全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月 ·2251·

• 药理与临床 •
云南重楼中血管内皮生长因子结合因子的活性研究
李彤彤 1, 2#，高 飞 2#，段承俐 2，王向军 2，钱永常 2, 3*
1. 云南农业大学农学与生物技术学院，云南 昆明 650201
2. 浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江 临安 311300
3. 美国德克萨斯农工大学 综合生物学系，美国德克萨斯州大学城 77843-4458
摘 要：目的 筛选并分离云南重楼水提物中能与血管内皮生长因子（VEGF）蛋白结合的物质，并探究其对 VEGF的刺激
作用。方法 采用固相化 VEGF亲和柱色谱的方法筛选云南重楼水提物中的 VEGF结合因子，HPLC法进一步分离纯化该因
子成分，并采用MTT法以 VEGF敏感型细胞株 HepG2为模型验证该因子活性，采用 UV、RRLC-QTOF检测，推测该因子
可能的成分组成。结果 从云南重楼水提物中筛选到能与 VEGF蛋白结合的因子（命名为因子 B3），HPLC分离纯化后因子
B3可以促进 VEGF敏感型细胞 HepG2的增殖，而对 VEGF不敏感型细胞 HEK293的增殖没有影响。因子 B3和 VEGF蛋白
对 HepG2细胞的增殖促进作用存在叠加效应；而这种效应可以被 VEGF抗体阻断；因子 B3本身对 HepG2细胞的增殖作用
也可以被 VEGF抗体阻断。通过 UV和 RRLC-QTOF检测，推测因子 B3可能为皂苷类成分。结论 云南重楼中分离得到的
因子 B3具有促进 VEGF功能的活性。
关键词：云南重楼；血管内皮生长因子；因子 B3；亲和柱色谱；皂苷类成分
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)15 - 2251 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.15.013
Study on activity of VEGF-binding factors in Paris polyphylla
LI Tong-tong1, 2, GAO Fei2, DUAN Cheng-li2, WANG Xiang-jun2, QIAN Yong-chang2, 3
1. College of Agriculture and Bio-technology, Yunnan Agriculture University, Kunming 650201, China
2. The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture, Zhejiang A&F University, Lin’an 311300, China
3. Department of Integrative Biosciences, College Station, Texas A&M University, Texas 77843-4458, USA
Abstract: Objective To screen and isolate vascular endothelial growth factor (VEGF)-binding factors from Paris polyphylla var.
yunnanensis, and explore their property for stimulating VEGF activity. Methods The VEGF-binding factors from water extract of P.
polyphylla var. yunnanensis were screened by VEGF-affinity chromatography and further purified by HPLC method. Their activity on
proliferation of VEGF-dependent cells was determined by MTT analysis with sensitive cell line HepG2 as model. We also predicted
the possible components according to RRLC-QTOF and UV results. Results The VEGF-binding factors screened from the water
extract of P. polyphylla var. yunnanensis were named as factor B3 which included three compounds and could induce the proliferation
of VEGF-dependent cell line HepG2 but not the VEGF-independent cell line HEK293. Further studies indicated that factor B3 had an
additive effect with VEGF to induce the proliferation of HepG2, and the additive effect could be attenuated by VEGF antibody. In
addition, the proliferation of HepG2 cells induced by factor B3 alone could also be attenuated by VEGF antibody. Furthermore, based
on the results of RRLC-QTOF and UV analysis, we predicted that factor B3 are probably members of saponin family. Conclusion The
factor B3 isolated from P. polyphylla var. yunnanensis has the property to stimulate VEGF activity.
Key words: Paris polyphylla Smith. var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz.; vascular endothelial growth factor; factor B3; affinity
column chromatography; saponins

收稿日期：2015-01-07
基金项目：浙江农林大学科研发展基金（2012FR017）；浙江省自然科学基金资助项目（LQ14H280007）
作者简介：李彤彤（1991—），女，在读硕士研究生，主要从事天然产物活性因子的开发和利用。E-mail: litongchina90@163.com
高 飞（1981—），男，主要从事天然产物中抗肿瘤活性因子的筛选。E-mail: gfei1981@live.com
*通信作者 钱永常（1962—），男，主要从事神经细胞生物学、肿瘤细胞生物学及天然药物的研究。Fax: (0571)63740809 E-mail: qian3906@zafu.edu.cn
#共同第一作者
·2252· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月

重楼 Rhizoma Paridis 是百合科重楼属植物的
总称，又名蚤休，入药部位为其根茎，具有清热解
毒、抗菌消炎、通络活血、凉肝定惊等功效[1-2]，从
古至今被应用于蛇药和治疗妇科的各种血症。《中
国药典》2010 年版收载云南重楼 Paris polyphylla
Smith. var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz. 或七
叶一枝花 Paris polyphylla Smith. var. chinensis
(Franch.) Hara作为药材重楼的基原植物[3]。云南重
楼在我国传统医学领域被认为是具有舒筋活血功
能的重要传统中药[2]，常作为君药用于治疗下肢静
脉血栓、血管闭塞性冠脉炎等血管类疾病。
血管内皮生长因子（vascular endothelial growth
factor，VEGF）是一种高度保守的同源二聚体糖蛋
白，其与血管内皮细胞膜上的特异性受体结合后，
能够促进内皮细胞的生长和增殖，增加血管的渗透
性，形成血管生成的临时基质，VEGF 也是新生血
管的关键调控者。VEGF 含有多种亚型，其中
VEGF165 蛋白活性最强，是 VEGF 家族中最重要
的血管生成调节因子。VEGF165蛋白在心血管领域
中已被应用于冠心病防治的研究，发现其可促进小
冠状血管侧枝循环的建立，恢复心肌血流供应，减
少梗死面积，促进缺血心肌的功能恢复[4-6]。与此同
时，VEGF165蛋白也具有美容的功效，与其他细胞
因子的协同作用可以有效促进新生毛细血管的生
成，提高真皮微血管的数目，改善皮肤的新陈代谢，
起到延缓衰老的作用。
VEGF 是血管生成的关键调控因子，筛选与之
作用从而促进血管生成的功能因子，尤其是来自天
然产物中的功能因子，对于血管类疾病的治疗具有
极为重要的意义。云南重楼具有舒筋活血的功效，
因此，本研究采用固相化VEGF亲和柱色谱的方法，
从云南重楼的水提物中筛选出能与 VEGF蛋白（具
体亚型为 VEGF165 蛋白）结合的物质。进而分离
纯化该物质，用筛选出的 VEGF敏感型细胞株作为
模型[7]，对其活性进行评价研究。
1 材料
1.1 药材
5 年生的新鲜云南重楼采自云南省大理市弥渡
县，经浙江农林大学林生院中药学科段承俐副教授
鉴定为云南重楼 Paris polyphylla Smith. var.
yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz. 的新鲜根茎。
1.2 细胞株
人肝癌细胞 HepG2、人肾癌细胞 HEK293由浙
江大学药学院曾苏教授实验室馈赠。
1.3 试剂
VEGF亲和色谱柱（产品目录号NRPB03S-5mL）
和人血清白蛋白（HSA）亲和色谱柱（产品目录号
NRPB99S-5mL）均购自杭州纽龙生物科技有限公
司。DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国 HyClone
公司）；胰蛋白酶、双抗（美国 Sigma 公司）；MTT
试剂盒［生工生物工程（上海）有限公司）］；VEGF165
蛋白、VEGF抗体（杭州纽龙生物科技有限公司）；
色谱纯乙腈、甲醇（西班牙 Scharlau公司）；甘氨酸、
Tris、HCl（上海凌峰化学试剂有限公司）。
1.4 仪器
Agilent RRLC液相色谱系统（包括 G1312B型
二元输液泵，G1322A型脱气机，G1367D型自动进
样器和 G1316A型柱温箱）；Agilent 6530型四极杆-
飞行时间串联质谱仪，配备电喷雾电离源（ESI源）
及 Agilent Mass Hunter 数据采集软件（version
B.02.01）；HPLC-DAD Agilent 1100（美国安捷伦公
司）；Milli-Q 超纯水系统（美国 Millipore 公司）；
CF16RX II高速冷冻离心机（日本 HITACHI公司）；
Class II BSC 生物安全柜（新加坡 ESCO 公司）；
MCO-18AIC 细胞培养箱（日本三洋公司）；
PMI-3000B荧光倒置相差显微镜（德国徕卡公司）；
MULTISKAN-FC酶标仪（美国Thermo公司）；R-210
旋转蒸发仪（瑞士 BUCHI公司）。
2 方法
2.1 云南重楼水提物的制备
新鲜云南重楼用清水洗净后切片晒干，打磨成
粉。取 10 g粉末置 500 mL烧杯中，加入蒸馏水 200
mL，在保持微沸状态下煎煮 1 h，取煎煮液，再重
复煎煮 2 次，合并 3 次煎煮液约 500 mL，室温下
12 000 r/min离心 15 min，取上清液，用旋转蒸发
仪浓缩至体积 100 mL，调 pH值至 7.2，得云南重
楼水提物（相当于生药量 0.1 g/mL）。
2.2 云南重楼水提物的亲和柱色谱分离
VEGF亲和柱色谱分离过程：先用 50 mL的 A
液（50 mmol/L Tirs-HCl，pH 7.2）进行VEGF亲和柱
色谱活化平衡，取 50 mL 云南重楼水提物上样于
VEGF亲和色谱柱，用 50 mL的A液再次平衡柱体，
除去未结合的物质；接着用 50 mL的 B液（PBS，
pH 6.0）洗脱柱子，除去结合能力弱的物质；最后用
50 mL的 C液（100 mmol/L甘氨酸溶液，pH 3.0）洗
脱目的物质[8]；收集洗脱液 C洗脱的组分进行 HPLC
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月 ·2253·

分析。HSA 亲和色谱柱作为特异性结合化合物测定
的阴性对照，方法同 VEGF亲和色谱柱分离过程。
2.3 HPLC检测
Waters XBridge-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为水（A）-乙腈（B），梯度洗脱：0～
40 min，5%～90% B；检测波长 210 nm，柱温 25 ℃，
体积流量 1 mL/min，进样量 30 μL。
2.4 功能因子的 HPLC收集
根据“2.2”项的结果，把与 VEGF 蛋白特异
结合（不与 HSA结合）的洗脱液冷冻干燥，用 1 mL
5%乙腈溶解，进行 HPLC 分析。根据特异性结合
化合物的出峰时间，收集与 VEGF 蛋白特异结合
的因子，旋蒸去除有机溶剂后用无菌超纯水溶解，
再次进行冷冻干燥并定容至 1 mL，然后用 0.22 μm
滤膜滤过，按“2.3”项下方法再次对制备好的因
子样品进行 HPLC 检测，确认特异因子的存在，
并根据峰面积归一化法估算纯度，因子在−80 ℃
冰箱保存备用。
2.5 VEGF敏感型细胞株的筛选
将消化后重悬的 HepG2 和 HEK293 细胞浓度
调整为 2×104个/mL，按每孔 100 μL（2 000个细
胞/孔）接种于 96 孔板中，实验组加入不同质量浓
度的 VEGF蛋白 10 μL，使培养基中 VEGF终质量
浓度分别为 4、20、100、200、500 ng/mL，阴性对
照组加无菌超纯水 10 μL，每组 5个复孔，处理 24 h
后用MTT法测定细胞增殖效果［以 490 nm处吸光
度值（A490）表示］，绘制细胞生长曲线，重复 3次。
2.6 功能因子对细胞增殖的影响
HepG2、HEK293细胞接种方法同“2.5”项，
把分离得到的因子溶液用无菌超纯水以 5倍的梯度
依次稀释，得到 5个质量浓度样品（每个质量浓度
之间相差 5 倍），每孔加入对应质量浓度的因子各
10 μL，因子终质量浓度分别相当于生药量为 500.0、
100.0、20.0、4.0、0.8 mg/mL。阴性对照组加无菌
超纯水 10 μL，处理 24 h后用MTT法测定细胞增
殖效果，绘制细胞生长曲线，重复 3次。
2.7 功能因子、VEGF 蛋白和 VEGF 抗体对细胞
增殖的影响
HepG2细胞接种方法同“2.5”项，设置 4批实
验。第 1批样品组加入不同质量浓度功能因子（终
质量浓度分别相当于生药量为 500.0、100.0、20.0、
4.0、0.8 mg/mL），阴性对照组加无菌超纯水，阳性
对照组加 VEGF蛋白（终质量浓度为 20 ng/mL）。
第 2批样品组加入不同质量浓度功能因子（质量浓
度同第 1批实验）和 VEGF蛋白（终质量浓度为 20
ng/mL），阴性对照组加无菌超纯水，阳性对照组加
VEGF蛋白（终质量浓度为 20 ng/mL）。第 3批样
品组加入不同质量浓度功能因子（质量浓度同第 1
批实验）、VEGF 蛋白（终质量浓度为 20 ng/mL）
和 VEGF抗体（终质量浓度为 200 ng/mL），阴性对
照组加无菌超纯水，阳性对照组加 VEGF蛋白（终
质量浓度为 20 ng/mL）和 VEGF抗体（终质量浓度
为 200 ng/mL）。第 4批样品组加入不同质量浓度功
能因子（质量浓度同第 1批实验）和 VEGF抗体（终
质量浓度为 200 ng/mL），阴性对照组加无菌超纯
水，阳性对照组加 VEGF抗体（终质量浓度为 200
ng/mL）。4批实验加入不同处理因素的体积均为 10
μL，处理 24 h后用MTT法测定细胞增殖效果，绘
制细胞生长曲线，重复 3次。
2.8 RRLC-QTOF测定精确相对分子质量
采用高分辨质谱测定功能因子的精确质量数，
推断可能的结构类型。将“2.4”项下收集到的因子
组分按照下述液质条件测定精确相对分子质量。
RRLC-QTOF测定条件：Waters XBridge-C18色谱
柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为水（A）-
乙腈（B），梯度洗脱：0～40 min，5%～90% B；
检测波长 210 nm，柱温 25 ℃，体积流量 1 mL/min，
采用柱后分流，分流进质谱仪的体积流量为 0.3
mL/min，紫外检测器体积流量为 0.7 mL/min。进样
体积 3 μL。离子源为电喷雾离子源（ESI源），正离
子模式检测；干燥气温度为 300 ℃；干燥气体积流
量为 8 L/min；鞘气温度为 300 ℃；鞘气体积流量
为 10 L/min，毛细管电压为 3 500 V；喷雾针气压为
310.275 kPa（45 psi），skimmer电压为 45 V，MS2
碰撞能量（CE）为 16 V。
3 结果
3.1 VEGF亲和柱结合物的 HPLC分析
HPLC 分析（图 1）显示，云南重楼水提物中
观察到 3个能与 VEGF亲和的信号峰（命名为因子
B3），保留时间在 15.6 min左右；而因子 B3不能与
HSA亲和，表明因子 B3与 VEGF结合是特异性的。
3.2 VEGF结合因子 B3的 HPLC分离和收集
进一步对因子 B3进行分离、纯化和收集。根据
纯化因子 B3的 HPLC 检测结果，使用峰面积归一
化法估算出因子 B3的质量分数大于 90%，见图 2。
经计算，因子 B3的质量浓度相当于生药量 5 g/mL。
·2254· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月




图 1 云南重楼水提物 VEGF 和 HSA 亲和色谱柱结合
成分的 HPLC分析
Fig. 1 HPLC analysis of P. polyphylla var. yunnanensis
water extracts binding to VEGF and HSA affinity columns



图 2 云南重楼水提物中因子 B3纯化后的 HPLC分析
Fig. 2 HPLC analysis of purified factors B3 from P.
polyphylla var. yunnanensis water extract
3.3 VEGF敏感型细胞株的筛选
通过 MTT 方法筛选出对 VEGF敏感的细胞株
作为细胞模型，对VEGF不敏感的细胞株作为对照。
结果显示，不同质量浓度的 VEGF 蛋白对 HepG2
细胞的增殖均有促进作用（P＜0.01），并在 VEGF
蛋白质量浓度为 20 ng/mL时，促进作用最为显著，
当 VEGF蛋白质量浓度＞100 ng/mL时，促进作用
逐渐减弱。而 VEGF蛋白对 HEK293细胞的增殖没
有促进作用（P＞0.05），见图 3。
3.4 因子 B3对细胞增殖的影响
在没有外加 VEGF蛋白的条件下，当因子 B3的
质量浓度＞4.0 mg/mL时，能够显著诱导 VEGF敏感
型细胞 HepG2 的增殖，并呈剂量依赖关系（P＜
0.01），但不能诱导 VEGF 不敏感型细胞 HEK293
的增殖，见图 4。
3.5 VEGF抗体对因子 B3和 VEGF诱导细胞增殖
的抑制作用
图 5显示，仅加入因子 B3（第 1批实验）及同
时加入因子 B3和 20 ng/mL VEGF蛋白（第 2批实
验）均能够显著诱导 VEGF 敏感型细胞 HepG2 增
殖（P＜0.05）；在 VEGF（20 ng/mL）被 VEGF抗
体（200 ng/mL）阻断条件下（第 3批实验），因子




与阴性对照组比较：**P＜0.01，图 4同
**P < 0.01 vs negative control group, Fig.4 is same
图 3 不同质量浓度的 VEGF 蛋白对 HepG2 和 HEK293
细胞增殖的影响 ( x±s, n = 3 )
Fig. 3 Effects of VEGF protein at different concentration
on proliferation of HepG2 and HEK293 cells ( x±s, n = 3 )




与阴性对照组比较：**P＜0.01
**P < 0.01 vs negative control group
图 4 因子 B3 对 HepG2 和 HEK293 细胞增殖的影响
( x±s, n = 3 )
Fig. 4 Effects of factor B3 on proliferation of HepG2 and
HEK293 cells ( x±s, n = 3 )
B3和 VEGF对 VEGF敏感型细胞 HepG2增殖没有
影响；而在培养基中只加 VEGF抗体（200 ng/mL），
不加 VEGF蛋白条件下（第 4批实验），因子 B3对
VEGF 敏感型细胞 HepG2 增殖无影响，甚至在
VEGF 抗体的作用下呈现抑制细胞增殖的趋势。结
果说明因子 B3通过增加或激活 VEGF 活性的途径
促进 HepG2 细胞增殖，而不是直接作用于 HepG2
细胞。
0 5 10 15 20 25
t/min

VEGF
HSA
13.5 14.0 14.5 15.0 15.5 16.0 16.5 17.0 17.5
t/min

A 4
90

0.6


0.5



0.4



0.3



0.2



0.1


0.0
阴性对照 4 20 100 200 500
VEGF/(ng·mL−1)

**
**
**
** **


HepG2
HEK293

阴性对照 0.8 4.0 20.0 100.0 500.0
因子 B3/(mg·mL−1)

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0.0
A 4
90

** **
**
**

HepG2
HEK293
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月 ·2255·





与阴性对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01
*P < 0.05 **P < 0.01 vs negative control group
图 5 VEGF抗体对因子 B3和 VEGF诱导细胞增殖的影响
( x±s, n = 3 )
Fig. 5 Effect of VEGF antibody on proliferation of HepG2
cells induced by factor B3 ( x±s, n = 3 )
3.6 因子 B3精确相对分子质量测定
采用 RRLC-QTOF 对因子 B3可能存在的化合
物进行精确相对分子质量的测定，得到 3个精确相
对分子质量的检测结果（图 6）。根据保留时间，3
个化合物（编号为 A、B、C）的质荷比（m/z）分
别为 504.320 2、679.514 1和 570.358 9，根据同位
素及其丰度，通过安捷伦质谱软件（Agilent Mass
Hunter数据采集软件，version B.02.01），推导得到
A和 C的质谱信号均带双电荷，为 [M＋2H]2+峰；
B 化合物的质谱信号中 m/z 679.514 1 为 [M＋H]+
峰，m/z 701.496 1为 [M＋Na]+峰。因此，3个化合
物的相对分子质量依次为 1 006.624 8、678.506 3和
1 138.702 2。通过 Agilent Mass Hunter数据采集软
件，得到这 3个化合物可能的分子式（表 1）。此外，
通过 DAD 的光谱扫描，得到 3 个化合物的 UV 图
谱（图 6中的小图）。
4 讨论
本研究首次报道云南重楼中存在水溶性的功能





图 6 因子 B3的 RRLC-QTOF和 UV检测结果
Fig. 6 Results of factor B3 using RRLC-QTOF and UV method
因子 B3，它不能与 HSA结合，而能与 VEGF蛋白
亲和结合，这说明因子 B3具有高度的 VEGF结合
特异性，具有潜在调节 VEGF蛋白的功能。
模型细胞增殖实验结果表明，因子 B3具有促进
依赖 VEGF 生长的细胞增殖的作用，而对不依赖
VEGF 的细胞增殖没有促进作用。进一步的研究表
A
B
C
504.320 2
250 300 350
λ/nm
200 300 400 500 600 700 800 900 1 000 1 100
m/z


250 300 350
λ/nm

701.496 1
679.514 1

250 300 350
λ/nm

第 1批实验
第 2批实验
第 3批实验
第 4批实验
0.6


0.5


0.4


0.3


0.2


0.1


0.0
阴性对照 阳性对照 0.8 4.0 20.0 100.0 500.0
因子 B3/(mg·mL−1)

A 4
90

570.358 9
**

**
**
*
**
*
**
** **
** **
·2256· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 15期 2015年 8月

表 1 因子 B3中 3个化合物的可能分子式、相对分子质量及匹配度
Table 1 Possible molecular formula, molecular mass, and matching degree of three compounds in factor B3
化合物 可能分子式 相对分子质量 质量匹配度 综合匹配度
A C44H90N6O19 1 006.624 7 99.98 97.75
C41H82N16O13 1 006.623 3 98.32 95.87
C40H86N10O15 1 006.622 1 93.12 95.15
B C40H70O8 678.506 4 99.70 93.70
C37H62N10O2 678.505 1 96.73 93.48
C30H62N16S 678.505 8 99.53 93.43
C C47H94N16O16 1 138.702 1 100.00 98.63
C46H98N12O20 1 138.700 7 98.43 97.94
C48H90N20O12 1 138.703 3 98.40 97.36

明，当VEGF被其抗体失活后，因子B3对依赖VEGF
的细胞增殖没有促进作用。这些结果揭示，在云南
重楼中发现的水溶物因子 B3 是直接通过和 VEGF
的相互作用来调节细胞的增殖。因为 VEGF蛋白参
与心脑血管疾病、缺血缺氧性疾病及新生血管的形
成、生长[5]，故推测其可能是重楼活血化瘀方面的
分子基础。同时，云南重楼在我国传统医学领域被
认为是舒筋活血功能的重要传统中药[2]，常作为君
药用于治疗下肢静脉血栓、血管闭塞性冠脉炎等疾
病。因此，本研究发现的因子 B3可能是云南重楼舒
筋活血功效的有效成分之一，是一类增强血管功能
的活性因子，对传统中药资源的开发利用具有重要
的研究价值和现实意义。
根据因子 B3的 RRLC-QTOF测定结果，结合 3
个化合物的紫外光谱图以及在电喷雾正离子化模
式下出现双电荷的现象，推断因子 B3中至少可能存
在的 3个化合物为皂苷类成分。根据表 1中这 3个
化合物可能的分子式和相对分子质量，查阅文献和
资料，并没有发现类似的化合物，因此推测这 3个
极有可能是新的化合物，但最终结构的完全确证需
要在接下来的工作中进一步展开。
本研究虽然报道因子 B3通过和 VEGF 相互作
用后调节细胞的增殖，但是在依赖 VEGF的 HepG2
细胞中，没有外加 VEGF 的条件下，因子 B3还是
诱导细胞的增殖，这可能与 HepG2细胞可以合成并
且分泌 VEGF蛋白到细胞外有关[9]，微量 VEGF存
在于培养基中以介导因子 B3 的作用，因为 VEGF
抗体可以拮抗因子 B3的诱导作用。这种推测可能和
培养基外加 20 ng/mL VEGF蛋白条件下，因子 B3
没有显示其剂量效应的原因，因为当培养基中
VEGF 蛋白浓度足够高时，细胞增殖的促进作用已
经达到饱和。此外，本研究虽然发现因子 B3是通过
VEGF调节细胞的增殖，但是因子 B3并非是单一结
构，根据液相色谱和液质的检测结果来看至少含有
3 种物质，目前正在进一步将其分离，确定每个单
一结构，进一步研究单一结构的功能，有利于更好
地开发云南重楼这一传统中药资源。
志谢：浙江农林大学研究生周瑜和张宇在实验
过程中给予帮助。
参考文献
[1] 武姗姗, 高文远, 段宏泉, 等. 重楼化学成分和药理作
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