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Determination of six triterpene acid contents in effective fraction of Eriobotryae Folium by quantitative analysis of multi-components by single-marker

一测多评法测定枇杷叶有效部位中6种三萜酸成分的量



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月

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一测多评法测定枇杷叶有效部位中 6 种三萜酸成分的量
蔡雪萍 1, 2,李振华 1, 2,华俊磊 1, 2,鞠建明 2*,吕 寒 3,马 丽 3,李维林 3
1. 南京中医药大学药学院,江苏 南京 210046
2. 江苏省中医药研究院,江苏 南京 210028
3. 江苏省中国科学院植物研究所,江苏 南京 210014
摘 要:目的 建立枇杷叶有效部位中蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸的一测多评 HPLC-ELSD
测定方法。方法 以熊果酸对照品为内参物,建立其与蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸的相对校正因子,
采用校正因子计算这 5 种三萜酸成分的量,实现一测多评;同时用外标法测定有效部位中该 6 种成分的量,并比较计算值与
实测值的差异,以验证一测多评的合理性、可行性和重复性。结果 15 批有效部位中 6 种三萜酸成分量的计算值与实测值
无显著性差异。结论 该方法操作简便,测定结果准确,实现了只用一个对照品同步测定枇杷叶总三萜酸有效部位中 6 个成
分的量,可为中药多指标成分质量评价模式提供参考。
关键词:一测多评;枇杷叶;蔷薇酸;委陵菜酸;马斯里酸;科罗索酸;齐墩果酸;熊果酸
中图分类号:R286.022 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2013)21 - 3057 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.21.022
Determination of six triterpene acid contents in effective fraction of Eriobotryae
Folium by quantitative analysis of multi-components by single-marker
CAI Xue-ping1, 2, LI Zhen-hua1, 2, HUA Jun-lei1, 2, JU Jian-ming2, LV Han3, MA Li3, LI Wei-lin3
1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China
2. Jiangsu Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210028, China
3. Institute of Botany, Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences, Nanjing 210014, China
Abstract: Objective To develop a quantitative analysis of multi-components by single-marker (QAMS) method for the simultaneous
determination of six triterpene acid (euscaphic acid, tormentic acid, maslinic acid, corosolic acid, oleanolic acid, and ursolic acid) contents
in the effective fraction of Eriobotryae Folium. Methods Ursolic acid was used as the internal reference substance, and the relative
correlation factors (RCF) of euscaphic acid, tormentic acid, maslinic acid, corosolic acid, and oleanolic acid were determined by
HPLC-ELSD with good reproducibility. The contents of the five components were calculated according to the RCF, respectively. The
contents of these six triterpene acids in 15 batches of effective fraction were determined by the external standard method. The rationality,
feasibility, and repeatability of the QAMS method were verified by comparing the results obtained from the two different methods. Results
For the six triterpene acids, there was no significant difference between the quantitative results with the two different methods in the 15
batches. Conclusion The method established in this research is accurate and feasible that it just needs to assay single-marker (ursolic
acid) for the determination of six triterpene acids in the effective fraction of Eriobotryae Folium simultaneously. Therefore, this method
could provide a new reference for the quality assess of multi components in Chinese materia medica.
Key words: quantitative analysis of multi-components by single-marker; Eriobotryae Folium; euscaphic acid; tormentic acid; maslinic
acid; corosolic acid; oleanolic acid; ursolic acid

枇杷叶为蔷薇科植物枇杷 Eriobotrya japonica
(Thunb.) Lindl. 的干燥叶,又名巴叶、芦桔叶,具
有清肺止咳、降逆止呕的作用,临床用于治疗肺热
咳嗽、气逆喘急、胃热呕逆、烦热口渴等症[1]。据
文献报道,枇杷叶的化学成分有三萜酸、黄酮类、
多酚、倍半萜及糖苷类等,三萜酸为其主要的活性

收稿日期:2013-05-18
基金项目:江苏省产学研前瞻性联合研究项目(BY2009144)
作者简介:蔡雪萍,在读硕士,研究方向为中药新剂型新工艺。Tel: 15850500785 E-mail: caixueping880315@163.com
*通信作者 鞠建明,博士,副研究员,硕士生导师,研究方向为中药新剂型与新工艺及中药材质量控制。
Tel: (025)85639640 E-mail: jjm405@sina.com
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成分之一,具有抗炎止咳、降血糖、抗病毒和抗氧
化的作用[2]。枇杷叶有效部位是本课题组采用现代
制剂技术对枇杷叶进行提取、分离纯化制得的总三
萜酸量达到 50%以上的活性部位,具有较强的降低
血糖的作用[3]。该活性部位主要含有蔷薇酸、委陵
菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸[4],
前 2 种三萜酸为一对手性异构体,后 4 种三萜酸分
别为极性相似的 2 对同分异构体,其中,蔷薇酸、
委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸对照品分离制备难
度大、成本高且较难购得,而齐墩果酸与熊果酸为
常见成分,对照品易得。
近年来关于一测多评的研究思路和方法已在人
参、黄连、黄芩、黄柏、丹参等药材中得到了验证,
并建立起了皂苷、生物碱、黄酮等同类成分间的相
对校正因子(relative correction factor,RCF)[5-11],
这些研究主要关于药材或饮片中多个成分的测定,
且基本采用紫外检测器,而采用该法测定中药有效
部位及使用其他检测器建立该法的研究鲜有报道。
枇杷叶有效部位中三萜酸系一类没有紫外吸收的化
合物,该类化合物的测定宜采用蒸发光散射检测器
(ELSD),而应用 ELSD 进行一测多评测定是否合适
有待进一步研究。
本研究应用 HPLC-ELSD,以熊果酸对照品作
为内标物,通过建立其与蔷薇酸、委陵菜酸、马斯
里酸、科罗索酸、齐墩果酸的相对校正因子,计算
出其他成分的量,并考察方法耐用性及系统适用性,
以探讨一测多评法在枇杷叶有效部位多指标质量控
制中应用的适用性及可行性。
1 仪器与试药
Waters 2695 高效液相色谱仪,Empower 1.0 工
作站(美国 Waters 公司);Waters e2695 高效液相色
谱仪,Empower 2.0 工作站(美国 Waters 公司);
Alltech 2000ES ELSD 检测器(美国 Alltech 公司);
AT201 型 1/10 万电子天平(瑞士 METTLER 公司);
Microfuge 16 型台式微量离心机(美国 Beckman
Coulter 公司);Milli—Q 型纯水器(美国 Millipore
公司);KQ—500DE 型数控超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司)。
齐墩果酸、熊果酸对照品(批号分别为
110709-200505,110742-200518)购自中国药品生
物制品检定所,蔷薇酸、委陵菜酸、科罗索酸、马
斯里酸对照品由江苏省中国科学院植物研究所从枇
杷叶中分离制得,经面积归一化法计算质量分数均
大于 98%。甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其
余试剂均为分析纯。
实验中用于定量测定的 15 批次枇杷叶有效部
位样品由江苏省中国科学院植物研究所中试车间提
供,其中 5 个样品批号分别为 110120、110314、
201105、201104、201106,其余的 10 个样品是由上
述 5 个批次的样品按一定比例勾兑而成。
2 方法与结果
2.1 枇杷叶总三萜酸有效部位的提取与纯化
取干燥枇杷叶药材1.0 kg粉碎成粗粉,依次用80%
乙醇 8、6 L 冷浸 2 次,每次 15 d,合并浸渍液,减压
浓缩至醇度为 30%的浓缩液,冷却,4 000 r/min 离心
15 min。取离心后沉淀,加入 95%乙醇 230 mL 加热溶
解,再加入 92 g 硅藻土拌样,取 92 g 硅藻土装柱,上
样后,以 95%乙醇 2 000 mL 洗脱,洗脱液合并,减压
回收乙醇,蒸干,即得枇杷叶总三萜酸有效部位。
2.2 方法学考察
2.2.1 色谱条件 Ultimate XB C18(250 mm×4.6
mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%
醋酸铵(C)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,5%~
10% A,55% B,40%~35% C;30~40 min,10%~
28% A,55% B,35%~17% C;40~60 min,28%~
32% A,55% B,17%~13% C;60~65 min,32%~
5% A,55% B,13%~40% C;65~80 min,5% A,
55% B,40% C),体积流量 1.0 mL/min,柱温 35 ℃,
ELSD漂移管温度 100 ℃,氮气体积流量 2.5 L/min,
在上述色谱条件下,取混合对照品溶液及供试品溶
液各 10 μL 进样。在此条件下,枇杷叶有效部位中
的 6 个三萜酸类成分与其相邻峰均能达到很好的分
离,且分离度大于 1.5,见图 1。
2.2.2 混合对照品溶液的制备 取蔷薇酸、委陵菜
酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸对照
品适量,精密称定,用甲醇溶解,制成浓度分别为
291.6、183.2、167.6、266.3、128.5、300.9 μg/mL 的
混合对照品溶液,于 4 ℃冰箱中避光保存,备用。
2.2.3 供试品溶液的制备 取枇杷叶有效部位粉末
(过 80 目筛)约 10 mg,精密称定,置 10 mL 量瓶
中,加甲醇至近刻度,超声处理 20 min,冷却至室
温后,定容至刻度,摇匀,过 0.45 μm 微孔滤膜,
取续滤液,即得。
2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取上述混合对照品
溶液 2、4、8、12、16、20 μL 注入液相色谱仪,按
上述色谱条件测定。以进样质量(m)的对数值对
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1-蔷薇酸 2-委陵菜酸 3-马斯里酸 4-科罗索酸 5-齐墩果酸
6-熊果酸
1-euscaphic acid 2-tormentic acid 3-maslinic acid 4-corosolic acid
5-oleanolic acid 6-ursolic acid
图 1 对照品 (A) 和样品 (B) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference
substances (A) and sample (B)
峰面积(A)的对数值进行线性回归处理,得蔷薇
酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸及
熊果酸的回归方程,结果表明,6 种三萜酸成分在
相应范围内线性关系良好,见表 1。
2.2.5 相对校正因子计算 以熊果酸为内标,在上
述特定的范围内按照相对校正因子计算公式分别计
算蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩
果酸对熊果酸的相对校正因子,结果见表 2。
2.2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10
μL,按上述色谱条件连续进样 6 次,计算蔷薇酸、
委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果
酸的峰面积 RSD 值分别为 1.55%、1.28%、0.89%、
1.53%、0.93%、1.35%,表明仪器精密度良好。
2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于制
备后 0、2、4、6、8、10 h 进样,记录蔷薇酸、委
陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸
6 个成分的质量分数,并计算其 RSD 值。结果以上
6 个成分的 RSD 值分别为 1.73%、2.20%、1.55%、
0.43%、1.76%、0.88%。
2.2.8 重复性试验 精密称取同一批枇杷叶有效部
表 1 6 种三萜酸类成分的线性关系和范围
Table 1 Linearities and ranges of six triterpene acids
成分 回归方程 线性范围 / μg r
蔷薇酸 lgA=1.575 lgm+0.854 0.583~5.832 r=0.999 0
委陵菜酸 lgA=1.697 lgm+0.361 0.335~3.352 r=0.999 9
马斯里酸 lgA=1.729 lgm+0.790 0.366~3.664 r=0.999 0
科罗索酸 lgA=1.715 lgm+0.819 0.533~5.326 r=0.999 0
齐墩果酸 lgA=1.766 lgm+0.519 0.257~2.570 r=0.999 9
熊果酸 lgA=1.749 lgm+0.582 0.602~6.018 r=0.999 9
表 2 6 种三萜酸的相对校正因子
Table 2 RCFs of six triterpene acids
相对校正因子 进样体积 / μL
f 蔷薇酸/熊果酸 f 委陵菜酸/熊果酸 f 马斯里酸/熊果酸 f 科罗索酸/熊果酸 f 齐墩果酸/熊果酸
2 1.039 1.061 0.959 0.972 0.986
4 1.048 1.067 0.965 0.977 0.992
8 1.051 1.064 0.970 0.979 0.993
12 1.052 1.061 0.971 0.981 0.993
16 1.056 1.060 0.974 0.984 0.991
20 1.057 1.054 0.974 0.984 0.991
平均 1.050 1.061 0.969 0.980 0.991
RSD / % 0.63 0.42 0.60 0.46 0.26



0 10 20 30 40 50 60 70
0 10 20 30 40 50 60 70
A
B
1
2
3
4
5
6
1 2
3
4
5
6
t / min
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位粉末 6 份,按供试品溶液处理方法制备并测定百
分含量,蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、
齐墩果酸和熊果酸质量分数的 RSD 值分别为
0.81%、0.77%、0.80%、0.27%、1.57%、0.51%。
2.2.9 加样回收率试验 取测定的枇杷叶有效部位
粉末约 25 mg,精密称定,平行 6 份,分别加入一
定量的对照品溶液,按“2.2.3”项下方法制备供试
品溶液,进样测定,计算得蔷薇酸、委陵菜酸、马
斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸的加样回收
率分别为 100.97%、97.35%、100.31%、96.59%、
98.98%、100.57%;RSD 值分别为 0.83%、2.00%、
0.80%、0.42%、1.61%、0.51%。
2.3 一测多评方法耐用性和系统适应性评价
2.3.1 色谱柱和高效液相色谱仪考察 取“2.2.2”
项下配制的混合对照品溶液,分别进样 2、4、8、
12、16、20 μL 测定,按“2.2.5”项下计算熊果酸
对蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩
果酸的相对校正因子。
试验考察了 Waters 2695,Waters e2695 两种高
效液相色谱系统和 Ultimate XB C18(250 mm×4.6
mm,5 μm),Aglient C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),
Thermo C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),Dubhe C18
(250 mm×4.6 mm,5 μm),Alltima HP C18(150 mm×
4.6 mm,3 μm)5 种色谱柱对相对校正因子的影响,
结果表明不同仪器及不同色谱柱所测得的各成分的
相对校正因子无显著性差异,RSD<2%,见表 3。
2.3.2 实验室考察 建立的一测多评试验方法在两
个实验室进行试验,色谱柱为 Ultimate XB C18(250
mm×4.6 mm,5 μm),结果显示不同实验室所得的
相对校正因子经 t 检验没有显著性差异(P>0.05),
见表 4。
2.3.3 待测色谱峰的定位 预实验分别考察了三萜
表 3 不同色谱柱及仪器对相对校正因子的影响
Table 3 Effect of different columns and instruments on RCFs
相对校正因子
仪器 色谱柱
f 蔷薇酸/熊果酸 f 委陵菜酸/熊果酸 f 马斯里酸/熊果酸 f 科罗索酸/熊果酸 f 齐墩果酸/熊果酸
Ultimate XB C18 1.050 1.061 0.969 0.980 0.991
Aglient C18 1.045 1.056 0.968 0.980 0.986
Thermo C18 1.063 1.065 0.982 0.988 0.980
Dubhe C18 1.058 1.063 0.973 0.988 0.983
Waters 2695 HPLC-ELSD
Alltima HP C18 1.023 1.031 0.965 0.978 0.983
Waters e2695 HPLC-ELSD Ultimate XB C18 1.055 1.060 0.967 0.985 0.977
平均 1.049 1.056 0.971 0.983 0.983
RSD / % 1.35 1.19 0.63 0.45 0.49
表 4 不同实验室对相对校正因子的影响
Table 4 Effect of different laboratories on RCFs
f 蔷薇酸/熊果酸 f 委陵菜酸/熊果酸 f 马斯里酸/熊果酸 f 科罗索酸/熊果酸 f 齐墩果酸/熊果酸
进样体积 / μL
Lab.1 Lab.2 Lab.1 Lab.2 Lab.1 Lab.2 Lab.1 Lab.2 Lab.1 Lab.2
2 1.039 1.051 1.061 1.054 0.959 0.958 0.972 0.980 0.986 0.970
4 1.048 1.060 1.067 1.072 0.965 0.963 0.977 0.984 0.992 0.971
8 1.051 1.058 1.064 1.067 0.970 0.970 0.979 0.984 0.993 0.980
12 1.052 1.054 1.061 1.060 0.971 0.968 0.981 0.984 0.993 0.981
16 1.056 1.055 1.060 1.059 0.974 0.974 0.984 0.990 0.991 0.978
20 1.057 1.052 1.054 1.052 0.974 0.970 0.984 0.987 0.991 0.980
平均 1.050 1.055 1.061 1.060 0.969 0.967 0.980 0.985 0.991 0.977
RSD / % 0.63 0.34 0.42 0.71 0.60 0.61 0.46 0.33 0.26 0.53
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酸类成分相对保留值和保留时间差在不同品牌色谱
柱中的重现性。结果显示保留时间差的波动较为明
显,相对保留值的波动相对较小,因此采用相对保
留值法进行三萜酸类待测成分色谱峰的定位可行。
根据结果最终确定各待测组分间的相对保留值,见
表 5。
表 5 一测多评法待测成分色谱峰的定位-相对保留值法
Table 5 Location-relative retention value method of chromatographic peaks by QAMS method
相对保留值 仪器 色谱柱
r 蔷薇酸/熊果酸 r 委陵菜酸/熊果酸 r 马斯里酸/熊果酸 r 科罗索酸/熊果酸 r 齐墩果酸/熊果酸
Ultimate XB C18 0.457 0.502 0.810 0.827 0.987
Aglient C18 0.431 0.459 0.813 0.829 0.987
Thermo C18 0.405 0.429 0.847 0.865 0.987
Dubhe C18 0.476 0.514 0.801 0.819 0.986
Waters 2695
Alltima HP C18 0.444 0.465 0.816 0.833 0.985
Waters e2695 Ultimate XB C18 0.443 0.474 0.817 0.835 0.986
平均 0.443 0.474 0.817 0.835 0.986
RSD / % 5.42 6.48 1.91 1.90 0.08

2.3.4 一测多评法与外标法结果的比较研究 按照
供试品溶液处理方法制备 15 份样品,精密吸取供试
品溶液各 10 μL 注入高效液相色谱仪,测定。分别
采用外标法和一测多评法计算枇杷叶有效部位中蔷
薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸
的含量,结果见表 6。结果显示,一测多评法与外
标法所得结果之间 6 种成分的夹角余弦值[12]分别为
0.999 91、0.999 85、0.999 91、0.999 97、0.999 96,
表明 2 种方法测得的质量分数没有显著性差异,且
两种方法所得的质量分数值偏差都在 5%以内,由
此说明一测多评法用于枇杷叶有效部位的多成分质
量评价研究是可行的。
表 6 一测多评法与外标法测得的枇杷叶有效部位中三萜酸类成分的质量分数
Table 6 Centents of triterpene acids in effective fraction of Eriobotryae Folium by QAMS and external standard method
蔷薇酸 / % 委陵菜酸 / % 马斯里酸 / % 科罗索酸 / % 齐墩果酸 / % 样品
外标法 QAMS 法 ε 外标法 QAMS 法 ε 外标法 QAMS 法 ε 外标法 QAMS 法 ε 外标法 QAMS 法 ε
熊果酸 / %
(外标法)
110120 10.30 10.80 4.88 8.57 8.82 2.96 8.77 8.72 0.52 15.71 15.48 1.47 4.60 4.79 4.16 18.95
110314 11.73 11.95 1.87 8.46 8.63 2.00 10.00 9.68 3.20 13.90 13.74 1.17 6.02 6.07 0.79 16.49
201105 12.69 12.93 1.89 7.74 7.99 3.13 9.33 9.20 1.39 15.76 15.50 1.68 5.30 5.44 2.67 18.15
201104 13.71 13.57 1.03 13.27 13.03 1.86 13.69 13.63 0.46 18.26 17.79 2.57 5.59 5.62 0.52 14.55
201106 12.81 12.96 1.17 8.41 8.60 2.26 9.87 9.62 2.62 15.54 15.22 2.05 5.51 5.62 1.93 17.16
勾兑 1 12.66 12.83 1.37 7.43 7.67 3.23 9.08 8.94 1.55 14.95 14.72 1.52 5.54 5.65 1.98 17.57
勾兑 2 10.97 11.35 3.53 8.60 8.82 2.56 9.38 9.22 1.75 14.80 14.62 1.21 5.40 5.53 2.37 17.95
勾兑 3 13.13 13.20 0.51 10.58 10.62 0.40 11.58 11.02 4.84 16.93 16.35 3.42 5.31 5.41 1.85 16.29
勾兑 4 11.44 11.79 3.03 8.23 8.46 2.78 9.33 9.18 1.61 15.51 15.24 1.70 5.12 5.26 2.89 17.95
勾兑 5 12.34 12.53 1.57 8.31 8.50 2.31 10.00 9.71 2.88 14.99 14.73 1.72 5.67 5.76 1.59 17.07
勾兑 6 11.47 11.86 3.38 7.88 8.13 3.25 9.10 9.01 0.98 15.73 15.49 1.52 5.02 5.19 3.35 18.61
勾兑 7 12.65 12.69 0.35 10.98 10.95 0.27 12.15 11.91 2.00 16.37 15.78 3.65 5.52 5.58 1.05 15.30
勾兑 8 12.41 12.64 1.84 7.26 7.51 3.44 9.18 9.04 1.51 15.28 15.03 1.63 5.33 5.47 2.45 17.70
勾兑 9 12.99 13.07 0.65 9.63 9.75 1.18 11.08 10.60 4.28 16.40 15.90 3.00 5.51 5.60 1.67 16.54
勾兑 10 12.30 12.53 1.91 7.37 7.61 3.32 9.12 8.99 1.48 15.26 15.01 1.67 5.04 5.19 2.83 17.61
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月

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3 讨论
枇杷叶有效部位中的三萜酸类成分是与其功能
主治相吻合的活性成分,其中熊果酸的含量较高且
对照品较易购得,所以选其作为内参物,建立了枇
杷叶有效部位原料药的一测多评方法。
本研究采用 HPLC-ELSD 建立一测多评测定方
法,在进行相对校正因子计算时若直接参照使用紫
外检测器文献中的计算方法,所得不同进样量的校
正因子 RSD 值非常大,当取峰面积和进样量的对数
进行相对校正因子计算时,RSD 值均小于 1%,表
明该计算方法可行。此外,在计算相对校正因子过
程中,进样量数据有的大于 1 个单位,有的小于 1
个单位,其对数值有正有负,无法计算校正因子,
将进样量均乘以 1 000(即单位小一级,由 μg 变为
ng),再取其对数,可有效避免因数值正负而导致无
法计算校正因子的问题。
为了验证所建立的 6 种三萜酸成分的一测多评
法的适用性及可行性,进行了方法学考察、方法耐
用性以及系统适应性试验。通过在不同的高效液相
色谱仪、不同实验室的考察,结果表明熊果酸与蔷
薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸
之间的相对校正因子具有良好的重现性。在考察待
测色谱峰的定位时,比较了相对保留值和保留时间
差两种方法在不同仪器和不同色谱柱中的重现性,
选择了偏差较小的相对保留值作为色谱峰的定位依
据。结果可知,马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸对
熊果酸的相对保留值重现性较好,RSD<5%,表明
根据内参物熊果酸的保留时间,通过相对保留值计
算能够正确判断这 3 种成分色谱峰的准确位置。而
蔷薇酸、委陵菜酸对熊果酸的相对保留值重现性较
差,RSD>5%,表明通过相对保留值不能准确定位。
因此,为了保证待测色谱峰的准确定位,在制订标
准时应对试验所需色谱柱型号和规格进行规定,并
列入该品种的标准正文中,亦可使用少量的对照品
对待测峰进行定性和准确定位后,再采用相对校正
因子计算其质量分数[13-14]。
本研究首次将一测多评法应用于枇杷叶有效部
位总三萜酸的质量评价中,该法所得 6 种三萜酸含
量的计算值与传统的外标法所得实测值之间无显著
性差异,表明本方法可在对照品缺失的情况下,仅
以熊果酸为对照品,实现枇杷叶有效部位的多指标
质量评价。
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