全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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HPLC 法同时测定林下参、鲜人参、生晒参和红参中 14 种人参皂苷
刘 志 1, 2, 3，阮长春 1, 3，刘天志 4，王立娟 4，郑毅男 4，孙光芝 1*
1. 吉林农业大学农业现代化综合技术研究所，吉林 长春 130118
2. 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，吉林 长春 130118
3. 吉林农业大学天敌昆虫应用技术工程研究中心，吉林 长春 130118
4. 吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118
摘 要：目的 建立同时测定林下参、鲜人参、生晒参和红参中 14 种中性和酸性皂苷量的方法。方法 采用反相高效液相
色谱法，以 COSMOSIL 5 C18-MS 柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）为分析柱，乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗
脱，柱温 25 ℃，体积流量为 1 mL/min，检测波长 203 nm。结果 人参皂苷在 0.010～0.640 mg/mL 内线性关系良好；加样
回收率为 97.4%～103.6%。结论 本法简便、准确、分离度好，可作为林下参、鲜人参、生晒参和红参的质量评价的方法，
并首次发现了林下参中酸性皂苷的存在。
关键词：林下参；鲜人参；生晒参；红参；人参皂苷；酸性皂苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)12 - 2431 - 04
Simultaneous determination of 14 kinds of ginsenosides in similar wild ginseng,
fresh ginseng, white ginseng, and red ginseng by HPLC
LIU Zhi1, 2, 3, RUAN Chang-chun1, 3, LIU Tian-zhi4, WANG Li-juan4, ZHENG Yi-nan4, SUN Guang-zhi1
1. Institute of Agricultural Modernization, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
2. Engineering Research Center of Edible and Medicinal Fungi, Ministry of Education, Jilin Agricultural University, Changchun
130118, China
3. Engineering Research Center of Natural Enemy Insects, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
4. College of Chinese Medicinal Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
Key words: similar wild ginseng; fresh ginseng; white ginseng; red ginseng; ginsenoside; acidic ginsenoside

人参 Panax ginseng C. A. Mey. 是我国名贵的
中药，被誉为“百草之王”。目前在林下参、园参及
其制品的质量评价上，使用高效液相色谱测定人参
皂苷的方法多以测定多种中性皂苷（人参皂苷 Rb1、
Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rb3、Rf、Rg3 和 Rg2）为
主[1-6]；而酸性人参皂苷如人参皂苷 Ro、丙二酰基
人参皂苷-Rb1、Rb2、Rc 和 Rd（M-Rb1、M-Rb2、M-Rc、
M-Rd）[7-9]，占人参总皂苷的 35%～60%[10-12]，却被
忽略，造成了人参总皂苷测定的不准确性，严重地影
响了人参的质量评价。因此本实验建立了简单、准确
的 HPLC 方法，同时测定了包括酸性皂苷在内的林下
参、鲜人参、生晒参和红参中 14 种人参皂苷的量；
且首次报道了林下参中酸性皂苷的存在，为林下参、
园参及其制品的质量评价提供了科学的方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪（美国 Agilent 公
司）；乙腈（美国 Fisher 公司），其他试剂为分析纯。
酸性皂苷对照品 M-Rb1、M-Rb2、M-Rc、M-Rd 和
Ro（自制，经 IR、MS、NMR 鉴定，质量分数＞99%）；
中性皂苷对照品人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、
Rg1、Rb3、Rf 和 Rg2（中国药品生物制品检定所）。
林下参和鲜人参采自吉林省抚松县，生晒参和红参
购于吉林省抚松县万良药材市场，均经吉林农业大
学中药材学院郑毅男教授鉴定。

收稿日期：2012-02-16
基金项目：吉林省科技厅科技支撑计划重点项目（20100914）
作者简介：刘 志（1978—），男，助理研究员，在读博士研究生，研究方向为天然产物研究及新药开发。
Tel: (0431)84510949 E-mail: lzhiiu@126.com
*通讯作者 孙光芝 E-mail: gzsun1967@yahoo.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 Cosmosil 5 C18-MS（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为乙腈（A）-0.05 mol/L 磷酸二氢
钾水溶液（B）；洗脱梯度：0～22 min，21%A；
22～30 min，21%～29%A；30～50 min，29%A；
50～60 min，29%～35%A；60～70 min，35%～
50%A；柱温 25 ℃；检测波长 203 nm；体积流量
1 mL/min；进样量 20 μL；分析时间 70 min。色谱
图见图 1。

1-M-Rb1 2-M-Rc 3-M-Rb2 4-M-Rd 5-人参皂苷 Ro 6-人参皂苷 Rb1 7-人参皂苷 Rc 8-人参皂苷 Rb2 9-人参皂苷 Rd 10-人参皂苷 Rg1
11-人参皂苷 Re 12-人参皂苷 Rb3 13-人参皂苷 Rf 14-人参皂苷 Rg2
1-M-Rb1 2-M-Rc 3-M-Rb2 4-M-Rd 5-ginsenoside Ro 6-ginsenoside Rb1 7-ginsenoside Rc 8-ginsenoside Rb2 9-ginsenoside Rd
10-ginsenoside Rg1 11-ginsenoside Re 12-ginsenoside Rb3 13-ginsenoside Rf 14-ginsenoside Rg2
图 1 林下参 (A)、鲜人参 (B)、生晒参 (C)、红参 (D) 和对照品 (E) 的高效液相色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of similar wild ginseng (A), fresh ginseng (B), white ginseng (C),
red ginseng (D), and reference substances (E)
2.2 供试品溶液的制备
林下参和鲜人参根切成碎末，各精密称取 2.5
g，生晒参和红参粉碎后过 4 号筛，各精密称取 1
g，各供试样品分别用 80%甲醇 50 mL 冷浸提取 5
次，每次 12 h，40 ℃下浓缩提取液至干，用 30%
乙腈溶解，定容至 25 mL 量瓶中，摇匀放置，用
前以 0.25 μm 的滤膜滤过，作为供试品溶液，4 ℃
下低温储藏。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取人参单体皂苷 M-Rb1、M-Rb2、M-Rc、
M-Rd、Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rb3、
Rf 和 Rg2 对照品各适量，用 30%乙腈定容，得到质
量浓度分别为 1.012、0.997、1.011、1.003、1.001、
1.008、1.01、1.02、0.997、1.011、0.995、0.999、
0.100 和 1.003 mg/mL 混和对照品储备液，摇匀，即
得，4 ℃下低温储藏。
2.4 线性关系的考察
分别吸取上述对照品母液 10、20、40、80、160、
320、640 μL，分别置于 1 mL 量瓶中，加 30%乙腈
稀释至刻度，制备成不同质量浓度的系列对照品溶
液，分别精密吸取系列对照品溶液各 20 μL 进样。结
果表明上述14个成分分别在 0.010～0.640 mg/mL，
与峰面积呈良好的线性关系。以色谱峰面积为纵坐
标（Y），质量浓度为横坐标（X），线性回归方程和
相关系数见表 1。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液各 20 μL，按上述色谱条
件进样分析，1 d 内连续 6 次，测定峰面积，结果人
参皂苷单体（图 1 中 1～14 号峰对应）峰面积的日
内精密度 RSD 分别为 1.33%、2.65%、1.24%、1.78%、
1.59%、2.04%、2.42%、1.25%、1.76%、1.93%、2.07%、
2.45%、1.81%和 2.14%。连续 3 d 内进样 6 次，其
日间精密度 RSD 分别为 2.52%、2.37%、2.64%、
2.24%、2.45%、2.71%、2.55%、2.69%、3.09%、2.32%、
2.27%、4.55%、3.91%和 3.76%。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、8、
12 h 检测峰面积，每次进样均为 20 μL，测得人参



0 10 20 30 40 50 60 70 0 10 20 30 40 50 60 70 0 10 20 30 40 50 60 70
0 10 20 30 40 50 60 70 0 10 20 30 40 50 60 70
A B C
D E
10
11 5
1
13
2
14 3
6
7
4 8
12
9
10
11
5
1
13
2
14
3
6 7
4 8
12
9
10
11
5
1
13
2
14
3
6
7
4
8
12
9
10
11
5
1314
6 7 8
12
9
10
11
5
1
13
2
14 3 6
7 4
8
12
9
t / min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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表 1 14 种人参皂苷的回归曲线方程和相关系数
Table 1 Regression curves equation and relative
coefficients of 14 kinds of ginsenosides
人参皂苷 回归方程 r
M-Rb1 Y＝2.24×103 X－2.79 0.999 7
M-Rb2 Y＝2.18×103 X－3.42 0.999 6
M-Rc Y＝2.27×103 X－5.24 0.999 6
M-Rd Y＝2.12×103 X－7.01 0.999 1
Ro Y＝2.39×103 X－5.52 0.999 0
Rb1 Y＝2.43×103 X－3.56 0.999 8
Rb2 Y＝1.99×103 X－2.86 0.999 5
Rc Y＝2.74×103 X－8.64 0.998 7
Rd Y＝2.32×103 X－3.25 0.999 9
Re Y＝2.17×103 X－2.01 0.999 2
Rg1 Y＝2.27×103 X－3.48 0.999 3
Rb3 Y＝2.88×103 X－9.24 0.999 1
Rf Y＝2.81×103 X－8.78 0.999 0
Rg2 Y＝2.89×103 X－8.83 0.999 3

皂苷单体（图 1 中 1～14 号峰对应）峰面积 RSD 分
别为 0.98%、1.24%、0.75%、1.69%、1.04%、1.52%、
2.17%、1.74%、0.93%、2.43%、1.88%、1.34%、0.88%
和 1.97%。
2.7 重复性试验
取同一鲜人参根样品 6 份，分别按供试样品的
制备方法处理后，分别精密吸取 20 μL，按上述色
谱条件测定，结果人参皂苷单体（图 1 中 1～14 号
峰对应）质量分数的 RSD 分别为 2.85%、3.09%、
3.52%、2.47%、1.72%、2.71%、1.96%、3.03%、3.24%、
3.85%、3.14%、2.02%、2.56%和 1.71%。
2.8 加样回收率试验
精密称取 6 份已测定的鲜人参根样品适量，分
别准确加入一定量的人参皂苷对照品，按供试样品
的制备方法处理后，按上述色谱条件测定，结果人
参皂苷单体（图 1 中 1～14 号峰对应）的平均回收
率（RSD）分别为 100.6%（1.35%）、102.2%（2.01%）、
98.4%（1.47%）、99.5%（1.08%）、98.5%（1.46%）、
101.5%（1.73%）、103.6%（2.25%）、101.8%（1.51%）、
97.4%（2.33%）、99.1%（1.75%）、102.7%（1.84%）、
100.1%（0.98%）、98.7%（2.15%）和 97.9%（3.03%）。
2.9 样品测定
按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别进
样 20 μL，按上述色谱条件进行测定，以外标法计
算，结果见图 1 和表 2。
表 2 人参皂苷的测定结果 (n＝3)
Table 2 Determination of ginsenosides (n＝3)
质量分数 / % 样品
M-Rb1 M-Rc M-Rb2 M-Rd Ro Rb1 Rc Rb2 Rd Rg1 Re Rb3 Rf Rg2
林下参 0.410 0.139 0.156 0.084 0.148 0.307 0.101 0.120 0.067 0.345 0.247 0.011 0.038 0.047
鲜人参 0.527 0.282 0.341 0.144 0.454 0.231 0.088 0.124 0.035 0.381 0.249 0.017 0.078 0.029
生晒参 0.333 0.165 0.194 0.085 0.402 0.318 0.168 0.206 0.118 0.350 0.246 0.012 0.054 0.033
红参 0 0 0 0 0.395 0.325 0.219 0.215 0.084 0.281 0.086 0.015 0.021 0.011

3 讨论
在酸性皂苷的定量测定研究上，杨崇仁等[12]报
道了云南栽培西洋参中 10 种皂苷的测定方法，用乙
腈-0.05 mol/L 的磷酸二氢钾测定 M-Rb1、M-Rb2、
M-Rc、Ro、Rb1、Rb2、Rc 和 Rd，用乙腈-磷酸测
定 Re 和 Rg1。Court 等[11]报道了采用间接的测定方
法，即测定中性皂苷后将丙二酰基人参皂苷脱丙二
酰基变成相应的人参皂苷再测定，需要测定 2 次。
本实验建立的 HPLC 方法，同时测定了包括酸性皂
苷在内的林下参、鲜人参、生晒参和红参中 14 种人
参皂苷的量；结果表明酸性皂苷在林下参、鲜人参、
生晒参中的量非常高，分别为 0.937%、1.748%和
1.179%，分别占其总皂苷的 42.21%、58.66%和
43.93%。本方法避免了由于忽略酸性皂苷而使总皂
苷测定的不准确，为林下参和园参及其制品提供了
一个较科学的质量评价方法。
在林下参的化学成分研究上，从林下参中分离
得到了多种已知化合物，分别鉴定为人参皂苷 Rb1、
Rb2、Rc、Rd、20(R)-Rg3、20(R)-Rh2、Re、Rh1、
Rb3、Rf、20(R)-Rg2 和 Rg1 等[13-15]。但林下参中酸
性皂苷的研究未见报道，本实验首次报道了林下参
中酸性皂苷（M-Rb1、M-Rb2、M-Rc、M-Rd、Ro）
的存在并对其进行定量分析。
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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