全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 18期 2015年 9月

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十味盆安颗粒中 9种成分的测定及指纹图谱研究
孙仙玲 1, 3，秦建平 2, 3，钱 俊 2, 3，吴 云 2, 3，王振中 2, 3，萧 伟 1, 2, 3*
1. 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210000
2. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
3. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 建立十味盆安颗粒中 9种成分（没食子酸、丹参素钠、绿原酸、芍药苷、虎杖苷、苯甲酸、丹酚酸 B、大黄
素、大黄素甲醚）的定量测定及指纹图谱研究方法，为十味盆安颗粒的质量控制提供依据。方法 采用 HPLC 法，色谱柱
为 Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱：0～16 min，5%～14%乙腈；16～
20 min，14%～17%乙腈，20～35 min，17%～19%乙腈；35～60 min，19%～35%乙腈；60～62 min，35%～75%乙腈；62～
78 min，75%乙腈；体积流量 1.0 mL/min；检测波长 230 nm（定量测定与指纹图谱用）。结果 没食子酸、丹参素钠、绿原
酸、芍药苷、虎杖苷、苯甲酸、丹酚酸 B、大黄素、大黄素甲醚 9 种成分均达到基线分离，在线性范围内线性关系良好，r
均＞0.999 9，加样回收率分别为 100.15%（RSD为 1.39%）、99.89%（RSD为 1.71%）、99.92%（RSD为 0.67%）、99.28%（RSD
为 0.60%）、99.89%（RSD为 0.80%）、99.72%（RSD为 1.83%）、99.91%（RSD为 0.79%）、100.06%（RSD为 0.94%）、99.97%
（RSD为 1.36%）；利用中药指纹图谱相似度评价系统（2012版）对 15批十味盆安颗粒指纹图谱进行分析，15批样品指纹图
谱与对照指纹图谱相似度达 0.976以上。结论 该方法简便可行、快速准确，可以作为评价十味盆安颗粒质量的有效方法。
关键词：十味盆安颗粒；指纹图谱；质量控制；没食子酸；丹参素钠；绿原酸；芍药苷；虎杖苷；苯甲酸；丹酚酸 B；大黄
素；大黄素甲醚
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)18 - 2727 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.18.010
Nine components in Shiwei Penan Granule and their fingerprint
chromatography
SUN Xian-ling1, 3, QIN Jian-ping2, 3, QIAN Jun2, 3, WU Yun2, 3, WANG Zhen-zhong2, 3, XIAO Wei1, 2, 3
1. College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210000, China
2. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
3. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001, China
Abstract: Objective To determine the nine components in Shiwei Penan Granule and establish the fingerprnt analysis for the quality
control of Shiwei Penan Granule. Methods The method was performed on a Thermo C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); The
gradient mobile phase consisted of acetonitrile (A)-0.1% phosphoric acid (B) with a flow rate of 1.0 mL/min (0—16 min, 5%—14% A;
16—20 min, 14%—17% A, 20—35 min, 17%—19% A; 35—60 min, 19%—35% A; 60—62 min, 35%—75% A; 62—78 min, 75%
A); The detection wavelength was set at 230 nm (for quantitative analysis and fingerprint). Results Gallic acid, sodium danshensu,
chlorogenic acid, paeoniflorin, polydatin, benzoic acid, salvianolic acid B, emodin, and physcion were baseline seperated with good
linearity relationships (r > 0.999 9) between concentration and peak areas over the linear ranges. The average recoveries of the
compounds were 100.15% (RSD = 1.39%), 99.89% (RSD = 1.71%), 99.92% (RSD = 0.67%), 99.28% (RSD = 0.60%), 99.89%
(RSD = 0.80%), 99.72% (RSD = 1.83%), 99.91% (RSD = 0.79%), 100.06% (RSD = 0.94%), and 99.97% (RSD = 1.36%). Using
Traditional Chinese Medicine Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition) to analyze the fingerprint of 15 batches of

收稿日期：2015-04-14
基金项目：科学技术部国家重大新药创制项目：现代中药创新集群与数字制药技术平台（2013ZX09402203）
作者简介：孙仙玲（1990—），女，河南洛阳人，南京中医药大学 2013级硕士研究生，研究方向为中药药剂。
Tel: 15961397835 E-mail: kanionsxl@126.com
*通信作者 萧 伟，男，博士生导师，研究员，研究方向为中药新剂型的研究与开发。Tel: (0518)81152367 E-mail: kanionlunwen@163.com
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Shiwei Penan Granule, the similarity values between the reference fingerprint and the 15 batches were higher than 0.977. Conclusion
The method is simple, rapid, and accurate, and can be used as an effective method to evaluate the quality of Shiwei Penan Granule.
Key words: Shiwei Penan Granule; fingerprint chromatography; quality control; gallic acid; sodium danshensu; chlorogenic acid;
paeoniflorin; polydatin; benzoic acid; salvianolic acid B; emodin; physcion

十味盆安颗粒为治疗盆腔炎性疾病后遗症[1-2]
的中药复方制剂，具有清热利湿、活血化瘀的功效，
主要用于治疗湿热瘀结所致的慢性盆腔炎。十味盆
安颗粒由虎杖、丹参、大血藤、赤芍、菝葜、蒲公
英、乌药、皂角刺、醋延胡索、党参 10味中药经过
提取、浓缩、醇沉、干燥后得到干燥浸膏，再加入
一定比例的糊精、甜菊素等辅料经干法制粒制成的
成方制剂，以成品颗粒中芍药苷、虎杖苷的量及虎
杖、丹参、大血藤、乌药、醋延胡索等 5味药材的
TLC鉴别为质控指标；同时性状、装量差异、水分、
粒度等检查项均符合《中国药典》2010年版要求。
由于中药复方中化学成分比较复杂，单一的定量测
定方法难以全面控制成品质量。中药指纹图谱可较
全面反映中药化学成分的种类和量的分布信息[3]，
为全面有效控制十味盆安颗粒的质量，保证临床用
药的有效性，本实验建立了十味盆安颗粒中多种成
分的定量测定及其指纹图谱研究方法，为该制剂的
质量控制提供参考。
1 仪器与材料
岛津 LC-20AT高效液相色谱仪，岛津企业管理
（中国）有限公司；DAD 紫外检测器，美国安捷伦
公司；BP211D型电子分析天平、Mettler AE240电
子分析天平，德国 Metter Toledo 公司；Centrifuge
5415D高速离心机，德国 Eppendorf公司。
对照品没食子酸（批号 110831-201204，质量
分数以 89.9%计）、丹参素钠（批号 110855-201412，
质量分数以 99.5%计）、绿原酸（批号 110753-
201415，质量分数以 96.2%计）、芍药苷（批号
l110736-201438，质量分数以 96.4%计）、虎杖苷（批
号 111575-200502）、苯甲酸（批号 100419-201302）、
丹酚酸 B（批号 111562-201313，质量分数以 97.0%
计）、大黄素（批号 110756-200110）、大黄素甲醚
（批号 110758-201415，质量分数以 99.1%计），以上
对照品均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为
色谱纯；其余试剂均为分析纯；自制纯化水。15批
十味盆安颗粒，批号分别为 140801、140901、
140902、140903、140915、140925、141001、141003、
141005、141007、141015、141020、141111、141112、
141113（S1～S15），江苏康缘药业股份有限公司。
丹参（批号 140301，为唇形科植物丹参 Salvia
miltiorrhiza Bge. 的干燥根和根茎）；菝葜（批号
140301，为百合科植物菝葜 Smilax china L. 的干燥
根茎）；蒲公英（批号 140301，为菊科植物蒲公英
Taraxacum mongolicum Hand. -Mazz. 的干燥全草）；
党参（批号 140201，为桔梗科植物党参 Codonopsis
pilosula Nannf. 的干燥根）；大血藤（批号 140301，
为木通科植物大血藤 Sargentodoxa cuneata Rehd. et
Wils. 的干燥藤茎）；虎杖（批号 140301，为蓼科植
物虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc. 的干燥
根茎和根）；延胡索（批号 140201，为罂粟科植物
延胡索 Corydalis yanhusuo W. T. Wang 的干燥块
茎）；皂角刺（批号 140301，为豆科植物皂荚Gleditsia
sinensis Lam. 的干燥棘刺）；赤芍（批号 140301，
为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥
根）；乌药（批号 140201，为樟科植物乌药 Lindera
aggregata Kosterm. 的干燥块根）；均购于安徽亳州
药材市场，鉴定人为康缘大药房吴舟主任药师。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，
洗脱程序为 0～16 min，5%～14%乙腈；16～20 min，
14%～17%乙腈；20～35 min，17%～19%乙腈；35～
60 min，19%～35%乙腈；60～62 min，35%～75%
乙腈；62～78 min，75%乙腈；体积流量为 0.9
mL/min；柱温 25 ℃；进样量 10 μL；检测波长 230
nm（定量测定和指纹图谱用）。色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
分别取没食子酸、丹参素钠、绿原酸、芍药苷、
虎杖苷、苯甲酸、丹酚酸 B、大黄素、大黄素甲醚
对照品适量，精密称定，置 100 mL量瓶中，加 70%
甲醇配成混合对照品母液，备用。精密量取混合对
照品母液 2.5 mL至 20 mL量瓶中，加 70%甲醇定
容，得质量浓度为没食子酸 12.19 μg/mL、丹参素钠
19.56 μg/mL、绿原酸 16.38 μg/mL、芍药苷 31.55
μg/mL、虎杖苷 36.80 μg/mL、苯甲酸 9.57 μg/mL、
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1-没食子酸 2-丹参素钠 4-绿原酸 8-芍药苷 11-虎杖苷 12-苯甲酸 15-丹酚酸 B 21-大黄素 22-大黄素甲醚
1-gallic acid 2-sodium danshensu 4-chlorogenic acid 8-paeoniflorin 11-polydatin 12-benzoic acid 15-salvianolic acid B 21-emodin 22-physcion

图 1 混合对照品 (A) 和十味盆安颗粒 (B) 溶液的 HPLC图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A) and Shiwei Penan Granule (B)

丹酚酸 B 36.84 μg/mL、大黄素 8.84 μg/mL、大黄素
甲醚 7.76 μg/mL的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
称取十味盆安颗粒粉末 0.5 g，精密称定，置 100
mL锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50 mL，称质量，
超声提取（250 W，40 kHz）30 min，冷却至室温，
再次称质量，用 70%甲醇补足减失质量，摇匀，滤
过，取续滤液，离心，即得。
2.4 十味盆安颗粒指纹图谱研究
2.4.1 精密度试验 取同一批十味盆安颗粒（批次
140801），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，
按“2.1”项下色谱条件连续进样 6次，记录色谱图，
结果表明，各色谱峰相对保留时间的 RSD 在
0.36%～0.77%，相对峰面积的 RSD 在 0.73%～
2.84%，表明仪器精密度较好。
2.4.2 重复性试验 取同一批十味盆安颗粒（批次
140801），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液 6
份，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，
结果表明，各色谱峰相对保留时间的 RSD 在
0.15%～0.93%，相对峰面积的 RSD 在 0.82%～
2.69%，表明该方法重复性较好。
2.4.3 稳定性试验 取同一批十味盆安颗粒（批次
140801），按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，
按“2.1”项下色谱条件分别在 0、170、340、680、
1 700 min、34 h进样测定，结果表明，各色谱峰相
对保留时间的 RSD 在 0.24%～0.91%，相对峰面积
的 RSD在 0.95%～2.60%，表明供试品溶液在 34 h
内稳定。
2.4.4 共有峰的指认与相似度评价 测定 15 批十
味盆安颗粒 HPLC图谱，叠加图谱见图 2。采用《中
药色谱指纹图谱相似度评价 2004A版》进行分析，
共标定 22个共有峰，将对照品溶液与样品色谱峰进
行比对得到 9个已知峰（1-没食子酸、2-丹参素钠、
4-绿原酸、8-芍药苷、11-虎杖苷、12-苯甲酸、15-
丹酚酸 B、21-大黄素、22-大黄素甲醚），13个为未
知峰。以中位数法生成对照指纹图谱，15批十味盆
安颗粒指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别为
0.977、0.977、0.976、0.977、0.992、0.992、0.992、
0.993、0.992、0.994、0.994、0.993、0.993、0.993、
0.993，相似度均达 0.976以上。
2.5 药材成品相关性研究
分别取十味盆安颗粒处方中 10 味药材的粉末
0.5 g，精密加 70%甲醇 50 mL，超声处理 60 min，
滤过，离心，得供试品溶液，按“2.1”项下色谱条
件进行测定。
由相关性图谱（图 3）可知，指纹图谱中 5、7
号峰主要来自菝葜；10号峰主要来自乌药；16号主
要来自皂角刺；3、4、9号峰主要来自大血藤；11、
18、19、20、21、22 主要来自虎杖；1、6、8、12
号峰主要来自赤芍；15、17号峰主要来自丹参。其
中 2、13、14 号峰暂无归属，通过查阅文献报道[4]
可推测2号峰丹参素钠可能是制剂过程中由15号峰
丹酚酸 B转化形成；13、14号峰为未知成分，有待
进一步研究。另由文献知大血藤、菝葜、蒲公英中
均含有 4号峰（绿原酸）[5-6]；菝葜、赤芍中均含有
1号峰（没食子酸）[7-8]。
1
2
4 8
11
12
15
21
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1 2 3 4 5 6 7
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0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
A
B
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图 2 15批十味盆安颗粒指纹图谱
Fig. 2 Fingerprint of 15 batches of Shiwei Penan Granule




图 3 10味药材的相关指纹图谱
Fig. 3 Relative fingerprint of 10 Chinese crude medicines

2.6 多成分定量测定
将对照品溶液与样品色谱峰进行比对，共指认
出 9个成分，分别为没食子酸、丹参素钠、绿原酸、
芍药苷、虎杖苷、苯甲酸、丹酚酸 B、大黄素、大
黄素甲醚。本实验采用二极管阵列检测器（DAD）
对样品进行全波段扫描，并且对 9个指标成分进行
了峰纯度验证，结果表明在本实验所确定的检测条
件下样品中所测定的 9个成分不含其他干扰成分。
2.6.1 线性关系考察 取对照品混合母液，用 70%
甲醇逐级 2倍稀释得系列对照品混合溶液，分别进
样，测定峰面积。以峰面积（Y）对质量浓度（X）
作图，得各对照品的回归方程。结果分别为没食子
酸 Y＝31 810 X－1 086，r＝0.999 9，线性范围
1.524～97.52 μg/mL；丹参素钠Y＝14 378 X－4 481，
r＝1.000 0，线性范围 2.445～156.48 μg/mL；绿原
酸 Y＝19 555 X－4 680，r＝1.000 0，线性范围
2.048～131.04 μg/mL；芍药苷Y＝14 897 X－16 983，
r＝1.000 0，线性范围 3.944～252.40 μg/mL；虎杖
苷 Y＝25 728 X－12 398，r＝1.000 0，线性范围
4.600～294.40 μg/mL；苯甲酸Y＝63 245 X－11 799，
r＝1.000 0，线性范围 1.196～76.56 μg/mL；丹酚酸
B Y＝19 716 X－12 501，r＝1.000 0，线性范围
4.605～294.72 μg/mL；大黄素 Y＝46 465 X＋2 808，
r＝0.999 9，线性范围 1.105～70.72 μg/mL；大黄素
甲醚 Y＝17 756 X－2 771，r＝0.999 9，线性范围
0.970～62.08 μg/mL。
1 2 3 4 5 6 7
8
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0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
R
S15
S14
S13
S12
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
丹参
菝葜
蒲公英
党参
大血藤
虎杖
延胡索
皂角刺
赤芍
乌药
十味盆安
颗粒
1 2 3 4 5 6 7
8
9 10
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12
13 14
15
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5
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1 6 8 12
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1
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2.6.2 精密度试验 取混合对照品溶液，按“2.1”
项下色谱条件连续进样 6次，测定，结果没食子酸、
丹参素钠、绿原酸、芍药苷、虎杖苷、苯甲酸、丹
酚酸 B、大黄素、大黄素甲醚峰面积的 RSD值分别
为 0.31%、0.23%、0.91%、0.21%、0.11%、0.28%、
0.26%、0.22%、0.76%，表明仪器精密度良好。
2.6.3 重复性试验 取同一批十味盆安颗粒
（140801批次），按“2.3”项下供试品制备方法制备
6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，测
定各指标成分的峰面积，计算质量分数，结果没食
子酸、丹参素钠、绿原酸、芍药苷、虎杖苷、苯甲
酸、丹酚酸 B、大黄素、大黄素甲醚的平均质量分
数和 RSD值分别为 1.26 mg/g、1.39%，2.50 mg/g、
1.56%，0.99 mg/g、1.94%，4.53 mg/g、1.30%，3.23
mg/g、1.31%，0.88 mg/g、1.83%，7.10 mg/g、0.47%，
1.58 mg/g、0.68%，0.91 mg/g、0.50%。
2.6.4 稳定性试验 取同一批十味盆安颗粒
（140801批次），按“2.3”项下供试品制备方法制备
供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于 0、170、
340、680、1 700 min、34 h进样测定，计算各指标
成分峰面积的RSD值，结果分别为没食子酸 1.88%、
丹参素钠 1.23%、绿原酸 1.54%、芍药苷 1.52%、虎
杖苷 1.84%、苯甲酸 1.71%、丹酚酸 B 0.53%、大黄
素 1.24%、大黄素甲醚 0.33%，说明供试品溶液中
各指标成分在 34 h内稳定。
2.6.5 加样回收试验 取已测定的同一批十味盆安
颗粒（140801批次）0.25 g，3份，精密称定，置于
50 mL量瓶中，分别加入混合对照品溶液（没食子
酸 344.31 μg/mL、丹参素钠 627.86 μg/mL、绿原酸
246.32 μg/mL、芍药苷 1 136.52 μg/mL、虎杖苷
807.95 μg/mL、苯甲酸 227.13 μg/mL、丹酚酸 B
1 778.11 μg/mL、大黄素 396.73 μg/mL、大黄素甲醚
227.71 μg/mL）0.8、1.0、1.2 mL，各平行 3份，加
70%甲醇定容，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，
进样，测定，计算回收率与 RSD值。结果分别为没
食子酸 100.15%、1.39%，丹参素钠 99.89%、1.71%，
绿原酸 99.92%、0.67%，芍药苷 99.28%、0.60%，
虎杖苷 99.89%、0.80%，苯甲酸 99.72%、1.83%，
丹酚酸 B 99.91%、0.79%，大黄素 100.06%、0.94%，
大黄素甲醚 99.97%、1.36%。
2.6.6 样品测定 将 15批十味盆安颗粒，按“2.3”
项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进
样，测定，结果见表 1。
3 讨论
在流动相选择方面，本实验考察了乙腈-水、甲
醇-水、甲醇-0.1%醋酸溶液（25∶75）、甲醇-0.4%
磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液[9-13]等几种不同
流动相在不同比例等度洗脱、梯度洗脱程序下的色
表 1 样品定量测定结果 (n = 2)
Table 1 Quantitative determination of nine maker components (n = 2)
批号
质量分数/(mg·g−1)
没食子酸 丹参素钠 绿原酸 芍药苷 虎杖苷 苯甲酸 丹酚酸 B 大黄素 大黄素甲醚
140801 1.26 2.51 0.98 4.51 3.20 0.89 7.03 1.59 0.92
140901 1.24 2.64 0.88 3.31 2.55 1.03 6.33 1.66 0.99
140902 1.23 2.71 0.85 3.39 2.70 1.09 6.24 1.72 0.99
140903 1.20 2.73 0.89 3.46 2.58 1.09 6.31 1.69 1.01
140915 1.25 2.60 0.95 4.53 3.17 0.89 6.36 1.58 0.91
140925 1.26 2.59 0.96 4.52 2.79 0.90 6.38 1.60 0.92
141001 1.24 2.70 0.92 4.49 2.87 0.93 6.25 1.65 0.91
141003 1.25 2.68 0.89 4.49 3.10 0.91 6.26 1.64 0.93
141005 1.21 2.61 0.96 4.46 2.69 0.99 6.40 1.61 0.91
141007 1.26 2.65 0.99 4.39 2.68 0.96 6.38 1.67 0.94
141015 1.22 2.64 0.93 4.43 2.97 0.95 6.38 1.66 0.96
141020 1.20 2.55 0.91 4.48 3.15 1.01 6.98 1.69 0.90
141111 1.27 2.53 0.92 4.41 2.88 0.95 7.00 1.59 0.91
141112 1.23 2.51 0.94 4.40 2.94 0.97 7.02 1.59 0.95
141113 1.25 2.62 0.98 4.44 2.86 0.93 6.39 1.61 0.92
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 18期 2015年 9月

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谱行为，结果表明，在乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗
脱程序下，各色谱峰分离度较好；同时考察了不同
柱温、不同体积流量、不同仪器、不同色谱柱对色
谱行为的影响，发现该检测方法耐用性良好。
检测波长的选择：本实验采用 DAD 对样品进
行全波段扫描，显示 283 nm 波长处有最大吸收，
但在 283 nm波长下有部分成分无吸收，如芍药苷。
为兼顾样品中所有成分，本实验对比了多个波长
（203、230、283、306、360 nm）下的色谱峰，发
现在 230 nm 条件下反映的色谱峰信息较全面，色
谱峰较多且 9种指标成分均有吸收，各色谱峰之间
均能达到基线分离，故选择 230 nm作为检测波长。
15 批十味盆安颗粒定量测定和指纹图谱研究[14]
结果表明该制剂 15批样品之间差异较小，批次之间
质量较稳定性，本实验所建方法可用于十味盆安颗
粒的质量控制。指纹图谱定量分析方法用于成分复
杂的中药复方质量控制，在监测指标性成分量的同
时，又对复方中的无效或未知成分进行了控制，对
全面控制中药复方制剂的质量具有指导意义。
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