全 文 ：正交试验优选十全大补膏的提取工艺研究
杨 勇,吴 敏, 王 初¹
(杭州市中医院, 浙江 杭州 310007)
摘 要:目的 优化十全大补膏的最佳提取工艺。方法 以芍药苷以及浸膏干质量为指标, 采用正交试验法, 加权
评分, 优选提取工艺。结果 处方药材的最佳提取工艺为加 8 倍量水, 提取 3 次 , 11 5 h/次。结论 此提取工艺合
理可行, 为生产十全大补膏提供参考。
关键词:十全大补膏;提取工艺;正交试验;高效液相色谱
中图分类号: R2841 2; R2861 02 文献标识码: B 文章编号: 0253- 2670(2010) 01- 0071- 02
十全大补膏是由党参、白术(炒)、茯苓、炙甘草、
当归、川芎、白芍(酒炒)、熟地黄、炙黄芪、肉桂 10味
药组成的,具有温补气血的功效,临床上用于气血不
足,饮食减少, 久病体虚, 脚膝无力, 面色萎黄,精神
倦怠,以及疮疡不敛,妇女崩漏等[ 1]。本处方中芍药
苷为其主要活性成分之一,因此本实验根据中药材
的成分性质和现代研究结果, 以芍药苷和浸膏干质
量为指标,采用正交试验法优选提取工艺, 为本制剂
的规范化加工提供技术参数。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪; KQ2100型超声波
清洗器( 100 W, 50 Hz;昆山市超声仪器有限公司)。
十全大补膏的处方药材均由浙江中医药大学中
药饮片厂提供, 芍药苷(批号: 1107362200731)购自
中国药品生物制品检验所,乙腈为色谱纯(Merck) ,
水为娃哈哈纯净水,其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
21 1 芍药苷测定方法的建立
21 11 1 色谱条件[ 2] : Agilent Eclipse XDB2C18色谱柱
( 250 mm @41 6 mm, 5 Lm) ;流动相:水2乙腈 ( 85 B
15) ;体积流量: 11 0 mL/ min;进样量: 10 LL;检测波
长: 230 nm;检测器: DAD;柱温: 30 e 。在该色谱条
件下,芍药苷与其他峰达基线分离,色谱图见图 1。
21 11 2 对照品溶液的制备:精密称取 11 76 mg 芍
药苷对照品, 置 25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释
至刻度,备用。
21 11 3 线性关系考察:精密吸取芍药苷对照品溶液
1、2、4、6、8 LL 注入高效液相色谱仪,按上述色谱条
件测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标
进行线性回归,得回归方程 Y= 1261 01 X+ 151 181,
* 2芍药苷
* 2peoniflorin
图 1 样品( A)和芍药苷对照品( B)的 HPLC色谱图
Fig1 1 HPLC Chroma tograms of sample ( A)
and peonif lor in r efer ence substance ( B)
r= 01 999 6。结果表明, 芍药苷在 01 070 4~ 01 704
Lg呈良好的线性关系。
21 11 4 供试品溶液的制备:取干浸膏01 2 g, 精密称
定,置 100 mL 具塞锥形瓶中, 精密加入稀乙醇 25
mL,密塞,称定质量, 超声提取 1 h, 放冷, 用稀乙醇
补足减少的质量, 摇匀, 15 000 r/ min离心 10 min,
取上清液,即得。
21 11 5 测定:照5中国药典6 2005年版十全大补丸
项下方法测定, 分别精密吸取对照品溶液与供试品
溶液各 10 LL, 注入液相色谱仪,测定,计算。
21 2 因素与水平的确定:根据试验结果, 选取影响
提取效果的因素和水平, 见表 1。
21 3 正交试验设计:根据处方中药物的性质及现代
表 1 因素水平
Table 1 Factor s and levels
水平 因 素
A 加水量/倍 B煎煮时间/ h C煎煮次数/次
1 6 1 1
2 8 11 5 2
3 10 2 3
#71#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 1 期 2010年 1月
¹ 收稿日期: 2009203219
作者简介:杨 勇( 1963 ) ) ,男,浙江诸暨人,教授,主任医师,硕士生导师,杭州市中医院院长,兼任浙江省医师协会理事,杭州市中医药协会副理事长,毕业于浙江大学医学院,主要从事中西医结合外科研究。T el : ( 0571) 85827880 E2mail: wchu640@163. com
研究结果,以芍药苷以及浸膏干质量为指标,采用正
交试验法优选十全大补膏提取工艺。按处方党参
4 g、白术(炒) 4 g、茯苓 4 g、炙甘草 2 g、当归 6 g、川
芎 2 g、白芍(酒炒) 4 g、熟地黄 6 g、炙黄芪 4 g、肉桂
1 g(共 37 g)称取各药材, 按 L9( 34)正交试验条件分
别提取,滤过,初步浓缩,转移到干燥至恒重的蒸发
皿中,水浴蒸干至稠浸膏,真空干燥, 得到浸膏, 储存
在干燥器中备用。
21 4 浸膏得率的测定:取处方中药材, 浸泡 10 h,
按照正交试验设计进行回流提取, 滤过, 浓缩得浸
膏。各浸膏样品于 80 e 下真空干燥约 48 h后, 称
定质量。结果见表 2。
21 5 正交试验结果:以综合得分= (浸膏干质量/最
大浸膏干质量) @100@40%+ (芍药苷的量/最大芍
药苷的量) @100@60%为指标, 进行正交试验优化
相关的参数,见表 2、3。
表 2 正交试验结果
Table 2 Results of or thogonal test
试验号 A B C D(空白项) 浸膏干质量/ g 芍药苷/ mg 综合得分
1 1 1 1 1 91935 2 431 72 57165
2 1 2 2 2 161368 7 691 61 92199
3 1 3 3 3 171722 8 681 50 95103
4 2 1 2 3 151869 5 591 52 83160
5 2 2 3 1 171826 5 711 54 97176
6 2 3 1 2 131520 0 481 48 69140
7 3 1 3 2 181277 6 701 40 97181
8 3 2 1 3 131912 7 551 69 76118
9 3 3 2 1 161752 4 731 07 96199
Ñ 2451 67 2391 06 2031 23 2521 07
Ò 2501 76 2661 93 2731 25 2601 20
Ó 2701 65 2611 09 2921 60 2541 81
R 241 98 271 87 871 37 81 13
表 3 方差分析
Table 3 Var iance analysis
方差来源 离均差平方和 自由度 F 值 显著性
A 1161 169 0 2 101 185
B 1441 018 2 2 121 625
C 1 4261 371 1 2 1251 05 P< 01 05
D(误差项) 111 406 3 2
F0105 ( 2, 2) = 191 00
由极差可以看出, 在该正交试验设定的因素、水
平条件下,对综合评分影响大小的因素进行分析,依
次为 C> B> A。以 D因素为误差项, C因素对十全
大补膏的提取工艺有显著影响。考虑到便于实际操
作的需要,加 8 倍量和 10 倍量水对结果无显著差
异,故最佳炮制工艺技术条件为 A2B2C3 ,即加 8倍
量水,提取 3次, 11 5 h/次。
21 6 验证试验:称取处方药材, 按上述结果分析中
的各条件下提取, 测定供试品溶液中芍药苷的质量
浓度, 同时测定浸膏干质量, 结果浸膏干质量为
181 06g, 芍药苷的量为721 17g,总评分为981 48%。
结果表明,验证样品中各指标与正交试验优选结果
相近,说明优选的工艺条件稳定可行。
3 讨论
白芍是十全大补膏中的君药之一, 其主要成分
为芍药苷。鉴于5中国药典62005年版以芍药苷作
为十全大补丸的质控指标, 故本实验以芍药苷为指
标,同时结合浸膏干质量对十全大补膏的提取工艺
进行了研究。
众所周知, 膏方是重要的调补养生方法之一。
然而目前还没有相对规范的制作工艺。因此, 本实
验以十全大补膏为例研究其提取的规范及最佳工
艺。目前对该处方的研究主要集中在有效成分和药
效学方面, 对其提取工艺研究较少。本实验优选了
十全大补膏的提取工艺, 为十全大补膏的最佳生产
工艺提供了参考。
参考文献:
[ 1] 中国药典 [ S]1 一部120051
[ 2] 葛志伟,贺 庆,林云径,等1 RP2HPLC 法测定杭白芍及其饮
片中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷[ J]1 中草药, 2008,
39( 12) : 37823801
#72# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 1 期 2010年 1月