全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 5 期 2011 年 5 月

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软肝化纤丸对 CCl4致大鼠慢性肝纤维化的影响
潘赞红，宓余强，毕丽萍，伍喜良
天津市传染病医院，天津 300192
摘 要：目的 观察软肝化纤丸对 CCl4致大鼠慢性肝纤维化的治疗作用。方法 采用每周 2 次 sc 10%～40% CCl4油溶液 2
mL/kg 造成大鼠慢性肝纤维化模型，并同时 ig 给予 1.5、3 g/kg 受试药物，以联苯双酯滴丸为阳性对照，观察药物对模型大
鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆红
素（TBIL）、白蛋白/球蛋白（A/G）及肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的影响，并进行肝脏病理切片，光镜下观察肝脏组织学改
变。结果 在造模同时，连续 8 周 ig 给予 3 g/kg 软肝化纤丸对 CCl4所致慢性肝纤维化大鼠血清 ALT、AST 及肝组织中 Hyp
量的升高均有明显抑制作用；且能明显减轻动物肝细胞变性、坏死及纤维化等损伤程度。结论 软肝化纤丸对 CCl4 所致慢
性肝纤维化模型动物具有很好的保肝降酶、改善肝纤维化程度的作用。
关键词：软肝化纤丸；肝纤维化；CCl4；羟脯氨酸；丙氨酸氨基转移酶；天冬氨酸氨基转移酶
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)05 - 0951 - 04
Effect of Ruangan Huaxian Pills on hepatic fibrosis in rats induced by CCl4
PAN Zan-hong, MI Yu-qiang, BI Li-ping, WU Xi-liang
Tianjin Hospital for Infectious Diseases, Tianjin 300192, China
Key words: Ruangan Huaxian Pills; hepatic fibrosis; CCl4; hydroxyproline (Hyp); alanine aminotransferase (ALT); aspartate
transaminase (AST)

软肝化纤丸系天津市传染病医院自行研制的中
药复方制剂，主要由炙鳖甲、丹参、银杏叶和女贞
子、半枝莲等中药组成，具有滋补肝肾、健脾益气、
化瘀软坚的功效，临床用于肝脾肾俱虚、瘀血阻络
慢性肝炎及肝硬化患者。组成软肝化纤方的各味药
材均具有多种药理活性，鳖甲具有抑制结缔组织增
生和提高血浆白蛋白作用，并能激活体液免疫[1]；
丹参有激活胶酶、抗脂质过氧化、清除氧自由基、
促进纤维组织降解、抑制纤维组织增生、改善微循
环、促进形成的纤维组织重吸收的作用[2-3]；银杏叶
提取物有明显的抗氧化和抗脂质过氧化作用，能显
著提高肝组织超氧化物岐化酶（SOD）和谷胱甘酞
过氧化酶（GSH-Px）活性，降低丙二醛（MDA）
的量，从而达到抗肝纤维化的作用[4-5]；女贞子主要
成分齐墩果酸对于 CCl4诱导的肝损伤有保护作用，
能明显降低丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨
基转移酶（AST）的活性，对多种肝毒物有抵抗作
用[6-7]；半枝莲具有抗肿瘤、抗病原微生物、解热保
肝等活性，临床可治疗肿瘤、肝炎、肝硬化、腹水、
肾炎等[8-9]。诸药合用，具有抗氧化、保肝降酶功效。
软肝化纤处方自 2003 年以汤剂形式在本院临
床应用，具有良好的保肝和抗肝纤维化作用。依据
该药功效，本课题组以联苯双酯滴丸为阳性对照，
对其进行了保肝降酶及改善肝纤维化程度的药理作
用研究，为其临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
雄性 Wistar 大鼠，SPF 级，由北京维通利华实验
动物有限公司提供，许可证号 SCXK（京）2007-0001。
1.2 药品和主要试剂
软肝化纤丸（黄棕色粉末，天津传染病医院提
供，批号 20070313，本品每丸含赤芍以芍药苷计，
不得少于 5.2 mg。），给药剂量按生药粉计算，用纯化
水配成混悬液备用[10]；联苯双酯滴丸（规格 1.5 mg/粒，
北京协和药厂，批号 0810015）；CCl4（天津康科德
科技有限公司）；羟脯氨酸（Hyp）检测试剂盒（南

收稿日期：2010-11-04
作者简介：潘赞红（1971—），天津市人，硕士，副主任药师，研究方向为中药制剂的生产、工艺、质量标准及研发。
Tel: 13820206376 E-mail: jeny_pan@163.com
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京建成生物工程研究所）；ALT、AST、总胆红素
（TBIL）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）检测试剂
盒，均购自美国贝克曼库尔特有限公司。
1.3 实验仪器
Beckman CoulterTM—CX4 全自动生化分析仪，
美国贝克曼库尔特有限公司；AE—260 电子天平，
瑞士；Nikon 80i 显微镜及病理图文分析系统，日本
Nikon 公司。
1.4 动物分组、造模及给药方法
取健康大鼠 50 只，体质量 180～210 g，雄性，
随机分为 5 组，分别为对照组（纯化水 10 mL/kg）、
模型组（纯化水 10 mL/kg）、阳性对照药联苯双酯
滴丸（0.15 g/kg，给药体积 10 mL/kg）、软肝化纤丸
两个剂量（3.0、1.5 g/kg，给药体积均为 15 mL/kg）
组。除对照组外，其他各组动物每周 sc CCl4-花生
油诱导剂 2 次，体积为 2 mL/kg，CCl4 比例依次为
10%、20%、30%、40%，每 2 周递增一个梯度。在
造模同时各给药组 ig 给予受试药物，每天定时给药
1 次，每周称体质量 2 次，以调整药物及 CCl4 的剂
量。连续给药 8 周，在末次给药后各组动物禁食不
禁水 16 h 以上，于次日上午将动物乙醚麻醉后，股
动脉采血，同时剖取各组大鼠肝脏和脾脏，称质量，
计算各组大鼠的肝脏和脾脏指数。
1.5 生化指标检测
各组动物采血后，以 3 000 r/min 离心 20 min，
制备血清，测定血清 ALT、AST、TP、ALB、TBIL
水平。同时每只动物取相同部位肝组织，采用碱水
解法测定 Hyp 水平。
1.6 病理组织学检测
剖取同叶肝组织，用 10%甲醛溶液固定，经石
蜡包埋，常规制片。HE 染色后进行病理组织形态
学检查。镜下检查参考文献方法[11]，将肝细胞纤维
化分为 5 个等级：“0”表示无纤维化；“1”表示汇
管区纤维化扩大，限局窦周及小叶内纤维化；“2”
表示汇管区周围纤维化，纤维间隔形成，小叶结构
保留；“3”表示纤维间隔伴小叶结构紊乱，无肝硬
化；“4”表示早期肝硬化。肝细胞变性分 4 个等级：
“−”表示正常肝组织；“+”表示肝细胞变性范围不
超过肝小叶半径的 1/2，以水样变性为主，肝细胞
呈点状或小灶状坏死，未见纤维组织增生，汇管区
炎细胞浸润；“++”表示肝细胞变性范围超过肝小叶
半径的 1/2，以气球样变性为主，较多肝细胞呈碎
片状坏死，伴明显的纤维组织增生，汇管区大量炎
细胞浸润；“+++”表示肝细胞大片变性坏死，范围
超过肝小叶半径的 2/3，并以肝细胞的碎片状和桥
接状坏死为主，肝实质内大量纤维组织增生，向内
伸展包绕肝小叶，可见中央静脉偏位或缺如。
1.7 统计学处理
计量资料用 sx ± 表示，采用 SPSS13.0 软件进
行统计分析，对符合参数检验要求的数据进行单因
素方差分析，通过单因素方差分析组间差异，不符
合参数检验的数据进行非参数 Kruskal-Wallis H 检
验，通过 Nemenyi 法检验组间差异，等级资料进行
非参数 Kruskal-Wallis H 检验，通过 Nemenyi 法检
验组间差异。
2 结果与分析
2.1 生化指标检测结果
由表 1 和 2 结果可见，与模型组比较，软肝化
纤丸 3 g/kg 组大鼠血清 ALT、AST 水平均明显降低
（P＜0.05），同时对肝组织中 Hyp 量的升高也有一
定抑制作用（P＜0.05），与对照药联苯双酯的作用
相当。但各给药组未见对 TBIL、ALB、GLB 和 TP
有明显的影响。对照药联苯双酯滴丸对血清 TBIL
的升高有明显的降低作用（P＜0.05）。
2.2 病理组织学检查结果
由表 3 和 4 结果可见，造模 8 周后，对照组动
表 1 软肝化纤丸对 CCl4致肝纤维化大鼠血清 ALT、AST、TBIL 的影响 ( , sx ± n＝10)
Table 1 Effect of Ruangan Huaxian Pills on ALT, AST, and TBIL in liver fibrosis of rats induced by CCl4 ( , sx ± n = 10)
组 别 剂量/(g·kg−1) ALT/(IU·L−1) AST/(IU·L−1) TBIL/(μmol·L−1)
对照 － 38.50± 2.51 96.10± 3.04 5.60±1.79
模型 － 186.80±68.34## 238.40±64.19## 7.32±2.81
联苯双酯滴丸 0.15 63.70±20.91** 181.63±25.97 4.90±2.11*
软肝化纤丸 1.5 142.33±73.42## 223.00±74.40## 6.86±2.83
3.0 115.70±29.90## 176.60±40.83# 6.64±3.11
与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01
#P<0.05 ##P<0.01 vs normal control group；*P<0.05 **P<0.01 vs model group
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表 2 软肝化纤丸对 CCl4致肝纤维化大鼠血清 ALB、TP、GLB、A/G 及肝脏 Hyp 水平的影响 ( , sx ± n＝10)
Table 2 Effect of Ruangan Huaxian Pills on contents of ALB, TP, GLB, A/G, and Hyp in liver fibrosis of rats induced by CCl4
( , sx ± n = 10)
组 别 剂量/(g·kg−1) ALB/(g·L−1) TP/(g·L−1) GLB/(g·L−1) A/G Hyp/(μg·mg−1)
对照 － 18.30±1.16 69.90±2.33 51.60±1.84 0.35±0.02 0.196±0.02
模型 － 17.40±3.60 63.33±3.23# 45.80±2.90# 0.39±0.11 0.304±0.04#
联苯双酯滴丸 0.15 16.20±1.14 66.50±3.92 50.30±3.34 0.32±0.02 0.269±0.03##*
软肝化纤丸 1.5 15.20±1.23## 63.60±3.92 48.40±3.78 0.31±0.04* 0.310±0.45##
3.0 15.00±1.63## 58.50±11.10## 44.20±8.64# 0.33±0.03 0.269±0.02##*
与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05
#P<0.05 ##P<0.01 vs normal control group；*P<0.05 vs model group
表 3 软肝化纤丸对 CCl4致大鼠肝脏纤维化的影响
Table 3 Effect of Ruangan Huaxian Pills on liver fibrosis of rats induced by CCl4
肝脏纤维化程度分级
组 别 剂量/(g·kg−1) 0 1 2 3 4 P 值
对照 － 10 0 0 0 0 －
模型 － 0 0 5 5 0 ＜0.01##
联苯双酯滴丸 0.15 0 4 5 1 0 ＜0.05#
软肝化纤丸 1.5 0 3 6 1 0 ＜0.01##
3.0 0 3 6 1 0 ＜0.01##
与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01
#P<0.05 ##P<0.01 vs normal group
表 4 软肝化纤丸对 CCl4致大鼠肝细胞病变的影响
Table 4 Effect of Ruangan Huaxian Pills on hepatic cell pathology in liver fibrosis of rats induced by CCl4
肝细胞变性 肝细胞坏死 组 别 剂量/(g·kg−1)
− + ++ +++
P 值
− + ++ +++
P 值
对照 － 10 0 0 0 － 10 0 0 0 －
模型 － 0 0 3 7 ＜0.01## 0 0 4 6 ＜0.01##
联苯双酯滴丸 0.15 0 0 6 4 ＜0.01## 0 1 5 4 ＜0.01##
软肝化纤丸 1.5 0 0 6 4 ＜0.01## 0 0 7 3 ＜0.01##
3.0 0 0 6 4 ＜0.01## 0 0 7 3 ＜0.01##
与对照组比较：##P＜0.01
##P<0.01 vs normal control group
物肝组织结构及肝细胞形态无明显异常。模型组大
部分动物肝小叶正常结构破坏广泛，肝细胞索排列
紊乱，肝细胞肿大，气球样变，汇管区及中央静脉
周围可见肝细胞核固缩及再生的肝细胞，大片肝细
胞坏死，肝细胞变性范围达到肝小叶半径的 1/2～
2/3，局部可见胆小管增生及纤维化，伴多量炎细胞
浸润。半数动物局部肝脏网状纤维融合形成细小或
较粗的胶原纤维条索，将肝细胞完全分隔成大小不
等的肝细胞团，半数动物局部肝脏网状纤维融合形
成细小纤维条索形成不完全性间隔。肝脏纤维化程
度分级均为 2、3 级。
软肝化纤丸组与阳性药组动物肝小叶结构不同
程度被破坏，部分动物肝细胞脂肪变性，肝细胞变
性范围不超过肝小叶半径的 1/2，以水样变性为主，
肝细胞呈小灶状坏死，汇管区可见炎细胞浸润。部
分动物肝细胞变性范围超过肝小叶半径的 1/2，以
气球样变性为主，较多肝细胞呈碎片状坏死，汇管
区炎细胞浸润，可见局部细小纤维增生未形成间隔，
或纤维组织增生形成不完全性间隔，少数动物局部
肝细胞被胶原纤维条索完全分隔成大小不等的肝细
胞团。肝脏纤维化程度分级大部分在 1、2 级，见图 1。
3 讨论
近年来，对于中药及其提取物抗肝纤维化实验
研究很多[13-14]，其参照的生化指标也不尽相同。徐
珊等[15-16]研究表明 Hyp 和肝纤维化程度密切相关，
可作为中医辨证分型、判断病情和指导治疗的客观
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 5 期 2011 年 5 月

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图 1 软肝化纤丸对肝纤维化大鼠肝脏病理形态的影响
Fig. 1 Effect of Ruangan Huaxian Pills on pathological morphology of liver fibrosis in rats
指标之一。本实验将 Hyp 作为肝纤维化指标。
软肝化纤丸是由鳖甲、黄芪、莪术、丹参、银
杏叶及女贞子等 12 味中药组成。方中鳖甲、莪术和
女贞子为君药，滋补肝肾、软坚散结；黄芪、白术
和茯苓益气健脾为臣药；丹参、郁金、赤芍和银杏
叶舒肝利疸、理气通络化瘀为佐；白花蛇舌草和半
枝莲清热解毒为使，共达滋补肝肾、健脾益气、活
血化瘀及软坚散结功效。
本实验结果表明，软肝化纤丸 3 g/kg 剂量组连
续 ig给药8周，对CCl4所致慢性肝纤维化大鼠ALT、
AST 值升高有明显的抑制作用。对肝组织中 Hyp 量
的升高也有明显抑制作用，其作用与阳性对照药联
苯双酯滴丸相当。该药 1.5 g/kg 剂量组与模型组比
较各项指标未见有显著性差异。病理检查结果表明，
软肝化纤丸 1.5、3 g/kg 剂量组部分动物肝细胞变性
范围超过肝小叶半径的 1/2，以气球样变性为主，
较多肝细胞呈碎片状坏死，汇管区炎细胞浸润，可
见局部细小纤维增生未形成间隔，或纤维组织增生
形成不完全性间隔。肝脏纤维化程度降低，与阳性
药联苯双酯的作用效果相近。提示该药 3 g/kg 剂量
对 CCl4 引起的慢性肝纤维化大鼠有很好的保肝降
酶、降低肝纤维化程度的作用。
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对照组 模型组 软肝化纤丸低剂量组
软肝化纤丸高剂量组 联苯双酯组