全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 10 •
• 化学成分 •
花刺参中两个新的四环三萜化合物
张佳佳
浙江医药高等专科学校,浙江 宁波 315200
摘 要:目的 从花刺参 Stichopus variegatus 中分离活性皂苷类成分。方法 将花刺参体内得到的总皂苷溶于吡啶-2-二氧六
环(1︰1)的混合液中,130 ℃加热 2.5 h,应用多种色谱技术对回流产物进行分离纯化,得到 2 个三萜皂苷类化合物。结
果 应用现代光谱技术(2D-NMR 和 ESI-MS)和化学方法鉴定其结构,分别为 3-O-[β-D-吡喃木糖(1→2)-4′-O-磺酸钠-β-D-
吡喃木糖]-海参烷-9-烯-3β,12α,17α,25β-四醇,命名为花刺参苷 A(variegatuside A,1);3-O-β-D-吡喃木糖-16β-乙酰氧基-海
参烷-9-烯-22,25-环氧-3β,12α,17α-三醇,命名为花刺参苷 B(variegatuside B,2)。结论 化合物 1 和 2 均为新化合物。
关键词:花刺参;海参;三萜皂苷;花刺参苷 A;花刺参苷 B
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2011)01 - 0010 - 05
Two new triterpene glycosides from Stichopus variegatus
ZHANG Jia-jia
Zhejiang Pharmaceutical College, Ningbo 315200, China
Abstract: Objective To study the constituents from the sea cucumber, Stichopus variegatus. Methods The crude saponins of S.
variegatus were desulfated with pyridine-dioxane (1:1), the desulfated products were separated by multi-chromatography to afford two
compounds. Results On the basis of chemical methods and spectral evidences, especially 2D-NMR and ESI-MS, these two
compounds were identified as 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-4′-O-sulfate-β-D-xylopyranosyl]-holosta-9-ene-3β,12α,17α,25β-
tetraol sodium salt, named as variegatuside A (1) and 16β-acetoxy-3-O-β-D-xylopyranosyl-holosta-22,25-epoxy-9-ene-3β,12α,17α-
triol, named as variegatuside B (2). Conclusion Compounds 1 and 2 are new compounds.
Key words: Stichopus variegatus Semper; sea cucumber; triterpene glycoside; variegatuside A; variegatuside B
花刺参 Stichopus variegatus Semper属楯手目刺
参科海洋动物,俗名方参、黄肉。一般体长 200 mm,
稍呈四方柱形,背部散布小疣足,口偏于腹部。盛
产于我国南海,包括北部湾、海南岛和西沙群岛沿
岸浅海。此外东非、马尔代夫群岛、印度尼西亚、
日本琉球群岛和澳大利亚北部海域也有分布,资源
丰富,可作为药物开发的有效资源[1]。已有人对该
种海参体内多糖和糖蛋白的分离纯化、化学特征和
药理活性进行了研究[2],但有关该种海参体内小分
子化学成分的研究报道较少。本课题组采用稻瘟霉
模型生物活性和体外细胞毒活性追踪方法,对其体
内的三萜皂苷类成分进行了系统研究[3],从花刺参
中得到 2 个新的三萜皂苷类化合物,命名为花刺参苷
A(variegatuside A)和花刺参苷 B(variegatuside B)。
1 材料和方法
1.1 仪器和试剂
XT 5 显微熔点仪(北京市科仪电光仪器厂);
Bruker Vector 22 型红外光谱仪;Varian Inova—600
核磁共振仪;Quatrro 质谱仪,Micromass 公司;
Sephadex LH-20 为 Pharmacia 公司产品;色谱用硅
胶和 HSGF254 硅胶预制板(烟台芝罘黄务硅胶开发
试验厂);HPLC:Aglient 1100 Series,RID 检测器,
Aglient 公司;反相柱为 Zobrax 300 SB C18(250
mm×9.4 mm,5 μm,Zorbax 公司);HPLC 洗脱剂
为色谱纯甲醇;其余试剂均为分析纯。
1.2 实验材料
花刺参 2007 年 9 月采于海南,由中国海洋大
学廖玉麟教授鉴定为花刺参 Stichopus variegatus
收稿日期:2010-06-23
基金项目:宁波市自然科学基金资助项目(2007A610083);浙江省医药卫生科学研究基金(2008B163);浙江省高校科研基金(Y200805910)
作者简介:张佳佳(1975—),女,硕士,副教授,主要从事海洋药物研发。E-mail: zjj@zjbti.net.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 11 •
Semper,标本现存于浙江医药高等专科学校。
1.3 提取和分离
新鲜花刺参材料(约 15 kg),洗净、切碎后,
用 85%乙醇冷浸提取,回收乙醇得浸膏。将浸膏均
匀分散在水中,用二氯甲烷萃取,待二氯甲烷萃取
液颜色变得极浅后,再用正丁醇萃取。回收正丁醇
即可得到花刺参粗皂苷。取粗皂苷 16.4 g,溶于 120
mL 吡啶-二氧六环(1︰1)溶剂中,120 ℃加热 2.5
h。反应物冷却后,回收溶剂,所得浸膏用硅胶低压
柱色谱处理,氯仿-甲醇-水(7.5︰2.5︰1,下层)
洗脱,得到的主成分再进行高效液相柱色谱纯化,
色谱柱为 Zobax SB C18型 ODS 反相柱,洗脱剂为
80%甲醇,体积流量为 1.5 mL/min,得到 2 个化合
物,其中化合物 1(18.7 mg),化合物 2(24.6 mg)。
应用现代光谱技术和化学方法鉴定以上 2 个化合物
为花刺参苷 A(variegatuside A)和花刺参苷 B
(variegatuside B)。
2 结构鉴定
这两个化合物均为新的三萜皂苷类化合物,化
合物 1 命名为花刺参苷 A(variegatuside A),化合
物 2 命名为花刺参苷 B(variegatuside B)。结构式
见图 1。
HO
NaO3SO
O
OH
OH
O
OH
O
O
OH
O
OHHO
O
O
OH
OH
HO
O
OAc
HO
O
O
OH
O
图 1 化合物 1 和 2 的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1 and 2
化合物 1:C40H61O17SNa,无色结晶性粉末,
mp 212.4~214.4 ℃(MeOH-H2O), 20D]α[ −22.3°
(c 0.4,MeOH),Liebermann-Burchard 反应和 Molish
反应均呈阳性。由 ESI-MS+提供的准分子离子峰
m/z: 893.357 8 [M+Na]+和 ESI-MS-提供的准分子
离子峰 m/z: 847 [M-Na]-,推测化合物 1 的相对分
子质量为 870。由 HR-ESI-MS+中准分子离子峰提
供的精确相对分子质量 m/z: 891.422 0 [M+Na]+
(计算值 891.422 3),结合 13C-NMR、1H-NMR 谱和
DEPT 谱,确定该化合物分子式 C40H61O17SNa。
KBr
maxIR ν (cm
−1):3 416(羟基),1 747(羰基),1 636
(双键),1 253,1 069(磺酸基)。磺酸基的推断还
由正离子质谱碎片峰 m/z: 791 [M-SO3Na+H+
Na]+的存在得以支持。
化合物 1 的 1H-NMR 谱高场区显示苷元上的 7
个角甲基质子信号,在 δH 3.5~5.5 区域内有糖环质
子信号,相应在 13C-NMR 谱的高场区有苷元和角甲
基上的碳信号,在 δC 60~90 区域内有糖环上的碳
信号,在 δC 105 附近有两个糖基端基碳信号。在
Δ9(11)位有双键信号 [δC 153.9 (C-9), δC 115.6 (C-11)/
δH 5.62 (1H, d, 4.8, β, H-11)]。C-3, C-12, C-17, C-20,
C-25 均有较大的低场位移 δ 88.8 (C-3), 71.6 (C-12),
89.8 (C-17), 86.7 (C-20), 81.4 (C-25), 说明这 5 个碳
原子均为连氧碳。以上特征表明化合物 1 为三萜皂
苷类化合物。化合物 1 主要的 HMBC 和 NOESY 相
关信号见图 2。
图 2 化合物 1 的 HMBC(A)和 NOESY(B)相关谱
Fig. 2 Key HMBC (A) and NOESY (B) correlations
of compound 1
根据化合物 1 的 1H-NMR、13C-NMR、DEPT
谱和 HMQC 谱,对化合物的各个碳及其连接氢质
子的化学位移进行归属,借助 DQFCOSY和 TOCSY
谱确定各个碳原子的连接顺序,结果见表 1。
化合物 1 的 13C-NMR、1H-NMR、DEPT 谱和
HMQC谱显示有 2个糖基的端基氢质子和端基碳信
号 [δH 4.71 (1H, d, 7.2)/δC 105.3, δH 4.83 (1H, d,
7.2)/δC 105.9],表明化合物 1 的寡糖链由 2 个糖基
组成,根据端基氢质子有较大的偶合常数(7.2 Hz),
推断 2 个糖基的端基均为 β 构型。
将化合物 1 用三氟乙酸水解后,衍生得到糖腈
乙酸酯衍生物,采用 GC-MS 分析,经与标准糖的
糖腈乙酸酯衍生物对照,表明化合物 1 中的糖基为
D-木糖。从 2 个糖基的端基氢质子出发,通过
TOCSY 和 DQFCOSY 谱可以对各个糖基质子的信
号进行归属,结果见表 1。由 13C-NMR 谱数据比较
H
H
HO
O
O CH3
CH3
OH
O
CH3
OH
HCH3
H H
CH3
CH3
H
H
CH3
H
H
H
H H
H H H
H
NaO3SO
HO
OH
OH
HO
HO
HH
H
H
O
H
O
H
H
H
H
H
HO
O
O CH3
CH3
OH
O
CH3
OH
HCH3
H H
CH3
CH3
H
H
CH3
H
H
H
H H
H H H
H
NaO3SO
HO
OH
OH
HO
HO
HH
H
H
O
H
O
H
H
H
A
B
1 2
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 12 •
表 1 化合物 1 的 13C-NMR、1H-NMR、NOESY、HMBC 相关谱(在吡啶-d5-D2O,4︰1 中,600/150 MHz)
Table 1 13C-NMR and 1H-NMR chemical shifts and NOESY and HMBC correlations of compound 1
(in pyridine-d5-D2O, 4:1, 600/150 MHz)
位置 δC δH (m, J in Hz) NOESY HMBC
1 36.4 1.38 (1H, m, α), 1.86 (1H, m, β)
2 27.4 1.76 (1H, m, α), 2.02 (1H, m, β) H-3α, H3-30, H3-19
3 88.8 3.14 (1H, dd, 4.2, 12.0, α) H-Xyl1, H-5α, H3-31 C: Xyl1
4 40.1
5 52.8 1.00 (1H, d, 10.2, α) H-3α, H3-31
6 28.4 2.02 (2H, m)
7 21.2 1.49 (1H, m, α), 1.74 (1H, m, β)
8 41.0 3.36 (1H, t, 9.6, β) H-7β, H-6β, H-15β, H3-19
9 153.9
10 39.8
11 115.6 5.62 (1H, d, 4.2, β) H-12β, H-1β, H3-19 C: 10, 8, 13, 12
12 71.6 4.99 (1H, dd, 5.4, 12.0, β) H-11β C: 14, 9
13 58.9
14 46.0
15 36.9 1.82 (1H, m, α), 1.40 (1H, m, β) H-8β C: 17
16 35.6 2.41 (1H, ddd, α), 2.97 (1H, dd, 6.0, 14.4, β) H-15α, H3-32, H-15β C: 14, 17
17 89.8
18 174.6
19 22.7 1.40 (3H, s) H-1β, H-2β, H3-30, H-8β, H-11β C: 1, 10, 5, 9
20 86.7
21 18.9 1.76 (3H, s) C: 22, 17, 20
22 80.7 4.32 (1H, m, α) H-16β C: 21, 20, 17
23 28.0 1.45 (2H, m) C: 24, 25
24 38.5 1.64 (2H, m) C: 25, 27
25 81.4
26 28.7 1.20 (3H, s) C: 27, 25, 24
27 27.1 1.19 (3H, s) C: 26, 24, 25
30 16.8 1.13 (3H, s) H3-19 C: 31, 3, 4, 5
31 28.2 1.28 (3H, s) H-3α, H-5 C: 30, 3, 4, 5
32 20.4 1.65 (3H, s) H-16α C: 13, 14, 8, 15
Xyl
1 105.3 4.71 (1H, d, 7.2) H-3, H-3′, H-5′, H-1″ C-3, C-1″
2 83.4 4.04 (1H, m) C-1′, C-3′, C-1″
3 75.4 4.28 (1H, m) C-2′, C-4′
4 76.0 5.10 (1H, m) C-2′, C-3′
5 64.2 3.73 (1H, m, α), 4.75 (1H, dd, 4.8, 11.4, β) H-1′, H-4′ C-4′, C-1′, C-4′
1 105.9 4.83 (1H, d, 7.2) H-3″, H-5″, H-2′ C-2′
2 76.8 4.02 (1H, m) C-3″, C-1″
3 77.7 4.22 (1H, m) C-2″
4 69.9 3.68 (1H, m)
5 65.2 3.74 (1H, m, α), 4.55 (1H, dd, 4.2, 10.8, β)
发现,C-4′(70.0~76.0)向低场位移 δ 6.0,提示在
该位置有磺酸基(-SO3Na)取代。另外,δC 83.4 (C-2′)
与相应单糖比较有较大的低场位移,提示相应位置
应是糖基相连的位置。将化合物 1 甲基化后酸水解
及衍生,采用 GC-MS 分析形成的部分甲基化糖醇
醋酸酯,表明糖链中存在 2 位连接的木糖。这一实
验结果支持了以上推断。
综上所述,化合物 1 的结构为 3-O-[β-D-吡喃木
糖(1→2)-4′-O-磺酸钠-β-D-吡喃木糖]-海参烷-9-烯-
3β,12α,17α,25β-四醇。现有文献资料表明化合物 1
尚未公开报道,为一新化合物,命名为花刺参苷 A
(variegatuside A)。
化合物 2:C37H56O12,无色结晶性粉末,mp
218~221 ℃(MeOH-H2O), 20D]α[ −27.3°(c 0.2,
MeOH),Liebermann-Burchard 反应和 Molish 反应
均呈阳性。由 ESI-MS+提供的准分子离子峰 m/z 715
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 13 •
[M+Na]+和 ESI-MS-提供的准分子离子峰 m/z 671
[M-Na]-,推测化合物 2 的相对分子质量为 692。
由高分辨质谱 HR-ESI-MS+中准分子离子峰提供
的精确分子量 m/z 715.366 4 [M+Na]+(计算值
715.366 9),583 [M-Xyl+Na+H]+,656 [M-
OAc+Na]+;结合 1H-NMR、13C-NMR 谱和 DEPT 谱,
确定该化合物的分子式 C37H56O12。 KBrmaxIR ν (cm−1):
3 417(羟基),1 741(羰基),1 637(双键)。
根据化合物 2 的 1H-NMR、13C-NMR、DEPT
谱、HMQC 谱,对化合物的各个碳以及其连接氢质
子的化学位移进行归属,借助 DQFCOSY 谱和
TOCSY 谱确定各个碳原子的连接顺序,结果见表 2。
化合物 2 的 1H-NMR 谱高场区显示 7 个角甲基
质子信号及苷元质子信号,在 δH 3.5~5.5 区域内有
表 2 化合物 2 的 13C-NMR、1H-NMR 和 NOESY、HMBC 相关谱(在吡啶-d5-D2O,4︰1 中,600/150 MHz)
Table 2 13C-NMR and 1H-NMR chemical shifts and NOESY and HMBC correlations of compound 2
(in pyridine-d5-D2O, 4:1, 600/150 MHz)
位置 δC δH (m, J in Hz) NOESY HMBC
1 36.4 1.39 (1H, m, α), 1.86 (1H, m, β)
2 27.0 1.92 (1H, m, α),
2.00 (1H, m, β)
H-3α
H3-30, H3-19
3 88.6 3.04 (1H, d, 10.8, α) H-Xyl1, H-5α, H3-31 C: Xyl1
4 38.5
5 52.8 1.00 (1H, d, 10.4, α) H-3α, H3-31
6 28.3 1.72 (1H, m, α), 1.54 (1H, m, β)
7 20.7 1.50 (1H, m, α), 1.75 (1H, m, β)
8 40.9 3.34 (1H, m, β) H-7β, H-6β, H-15β, H3-19
9 150.2
10 32.4
11 123.7 5.60 (1H, m, β) H-12β, H-1β, H3-19 C: 10, 8, 13, 12
12 71.4 4.96 (1H, m, β) H-11β C: 14, 9
13 58.5
14 47.1
15 36.7 1.92 (1H, m, α),
1.43 (1H, m, β)
H-8β
C: 17
16 73.4 6.26 (1H, m, α) H-15α, H3-32
C: 14, 17
CH3COO
17 87.9
18 173.8
19 22.5 1.75 (3H, s) H-1β, H-2β, H3-30, H-8β, H-11β C: 1, 10, 5, 9
20 87.2
21 18.5 1.96 (3H, s) C: 22, 17, 20
22 75.3 4.24 C: 21, 20, 17
23 28.1 1.45 C: 24, 25
24 34.3 1.16 C: 25, 27
25 77.5
26 22.8 0.77 (3H, s) C: 27, 25, 24
27 22.5 0.76 (3H, s) C: 26, 24, 25
30 16.7 1.05 (3H, s) H3-19 C: 31, 3, 4, 5
31 29.5 1.27 (3H, s) H-3α, H-5 C: 30, 3, 4, 5
32
CH3COO
CH3COO
20.7
170.4
20.7
1.65 (3H, s)
2.00
H-16α C: 13, 14, 8, 15
Xyl
1 105.1 4.68 (1H, d, 7.2) H-3, H-3′, H-5′, H-1″ C-3
2 76.7 3.98 (1H, d, 8.8) C-1′, C-3′
3 73.7 4.20 (1H, d, 8.4) C-2′, C-4′
4 69.9 5.09 (1H, m) C-2′, C-3′
5 66.3 3.73 (1H, m, α), 4.62 (1H, m, β) H-1′, H-4′ C-4′, C-1′, C-4′
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糖环质子信号,相应在 13C-NMR 谱的高场区有苷元
和角甲基上的碳信号,在 δC 60~90 区域内有糖环
上的碳信号,在 δC 105 附近有糖基端基碳信号。在
Δ9(11) 位有双键信号 [δC 150.2 (C-9), δC 123.7
(C-11)/δH 5.51 (1H, m, H-11)]。C-3, C-12, C-16, C-17,
C-20, C-25 均有较大的低场位移 δ 88.6 (C-3), 71.4
(C-12), 73.4 (C-16), 87.9 (C-17), 87.2 (C-20), 77.5
(C-25), 说明这 6 个碳原子均为连氧碳。以上特征表
明化合物 2 为三萜皂苷类化合物。
化合物 2 的 16 位碳、氢均发生较大的低场位
移 [δC 73.4 (C-16)/δH 6.26 (1H, m, H-16)],推测 16
位碳上连有含氧基团,而其 HMBC 谱(图 3)上的
碳 氢 远 程 相 关 信 号 2.00/170.4 (H-CH3COO/
C-CH3COO),说明化合物中含氧基团为乙酰氧基
(-CH3COO), 6.26 (1H, m, H-16)/170.4 (C-CH3COO),
证明乙酰基连在苷元 16 位碳上。在 NOESY 谱上
1.92 (1H, m, H-15α) 与 6.26 (1H, m, H-16α) 有明显
的相关峰,存在 NOE 相关,说明 16 位的氢为 α-H,
而乙酰基则处于 16 位的 β 位。
O
H
O
H
H
H
OH3C
OH
HO
O
HH
H
H
O
OH
MeO
HO
H
H
H
H O
OH
O
HO
H3C
H
H
H
HO
NaO3SO
CH2OH
O
O CH3
CH3
OH
O
CH3
OH
HCH3
H H
CH3
CH3
H
H
CH3
H
H
H
H H
HH H
H
HO
H
H
图 3 化合物 2 的 HMBC 相关谱
Fig. 3 Key HMBC correlations of compound 2
化合物 2 的 13C-NMR、1H-NMR、DEPT 谱、
HMQC谱显示有 1个糖基的端基氢质子和端基碳信
号 [δH 4.68 (1H, d, 7.2)/δC 105.1],表明化合物 2 的
寡糖链由 1 个糖基组成,根据端基氢质子有较大的
偶合常数(7.2 Hz)推断糖基的端基为 β 构型。将
化合物 2 用三氟乙酸水解后,衍生得到糖腈乙酸酯
衍生物,采用 GC-MS 分析,经与标准糖的糖腈乙
酸酯衍生物对照,表明化合物2中的糖基为D-木糖。
从该糖基的端基氢质子出发,通过 TOCSY 和
DQFCOSY 谱可以对各个糖基质子的信号进行归
属,见表 2。
综上所述,化合物 2 的结构为 3-O-β-D-吡喃木
糖 -16β- 乙 酰 氧 基 - 海 参 烷 -9- 烯 -22,25- 环 氧 -
3β,12α,17α-三醇。现有文献资料表明化合物 2 尚未
公开报道,为一新化合物,命名为花刺参苷 B
(variegatuside B)。
3 讨论
对花刺参活性皂苷类成分的研究结果表明,花
刺参体内的抗肿瘤活性成分主要为三萜皂苷,作为
海参体内主要的有毒物质和化学防御物质,其具有
较强的抗肿瘤和抗真菌活性,是一类很有前景的抗
肿瘤药物的先导化合物,对其进行深入的构效关系
研究将有助于抗肿瘤新药的研究与开发。本研究所
报道的 2 个化合物均为新化合物,有可能作为抗肿
瘤药物的先导化合物。
参考文献
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