全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月
·2960·
板蓝根抗病毒有效部位的化学成分及其活性研究
何立巍,董 伟,杨婧妍,李 祥*,李 伟
南京中医药大学,江苏 南京 210046
摘 要:目的 研究板蓝根 Isatidis Radix 抗病毒有效部位的化学成分及单体成分的活性。方法 板蓝根水提物经 D101 大孔
树脂吸附,10%、50%乙醇洗脱的有效部位,经硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱及 Sephadex LH-20 进行分离纯化,并根据理化
常数和波谱数据,鉴定化合物的结构。结果 从板蓝根水提抗病毒有效部位中分离得到 10 个化合物,分别鉴定为丁香苷(1)、
4-(1, 2, 3-三羟基丙基)-2, 6-二甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷(2)、异落叶松脂醇(3)、异落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(4)、
落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(5)、落叶松脂素-4, 4′-二-O-β-D-二葡萄糖苷(6)、2-羟基-1, 4-苯二甲酸(7)、D-甘露醇(8)、
吲哚-3-乙腈-6-O-β-D-葡萄糖苷(9)、3-[2′-(5′-羟甲基) 呋喃基]-1(2H)-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(10)。结论 化合物 2、4、
7、8、10 为首次从菘蓝属植物中分离得到。化合物 10 具有明显的抗 HSV-2 型病毒作用,治疗指数(TI)为 6.07;化合物 1、
5、6 对 HSV 病毒也表现出一定的抑制作用。
关键词:板蓝根;抗病毒;丁香苷;落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷;3-[2′-(5′-羟甲基) 呋喃基]-1(2H)-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷
中图分类号:R284.2 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2013)21 - 2960 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.21.003
Chemical constituents in antiviral fraction of Isatidis Radix and their activities
HE Li-wei, DONG Wei, YANG Jing-yan, LI Xiang, LI Wei
Nanjing University of Chinese Medicine, Nangjing 210046, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents in the antiviral fraction of Isatidis Radix and the activity of the monomer
components. Methods The water extract of Isatidis Radix was adsorbed by macroporous resin, and the antiviral fraction was eluted
with 10% and 50% ethanol, repeatedly separated and purificated by silica gel column chromatography, reverse phase silica gel column
chromatography, and Sephadex LH-20. The chemical structures were identificated using physicochemical constants and spectral data.
Results Ten compounds were isolated from the active fraction of water extract, and they were respectively identified as syringin (1),
4-(1, 2, 3-trihydroxypropyl)-2, 6-dimethoxyphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside (2), isolariciresino (3), isolariciresinol 4-O-β-D-
glucopyranoside (4), lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside (5), lariciresinol-4, 4′-bis-O-β-D-glucopyranoside (6), 2-hydroxy-1,
4-benzenedi carboxylic acid (7), D-mannitol (8), indole-3-acetonitrile6-O-β-D-glucopyranoside (9), and 3-[2′-(5′-hydroxymethyl)
furyl]-1(2H)-isoquinoline-7-O-β-D-glucopyranoside (10). Conclusion Compounds 2, 4, 7, 8, and 10 are isolated from Isatidis Radix
for the first time. Compound 10 has the significant effect of anti-HSV-2 virus. Therapeutic index (TI) is 6.07. Compounds 1, 5, and 6
also show some inhibition to HSV virus.
Key words: Isatidis Radix; antivirus; syringin; lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside; 3-[2′-(5′-hydroxymethyl) furyl]-1(2H)-
isoquinoline-7-O-β-D-glucopyranoside
板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica
Fort. 的干燥根。主产于河北、江苏;河南、安徽、
陕西等地均有栽培。性寒,味苦,归心、胃经。清
热解毒、凉血利咽。用于外感发热、温病初起、咽
喉肿痛、温毒发斑、痄腮、丹毒、痈肿疮毒[1]。临
床上常用于治疗病毒及细菌感染所引起的疾病,对
多种病毒性疾病均有较好的治疗或预防作用[2]。此
前对板蓝根抗病毒活性部位的药理筛选结果表明,
收稿日期:2013-07-15
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81073023);国家教育部博士点基金资助项目(20093237120015);江苏省高校自然基金资助项目
(09KJB360006);江苏高校优势学科建设工程资助项目;南京中医药大学青年自然科学基金(09XZR02)
作者简介:何立巍(1974—),男,黑龙江省哈尔滨人,博士,副教授,从事中药及天然药物化学教学科研工作。
Tel: (025)85811524 E-mail: he_lw@163.com
*通信作者 李 祥,女,教授,博士生导师。Tel: (025)51998182 E-mail: Lixiang_8182@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月
·2961·
板蓝根抗病毒成分集中在水提取液等极性较大部
位。由于水提液化学成分的研究具有一定复杂性,
所以还未见对其进行化学成分研究的报道,这可能
是板蓝根抗病毒化学成分一直没有得到阐明的直接
原因。本课题组前期对板蓝根各化学部位的药理筛
选研究结果表明,水提取物经大孔树脂吸附后,10%、
50%乙醇洗脱部位有显著抗病毒活性,是抗病毒的有
效部位[3]。从这 2 个有效部位中共分离得到 10 个化
合物,分别鉴定为丁香苷(syringin,1)、4-(1, 2, 3-
三羟基丙基 )-2, 6-二甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷
[4-(1, 2, 3-trihydroxypropyl)-2, 6-dimethoxyphenyl-1-
O-β-D-glucopyranoside , 2] 、 异 落 叶 松 脂 醇
(isolariciresino,3)、异落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷
(isolariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside,4)、落叶
松脂素 -4-O-β-D-葡萄糖苷( lariciresinol-4-O-β-D-
glucopyranoside,5)、落叶松脂素-4, 4′-二-O-β-D-二葡
萄糖苷(lariciresinol-4, 4′-bis-O-β-D-glucopyranoside,
6)、2-羟基-1, 4-苯二甲酸(2-hydroxy-1, 4-benzenedi
carboxylic acid,7)、D-甘露醇(D-mannitol,8)、吲
哚-3-乙腈-6-O-β-D-葡萄糖苷(indole-3-acetonitrile-6-
O-β-D-glucopyranoside,9)、3-[2′-(5′-羟甲基) 呋喃
基]-1(2H)-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(3-[2′-(5′-
hydroxymethyl) furyl]-1(2H)-isoquinoline-7-O-β-D-
glucopyranoside,10)。化合物 2、4、7、8、10 为首
次从菘蓝属植物中分离得到,化合物 10 有明显的抗
HSV-2 的作用。
1 仪器与材料
AC—300 核磁共振仪,瑞士 Bruker 公司;X—
4 型显微熔点测定仪,河南豫华仪器有限公司。D101
大孔吸附树脂,天津农药树脂有限公司;柱色谱硅
胶,青岛海洋化工分厂;Sephadex LH-20,上海达
瑞精细化学品有限公司;ODS 反相硅胶,日本 YMC
公司。人类单纯疱疹病毒 I 型(HSV-1)、II 型
(HSV-2);Vero 细胞(非洲绿猴肾细胞),为 HSV
型病毒敏感细胞。RPMI 1640 培养基(Gibco 公司
产品),10%新生小牛血清(中美合资兰州民海生物
工程有限公司,批号 20100629)。阿昔洛韦(ACV,
湖北潜江制药股份有限公司,批号 20110802)。
板蓝根药材产地为江苏连云港,经南京中医药
大学鉴定教研室陈建伟教授鉴定为十字花科植物菘
蓝 Isatis indigotica Fort. 的干燥根。
2 提取与分离
板蓝根干燥饮片 20 kg,分别用 8、6 倍量的
水煎煮 1.5 h,滤过,合并 2 次提取液并浓缩至 40
kg,滤过。搅拌下向提取液中加入 95%乙醇,至
乙醇终体积分数为 70%。静置过夜,抽滤,滤液
回收乙醇,浓缩至 20 kg。上述板蓝根水提取液反
复经 D101 大孔吸附树脂,分别用不同体积分数
乙醇洗脱,得到 10%乙醇洗脱部分 120 g;50%乙
醇洗脱部分 40 g。将 10%、50%乙醇洗脱部位以
甲醇回流提取,所得浸膏经硅胶柱色谱,氯仿-甲
醇(100∶1、50∶1、20:1、10∶1、5∶1、2∶1)
梯度洗脱,TLC 检测合并相同组份,共得到 10
个流分(Fr. 1~10)。Fr. 3 经硅胶柱色谱(氯仿-
甲醇 30∶1、20∶1 洗脱),重结晶纯化,得化合
物 3(10 mg)、9(6 mg);Fr. 4 经硅胶(氯仿-甲
醇 20∶1、10∶1 洗脱),得化合物 1(12 mg)、2
(5 mg)、4(10 mg)、5(20 mg);Fr. 6 经反相硅
胶柱色谱(甲醇-水 90∶10、80∶20 洗脱),得化
合物 7(9 mg)、8(13 mg);Fr. 7 经反相硅胶柱
色谱(甲醇-水 80∶20、70∶30 洗脱),得化合物
6(60 mg),再经 Sephadex LH-20 排阻色谱,得
化合物 10(5 mg)。
3 结构鉴定
化合物1:无色针状晶体(氯仿-甲醇),mp 191~
192 ℃,Molish 反应呈阳性。1H-NMR (300 MHz,
CD3OD) δ: 6.71 (2H, s, H-3, 5), 6.53 (1H, d, J = 15.9
Hz, H-1′), 6.48 (1H, m, H-2′), 3.75 (2H, m, H-3′), 3.75
(6H, s, 2, 6-OCH3), 3.30 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-1″),
3.17~3.41 (5H, m, H-2″~6″);13C-NMR (75 MHz,
CD3OD) δ: 135.9 (C-1), 154.4 (C-2), 105.5 (C-3),
135.3 (C-4), 105.5 (C-5), 154.4 (C-6), 130.1 (C-1′),
131.3 (C-2′), 62.6 (C-3′), 105.4 (C-1″), 75.8 (C-2″),
78.3 (C-3″), 71.4 (C-4″), 77.9 (C-5″), 63.6 (C-6″),
57.1 (2, 6-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[4],
故鉴定化合物 1 为丁香苷。
化合物 2:白色粉末(甲醇),mp 184~185 ℃。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 6.66 (1H, s,
H-3), 6.67 (1H, s, H-5), 4.66 (1H, d, J = 3.7 Hz,
H-1′), 3.09 (1H, m, H-2′), 4.20 (1H, m, H-3′α), 3.83
(1H, m, H-3′β), 3.76 (6H, s, 2, 6-OCH3), 4.87 (1H,
d, J = 6.7 Hz, H-1′), 3.02~3.59 (5H, m, H-2″~6″);
13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 152.8 (C-1),
133.9 (C-2), 104.4 (C-3), 137.3 (C-4), 104.4 (C-5),
133.9 (C-6), 85.3 (C-1′), 53.8 (C-2′), 71.5 (C-3′),
56.6 (2, 6-OCH3), 102.8 (C-1″), 74.3 (C-2″), 76.7
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月
·2962·
(C-3″), 70.1 (C-4″), 77.4 (C-5″), 61.1 (C-6″)。以上
数据与文献报道基本一致[5],故鉴定化合物 2 为
4-(1, 2, 3-三羟基丙基)-2, 6-二甲氧基苯-1-O-β-D-
葡萄糖苷。
化合物 3:白色针晶(氯仿-甲醇),mp 137~
138 ℃,FeCl3 试剂显色阳性。1H-NMR (300 MHz,
CD3OD) δ: 6.57 (1H, s, H-2), 6.18 (1H, s, H-5),
2.75 (1H, m, H-7α), 2.78 (1H, m, H-7β), 1.97 (1H,
m, H-8), 3.38 (1H, m, H-9α), 3.69 (1H, m, H-9β),
6.61 (1H, s, H-2′) 6.67 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5′),
6.59 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6′), 3.73 (1H, d, J = 10.6
Hz, H-7′), 1.75 (1H, m, H-8′), 3.28 (1H, m, H-9′α),
3.40 (1H, m, H-9′β), 3.73 (3H, s, 3-OCH3) 3.71 (3H,
s, 3′-OCH3);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 129.0
(C-1), 112.4 (C-2), 147.2 (C-3), 145.2 (C-4), 117.4
(C-5), 134.1 (C-6), 33.6 (C-7), 40.0 (C-8), 65.9
(C-9), 138.6 (C-1′), 113.8 (C-2′), 149.0 (C-3′), 145.9
(C-4′), 115.9 (C-5′) 123.2 (C-6′), 48.1 (C-7′), 48.1
(C-8′), 63.2 (C-9′), 56.4 (3-OCH3), 56.3 (-3′OCH3)。
以上数据与文献报道一致[6],故鉴定化合物 3 为
异落叶松脂醇。
化合物 4:白色粉末(甲醇),mp 210~212 ℃。
三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示含酚羟基;
KBr
maxIR ν (cm
−1): 3 430, 1 607, 1 516;ESI-MS m/z: 545
[M+Na]+,HR-MS 给出相对分子质量为 545.210 7
[M+Na]+(计算值为 545.199 3),结合核磁共振波
谱,确定分子式为 C26H34O11。1H-NMR (300 MHz,
DMSO-d6) δ: 6.68 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, s, H-5),
2.73 (2H, brs, H-7), 1.85 (1H, m, H-8), 3.57 (1H, m,
H-9α), 3.43 (1H, m H-9β), 6.68 (1H, brs, H-2′), 6.68
(1H, d, J = 7.3 Hz, H-5′), 6.51 (1H, brd, J = 8.2 Hz,
H-6′), 3.80 (1H, d, J = 9.9 Hz, H-7′), 1.70 (1H, m,
H-8′), 3.43 (1H, m, H-9′α), 3.17 (1H, m, H-9′β), 3.71
(3H, s, 3-OCH3), 3.69 (3H, s, 3′-OCH3), 4.55 (1H, d,
J = 7.3 Hz, H-1″), 3.43~3.13 (5H, m, H-2″-6″), 8.74
(1H, s, 4′-OH), 4.44 (1H, t, J = 5.9 Hz, 9-OH), 4.30
(1H, t, J = 5.9 Hz, 9′-OH);13C-NMR (100 MHz,
DMSO-d6) δ: 130.3 (C-1), 112.3 (C-2), 146.9 (C-3),
144.3 (C-4), 116.7 (C-5), 132.8 (C-6), 32.4 (C-7), 38.2
(C-8), 63.7 (C-9), 136.6 (C-1′), 113.4 (C-2′), 147.4
(C-3′), 144.9 (C-4′), 115.4 (C-5′), 121.6 (C-6′), 46.1
(C-7′), 45.5 (C-8′), 59.5 (C-9′), 55.9, 55.8 (3,
3′-OCH3), 100.3 (C-1″), 73.2 (C-2″), 77.1 (C-3″), 68.7
(C-4″), 76.8 (C-5″), 60.1 (C-6″)。以上数据与文献报
道一致[7],故鉴定化合物4为异落叶松脂醇4-O-β-D-
葡萄糖苷。
化合物 5:白色结晶性粉末(甲醇),mp 174~
176 ℃。1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 6.89 (1H,
d, J = 1.5 Hz, H-2), 7.03 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 6.79
(1H, dd, J = 8.6, 1.5 Hz, H-6), 4.72 (1H, d, J = 6.5 Hz,
H-7), 2.20 (1H, m, H-8), 3.47 (1H, d, J = 8.0 Hz,
H-9α), 3.65 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-9β), 6.79 (1H, d, J =
1.5 Hz, H-2′), 7.03 (1H, dd, J = 8.6, 1.5 Hz, H-5′),
6.58 (1H, dd, J = 6.5 Hz, H-6′), 2.45 (1H, d, J = 11.0
Hz, H-α), 2.82 (1H, dd, J = 11.0, 3.8 Hz, H-7′ β), 2.57
(1H, m, H-8′), 3.57 (1H, t, J = 7.0 Hz, H-9′α), 3.89
(1H, t, J = 7.0 Hz, H-9′β), 3.71 (6H, s, 3, 3′-OCH3),
4.87 (1H, d, J = 5.0 Hz, H-1″), 3.44~3.16 (5H, m,
H-2″~6″), 8.71 (1H, s, 4-OH);13C-NMR (100 MHz,
DMSO-d6) δ: 137.9 (C-1), 131.8 (C-1′), 110.2 (C-2),
113.2 (C-2′), 149.0 (C-3), 147.6 (C-3′), 145.7 (C-4),
144.7 (C-4′), 115.2 (C-5), 115.6 (C-5′), 118.0 (C-6),
120.8 (C-6′), 81.8 (C-7), 32.3 (C-7′), 52.7 (C-8), 42.2
(C-8′), 58.8 (C-9), 72.1 (C-9′), 55.8, 55.7 (2×
CH3OH), 100.3 (C-1″), 73.4 (C-2″), 77.2 (C-3″),
69.9 (C-4″), 77.2 (C-5″), 60.9 (C-6″)。以上数据与
文献报道一致[8-9],故鉴定化合物 5 为落叶松树脂
醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物 6:白色粉末(甲醇),mp 136~138 ℃,
FeCl3 反应阴性,提示不含酚羟基。酸水解后薄层检
识 Rf 值与葡萄糖标准品一致,证明含有葡萄糖。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 6.88 (1H, d, J = 1.5
Hz, H-2), 7.02 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 6.77 (1H, dd,
J = 8.6, 1.5 Hz, H-5), 4.72 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-7),
2.20 (1H, m, H-8), 3.47 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-9α),
3.65 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-9β), 6.82 (1H, d, J = 1.5
Hz, H-2′), 6.97 (1H, dd, J = 8.6, 1.5 Hz, H-5′), 6.68
(1H, dd, J = 6.5, 1.9 Hz, H-6′), 2.46 (1H, d, J = 11.0
Hz, H-α), 2.84 (1H, dd, J = 11.0, 3.8 Hz, H-7′ β), 2.61
(1H, m, H-8′), 3.56 (1H, t, J = 7.0 Hz, H-9′α), 3.90
(1H, t, J = 7.0 Hz, H-9′β), 3.74 (6H, s, 3, 3′-OCH3),
4.84 (1H, d, J = 5.0 Hz, H-1″), 4.86 (1H, d, J = 5.5
Hz, H-1′′′), 3.44~3.16 (10H, m, H-2″~6″, 2′′′~6′′′);
13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 137.8 (C-1), 134.8
(C-1′), 110.2 (C-2), 113.2 (C-2′), 149.0 (C-3, 3′), 145.7
(C-4), 145.0 (C-4′), 115.2 (C-5), 115.5 (C-5′), 118.0
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月
·2963·
(C-6), 120.5 (C-6′), 81.8 (C-7), 32.4 (C-7′), 52.7
(C-8), 42.0 (C-8′), 58.8 (C-9), 72.1 (C-9′), 55.8
(2×CH3OH), 100.4 (C-1″), 100.3 (C-1′′′), 73.4 (C-2″,
2′′′), 77.1 (C-3″, 3′′′), 69.9 (C-4″, 4′′′), 77.2 (C-5″, 5′′′),
60.9 (C-6″, 6′′′)。以上数据与文献报道一致[9],故鉴
定化合物 6 为落叶松脂素-4, 4′-二-O-β-D-吡喃葡萄
糖苷。
化合物 7:白色粉末(甲醇),mp 320~322 ℃。
1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 8.54 (1H, d, J = 2.1
Hz, H-3), 8.10 (1H, dd, J = 8.6, 2.1 Hz, H-5), 6.98
(1H, d, J = 2.1 Hz, H-6);13C-NMR (100 MHz,
CD3OD) δ: 173.0 (C-8), 168.9 (C-7), 166.9 (C-2),
137.6 (C-4), 134.1 (C-1), 122.8 (C-3), 118.4 (C-5),
113.9 (C-6)。以上数据与文献报道一致[10],故鉴定
化合物 7 为 2-羟基-1, 4 苯二甲酸。
化合物 8:白色粉末(甲醇),mp 168~169 ℃。
13C-NMR (100 MHz, D2O) δ: 73.3, 71.8, 65.8。
1H-NMR (D2O) δ: 3.68~3.87 (8H, m)。以上数据与
文献报道一致[11],TLC 检识,在异丙醇-醋酸乙酯-
水溶剂系统中与甘露醇对照品 Rf 值相同,故鉴定化
合物 8 为 D-甘露醇。
化合物 9:棕黄色针状晶体(氯仿-甲醇),mp
240~242 ℃,Molish 反应呈阳性。1H-NMR (300
MHz, CD3OD) δ: 7.12 (1H, s, H-2), 7.02 (1H, d, J =
6.6 Hz, H-4), 6.76 (1H, dd, J = 2.1, 6.6 Hz, H-5), 7.03
(1H, d, J = 2.1 Hz, H-7), 4.17 (2H, s, 3-CH2), 5.06
(1H, d, J = 7.5 Hz, H-1′), 3.9~3.3 (5H, m, H-2′-6′);
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 123.9 (C-2), 121.4
(C-3), 123.6 (C-4), 104.9 (C-5), 153.1 (C-6), 107.4
(C-7), 140.0 (C-8), 105.3 (C-9), 102.5 (C-1′), 75.2
(C-2′), 78.2 (C-3′), 71.3 (C-4′), 78.3 (C-5′), 62.6
(C-6′), 118.4 (-C≡N), 16.1 (-CH2)。以上数据与文献
报道一致[12],故鉴定化合物 9 为吲哚-3-乙腈-6-O-β-
D-葡萄糖苷。
化合物 10:橙红色片状结晶(甲醇),mp 232~
233 ℃。碘化铋钾反应阳性,提示为含氮化合物。
三氯化铁-铁氰化钾反应阴性,提示不含酚羟基。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 10.41 (1H, s,
H-2), 7.26 (1H, s, H-4), 6.74 (1H, d, J = 8.5 Hz,
H-5), 6.96 (1H, dd, J = 8.4, 2.1 Hz, H-6), 8.07 (1H,
d, J = 2.1 Hz, H-8), 7.21 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-3′),
6.62 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-4′), 4.63 (2H, d, J = 5.6
Hz, H-6′), 5.51 (1H, t, J = 5.8 Hz, 6′-OH), 4.88 (1H,
d, J = 7.7 Hz, H-1″), 3.21 (1H, m, H-2″), 3.26 (1H,
m, H-3″), 3.15 (1H, m, H-4″), 3.26 (1H, m, H-5″),
3.62 (1H, m, H-6″), 3.44 (1H, m, H-6″);13C-NMR
(100 MHz, DMSO-d6) δ: 168.5 (C-1), 121.0 (C-3),
119.2 (C-4), 109.2 (C-5), 118.6 (C-6), 151.7 (C-7),
113.6 (C-8), 121.1 (C-9), 137.2 (C-10), 149.6
(C-2′), 121.1 (C-3′), 110.3 (C-4′), 160.0 (C-5′), 56.0
(C-6′), 101.2 (C-1″), 73.1 (C-2″), 76.1 (C-3″), 68.9
(C-4″), 77.0 (C-5″), 60.4 (C-6″)。以上数据与文献
报道一致[13],故鉴定化合物 10 为 3-[2′-(5′-羟甲基)
呋喃基]-1(2H)-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。
4 抗病毒活性
4.1 药物对细胞的毒性作用
精密称取待检样品(化合物 1~10)适量,直
接用新鲜培养基充分溶解,滤过除菌,4 ℃保存。
取长成单层细胞的 96 孔细胞培养板,弃去上清液,
将含不同浓度药物的细胞培养液 0.2 mL 加入细胞,
每个浓度 4 个复孔,37 ℃、5% CO2培养 72 h,每
孔加入 20 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液,继续培养 4 h,
倾去上清液,加入 0.2 mL DMSO,570~630 nm 双
波长法测吸光度(A)值,计算细胞存活率及半数
毒性浓度(TC50)。经测定可知(表 1),化合物 1~
10 TC50 值分别为 1.750、>1.000、>1.000、0.755、
0.273、0.797、0.948、>1.000、0.320、0.662 mg/mL。
4.2 抗病毒实验
以最大无毒浓度为起始浓度,倍比稀释几个浓
度,进行抗病毒实验。设空白细胞对照、病毒感染
对照、阿昔洛韦(ACV)阳性对照和受试药物组,
共 4 个组。取长成单层的细胞,弃去上清液,加入
20 μL 100 TCID50 病毒液,吸附 1 h,用 PBS 液洗
去未吸附的病毒,加入含不同质量浓度药物的细胞
培养液 0.2 mL,每个浓度 4 个复孔,37 ℃ 5% CO2
培养 72 h,每孔加入 20 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液,
继续培养 4 h,倾去上清液,加入 0.2 mL DMSO,
570 nm(630 nm 作为参考波长)双波长法测 A 值,
计算病毒抑制率及半数有效浓度(IC50),并计算治
疗指数(TI),结果见表 1。
实验结果表明,化合物 10 具有明显的抗 HSV-2
型病毒作用,药物浓度为 0.125 mg/mL 时病毒抑制率
为 57.31%,IC50为 0.109 mg/mL,TI 为 6.07,据文献
报道[14],阳性对照阿昔洛韦的 TI 为 12.04。另外,化
合物 1、5、6 的活性虽未达到半数有效,但从病毒抑
制率指标观察,对 HSV 病毒表现出一定的抑制作用。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月
·2964·
表 1 板蓝根中化合物 1~10 对 HSV 病毒的抑制作用
Table 1 Inhibition of compounds 1―10 form Isatidis Radix to HSV virus
不同稀释倍数药物对病毒的抑制率 / % 化合物 病毒 起始质量浓度 /
(mg·mL−1) 1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32
TC50 /
(mg·mL−1)
IC50 /
(mg·mL−1)
TI
HSV-1 29.56 31.73 8.10 4.99 2.10 4.23 — — 1
HSV-2
1.0
— — 6.40 — 8.66 2.54
1.750
— —
HSV-1 4.96 15.94 11.95 2.13 — — — — 2
HSV-2
1.0
— 2.81 3.56 — — 2.94
>1.000
— —
HSV-1 — — — 5.59 8.08 1.74 — — 3
HSV-2
1.0
— — — — — —
>1.000
— —
HSV-1 21.74 13.13 — 9.88 27.57 10.27 — — 4
HSV-2
0.5
14.17 3.29 26.96 19.19 15.80 19.01
0.755
— —
HSV-1 24.44 — — — — — — — 5
HSV-2
0.163
39.26 19.66 42.55 43.62 42.24 33.97
0.273
— —
HSV-1 12.74 34.19 30.21 23.23 7.71 23.44 — — 6
HSV-2
0.5
39.51 25.90 22.37 20.18 27.46 17.53
0.797
— —
HSV-1 12.77 11.73 5.27 3.85 0.82 — — — 7
HSV-2
0.5
— — — 1.66 — 3.68
0.948
— —
HSV-1 — 2.66 — — — — — — 8
HSV-2
0.5
5.51 — — — — 3.91
>1.000
— —
HSV-1 14.30 22.37 16.23 9.37 — — — — 9
HSV-2
0.5
3.04 — — — — —
0.320
— —
HSV-1 — 31.11 15.34 — 3.26 27.50 — — 10
HSV-2
0.5
— 37.35 57.31 40.14 40.92 48.94
0.662
0.109 6.07
HSV-1 55.14 ACV
HSV-2
0.2
63.96
参考文献
[1] 林子君, 刘晓秋, 韩 娜, 等. 板蓝根的化学成分研究
[J]. 现代药物与临床, 2011, 26(5): 381-383.
[2] 李寒冰, 鄢 丹, 武彦舒, 等. 基于抗病毒活性检测的
板蓝根质量生物评价方法及优化研究 [J]. 中草药 ,
2011, 42(8): 1560-1565
[3] 何立巍, 李 祥, 陈建伟. 板蓝根抗病毒有效部位的筛
选 [J]. 中国药房, 2008, 19(33): 2565-2566.
[4] 吴立军, 沈 燕, 郑 健, 等. 丁香苷的核磁共振研究
[J]. 波谱学杂志, 1999, 15(5): 465-467.
[5] 李 彬, 陈万生, 赵 阳, 等. 四倍体板蓝根中的苯丙
素类成分 [J]. 中草药, 2005, 36(3): 326-328.
[6] Fumiko A, Tatsuo Y. Lignan glycosides from Parsonsia
laevigata [J]. Phytochemistry, 1989, 28(6): 1737-1741.
[7] Jiang Z H, Tanaka T, Sakamoto M , et al. Studies on a
Medicinal Parasitic Plant: Lignans from the Stems of
Cynomorium songaricum [J]. Chem Pharm Bull, 2001,
49(8): 1036-1038.
[8] 刘海利, 吴立军, 吴 斌. 板蓝根木脂素苷A的平面结
构研究 [J]. 波谱学杂志, 2002, 19(3): 315.
[9] 张永文, 俞敏倩, 陈玉武, 等. 板蓝根中的木脂素双葡
萄糖苷 [J]. 中国中药杂志, 2005, 30(5): 395-397.
[10] 李 彬, 陈万生, 杨根金, 等. 四倍体板蓝根中的有机酸
类成分 [J]. 第二军医大学学报, 2000, 21(3): 207-208.
[11] Sadtler Research Laboratories Inc. Sadtler Standard
Infrared Grating Spectra [M]. Vol: 21-22. USA,
Philadelphia: Sadter Research Laboratories Inc. 1971.
[12] Li B, Chen W S, Zheng S Q, et al. Two new alkaloids
isolated from tetraploidy Banlangen [J]. Acta Pharm Sin,
2000, 35(7): 508-510.
[13] 何立巍, 李 祥, 陈建伟. 板蓝根水提取物中的化学成
分 [J]. 药学学报, 2006, 41(12): 1193-1196.
[14] 黄 勇. 更昔洛韦与阿昔洛韦体外抗水痘-带状疱疹病
毒活性的研究 [D]. 天津: 天津医科大学, 2005.