全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 16 期 2014 年 8 月 ·2344·
管花肉苁蓉中苯乙醇苷的提取和大孔树脂纯化工艺研究
王毓杰
成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137
摘 要：目的 优选管花肉苁蓉 Cistanche tubulosa 中苯乙醇苷的提取纯化工艺。方法 以松果菊苷和麦角甾苷质量分数为
考察指标，采用 L9(34) 正交试验设计，对提取工艺进行优化；考察 7 种大孔树脂对 2 种苯乙醇苷的吸附和解吸附性能，确
定最佳纯化工艺条件。结果 最佳提取纯化工艺为管花肉苁蓉药材加 12 倍量 50%乙醇，70 ℃温浸 2 次，温浸时间 1 h，滤
过，合并滤液，回收溶剂，加水调整为含生药 0.2 g/mL 的上样溶液，上样量为 0.8 倍柱体积（BV），大孔树脂柱的径高比为
1∶9，先用 3 BV 的水除杂，再用 4 BV 的 30%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩至干，即得肉苁蓉苯乙醇苷纯化物，该纯化物中
2 种苯乙醇苷质量分数＞75%。结论 优选得到的提取纯化工艺稳定可行，适合工业化生产。
关键词：管花肉苁蓉；大孔树脂；苯乙醇苷；松果菊苷；麦角甾苷
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)16 - 2344 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.16.012
Extraction of phenylethanoid glycoside from Cistanche tubulosa and purification
technology by macroporous resin
WANG Yu-jie
College of Ethnomedicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China
Abstract: Objective To optimize the extraction and purification technology of phenylethanoid glycoside from Cistanche tubulosa.
Methods Orthogonal design L9(34) was employed to optimize the extraction conditions by taking the extraction yield of echinacoside
and acteoside as indexes. The absorption-desorption characteristics of seven macroporous resins were evaluated, then the best
purification conditions were optimized. Results The optimal extraction conditions were as follows: The air-dried stems of C. tubulosa
were powdered and extracted twice with 12-fold 50% ethanol for 1 h each time, temperature was 70 ℃; The supernatant was
concentrated to 5-fold weight of the stems of C. tubulosa. The concentrated liquid was subjected to macroporous resin (HPD750)
column and then eluted with deionezed water (3 BV) and 30% ethanol (4 BV), respectively. The 30% ethanol fraction was evaporated
under vacuum to give the phenylethanoid glycoside-rich C. tubulosa stem extract. The purity of phenylethanoid glycoside was above
75%. Conclusion The optimized extraction and purification process is stable, efficient, and suitable for industrial production.
Key words: Cistanche tubulosa (Schenk) Wight; macroporous resins; phenylethanoid glycoside; echinacoside; acteoside

肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生草本寄生植
物，药用其根，始载于《神农本草经》，列为上品。
性温，味甘、咸，归肾、大肠经，有滋肝养肾、益
精血、润肠通便的功效，用于治疗肾阳不足、精血
亏虚、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等症[1]。
《中国药典》2010 年版收载的法定品种为荒漠
肉苁蓉 Cistanche deserticola Y. C. Ma 和管花肉苁蓉
C. tubulosa (Schenk) Wight[2]。两者化学成分相似，
但寄生于红柳根上的管花肉苁蓉更容易进行人工栽
培，已在新疆民丰县、于田县等地大面积种植，是
目前市场流通量最大的肉苁蓉药材[3]。肉苁蓉中的
苯乙醇苷类成分是其发挥补益作用的主要成分[4]，
这类成分由苯乙醇基和糖构成，结构中的多个糖链
决定了这类成分具有较高的水溶性。除了补益作用，
肉苁蓉苯乙醇苷类成分还具有肝脏保护、神经保护
等多种活性[5-7]。因此，肉苁蓉苯乙醇苷类成分的提
取纯化工艺研究，对于其药效物质基础及新产品开
发研究都具有重要意义。
本研究以管花肉苁蓉中的主要苯乙醇苷类成分
松果菊苷和麦角甾苷为考察指标，采用 L9(34) 正交

收稿日期：2014-03-25
基金项目：四川省教育厅资助项目（13ZB0304）；成都中医药大学科技发展基金（ZRMS201246）
作者简介：王毓杰，男，博士，讲师，从事中药及民族药药效物质基础及作用机制研究。Tel: (028)61800160 E-mail: superwangyj@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 16 期 2014 年 8 月 ·2345·
试验设计，对提取工艺进行优化；并考察 7 种大孔
树脂对上述苯乙醇苷的吸附和解吸附性能，确定纯
化肉苁蓉苯乙醇苷的最佳工艺。
1 仪器与材料
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，含 G1311A 四
元泵、G1315A 二极管矩阵检测器。松果菊苷（批
号 A0282）、麦角甾苷对照品（批号 A0280），质量
分数均＞98%，成都普思生物科技有限公司；肉苁
蓉药材购于新疆维吾尔自治区于田县，经成都中医
药大学张艺研究员鉴定为列当科肉苁蓉属多年生草
本寄生植物管花肉苁蓉 Cistanche tubulosa (Schenk)
Wight 的干燥根；大孔吸附树脂 HPD400、HPD450、
HPD600、HPD750、HPD826、DM130、ADS-17，
沧州宝恩吸附材料科技有限公司；乙腈，色谱纯，
Honeywell 公司；甲酸、乙醇，分析纯，成都科龙
化工试剂厂。
2 方法与结果
2.1 松果菊苷和麦角甾苷测定方法的建立
2.1.1 色谱条件[8] Waters Symmetry Shield RP18柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Symmetry Shield RP18
（20 mm×3.9 mm，5 μm）Guard 2Pk 保护柱；流动
相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～10 min，
17%乙腈；10～30 min，17%～50%乙腈；检测波长
330 nm。在此色谱条件下待测组分可达到基线分
离，理论塔板数以松果菊苷、麦角甾苷计算均大于
5 000。
2.1.2 对照品溶液的制备 取松果菊苷、麦角甾苷
对照品适量，精密称定，加 30%乙醇制成含松果菊
苷 1.995 mg/mL、麦角甾苷 1.299 mg/mL 的对照品
储备液，精密量取该储备液稀释 10 倍，作为对照品
溶液。
2.1.3 线性关系考察 精密量取松果菊苷、麦角甾
苷对照品储备液，稀释 5、10、50、100、500、1 000
倍制得不同质量浓度的对照品溶液，精密吸取上述
对照品溶液 10 μL 注入高效液相色谱仪，测定峰面
积，并以峰面积积分值为纵坐标（Y），进样量为横
坐标（X），进行回归分析。松果菊苷的回归方程：
Y＝18 182 X－69.895，r＝0.999 6，表明松果菊苷在
1.995～399 μg 线性关系良好；麦角甾苷的回归方
程：Y＝18 035 X－9.949 3，r＝1.000 0，表明麦角
甾苷在 1.299～259.8 μg 线性关系良好。
2.2 肉苁蓉药材定量测定
按《中国药典》2010 年版肉苁蓉项下方法制备
供试品溶液，按“2.1”项方法测定。结果按干燥品
计算，本研究所用肉苁蓉药材中松果菊苷和麦角甾
苷的质量分数分别为 14.01%、3.18%。
2.3 苯乙醇苷的提取工艺研究
2.3.1 提取溶剂考察 分别取肉苁蓉药材粗粉 50
g，加 10 倍量的水及 30%、50%、70%乙醇，70 ℃
温浸 2 次，每次 1 h，滤过，回收溶剂后，加水定容
至 250 mL。取 1 mL，加 30%乙醇定容至 100 mL，
滤过，测定松果菊苷和麦角甾苷；另取 200 mL（相
当于 40 g 药材），置蒸发皿中挥干溶剂后，计算出
膏量。上述提取溶剂所得粗提物中松果菊苷的质量
分数分别为 19.96%、23.28%、31.98%、28.78%；
麦角甾苷分别为 2.89%、4.57%、6.64%、5.93%。
结果表明 50%乙醇对松果菊苷和麦角甾苷的提取
率最高。
2.3.2 正交试验 以溶剂用量（A，8、10、12 倍量），
提取次数（B，1、2、3 次），提取时间（C，1.0、
1.5、2.0 h）为因素，以松果菊苷、麦角甾苷质量分
数为指标，进行 L9(34) 正交试验。实验结果见表 1，
方差分析见表 2、3。
由直观分析（松果菊苷 Ks、Rs，麦角甾苷 Km、

表 1 L9(34) 正交试验设计与结果
Table 1 Design and results of L9(34) orthogonal test
试验号 A / 倍 B / 次 C / h D (空白)
松果菊
苷 / %
麦角甾
苷 / %
1 8 (1) 1 (1) 1.0 (1) (1) 30.46 6.77
2 8 (1) 2 (2) 1.5 (2) (2) 29.36 6.21
3 8 (1) 3 (3) 2.0 (3) (3) 27.51 5.81
4 10 (2) 1 (1) 1.5 (2) (3) 34.20 7.63
5 10 (2) 2 (2) 2.0 (3) (1) 33.60 7.08
6 10 (2) 3 (3) 1.0 (1) (2) 32.29 6.90
7 12 (3) 1 (1) 2.0 (3) (2) 36.29 7.66
8 12 (3) 2 (2) 1.0 (1) (3) 34.46 7.48
9 12 (3) 3 (3) 1.5 (2) (1) 31.82 6.94
Ks1 87.33 100.95 97.21 95.88
Ks2 100.09 97.42 95.38 97.94
Ks3 102.57 91.62 97.40 96.17
Rs 15.24 9.33 2.02 2.06
Km1 18.79 22.06 21.15 20.79
Km2 21.61 20.77 20.78 20.77
Km3 22.08 19.65 20.55 20.92
Rm 3.29 2.41 0.60 0.15
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表 2 方差分析表 (松果菊苷)
Table 2 Analysis of variance (echinacoside)
变异来源 偏差平方和 自由度 F 值 显著性
A 44.581 2 53.777 P＜0.05
B 14.794 2 17.846
C 0.829 2 1.000
误差 (D) 0.829 2
F0.05(2, 2)＝19.00 F0.01(2, 2)＝99.00
表 3 方差分析表 (麦角甾苷)
Table 3 Analysis of variance (acteoside)
变异来源 偏差平方和 自由度 F 值 显著性
A 2.111 2 527.750 P＜0.01
B 0.970 2 242.500 P＜0.01
C 0.061 2 15.250
误差 (D) 0.004 2
F0.05(2, 2)＝19.00 F0.01(2, 2)＝99.00 F0.001(2, 2)＝199.00
Rm）和方差分析结果可知，各因素对提取效率的影
响顺序为 A＞B＞C，且 A 因素有显著性影响，因
此最佳提取方案为 A3B2C1，即肉苁蓉药材加 12 倍
量 50%乙醇，70 ℃温浸 2 次，温浸时间 1 h。
2.4 验证试验
按正交试验优选的提取工艺，平行试验 3 次。
肉苁蓉粗提物中松果菊苷、麦角甾苷的平均质量分
数分别为 33.21%、7.55%，见表 4。
2.5 苯乙醇苷的大孔树脂纯化工艺研究
2.5.1 静态吸附与解吸附
（1）静态吸附考察：取肉苁蓉药材 50 g，加 12
倍量 50%乙醇，70 ℃温浸 2 次，每次 1 h，滤过，
回收溶剂后，加水定容至 250 mL（相当于 0.2 g 生
药/mL），作为供试原液。分别称取不同型号经过预
处理的大孔树脂 HPD-400、HPD-450、HPD-600、
表 4 提取工艺验证试验结果
Table 4 Results of verification experiment
of extraction process
批次 松果菊苷 / % 麦角甾苷 / %
1 33.11 7.44
2 33.25 7.60
3 33.26 7.61

HPD-750、HPD-826、DM-130、ADS-17 各 5 g，置
50 mL 锥形瓶中，加 30 mL 供试原液，振荡吸附 24
h，静置后取 1 mL 上清液，加 30%乙醇定容至 100
mL，测定。计算静态饱和吸附量［饱和吸附量＝(初
始质量浓度－吸附后质量浓度)×吸附液体积/干树
脂质量］，结果见表 5。
（2）静态解吸考察：取已吸附好的树脂，经 100
mL 水洗后，加入 50%乙醇溶液 250 mL，置恒温振
荡器上振荡解吸，取上清液 1 mL，加 30%乙醇定容
至 10 mL，测定。计算解吸率（解吸率＝解吸液质
量浓度×解吸液体积/饱和吸附量），结果见表 5。
由表 5 可以看出，HPD-750 和 ADS-17 2 种树
脂对松果菊苷、麦角甾苷的吸附量高于其他型号树
脂，并且 HPD-750 的解吸率高于 ADS-17，因此选
择 HPD-750 进行下一步考察。
2.5.2 上柱液质量浓度考察 将提取后的药液分别
浓缩成含生药 0.1、0.2、0.4 g/mL 的上柱液。分别
取 3 份处理好的 HPD-750 树脂装柱，每份 15 g，将
上述不同质量浓度的药液上大孔树脂柱（上柱生药
量相同），上样后依次用 3 BV 的水、以 2 BV/h 的
体积流量洗脱除去杂质，再用 50%乙醇洗脱 6 BV，
体积流量为 2 BV/h。洗脱液浓缩至干，测定，计算
质量分数。松果菊苷分别为 59.11%、63.16%、
61.79%，麦角甾苷分别为 10.21%、12.73%、11.26%。
表 5 不同型号树脂静态吸附、解吸性能比较
Table 5 Static adsorption and desorption capacity of different resins
吸附量 / (mg·g−1) 解吸率 / % 树脂型号 极性 粒径 / mm
松果菊苷 麦角甾苷 松果菊苷 麦角甾苷
HPD-400 中极性 0.30～1.25 59.919 29.925 51.941 71.599
HPD-450 中极性 0.30～1.20 49.548 24.263 39.481 70.336
HPD-600 中极性 0.30～1.20 49.475 25.208 41.902 71.243
HPD-750 中极性 0.30～1.20 63.715 30.043 57.755 72.597
HPD-826 极性 0.30～1.20 52.320 25.458 33.258 65.011
DM-130 中极性 0.30～1.25 53.441 24.191 35.210 67.051
ADS-17 中极性 0.30～1.25 61.592 31.388 45.644 68.259
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因此，上柱液的浓度确定为生药 0.2 g/mL。
2.5.3 泄露曲线的绘制 取 50 g（体积为 100 mL）
处理好的 HPD-750 树脂装柱，取肉苁蓉上柱液，以
2 BV/h 的体积流量通过树脂柱，进行动态吸附，每
10 毫升接 1 流分，每 1 流分中取 1 mL，加 30%乙
醇定容至 100 mL，测定，绘制泄露曲线，见图 1。
由图 1 可知，当上样体积在 9 号流分（即上样量为
90 mL）时出现明显地泄露。因此，上样量确定为
80 mL，即 0.8 BV。




图 1 泄露曲线
Fig. 1 Dynamic leakage curves

2.5.4 洗脱溶剂的考察 取肉苁蓉上柱液 80 mL，
加入到装有 50 g HPD-750 树脂柱中，依次用 3 BV
的水及 10%、30%、50%乙醇以 2 BV/h 的体积流量
洗脱，洗脱液按每 0.5 BV 收集 1 份，每份中取 1 mL，
加 30%乙醇定容至 100 mL，测定结果见图 2。苯乙
醇苷主要集中在 30%乙醇洗脱液中，并且水洗脱液
不会将苯乙醇苷洗脱下来。
2.5.5 洗脱溶剂用量的考察 取肉苁蓉上柱液 80
mL，加入到装有 50 g HPD-750 树脂柱中，依次用 3
BV 的水以 2 BV/h 的体积流量洗脱除去杂质，再用
30%乙醇洗脱，洗脱液按每 1 BV 收集 1 份，每份中
取 1 mL，加 30%乙醇定容至 100 mL，测定结果见
图 3。在洗至 4 BV 时，洗脱率达到 90%以上。同时，




1～6-水洗脱液 7～12-10%乙醇洗脱液 13～18-30%乙醇洗脱液
19～24-50%乙醇洗脱液
1—6-water eluent 7—12-10% ethanol eluent 13—18-30% ethanol
eluent 19—24-50% ethanol eluent

图 2 洗脱溶剂的考察
Fig. 2 Investigation of eluting solvents



图 3 洗脱溶剂用量的考察
Fig. 3 Investigation of eluting solvent volumes

考虑到生产成本等因素，洗脱溶剂的量确定为 4 BV。
2.5.6 树脂柱径高比的考察 取肉苁蓉上柱液 80
mL，加入到装有 50 g HPD-750 树脂柱中，树脂柱
的径高比分别为 1∶3、1∶6、1∶9、1∶12，分别
用 3 BV 的水以 2 BV/h 的体积流量洗脱除去杂质，
再用 4 BV 的 30%乙醇洗脱，洗脱液减压蒸干后，
测定质量分数。结果显示，不同径高比的大孔树脂
纯化样品中松果菊苷分别为 60.15%、62.46%、
63.91%、63.96%；麦角甾苷分别为 11.65%、12.06%、
13.21%、13.25%。从提高纯化效率和节约成本的角
度出发，将径高比确定为 1∶9。
2.5.7 水洗量的考察 取肉苁蓉上柱液 80 mL，加
入到装有 50 g HPD-750 树脂柱中，树脂柱的径高比
为 1∶9，分别用 1、2、3、4 BV 的水以 2 BV/h 的
体积流量洗脱除去杂质，再用 4 BV 的 30%乙醇洗
脱，洗脱液减压蒸干后，测定质量分数。结果显示，
4 种样品质量分数相差不大，但用 3、4 BV 水洗脱
后，30%乙醇洗脱液颜色较澄清，HPLC 色谱图中
杂质峰较少，从提高纯化效率的角度出发，选择用
3 BV 的水洗脱。
2.5.8 大孔树脂纯化工艺的确定 肉苁蓉提取液浓
度调整为 0.2 g 生药/mL，上样量为 0.8 BV，大孔树
脂柱的径高比为 1∶9，先用 3 BV 的水除杂，再用
4 BV 的 30%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩至干，即得
肉苁蓉苯乙醇苷纯化物。
2.5.9 大孔树脂纯化工艺验证试验 按上述确定的
纯化工艺制备 3 批样品，分别测定纯化前（粗提物）、
后（大孔树脂纯化物）松果菊苷和麦角甾苷的量，
并计算出膏率和转移率。结果表明，经大孔树脂纯
化后，松果菊苷和麦角甾苷的质量分数分别由粗提
物中的 33.21%、7.55%提高到 66.14%、13.43%，纯
化物中 2 种苯乙醇苷的质量分数＞75%，见表 6。
3 讨论
本研究采用正交设计试验优化管花肉苁蓉苯乙
松果菊苷
麦角甾苷
0.3


0.2


0.1


0 质
量
浓
度
/
(m
g·
m
L−
1 )

1 5 10 15
流分
松果菊苷
麦角甾苷
16

12

8

4

0
洗
脱
量
/
%

1 6 12 18 24
流分
松果菊苷
麦角甾苷
30
20
10
0
洗
脱
率
/
%

1 2 3 4 5 6
流分
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表 6 大孔树脂纯化前后松果菊苷、麦角甾苷质量分数比较
Table 6 Comparison on contents of echinacoside and
acteoside before and after purification
by macroporous resin
松果菊苷 / % 麦角甾苷 / % 样品 出膏率 / %
质量分数 转移率 质量分数 转移率
纯化前 36.61 33.21 86.78 7.55 86.92
纯化后 17.16 66.14 81.01 13.43 72.47

醇苷的提取工艺。考虑到苯乙醇苷类成分结构中既
有亲脂性基团，又有多个亲水性的葡萄糖取代基。
因此，在考察提取溶剂时比较了水以及低浓度乙醇
的提取效果，实验结果也证实 50%乙醇的提取效率
最高。同样的，笔者在预试验时也发现中等极性的
大孔树脂对苯乙醇苷的吸附和解吸附效果较好。因
此，通过比较多种型号中等极性大孔树脂的吸附、
解吸附效果，最终筛选出 HPD-750 型树脂。
在分析正交试验结果以及大孔树脂工艺参数
时，本研究综合考虑了提取效率、提取成本、药材
成本等多种因素，筛选出最合理、稳定可行的提取
纯化工艺。本工艺能够使管花肉苁蓉提取物中的主
要苯乙醇苷类成分松果菊苷和麦角甾苷的量明显增
加，可用于指导工业化生产。
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