全 文 ：兰花蕉花粉的扫描电镜样品制备技术*
徐信兰　卢乃弟　王学海
(中国科学院华南植物研究所电镜室 ,广州 510650)
　* 中国科学院广州分院分析测试基金资助项目
兰花蕉科植物的花粉壁结构比较特殊 ,它的外壁很薄且不完整甚至外壁缺失 ,因此用常规的
花粉扫描电镜样品制备方法 (如醋酸酐分解法等 )进行处理 ,其花粉粒易破碎、变形 ,最终得不到
理想的观察效果 ,致使这个科植物的花粉形态资料欠缺 ,花粉类型系统分析资料不足 ,从而对其
外壁结构的认识存在较大的争论。为此我们通过采用各种不同制样方法进行试验比较 ,最终选出
一种简单易行的样品制备方法 ,较好地解决了这类花粉外壁较薄或不完整甚至缺失的植物的花
粉扫描电镜样品制备技术问题 ,从而获得良好的观察结果。为该科植物的分类和系统发育的研究
提供花粉形态及统计分析的资料 ,这个方法对该科植物的研究及有关这类型花粉的样品制备具
有重要的实用意义。
材料与方法
1. 试验材料为兰花蕉科兰花蕉 ( Orchidantha chinensis T. L. Wu)及长萼兰花蕉 ( 0. 1
ongisepala ) ;芭蕉科芭蕉属红蕉 ( Musa uranoscopos Lour ) ;睡莲科睡莲属睡莲 ( Nymphaea
tet rag ona Geo rgi )和雨久花科凤眼蓝属凤眼蓝 ( Eichho rnia crassipes Solm )及禾科稻属水稻
( Oryza sativ a L. )等五个科共六个种的花粉 ,均采自广州华南植物园。
2. 选择将开而未放的花朵 ,采花药中的花粉粒置于盛有浓度为 70%左右的乙醇水溶液 (前处理
液 )的离心管中 ,将离心管放于超声波清洗器中 50W33kHz的水浴震荡清洗 1— 2次 ,每次 5min,
尔后用 30%乙醇水溶液多次换洗前处理液 ,每次 5min,直至换洗液加入后花粉粒随溶液翻动面
翻动、散开、无积聚 ,溶液澄清为止。 此时按常规先后用含 0. 1mo l二甲砷酸钠缓冲液的 4%戊二
醛前固定 12h以上 (或多天亦可 ) ,经浸洗后再用 1%四氧化锇作后固定 10h左右 ,再将经浸洗液
清洗后样品置于 30%乙醇液中+ 4℃存放 ,上台时用吸管吸出样品滴台 ,让其自然干燥后经 JFC-
1100型离子溅射仪镀金膜 (厚约 10nm ) ,用 JSM-T300型扫描电镜观察、拍片。
结果与讨论
1. 通过扫描电镜观察可见兰花蕉花粉表面干净 ,形态饱满 ,雕纹清晰 ,变形与破碎少 ,观察结果
令人满意。为验证此法的适用范围 ,将这个方法应用于红蕉和水生的睡莲、凤眼蓝及水稻的花粉
制备亦取得良好的观察效果 ,可见此方法简单易行、效果好。 过去有关兰花蕉科植物的花粉形态
的资料因其特殊结构 ,样品不易处理而未见有关的报导 ,现在采用此方法获得满意的图像 ,并已
另行发表了有关花粉形态的文章 ,为该类型花粉的研究提供了微形态的资料 ,在此不再重复。另
外 ,从图上可十分清晰看到红蕉花粉粒雕纹凹凸不平 ;睡莲花粉粒上的环槽清楚 ,槽膜上面布满
细颗粒 ;凤眼蓝环沟清晰 ,两个极面纹饰差异明显 ,而水稻花粉则纹饰清楚。
2. 整个制样过程其关键为乙醇水溶液前处理的浓度与处理时间 ,此应根据花粉粒的外披物质的
多少和外壁对乙醇的耐受力进行选择 ,如两种兰花蕉则用 75%的浓度为好 ,而红蕉则用 80%的
浓度为好 ,对于一些水生植物的花粉如睡莲、凤眼兰等以 70%为佳。 浓度过高致使花粉收缩变
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形 ,浓度不足则不能清洗干净花粉粒外披的花粉素类物质。另外处理时间太短亦洗不干净 ,时间
过长花粉表面出现裂痕 ,如红蕉的前处理要震洗二次才干净。
3. 整个样品处理过程除更换溶液外 ,均应在 4℃的条件下进行 ,保持这个温度有利于花粉沉降 ,
可减少甚至不用离心沉淀 ,省时省事 ,减少花粉损耗。
4. 对于其它一些有类似花粉壁结构的花粉 ,采用此法的制备效果我们还在测试中。
参考文献
[ 1]侯宽昭 .广州植物志 .北京:科学出版社 , 1965. 97, 665, 682, 779.
[ 2]龙活等 .中国兰花蕉科植物花粉形态 .热带亚热带植物学报 , 1997, 5( 3)∶ 6— 9.
[ 3]兰盛银等 .植物花粉剥离观察扫描电镜图解 .北京:科学出版社 , 1996. 35— 48.
1)兰花焦花粉　　　　　　　　　 2)长萼兰花蕉花粉　　　　　　　　　 3)红蕉花粉
4)凤眼蓝花粉 5)睡莲花粉 6)水稻花粉
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