 用 TCA-丙酮沉淀
法和 Tris-HC1 法提取总蛋白后的 SDS-PAGE 结果
见图 1 , 从图中可以看出由这两种方法提取的蛋
白质经 SDS-PAGE 后 , 蛋白质条带在位置、数目
及染色的深浅上有很大的不同 , Tris-HC1 法提取
的蛋白条带数目比 TCA-丙酮法得到的蛋白条带数
目要多 , 且条带清晰 , 染色较深 , 而 TCA-丙酮法
所得条带相对较少 , 说明样品中影响电泳的盐离
子浓度较高或蛋白质有所降解 , 表明使用不同的
提取方法所溶解的蛋白质种类和数量是不相同的。
图 1 箭毒木种子 1D SDS-PAGE 分离结果
(A 与 B : TCA-丙酮法提取 ; C 与 D: Tris-HC1 法 ) M: 标准蛋白 ;
A 与 C : 对照 ; B 与 D: 脱水处理的箭毒木种子
Fig . 1 The result of 1D SDS-PAGE of different extraction methods of
( A and B: TCA-actone extraction method; C and D: Tris-HC1
extraction method) M : protein marker ; A and C : the control ;
B and D: the dehydrated Antiaris toxicaria Seed .
2 .2 2-DE 的结果分析
TCA-丙酮法提取的蛋白 2-DE 分离结果见图
2 和 3 , Tris-HCL 法提取的蛋白 2-DE 分离结果见
图 4 和 5。两种提取方法大部分蛋白质均集中在
中间 , 但利用 Tris-HC1 法提取的蛋白图谱效果明
显比用 TCA-丙酮法提取的效果好 , 主要表现在
不同分子量 (Mw) 范围内的蛋白数目及分离效
果方面 ( 特别是圆形与椭圆形区域 ) 有差别 , 利
用 PDQuest进行点检测及统计分析 , TCA-丙酮提
取法 2-DE 分离得到蛋白点为 409 个 (对照 ) 与
111 个 ( 脱水 13 天 ) , 且 匹配 率很 低 ( 15% ) ,
Tris-HC1 提取法 2-DE 分离得到蛋白点 609 个 (对
照 ) 与 503 个 (脱水 13 天 ) , 匹配率为 33%。Tris-
HC1提取法所得结果比 TCA-丙酮法所得分别多
200 个与 392 个蛋白点 , 分别增加 48.9%和 353%。
9534 期 杨 君等 : 箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法
TCA-丙酮法所提取蛋白在小分子量区域分
布不均匀 , 蛋白点不清晰 , 水平条纹与竖直条纹
较为严重 , 而改进后的方法克服了上述缺点 , 并
分离出利用 TCA-丙酮法所不能分离出的酸性端蛋
白 (区域 3) , 这与曾广娟等 ( 2008 ) 的研究结论
一致 , 即 : TCA-丙酮法和 Tris-HCL 法提取的蛋白
质相比较 , TCA-丙酮法能够得到较多中等分子量
(20～50 kD) 的蛋白质 , 而 Tris-HC1 提取法除了分
离到较多的中等分子量的蛋白质外 , 还得到了比
例相当的高分子量和低分子量蛋白质。
由于 TCA-丙酮法不能很好地去除高含量的
盐离子、多酚、色素及多糖等干扰物质 , 造成蛋
白图谱严重的横向条纹与纵向条纹 , 蛋白点的缺
失与弥散 , 无论是高分子量的区域 , 还是低分子
量区域 , 酸性端还是碱性端 , 改进后的效果均优
于 TCA-丙酮提取法。
另外 , TCA-丙酮法最容易操作 , 但蛋白质要
沉淀过夜 , 所耗费的时间较长 ; 改进后的方法操
图 2 未脱水处理的箭毒木种子 2-DE
分离结果 (TCA-丙酮法 )
Fig . 2 The result of 2-DE of the normal Antiaris toxicaria
Seed (TCA -acton extraction method)
图 3 利用 TCA-丙酮法方法提取的脱水处理的箭毒木种子
2-DE 分离结果 ( TCA-丙酮法 )
Fig . 3 The result of 2-DE of the dehydrated Antiaris toxicaria
Seed (TCA-actone extraction method)
图 4 未脱水处理的箭毒木种子 2-DE 的
分离结果 (Tris-HC1 法 )
Fig . 4 The result of 2-DE of the normal Antiaris toxicaria
Seed ( Tris-HC1 extraction method)
图 5 脱水处理的箭毒木种子 2-DE 的
分离结果 (Tris-HC1 法 )
Fig . 5 The result of 2-DE of the dehydrated Antiaris toxicaria
Seed (Tris-HC1 extraction method)
注 : 在图 2～图 5 中 , 1 , 2 , 3 分别代表主要的不同分子量范围内蛋白数目及分离效果的区域
note: In fig . 2～ fig . 5 , the“1 , 2 , 3”respectively the areaof main protein with different molecular weight and different seperated effect
063 云 南 植 物 研 究 31 卷
作简便 , 时间较短 , 成本适中 , 其处理过程的步
骤简单快捷 , 减少了因处理步骤繁多而造成的样
品蛋白质的损失 , 大大提高了实验结果的重复性。
3 讨论
3 .1 样品制备
传统的 TCA-丙酮沉淀法是很有效的蛋白质
提取法 , 能够抑制蛋白酶活性 , 保证在制样过程
中蛋白质不被降解 , 消除瞬时的蛋白质水解作用
和其它蛋白酶的修饰。然而该方法的一个最大缺
点是蛋白质很难重新溶解 , 而且样品中的非蛋白
成分很难除去 , 可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白
(王玉琪和彭新湘 , 2006 ) , 导致 2-DE 图谱上有
明显的横纵条纹。本实验中采用的 Tris-HCl 法不
仅继承了传统的 TCA-丙酮沉淀法的优点 , 而且
在膜蛋白和疏水性蛋白的提取方面也有所改善 ,
有效地减少了提取过程中蛋白质的损失。
由于箭毒木种子含有大量的盐离子、多酚、
色素及多糖等次生代谢干扰物 , 研磨 时使用
PVPP 以除去酚类杂质 , 同时在研磨过程中应注
意避免样品吸潮 ; 用含 SDS 的 Tris-HCL 与 TCA-
丙酮联合使用提取蛋白质 , 在 - 20℃沉淀蛋白 ,
使蛋白沉淀更彻底 ; 用预冷的丙酮将沉淀反复洗
涤多次以去除色素 , 用 80% 的丙酮洗涤沉淀以
除去水溶性杂质 ( 包括高浓度的盐离子 ) , 比
TCA-丙酮法单独利用高速长时离心与丙酮洗涤
沉淀的方法更能最大限度地排除影响双向电泳的
杂质等不利因素 , 也比传统的脱盐和透析方法要
省时省力。
在样品溶解方面 , 7 mol L - 1 以上尿素适合箭
毒木种子全蛋白质的提取 , 硫脲 ( thiourea) 是另
一种增溶剂 , 在膜蛋白的提取中应用较多 ( Pas-
quali 等 , 1997 ) , 但硫脲不溶于水却溶于高浓度
尿素 , 因此与尿素联用可增强相关蛋白质的溶解
性。另外 , 要注意在裂解蛋白质沉淀时不能超过
37℃ , 否则尿素分解产生氰酸盐会使蛋白质甲酰
化 , 导致蛋白质等电点变化产生假点 , 且样品一
旦溶解于尿素就要分装保存 , 避免反复冻融引起
降解。注意到以上几点 , 从电泳结果上看 , 各组
分的分离基本没有拖尾现象 , 横向扩散也很轻
微 , 大小蛋白质组分斑点均清晰可见 , 分离效果
比较理想 ( 图 4 , 5 )。
3 .2 H等电聚焦电泳 ( 1EF) 样品制备对蛋白质
分析的影响
等电聚焦一定要掌握合适的上样量 , 上样量
大有利于低丰度蛋白的分离 , 但过大会使高丰度
蛋白质斑点太大而影响其他蛋白质斑点的分离和
分析 , 或使蛋白质在胶条槽中沉淀而不能充分进
入胶条 , 使聚焦失败 ; 上样量过小会导致蛋白图
谱中相关蛋白质信息量不够 , 而影响后续实验的
展开。对箭毒木这样的材料 , 上样量在 500μg时
用 Tris-HCl 提取法所得蛋白经 2-DE 分离后蛋白
点形态规则、稳定性高、重复性好。另外 , 等电
聚焦过程中要控制好聚焦时间 ( 最佳时间是 IEF
分离达到稳态所需的时间 , 一般为 12～13 小时 )
和温度 ( 18～20℃ )。
3 .3 其他技术细节
对实验过程中有关技术细节做了改进和探
讨 , 主要是 :
(1) 一般平衡是获得高质量双向电泳图谱十
分关键的步骤 , DTT 在 SDS与蛋白质充分结合后
断裂蛋白质的二硫键 , 碘乙酰胺可以烷基化 DTT
和蛋白质所带的自由巯基 , DTT 中的巯基带有电
荷 , 若二次平衡不完全 , 则会使蛋白图谱产生较
为明显的横条纹 , 本次实验确定 DTT 与碘乙酰
胺两次平衡时间各为 15 min, 最长不超过 20 min
为最好。
(2) 采用 12.5%的聚丙烯酰胺虽然可将蛋白质
点分离出来 , 但有相当一部分沉集在凝胶右下侧
(图 4, 5) , 使蛋白点相互靠近 , 影响蛋白质的分离
效果 , 这在今后的研究中应该再着重加以改进。另
外 , 在低熔点琼脂糖一端插上单孔梳 , 点上 Mark-
er, 电泳后可以直观地判别有关蛋白质点分子量。
(3) 考马斯亮蓝染色法虽然灵敏度低于银染
色或荧光检测 , 但操作简便 , 对染色条件如温
度 , 试剂质量 , 显色时间不敏感 , 凝胶染色重复
性好 , 蛋白点清楚、突出 , 染色背景及对比度
好 , 且与下游蛋白质质谱鉴定方法兼容 , 应用空
间很大 ; 为满足高通量差异蛋白组分析 , 从成本
考虑 , 试验初期银染色的地位首屈一指 , 但银染
背景深 , 噪声大 , 不易控制。
综上所述 , 本实验为箭毒木种子蛋白质双向
电泳实验体系的建立与优化 , 从样品制备开始到
双向图谱的获得就综合考虑各种因素 , 最终确定
1634 期 杨 君等 : 箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法
了以 Tris-HCl 为蛋白制备方法的一系列技术条件
参数 , 为箭毒木属植物的蛋白质组学的深入研究
打下了坚实的基础。
〔参 考 文 献〕
西南 4林学院 , 云南省林业厅 , 1991 . 云南树木图志 (下 ) [M ] . 昆
明 : 云南科技出版社
钱小 5红 , 贺福初 . 2003 . 蛋白质组学理论与方法 [M ] .北京 : 科学
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Gu R 8S ( 谷瑞升 ) , Liu QL ( 刘群 录 ) , Chen XM ( 陈雪梅 ) et al. ,
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electrophoresis of membrane proteins [ J ] . Electrophoresis, 18 ( 14) :
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* * * * * * * * * * * * * * *
《云南植物研究》 征订启事
《云南植物研究》 创刊于 1979 年 , 是由中国科学院主管、中国科学院昆明植物研究所承办的全国
性自然科学学术期刊。经过 30 年的努力 , 现已成为我国植物科学研究发表论文的主要学术性刊物之
一 , 已被选为“中国自然科学核心期刊”,“中国生物学类科技核心期刊”。本刊荣获中科院优秀期刊
二等奖 ( 1996) 及一等奖 (2000 )、第二届全国优秀期刊三等奖 ( 1997) 及云南省优秀科技期刊一等
奖 ( 1997) 等 , 并作为中国科学院首批向美国 SCI 推荐的刊物之一 , 2002 年入选国家“双效期刊”。
本刊所发表的论文在国内生物、农林、医药、轻工等二次文献刊物都有摘报 ; 国外 CA (美国化学文
摘 )、BA (美国生物学文摘 ) 等从 1980 年起就连续摘报 ; 生物科学的当代进展 (CABS)、科学引文索
引 (SCI) 的 CI 部分以及俄罗斯文摘杂志 (PЖ ) 和国际农业科技情报系统 (Agris) 等都有摘报 ; 乌
利希国际期刊指南 (UIPD) 从 80 年代就刊载本刊出版事宜。本刊已同 30 多个国家和地区有发行和交
换关系 , 在国内外同行中有一定的影响。目前已加中国学术期刊光盘版、中国学术期刊网及万方数据
库资源系统。本刊主要报道植物学各分支学科具有创造性或较高学术水平的研究论文和简报 ; 植物学
领域的新发现及重大应用价值的新成果 ; 有关植物学资源开发利用和保护的创新性研究成果 ; 植物学
研究的新技术、新方法 ; 反映本学科重要领域的国内外植物科学研究的最新进展的评述 , 中英文稿件
均受欢迎。本刊设有植物系统学与生物地理学、植物化学与化学生物学、生物多样性保护与民族植物
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《云南植物研究》 为双月刊 , 双月 25 日出版 , 2010 年每期 25 元 , 邮发代号 : 64 - 11 , 若在邮局漏
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