全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 6 期 2014 年 3 月 ·786·
HPLC 测定草乌与瓜蒌配伍前后 6 种毒性成分量的变化
张 凌 1，柳芳林 1，刘长安 1，翟兴英 1，廖清花 1，杨世林 1, 2*
1. 江西中医药大学，江西 南昌 330004
2. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330004
摘 要：目的 研究草乌 Aconiti Kusnezoffi Radix 与瓜蒌 Trichosanthis Fructus 按照 13 个不同比例配伍后，苯甲酰新乌头碱、
苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌头碱成分量的变化。方法 草乌与瓜蒌的干燥粉末，混匀，
分别用 10 倍量蒸馏水和 75%乙醇浸润 1 h，提取 2 次，每次 1 h，合并提取液，离心，取上清液。HPLC 采用 Welch Xtimate C18
（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，乙腈-40 mmol/L 乙酸铵（氨水调 pH 10.0）梯度洗脱；体积流量 1 mL/min，检测波长 235
nm。结果 草乌与瓜蒌配伍后，随瓜蒌比例增加，药液 pH 值逐渐降低，单酯型生物碱总量变化不明显，而双酯型生物碱总
量增加。结论 草乌与瓜蒌配伍后，从化学成分来看，双酯型生物碱类成分增加导致毒性增加。
关键词：草乌；配伍；瓜蒌；毒性成分；HPLC；双酯型生物碱；单酯型生物碱；苯甲酰新乌头碱；苯甲酰乌头原碱；苯甲
酰次乌头原碱；中乌头碱；乌头碱；次乌头碱
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)06 - 0786 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.06.009
Content changes of six toxic components before and after Aconiti Kusnezoffii
Radix combined with Trichosanthis Fructus by HPLC
ZHANG Ling1, LIU Fang-lin1, LIU Chang-an1, ZHAI Xing-ying1, LIAO Qing-hua1, YANG Shi-lin1, 2
1. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China
2. National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine, Nanchang 330004, China
Abstract: Objective To investigate the effect of Aconiti Kusnezoffii Radix (AKR) combined with Trichosanthis Fructus (TF) in 13
different ratios on contents of benzoylmesaconitine, benzoylaconine, benzoylhypaconine, mesaconitine, aconitine, and hypaconitine.
Methods The powdered AKR-TF material, mixture, was alkalized by 10 times 75% ethanol and distilled water for 1 h, respectively,
and extracted regurgitantly twice (each time for 1 h). The extracts were combined and centrifuged, and the supernatant was taken. The
Welch Xtimate-C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was eluted with a mobile phase consisted of aceto-nitrile and 40 mmol/L
ammonium acetate (pH value 10.0, adjusted with aqueous ammonia) and gradient elution at a flow rate of 1 mL/min. The eluent was
monitored by a UV detector at 235 nm. Results After AKR combined with TF, the content of monoester-alkaloids did not change
significantly. Liquid pH value gradually reduced and total quality of diester-alkaloids increased with the ratios of TF increasing.
Conclusion From the view of chemical composition, the toxicity is increasing when AKR combined with TF.
Key words: Aconiti Kusnezoffii Radix; compatibility; Trichosanthis Fructus; toxic components; HPLC; diester-alkaloids; monoester-
alkaloids; benzoylmesaconitine; benzoylaconine; benzoylhypaconine; mesaconitine; aconitine; hypaconitine

草乌属毛茛科植物北乌头 Aconitum kusnezoffii
Reichb. 的干燥块根，具有祛风除湿、温经止痛的
作用。用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝
作痛、麻醉止痛等[1]。“十八反”是中药配伍禁忌的
主要内容，包括“半蒌贝敛芨攻乌”。历代医药学者
认为十八反不是绝对的配伍禁忌，有时会增加、增
强毒性，有的是对方剂本身或其他药物的疗效产生
干扰、拮抗乃至抵消[2]。有学者通过毒性成分的变
化来阐述十八的科学内涵[3-4]，本实验通过测定草乌
与瓜蒌合煎后毒性成分的变化来研究“半蒌贝敛及

收稿日期：2013-10-30
基金项目：国家重点基础研究发展计划（“973”计划）项目资助（2011CB505302）
作者简介：张 凌（1962—），女，硕士生导师，研究方向药物分析研究。Tel: (0791)7118630 E-mail: dw64810@163.com
*通信作者 杨世林（1953—），男，博士生导师。Tel: 13870608982 E-mail: slyang3636@126.com
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攻乌”的物质基础，为进一步丰富“十八反”中药
配伍禁忌提供实验依据。
1 仪器与材料
Agilent1260 型高效液相色谱仪，含 VWD 检测
器、Agilent1200 工作站（美国安捷伦公司）。KQ—
250 UDB 型双频数控超声波清洗器（昆山市仪器有
限公司），Sartorius ISO 9001 型电子天平（德国赛多
利斯科技有限公司），PHS—3C pH 计（上海虹益仪
器仪表有限公司），TL—5.0 台式离心机（上海市离
心机械研究所），旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限
公司）。
生 草 乌 Aconiti Kusnezoffii Radix 、 瓜 蒌
Trichosanthis Fructus 购自浙江中医药饮片厂，由江
西中医药大学邓可众教授鉴定均为正品。生草乌按
《中国药典》2010 年版项下鉴定，乌头碱、次乌头
碱、中乌头碱总量为 0.34%，杂质总量为 3.62%，
水分为 8.25%，总灰分为 4.96%，酸不溶性灰分为
0.72%；瓜蒌按《中国药典》2010 年版项下鉴定，
水分为 10.45%，总灰分为 5.72%，浸出物为 35.49%。
对照品乌头碱（批号 X-015-110425）、中乌头碱（批
号 X-011-110425 ）、次乌头碱（批号 MUST-
13011706）、苯甲酰乌头原碱（批号 B-010-110316）、
苯甲酰中乌头原碱（批号 B-009-110316）、苯甲酰
次乌头原碱（批号 B-016-110316）购自成都瑞芬思
生物科技有限公司，质量分数均大于 98%。甲醇、
乙腈为色谱纯，购于 Tedia 公司；其余试剂均为分
析纯。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备
分别精密称取苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原
碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌
头碱对照品 0.485、1.325、1.010、1.325、0.980、0.950
mg 分别置 5 mL 量瓶中，用乙腈溶解定容。
2.2 供试品溶液的制备
2.2.1 草乌配伍瓜蒌水提液供试品溶液制备 取供
试品生草乌 2.5 g，分别与瓜蒌按 16∶1、13.5∶1、
11∶1、8.5∶1、6∶1、3.5∶1、1∶1、1∶3、1∶5、
1∶7、1∶9、1∶11、1∶13、0∶13 比例混合均匀，
分别加入 10 倍量的水，浸泡 1 h，微沸提取 2 次，
提取时间各 1 h，合并提取液后离心 30 min，4 000
r/min，上清液测定 pH 值，浓缩定容至 25 mL。按
照上述方法分别制备草乌单煎液、瓜蒌单煎液。
2.2.2 草乌配伍瓜蒌醇提液供试品溶液制备 取供
试品生草乌 2.5 g，分别与瓜蒌按 16∶1、13.5∶1、
11∶1、8.5∶1、6∶1、3.5∶1、1∶1、1∶3、1∶5、
1∶7、1∶9、1∶11、1∶13、0∶13 比例混合均匀，
分别加入 10 倍量的 75%乙醇，其余按水提液的方
法制备供试品溶液。
2.3 色谱条件
色谱柱 Welch Xtimate C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为乙腈-40 mmol/L 的乙酸铵溶液（氨
水调 pH 值为 10.0），梯度洗脱：0～8 min，18%乙
腈；8～35 min，18%～30%乙腈；35～45 min，30%
乙腈；45～55 min，30%～45%乙腈；55～65 min，
45%～50%乙腈；65～75 min，50%乙腈；75～85
min，50%～55%乙腈；进样量 20 μL；体积流量 1
mL/min；柱温 30 ℃；检测波长 235 nm。
2.4 定量限和检测限
取“2.1”项下的对照品溶液，依次稀释 205、
675、694，1 307、1 387、648 倍，使各峰高约为基
线噪音的 10 倍，得定量限分别为苯甲酰新乌头原碱
0.449 μg/mL、苯甲酰乌头原碱 0.532 μg/mL、苯甲
酰次乌头原碱 0.287 μg/mL、新乌头碱 0.194 μg/mL、
乌头碱 0.137 μg/mL、次乌头碱 0.297 μg/mL；依次
稀释 410、1 350、971.6、1 041、2 614、1 280 倍，
使各峰高约为基线噪音的 3 倍，得检测限分别为苯
甲酰新乌头原碱 0.223 μg/mL、苯甲酰乌头原碱
0.266 μg/mL、苯甲酰次乌头原碱 0.205 μg/mL、新
乌头碱 0.013 μg/mL、乌头碱 0.013 μg/mL、次乌头
碱 0.148 μg/mL。
2.5 线性关系考察
分别精密称取苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原
碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌
头碱对照品分别逐级稀释成 6 个不同质量浓度溶液
到定量限，进样，以峰面积为纵坐标（Y），质量浓
度为横坐标（X）绘制标准曲线，进行线性回归，得
回归方程苯甲酰新乌头原碱 Y＝35 598 X－1.302 4，
r＝1.000 0，线性范围 0.47～97 μg/mL；苯甲酰乌头
碱 Y＝6 981.4 X＋13.478，r＝0.999 3，线性范围
0.41～265 μg/mL；苯甲酰次乌头原碱 Y＝15 251 X＋
21.293，r＝0.999 4，线性范围 0.29～202 μg/mL；
新乌头碱 Y＝5 485.7 X＋5.073 1，r＝0.999 9，线性
范围 0.203～265 μg/mL；乌头碱 Y＝20 542 X－
5.633 2，r＝0.999 7，线性范围 0.141～196 μg/mL；
次乌头碱 Y＝20 528 X＋12.594，r＝0.999 9，线性
范围 0.293～190 μg/mL。
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2.6 精密度试验
取“2.1”项下的对照品溶液，分别取 0.5 mL
混合，按照色谱条件，连续进样 6 次，测定 6 种乌
头类生物碱的峰面积积分值，结果苯甲酰新乌头碱、
苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、
乌头碱、次乌头碱的 RSD 分别为 2.97%、2.5%、
2.48%、2.54%、2.77%、2.77%，6 种生物碱的 RSD
值均小于 3%，表明精密度良好。
2.7 稳定性考察
取草乌与瓜蒌 1∶1 配伍的供试品溶液，冷藏放
置 0、2、4、6、8、10、12、24、36 h 后，按上述
色谱条件进行 HPLC 分析，测定 6 种生物碱的量，
苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头
原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌头碱在不同时间峰
面积的 RSD 分别为 2.04%、2.03%、2.24%、2.32%、
2.54%、2.68%。
2.8 重复性试验
精密称取草乌与瓜蒌各 2.5 g，混合，共 6 份，
按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱
条件进行 HPLC 分析。根据所得 6 种生物碱的峰面
积并计算其在样品中的量，结果苯甲酰新乌头原碱、
苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、
乌头碱、次乌头碱质量分数的 RSD 分别为 2.92%、
2.53%、1.98%、2.27%、2.06%、2.27%。
2.9 回收率试验
精密称取已测定苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌
头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、
次乌头碱的生草乌与瓜蒌各 2.5 g，共 6 份，分别按
80%、100%、120%的量精密加入各种对照品，按照
“2.2”项下方法制备供试品溶液，按照色谱条件进
样测定，结果平均回收率分别为 104.40%、97.21%、
97.30%、95.31%、103.47%、104.72%，RSD 分别
为 2.52%、2.68%、2.85%、2.33%、2.74%、2.92%。
2.10 样品测定
将“2.2”项下各供试品溶液，按照色谱条件分
别进样测定，计算共煎液 6 种生物碱的量。色谱图
见图 1。水提液中 6 种生物碱测定结果见表 1，75%
醇提液中 6 种生物碱测定结果见表 2。





A-混合对照品 B-草乌醇提 C-瓜蒌醇提 D-草乌与瓜蒌 1∶1 配伍醇提 E-草乌水提 F-瓜蒌水提 G-瓜蒌与草乌 1∶1 配伍水提
1-苯甲酰新乌头原碱 2-苯甲酰乌头原碱 3-苯甲酰次乌头原碱 4-新乌头碱 5-乌头碱 6-次乌头碱
A-mixed reference substances B-AKR extracted by ethanol C-TF extracted by ethanol D-AKR combined with TF in 1∶1 ratio
extracted by ethanol E-AKR extracted by water F-TF extracted by water G-AKR combined with TF in 1∶1 ratio extracted by water
1-benzoylmesaconin 2-benzoylaconine 3-benzoylhypaconine 4-mesaconitine 5-aconitine 6-hypaconitine

图 1 混合对照品和供试品的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances and samples

3 讨论
与生草乌水提单煎液相比，草乌与瓜蒌水提合
煎液中双酯型生物总量随瓜蒌所占比例的增高而逐
渐增加，单酯型生物碱总量变化不大，而药液 pH
值逐渐下降，药液的 pH 值可能对双酯型生物碱的
量有一定的影响。瓜蒌经水提及醇提后，均不含有
本实验中测定的 6 种乌头类生物碱。草乌水提液中
不含新乌头碱，且乌头碱质量分数接近定量限，故
色谱峰上不明显。瓜蒌与草乌 1∶1 水提液中新乌头
碱及乌头碱含量亦与定量限接近，两色谱峰不明显。
与生草乌醇提单煎液相比，草乌与瓜蒌醇提合
煎液中双酯型生物碱的量随瓜蒌所占比例的增高而
逐渐增加，单酯型生物碱的量变化不大，药液 pH
值则逐渐下降，变化趋势与草乌配伍瓜蒌水提合煎
液类似。
草乌中主要毒性成分为双酯型生物碱和单酯型
1 2
3
4 5
6
A B 1
2 3 4 5 6
C
D E F
G
1
2 3 4 5 6
0 20 40 60 80
t / min
2
1
3 5 6
1
2 3 4 5 6
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表 1 草乌配伍瓜蒌水提后定量测定结果
Table 1 Quantity determination of AKR combined with TF after water extraction
单酯型生物碱 / (μg·g−1) 双酯型生物碱 / (μg·g−1) 草乌-瓜蒌 pH 值
苯甲酰新乌头碱 苯甲酰乌头碱 苯甲酰次乌头碱 总量 新乌头碱 乌头碱 次乌头碱 总量
1∶0 5.40 355.077 488.085 164.846 1 008.009 － 6.228 53.399 59.600
16∶1 5.39 244.818 334.033 109.997 688.849 － 8.859 27.065 35.900
13.5∶1 5.11 281.450 396.342 126.521 804.312 － 5.327 40.232 45.500
11∶1 5.13 500.493 708.027 234.973 1 443.493 － 6.496 110.366 116.900
8.5∶1 4.25 438.579 625.021 202.221 1 265.821 4.700 7.008 93.798 105.500
6∶1 3.73 405.501 544.736 168.420 1 118.657 63.000 8.372 115.565 187.000
3.5∶1 5.10 433.298 633.472 203.696 1 270.466 6.247 11.296 133.372 150.800
1∶1 4.86 479.565 681.743 206.352 1 367.659 27.575 15.486 213.247 256.300
1∶3 4.64 431.360 697.213 226.941 1 355.513 118.448 32.953 263.461 414.700
1∶5 4.58 437.147 614.350 181.435 1 232.931 102.862 27.131 281.025 411.000
1∶7 4.45 470.042 641.207 211.138 1 322.387 126.560 45.134 265.113 436.800
1∶9 4.21 480.450 679.379 229.235 1 389.064 111.612 47.692 306.752 466.100
1∶11 4.36 495.731 635.549 221.465 1 352.745 133.943 49.495 311.683 494.900
1∶13 4.56 507.839 640.634 221.662 1 370.135 145.700 50.469 317.465 513.500
0∶1 4.57 － － － － － － － －

表 2 草乌配伍瓜蒌 75%醇提后定量测定结果
Table 2 Quantity determination of AKR combined with TF after 75% alcohol extraction
单酯型生物碱 / (μg·g−1) 双酯型生物碱 / (μg·g−1) 草乌-瓜蒌 pH 值
苯甲酰新乌头碱 苯甲酰乌头碱 苯甲酰次乌头碱 总量 新乌头碱 乌头碱 次乌头碱 总量
1∶0 5.40 458.337 590.213 234.476 1 283.071 131.245 23.504 162.331 317.080
16∶1 5.77 494.748 766.182 327.754 1 588.684 235.935 40.091 324.485 600.511
13.5∶1 5.74 491.981 762.171 330.475 1 584.627 251.521 48.740 332.697 632.958
11∶1 5.73 515.171 837.084 346.703 1 698.958 247.693 46.937 314.622 609.252
8.5∶1 5.70 307.715 502.481 193.041 1 003.237 184.346 39.482 264.943 488.771
6∶1 5.76 450.953 707.741 329.458 1 488.152 278.045 46.620 339.814 664.479
3.5∶1 5.45 468.918 751.428 309.165 1 529.511 373.383 61.213 407.835 842.431
1∶1 5.81 450.953 631.825 268.741 1 351.519 466.261 91.080 501.897 1 059.238
1∶3 4.59 419.056 642.925 237.825 1 299.806 478.566 77.828 481.394 1 037.788
1∶5 4.88 473.722 752.359 276.511 1 502.592 567.707 90.617 553.666 1 211.990
1∶7 4.63 355.428 523.823 163.239 1 042.490 485.584 72.005 408.515 966.104
1∶9 4.38 500.984 702.226 255.955 1 459.165 638.801 116.270 532.604 1 287.675
1∶11 4.23 309.203 472.329 142.225 923.757 400.089 61.456 573.757 1 035.302
1∶13 4.51 294.764 374.355 124.029 793.148 405.467 139.658 578.712 1 123.837
0∶1 4.77 － － － － － － － －

生物碱，两者毒性差异大，单酯型生物碱毒性为双
酯型生物碱的 10%～20%，因此生草乌毒性以双酯
型生物碱的量为指标[5]。瓜蒌配伍草乌经水提和醇
提后，双酯型生物碱成分的量增加，则毒性增强，
因此从化学成分看，瓜蒌与草乌相反。由于 6 种生
物碱都是酯型生物碱，因此醇提合煎液中 6 种生物
碱的量要高于水提合煎液。生草乌除本实验中测定
的 6 种生物碱外还含有大量脂型二萜生物碱和其他
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 6 期 2014 年 3 月 ·790·
生物碱，且在醇中溶解度好，醇用量越高，生物碱
溶解度越大，采用 75%乙醇提取可以防止过多溶出
其他生物碱，避免干扰。
本法是测定草乌与瓜蒌配伍之后 6 种毒性成分
量的变化，《中国药典》2010 年版方法则是测定草
乌（或附子、川乌）单独处理后 6 种毒性生物碱，
与药典方法相比本法分离度高，效果好。此法还能
用于草乌与“半贝敛芨”配伍之后 6 种毒性成分的
测定。
水煎剂中生物碱盐的抗热破坏作用高于游离生
物碱，差异极显著[6]。瓜蒌水提液 pH 值为 4.56，醇
提液 pH 值为 4.76，都显酸性，瓜蒌比例越高溶液
所含酸性成分越多，酯型生物碱在酸性条件下，形
成盐，加速了生物碱的游离，因此瓜蒌能提高生草
乌双酯型生物碱的溶出率。本实验以原药材为研究
目标，通过考察毒性成分量的变化及其影响因素，
为研究草乌与瓜蒌的配伍禁忌提供科学依据。
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