全 文 ：不同产地牛蒡种质与药材质量的相关性评价研究
许 亮,窦德强,康廷国* ,吕 智, 康 凯,刘杨楠
(辽宁中医药大学药学院, 辽宁 大连 116600)
摘 要:目的 研究不同产地的牛蒡种质与牛蒡子药材质量的相关性。方法 采用 H PLC 法测定药材中牛蒡苷与
苷元的量,色谱柱为 Ag ilent TCC18 ( 250 mm 4. 6 mm, 5 m) ; 流动相: 甲醇水 (线性梯度洗脱: 0 min, 水 55% ;
10 m in, 水 46% ; 20 min, 水 30% ) ; 体积流量: 1 0 mL / min; 检测波长: 280 nm。在培养箱中进行牛蒡种子发芽实
验,测定发芽势、发芽率等。并采用 SPSS 13 0 进行相关性分析。结果 牛蒡子的千粒质量、发芽势、发芽率与药
材中牛蒡苷量成极显著正相关,与牛蒡苷元的量成极显著负相关。结论 不同产地牛蒡种质与药材的质量具有显
著相关性,为牛蒡子药材的质量评价提供参考。
关键词:牛蒡子; 牛蒡苷; 牛蒡苷元; H PLC; 种质
中图分类号: R282 6 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 04065603
牛蒡 A rctium lappa L. 为菊科药用植物,其干
燥成熟果实为牛蒡子,是一味临床常用中药, 具有疏
散风热、宣肺透疹, 解毒利咽的功效,用于治疗风热
感冒、咳嗽痰多、麻疹、风疹、咽喉肿痛等 [ 1]。牛蒡子
苷和苷元为主要活性成分, 其药理研究表明具有抗
炎及免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等作用[ 2]。本课题组
采集了全国多个产地的牛蒡种质资源及生药
材[ 3, 4] , 并对 34 个产地的样品进行了千粒质量、粒
数百分比、质量百分比、发芽势、发芽率等评价指标
的测定。目前, 对于不同产地牛蒡子中牛蒡苷及苷
元的定量分析有少量报道[ 5, 6]。本实验采用 HPLC
法测定了相应来源牛蒡子药材中牛蒡苷和苷元的
量,并经 SPSS 13 0 进行相关性统计分析, 各指标
之间有显著的相关关系。
1 实验材料
不同产地牛蒡均为自采, 经康廷国教授和王冰
教授鉴定,保存于辽宁中医药大学药学院药用植物
教研室,见表 1。
2 实验方法
2 1 千粒质量:千粒质量是评价种子质量的一个重
要指标, 随机选取 1 000 粒种子称质量, 重复两次,
求平均质量,见表 1。
2 2 粒数百分比: 随机选取 100 粒牛蒡的种子测
定饱满粒数占总粒数的百分比,重复 2次,计算平均
值,结果见表 1。
2 3 质量百分比: 随机选取 100 粒牛蒡的种子测
定饱满种子质量占总质量的百分数,重复 2次,计算
平均值,结果见表 1。
2 4 发芽势与发芽率:选取不同产地的牛蒡种子放
在经水浸湿的铺有双层滤纸的培养皿中, 用纱布覆
盖,置于培养箱中在 25 ! 下培养,每天用已经准备
好的清水早晚换水。每次培养种子 100 粒, 重复 2
次,计算平均发芽势与发芽率, 结果见表 1。发芽势
是规定第 9天的测定值, 发芽率是不再有发芽种子
出现时进行测定, 大约 15 d 左右。
发芽势 = 规定天数内发芽种子的粒数/供试种子
数 100%
发芽率= 发芽的种子数/供试种子数 100%
3 牛蒡苷和苷元的测定
3 1 仪器与试药: Agilent 1100 高效液相色谱仪;
四元泵;在线脱气机; 柱温箱; 牛蒡苷对照品 (批号
110819200505) 购于中国生物制品鉴定所、牛蒡苷
元对照品为实验室自制, 经过结构鉴定, 纯度符合
要求。
3 2 方法与结果
3 2 1 色谱条件: 色谱柱为 Ag ilent T CC18 ( 250
mm 4. 6 mm, 5 m) ; 流动相:甲醇水 (线性梯度
洗脱: 0 min, 水 55% ; 10 min, 水 46% ; 20 m in, 水
30%) ; 体积流量: 1 0 mL/ m in; 检测波长: 280 nm;
柱温: 25 ! 。理论塔板数不低于 3 000。色谱图见
图 1。
3 2 2 对照品溶液的制备与纯度检查:精密称定干
燥至恒重的牛蒡苷和苷元对照品, 加甲醇溶解并定
∀656∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
收稿日期: 20090720 基金项目:科技部资助项目 ( 2005DKA21004) ; 国家# 十一五∃攻关课题 ( 2006BAIO09B026)作者简介:许 亮( 1978 % ) ,男,辽宁沈阳人,讲师,博士研究生在读,主要从事中药生药的教学与科研工作,主要研究方向:中药资源研究与新药开发。T el: ( 0411) 87586004 Email: xul@ ln utcm. edu. cn
* 通讯作者 康廷国 T el: ( 0411) 87856028 Email: kangtg@lnutcm. edu. cn
1牛蒡苷 2牛蒡苷元
1arct iin 2arct igenin
图 1 牛蒡苷与牛蒡苷元对照品( A)和牛蒡子样品( B)
HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of arctiin, arctigenin reference
substances ( A) , and Fructus Arctii ( B)
容至刻度, 分别配成 1 149 mg / mL 的牛蒡苷对照
品溶液和 0 519 mg / mL 的牛蒡苷元对照品溶液。
经峰面积归一化法测定牛蒡苷的质量分数为
99 68% 和牛蒡苷元为 99 01%。
323 供试品溶液的制备:将供试品干燥并粉碎,过
60目筛,取粉末 05 g,精密称定,置 50 mL 量瓶中,
加甲醇 45 mL, 在超声波发生器内提取 20 min ( 150
W, 20 kHz) ,取出放冷,加甲醇至刻度,摇匀。经微孔
滤膜 ( 0 45 m) 滤过,即得。
3 2 4 线性关系的考察:精密称定干燥至恒重的牛
蒡苷加甲醇溶解并定容, 配成 1 149 mg/ mL 的牛
蒡苷对照品溶液。精密吸取 4、6、8、10、12、14 L
分别注入液相色谱仪,测定牛蒡苷的色谱峰面积, 以
进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得牛蒡苷回归
方程为 Y= 540 83 X- 937 02, r= 0 999 9,表明牛
蒡苷在 4 596~ 16 086 g 线性关系良好。
精密称定干燥至恒重的牛蒡苷元加甲醇溶解并
定容,配成 0 051 9 mg / mL 的牛蒡苷元对照品溶
液。精密吸取 2、4、6、8、10、12 L 分别注入液相色
谱仪,测定牛蒡苷元的色谱峰面积,以进样量为横坐
标,以峰面积为纵坐标, 得回归方程为 Y= 38 257
X- 24 926, r = 0 999 8。牛蒡苷元在 0 103 8 ~
0 622 8 g 线性关系良好。
3 2 5 精密度试验:在上述色谱条件下对同一供试
品溶液连续进样 6次, 记录牛蒡苷和牛蒡苷元的峰
面积,牛蒡苷峰面积 RSD= 2 17% ( n= 6) ; 牛蒡苷
元峰面积 RSD= 1 82% ( n= 6) ,精密度良好。
3 2 6 稳定性试验: 在室温条件下, 精密吸取同一
供试品溶液,按样品测定方法在 0、2、4、6、8 h 时间
间隔内分别测定牛蒡苷和苷元的峰面积, 牛蒡苷
RSD= 1 72% ( n= 5 ) , 牛蒡苷元 RSD = 1 70%
( n= 5)。结果表明,牛蒡苷和苷元在 8 h 内基本稳
定,符合有关规定。
3 2 7 重现性试验:按样品测定方法对同一供试样
品进行 5 次平行试验, 牛蒡苷质量分数的 RSD=
1 37% ( n = 5) ; 牛蒡苷元质量分数的 RSD =
1 19% ( n = 5)。结果表明, 重现性试验符合有
关规定。
3 2 8 加样回收率试验: 精称 6份已知牛蒡苷和苷
元量的供试样品 025 g。分别加入等量的牛蒡苷和
牛蒡苷元对照品。按样品测定项下方法处理,计算回
收率, 结果牛蒡苷和苷元的平均回收率分别为
97 86% 和 98 33%, RSD 分别为 1 58% 和 1 74%。
3 2 9 样品的测定:按照供试品溶液的制备方法分
别对不同产地的牛蒡子进行制备, 分别取 10 L 进
样。测定牛蒡苷和苷元的色谱峰面积, 计算牛蒡子
药材中牛蒡苷和牛蒡苷元的量, RSD 小于 3%, 结
果见表 1。
表 1 千粒质量、粒数百分比、质量百分比、发芽势、发芽率
及牛蒡子药材中牛蒡苷和苷元的量 (n= 2)
Table 1 Weight of 1 000 grains, grains percentage, weight
percentage, germination tendency, germination
percentage, and arctiin and arctigenin
contents in Fructus Arctii ( n= 2)
采集地点 千粒质
量/ g
粒数百
分比/ %
质量百
分比/ %
发芽
势/ %
发芽
率/ %
牛蒡
苷/ %
牛蒡苷
元/ %
黑龙江 佳木斯 9 59 0 76 0 82 60 33 77 33 6 99 0 13
富锦市 8 53 0 54 0 72 66 33 84 00 5 75 0 26
五常县 10 19 0 61 0 74 73 33 84 67 6 82 0 18
牡丹江 9 80 0 81 0 87 91 00 92 00 6 82 0 14
吉林 四平 9 97 0 71 0 81 82 67 88 67 7 00 0 32
梅河口 10 99 0 29 0 88 93 67 94 33 9 22 0 14
通化 10 38 0 48 0 56 60 33 76 00 7 05 0 51
抚松 8 47 0 23 0 33 80 00 89 00 6 30 0 38
桦甸 10 03 0 46 0 49 92 67 95 00 7 60 0 21
胶河 9 92 0 29 0 36 82 33 86 67 5 62 0 35
延吉 6 97 0 15 0 26 82 00 83 67 5 23 0 64
辽宁 本溪县 9 87 0 62 0 69 84 33 92 00 7 63 0 17
宽甸 7 17 0 34 0 41 66 00 80 00 5 56 0 30
岫岩 10 51 0 27 0 31 80 00 84 33 8 83 0 14
铁岭 8 45 0 65 0 79 93 67 95 67 6 56 0 22
清源 10 62 0 63 0 76 84 67 89 67 6 73 0 25
北宁 8 88 0 65 0 79 82 33 83 33 6 31 0 27
浙江 建德 9 83 0 74 0 81 68 00 72 67 7 26 0 29
江苏 徐州丰县 10 98 0 71 0 74 85 00 86 00 6 16 0 28
山东 临沂苍山 9 77 0 61 0 69 76 33 82 00 5 47 0 99
陕西 宝鸡太白 9 34 0 67 0 77 62 33 75 00 6 90 0 37
安康宁陕 7 97 0 55 0 78 88 67 88 67 6 21 0 55
甘肃 定西渭源 9 74 0 79 0 90 98 67 99 00 7 59 0 08
天水 5 80 0 16 0 29 22 67 30 00 2 54 0 64
定西岷县 5 59 0 22 0 45 85 67 88 33 3 61 0 14
陇南宕昌 8 23 0 52 0 58 88 33 88 67 5 01 0 17
河北 承德兴隆县 6 83 0 04 0 10 81 00 83 00 5 09 0 52
河南 禹州 7 36 0 25 0 33 21 67 29 00 4 69 1 02
滦川 7 30 0 37 0 45 76 00 84 33 6 02 0 38
湖北 恩施 7 63 0 54 0 62 92 33 93 00 7 70 0 27
神农架 8 27 0 33 0 35 64 67 71 00 6 51 0 55
巴东 7 08 0 69 0 83 73 33 76 33 6 91 0 44
四川 雅安 6 40 0 24 0 27 61 00 75 67 4 71 0 26
松潘 12 80 0 87 0 94 93 00 94 67 6 85 0 15
平均值 8 86 0 49 0 60 76 30 82 17 6 33 0 34
∀657∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
4 SPSS 13 0 相关分析
将以上数据输入 SPSS 13 0 进行相关分析, 得
到 Pear son Co rrelat ion 值见表 2。体现牛蒡种质质
量的指标中千粒质量、粒数百分比、质量百分比、发
芽势与发芽率与体现牛蒡子药材质量的指标牛蒡苷
量、牛蒡苷元量有显著或极显著的相关性,成正相关
或负相关。
表 2 各指标间的相关系数 P值
Table 2 Correlation coefficient P value
during various statistical targets
指标名称
千粒
质量
粒数百
分比
质量百
分比
发芽势 发芽率 牛蒡苷
牛蒡
苷元
千粒质量 1 602* * 592* * 396* 428* 696* * - 350* *
粒数百分比 602* * 1 907* * 335 362* 455* * - 367*
质量百分比 592* * 907* * 1 398* 407* 519* * - 405*
发芽势 396* 335 398* 1 958* * 511* * - 578* *
发芽率 428* 362* 407* 958* * 1 547* * - 647* *
牛蒡苷 696* * 455* * 519* * 511* * 547* * 1 - 461* *
牛蒡苷元 - 350* - 367* - 450* * - 578* * - 647* * - 461* * 1
* 显著相关
* Correlat ion is signif icant at 0. 05 level ( 2t ailed)
* * 极显著相关
* * Correlat ion is very signif icant at 0. 01 level ( 2 tailed)
5 结论与讨论
测定了 34 个不同采集地的 7 个指标, 千粒质
量平均值为 8 86 g ,牛蒡苷量平均值为 6 33% , 其
中体现种质质量的指标千粒质量、粒数百分比、质量
百分比、发芽势、发芽率与牛蒡子药材的评价指标牛
蒡苷的量成正相关。千粒质量、粒数百分比和质量
百分比 3者之间成极显著正相关, 这 3 者指标越高
说明牛蒡种子越成熟饱满、粒大,牛蒡苷是牛蒡子药
材的检测评价指标, &中国药典∋2005年版规定不低
于 5% ,这 3者指标越高牛蒡苷量越高,说明了牛蒡
子药材的质量、成熟饱满的种子所占的数量比、质量
比越高牛蒡苷的量也越高。这与传统牛蒡子药材质
量评价以粒大、饱满者为佳相一致。发芽势和发芽
率是评价种质质量、种子成熟饱满度、生长力的指
标,与牛蒡苷量成极显著正相关。牛蒡子药材中的
牛蒡苷量和苷元量成极显著负相关, 说明药材中牛
蒡苷的量越高牛蒡苷元的量越低, 这也为牛蒡子药
材的质量评价提供参考。
参考文献:
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[ J] 中草药, 2004, 35( 4) : 406407
HPLC法测定市售胡黄连中胡黄连苷(和胡黄连苷)
周 菲1 ,倪 健2
( 1 中国医药研究开发中心有限公司, 北京 102206; 2 北京中医药大学, 北京 100029)
摘 要:目的 建立胡黄连药材中胡黄连苷(和胡黄连苷 )的 HPLC 定量测定方法。方法 采用 Dikma Diamon
sil C18柱 ( 250 mm 4. 6 mm, 5m) , 乙腈水冰醋酸 ( 20∗ 80∗ 0 5) 为流动相, 体积流量: 1 0 mL/ min,检测波长:
275 nm, 柱温: 25 ! 。结果 胡黄连苷 ( 对照品在 0 09~ 1 88 g 进样量与峰面积间呈良好的线性关系, r =
0 999 8, 平均加样回收率为 99 2% , RSD 为 1 50% ( n= 6) ; 胡黄连苷)对照品在 0 16~ 3 2 g 进样量与峰面积
间呈良好的线性关系, r= 0 999 9,平均加样回收率为 98 9% , RSD 为 1 81% ( n= 6)。结论 该方法操作简便, 结
果准确,重现性好, 可用于胡黄连药材的定量测定。
关键词:胡黄连; 胡黄连苷( ; 胡黄连苷) ; 高效液相色谱
中图分类号: R282 6 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 04065803
胡黄连味苦, 性寒。归肝、胃、大肠经。有清湿
热,除骨蒸, 消疳热之功效, 用于治疗湿热泻痢, 黄
疸,痔疾,骨蒸潮热,小儿疳热。现代药理表明, 胡黄
连具有保肝利胆, 拮抗平滑肌痉挛等作用[ 1]。目前
∀658∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
收稿日期: 20090722 基金项目:北京市科技计划项目 (课题编号: D07080201330705,项目编号: D0206001000091)作者简介:周 菲( 1981 % ) ,女,江苏徐州人,工程师,从事中药新药研究开发工作。T el: ( 010) 80717086 Email: nipzf@ 126. com