全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月 ·1649·

四倍体金银花水提物抗炎作用和急性毒性实验研究
胡 璇 1, 2，李卫东 2, 3*，张硕峰 2*，李 欧 2，郝江波 2, 3，莫 愁 2, 3
1. 中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州 571737
2. 北京中医药大学中药学院，北京 100102
3. 北京中医药大学 中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京 100102
摘 要：目的 对四倍体金银花水提物的抗炎作用以及急性毒性进行评价。方法 以二倍体金银花为对照，分别采用角叉菜
胶诱导大鼠足肿胀实验、大鼠棉球肉芽肿实验对四倍体金银花水提物进行抗炎活性评价；采用 Bliss 法测定小鼠的半数致死
量（LD50）对其进行急性毒性评价。结果 四倍体金银花水提物具有明显的抗急性炎症作用，与亲本二倍体金银花之间抗炎
作用差异不具有统计学意义，2 个种质均不具有明显的抗亚急性炎症作用。四倍体和二倍体金银花水提物 ig 给药对小鼠
的 LD50 值分别为 72.12、69.92 g/kg，急性毒性差异不明显，分别相当于人体（体质量 60 kg）安全用量的 412 和 400 倍。
结论 四倍体金银花水提物具有明显的抗急性炎症作用，在一定剂量范围内使用较为安全。
关键词：金银花；四倍体；二倍体；抗炎作用；急性毒性
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)11 - 1649 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.016
Experimental study on anti-inflammatory effects and acute toxicity of aqueous
extract from tetraploid Lonicerae Flos
HU Xuan1, 2, LI Wei-dong2, 3, ZHANG Shuo-feng2, LI Ou2, HAO Jiang-bo2, 3, MO Chou2, 3
1. Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key Laboratory of Crop Gene
Resources and Germplasm Enhancement in Southern China, Danzhou 571737, China
2. School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China
3. Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs, Ministry of Education, Beijing University
of Chinese Medicine, Beijing 100102, China
Abstract: Objective To evaluate the anti-inflammatory effects and acute toxicity of the aqueous extract form tetraploid Lonicerae Flos.
Methods Compared with the diploid, the paw swelling of rats induced by carrageenan and cotton pellet granuloma tests were obtained to
study the anti-inflammatory effects of the tetraploid Lonicerae Flos. A pretest was used to judge the possibility of LD50 in the acute toxicity
test. The experimental data are calculated LD50 on mice by Bliss method to evaluate the acute toxicity of the diploid Lonicerae Flos.
Results The tetraploid Lonicerae Flos had the significant resistance to acute inflammation, but there was not significance between the
two ploidies. Neither the tetraploid nor the diploid had the obvious subacute inflammation resistance effects. The possibility of measuring
LD50 was definite through pre-test. The LD50 of the aqueous extract from the two ploidies were 72.12 and 69.92 g/kg, respectively.
However, there was no obvious difference in acute toxicity between the two ploidies. And the LD50 of mice was equal to 412 and 400 times
of 60 kg normal human’s daily dried medicinal herb expenses respectively. Conclusion The tetraploid Lonicerae Flos has the significant
anti-inflammation with less toxic and side effect. It could be used safely in a certain dose range.
Key words: Lonicerae Flos; tetraploid; diploid; anti-inflammation; acute toxicity

金银花 Lonicerae Flos 为忍冬科（Caprifoliaceae）
植物忍冬 Lonicera japonica Thunb. 的干燥花蕾或
带初开的花，性味甘、寒[1]。其具有清热解毒、凉
散风热之功效，主治痈肿疔疮、丹毒、喉痹、风热

收稿日期：2014-11-19
基金项目：国家自然科学基金资助项目（31370360）
作者简介：胡 璇（1986—），女，硕士，研究方向为南药资源综合利用。Tel: (0898)23301253 E-mail: mchuxuan@163.com
*通信作者 李卫东（1970—），副研究员，硕士生导师。Tel: (010)84738334 E-mail: liweidong2005@126.com
张硕峰（1969—），硕士生导师。Tel: (010)84738627 E-mail: shuofengzhang@sina.com
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感冒、热毒血痢、温病发热[2]。金银花是重要的大
宗药材，也是重要的药食两用药材，广泛应用于医
药、食品、日化用品等领域，特别是在抗击非典型
肺炎中发挥了重要作用。
为开辟金银花新药源，以二倍体金银花“大毛花”
为亲本，采用秋水仙素诱导培育而成了四倍体金银花
“九丰一号”，并通过了国家级品种审定。四倍体金银
花具有产量高[3]、品质优、抗逆性强、采摘省工[4-5]
等优势，已在全国大面积推广种植。前期研究表明，
四倍体金银花中绿原酸和木犀草苷的量显著高于二
倍体金银花[6]，但是，目前缺乏其药效学和相关安全
性评价研究。已获得的大部分多倍体药材如丹参[7]、
天山雪莲[8]、白术[9]、板蓝根[10]等是从产量和化学的
角度对药材进行分析评价，目前缺少多倍体药材药效
和毒性研究。本研究选择四倍体金银花为受试药物，
以二倍体金银花为对照药材，对四倍体金银花水提物
的抗炎作用和急性毒性进行评价，探究四倍体金银花
临床应用的可能性和安全性。
1 材料
1.1 药材
以山东平邑九间棚基地种植的四倍体金银花
“九丰一号”品种为受试药材，以二倍体金银花“大
毛花”品种为对照药材，同期分别采集 2 个品种的
第 1 茬二白期鲜花蕾，鲜花蕾采用滚筒杀青烘干加
工方法干燥[7]，样品由北京中医药大学李卫东副研
究员鉴定均为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica
Thunb. 的干燥花蕾。
1.2 动物
清洁级 SD 大鼠，雄性，体质量 180～200 g，
由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格
证号 SCXK（京）2007-0001。清洁级 ICR 小鼠，雌
雄各半，体质量 18～22 g，由斯贝福（北京）实验
动物科技有限公司提供，合格证号 SCXK（京）
2011-0004。
1.3 药品和试剂
醋酸地塞米松片，天津太平洋制药有限公司提
供，批号 1110020；庆大霉素，上海现代哈森（商
丘）药业有限公司提供，批号 10040512；角叉菜胶，
Sigma 公司提供，批号 127H1227；棉球，每个 50 mg，
高压灭菌，加入庆大霉素 0.1 mL，50 ℃烘箱烤干。
2 方法
2.1 金银花提取物的制备
取四倍体金银花药材 500 g，用 20 倍蒸馏水浸
泡静置 40 min 后煎煮 30 min，用 4 层纱布滤过，滤
渣再煎煮 30 min，纱布滤过后合并滤液，煎液减压
浓缩至含生药 0.595 g/mL，置于冰箱备用，临用前
稀释。取二倍体金银花对照药材 500 g，同样方法
制备水提物。
急性毒性实验受试和对照药材制备方法同前，
但受试药材浓缩至混悬液含生药 1.85 g/mL，确定为
小鼠 ig 给药的最大质量浓度。对照药材浓缩至混悬
液含生药 2 g/mL。
2.2 角叉菜胶致大鼠足肿胀实验[11]
取 SD 大鼠 78 只，随机分成 6 组，分别为模型
组，阳性对照组，四倍体金银花水提物高、低剂量
（2.97、1.44 g/kg）组，二倍体金银花水提物高、低
剂量（2.97、1.44 g/kg）组，每组 13 只。模型组 ig
给予等量的蒸馏水，阳性对照组 ig 给予醋酸地塞米
松溶液 0.5 mg/kg，四倍体金银花提取物组和二倍体
金银花水提物组分别 ig 给予相应剂量的提取物，各
组每天给药 1 次，连续 5 d。于末次给药后 1 h，在
每只大鼠右后足跖部皮内注射 1%角叉菜胶 0.1
mL，分别于致炎后 1、2、4、6 h 用软皮尺测量右
后足跖周长，并测量左后足跖相应部位的周长，计
算肿胀率。
肿胀率＝(右后足跖周长－左后足跖周长)/左后足跖周长
2.3 大鼠棉球肉芽肿增生实验[12]
大鼠分组和给药剂量、途径同“2.2”项。各组
大鼠用水合氯醛麻醉，在无菌条件下于腹部正中作
一开口，用止血钳剥离皮肤至腹股沟处，将预先高
压灭菌并加入庆大霉素0.1 mL的50 mg棉球植入腹
股沟处。待动物清醒后开始给药，连续 14 d。末次
给药后 1 h，脱颈椎处死大鼠，剥离并取出棉球肉
芽肿组织，置于电子天平上称质量，即为棉球肉芽
肿湿质量，将棉球肉芽肿置于 110 ℃烘箱中，干燥
48 h，取出称量即为棉球肉芽肿干质量。分别用棉
球肉芽肿湿质量或干质量减去原棉球质量即为肉
芽肿质量。
2.4 急性毒性实验[13]
取小鼠 100 只，雌雄各半，随机分为 10 组，1～
5 组为不同剂量的四倍体金银花水提物组，给药剂
量分别为 90.80、75.67、62.06、52.55、43.79 g/kg，
6～10 组为不同剂量的二倍体金银花水提物组，给
药剂量分别为 83.33、69.44、57.87、48.22、40.19
g/kg，给药体积均为小鼠最大给药量。给药前，小
鼠禁食 12 h（自由饮水），于次日上午 ig 给药 1 次，
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月 ·1651·

常规饲养，连续观察 14 d，记录动物的毒性反应和
死亡情况。在给药 14 d 后处死所有小鼠，肉眼观
察小鼠主要脏器的变化，发现病变情况需要做组织
病理学检查。
2.5 统计学方法
抗炎实验各组实验数据采用 SPSS 16.0 软件进
行统计分析，实验结果以 ±x s 表示，组间比较采用
单因素方差分析；急性毒性实验中半数致死剂量
（LD50）采用 Bliss 法进行计算。
3 结果
3.1 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
由表 1 可知，四倍体、二倍体金银花水提物各
剂量组在多个时间点可明显减轻大鼠的足肿胀程
度。其中四倍体金银花水提物高剂量组在致炎后
2、4、6 h，低剂量组在致炎后 1、4、6 h 作用明显，
与模型组比较，大鼠足肿胀率明显降低（P＜0.05、
0.01）。二倍体金银花水提物高、低剂量组在致炎
后各时间点作用明显，与模型组比较，大鼠足肿
胀率明显降低（P＜0.05、0.01）。四倍体金银花
水提物和二倍体金银花水提物各组之间差异不
显著。
3.2 对大鼠棉球肉芽肿增生的影响
由表 2 可知，四倍体和二倍体金银花水提物各
剂量组对大鼠棉球肉芽肿干、湿质量无明显影响。
四倍体和二倍体金银花水提物各剂量组间肉芽肿
干、湿质量差异不显著。
3.3 急性毒性反应及 LD50 测定结果
四倍体和二倍体金银花水提物各剂量组 ig 给
药后小鼠活动量减少，食欲减弱，出现便溏现象，
约 15 h 后恢复正常。动物死亡主要发生在 48 h 内，
对死亡动物进行尸检，裸眼下观察心、肺、肝、肾、
脾、胸腺等重要器官，无明显异常。对存活下来的
小鼠连续观察 14 d，情况良好，未出现其他毒性反
应情况，死亡情况也未继续发生。给药 14 d 后，处
表 1 四倍体和二倍体金银花水提物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响 ( x ±s, n = 13)
Table 1 Effects of aqueous extract from tetraploid and diploid Lonicerae Flos on paw swelling of rats induced by carrageenan
( x ±s, n = 13)
组别 剂量/(g·kg− 1) 致炎后不同时间点大鼠足肿胀率/%
1 h 2 h 4 h 6 h
模型 — 30.3± 7.8 38.7± 5.9 42.8±10.3 45.4±15.9
地塞米松 0.000 5 18.9± 9.9** 28.2± 7.7** 28.3± 8.1** 24.1± 7.0**
四倍体金银花 2.97 22.6±11.7 26.1±12.9** 29.2±11.9** 29.3±14.7*
1.44 17.3± 8.0** 36.9±11.1 31.1±11.2* 22.1± 9.4**
二倍体金银花 2.97 14.8±10.7** 22.5±10.4** 27.0±10.4* 29.0±14.9*
1.44 14.7±10.4** 26.9±10.9** 24.8±13.3** 31.2±16.2*
与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01，下同
*P < 0.05 **P < 0.01 vs model group, same as below
表 2 四倍体和二倍体金银花水提物对大鼠棉球肉芽肿
质量的影响 ( x ±s, n = 13)
Table 2 Effects of aqueous extract from tetraploid and diploid
Lonicerae Flos on granuloma quality of rats ( x ±s, n = 13)
组别
剂量/
(g·kg−1)
肉芽肿湿
质量/mg
肉芽肿干
质量/mg
模型 — 725.7± 74.9 148.8±24.0
地塞米松 0.000 5 491.6± 85.7** 91.6±18.4**
四倍体金银花 2.97 743.2±102.9 150.1±19.5
1.44 750.2± 62.1 151.8±11.9
二倍体金银花 2.97 703.1± 99.8 143.7±20.2
1.44 737.8±107.1 151.5±19.9

死所有小鼠，肉眼观察其内脏组织均未见明显异
常，统计各剂量组的死亡率，通过 Bliss 软件计算
四倍体和二倍体金银花水提物的 LD50 分别为
72.12、69.92 g/kg，95%可信限分别为 64.83～82.93、
62.13～84.99 g/kg，差异不显著。结果见表 3。
4 讨论
多倍体植物作为新药用植物资源药材在使用
前，需要进行有效性和安全性评价。药用植物加倍
后会导致化学组分和有效成分量的变化，研究报
道，在相同剂量下，四倍体丹参比二倍体丹参有较
强的改善微循环及增加微血管口径的作用，而对毛
细血管开放数的影响两者无明显差异[14]。但是目前
关于多倍体的毒性研究未见报道。
·1652· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月

表 3 四倍体和二倍体金银花水提物对小鼠急性毒性结果
Table 3 Results of aqueous extract from tetraploid and diploid
Lonicerae Flos on LD50 of mice
组别 剂量/
(g·kg−1)
对数剂量 死亡数/只
死亡率/
%
四倍体金银花

90.80 1.958 1 8 80
75.67 1.878 9 6 60
62.06 1.792 8 3 30
52.55 1.720 6 1 10
43.79 1.641 4 0 0
二倍体金银花

83.33 1.920 8 7 70
69.44 1.841 6 5 50
57.87 1.762 5 3 30
48.22 1.683 2 1 10
40.19 1.604 1 0 0

本实验采用了急性和亚急性炎症动物模型，对
四倍体金银花水提物的抗炎作用进行了探讨。研究
结果表明，四倍体金银花与二倍体金银花水提物在
多个时间点均能有效抑制大鼠角叉菜胶足跖肿胀，
对急性渗出性炎症均有明显抑制作用，但是 2 个种
质之间差异不具有统计学意义，二者对慢性炎症的
肉芽组织增生均无明显抑制作用。本研究表明，四
倍体金银花在急性渗出性炎症方面能够应用于临
床。二倍体金银花水提物高、低剂量组在致炎后 1 h
后有明显抑制作用，而四倍体金银花水提物只有低
剂量组在致炎后 1 h 有明显抑制作用，表明在相同剂
量下，四倍体和二倍体产生抑制作用的时间点是有
差异的，这种差异有待于进一步研究。
急性毒性实验中四倍体和二倍体金银花水提
物均未使小鼠有明显临床中毒表现，但是出现死亡
现象，通过预试验判断存在 LD50。采用 Bliss 法计
算四倍体和二倍体金银花水提物的 LD50，两者的
95%可信区间范围较窄，方法精确度高。四倍体金
银花水提物 LD50 值为生药 72.12 g/kg，按《中国药
典》2010 年版规定金银花人体日用量为 6～15 g[1]，
按 60 kg 体质量算，相当于人体安全用量的 412 倍，
二倍体金银花水提物 LD50值为 69.92 g/kg，相当于人
体用量的 400 倍，两者急性毒性相当，没有显著差异。
一般按体质量计算，小鼠最大给药量相当于成人临床
日用量 100 倍以上则认为是较为安全的[15]。本研究认
为，四倍体金银花在一定剂量内使用是安全的。
本实验结果表明四倍体金银花抗炎作用与急
性毒性同亲本二倍体金银花比较，并无显著差异，
为四倍体金银花的开发利用提供了初步的药效学
和毒理学基础，其临床应用有效性及安全性尚需深
入探讨。
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