全 文 ：黄芪甲苷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡的
保护作用及机制研究
关凤英,李 红,杨世杰*
(吉林大学白求恩医学院 药理教研室, 吉林 长春 130021)
摘 要:目的 研究黄芪甲苷 ( astrag alo side , As ) 对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法 制备大鼠心
肌缺血再灌注损伤模型,研究 As 对血清中乳酸脱氢酶 ( LDH )、丙二醛 ( M DA ) 和超氧化物歧化酶 ( SOD) 的
影响, TU NEL 法检测心肌细胞凋亡率,同时电镜观察心肌超微结构变化, Western blotting 法检测心肌细胞胞浆内
细胞色素 C ( Cyt C) 蛋白表达。结果 与模型组比较, A s 可降低 LDH 漏出量 ( P < 0 05) , 并可明显降低
MDA 的量 (P< 0 05) ,增强 SOD 活力 (P < 0 05) , T UNEL 检测显示 As 可降低缺血区周围心肌细胞的凋亡
百分率;超微结构观察显示, 与模型组比较, A s 组的肌丝、线粒体和细胞核等细胞器形态有明显的改善; Western
blotting 法检测结果显示, As 组的 Cyt C 释放量低于模型组 ( P< 0 05)。线粒体 AT P 敏感钾通道 ( mito K ATP
C) 抑制剂 5羟癸酸钠 ( 5HD) 减弱了 As 的保护作用。结论 As 可以减少心肌缺血再灌注造成的心肌细
胞凋亡,机制与其激活 mitoK AT PC,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关。
关键词:黄芪甲苷; 心肌缺血再灌注; 凋亡; 线粒体 ATP 敏感钾通道 ( mito KAPT C)
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07114605
心肌缺血再灌注损伤 ( myocardial ischemia
reperfusion injury, M IRI) 是指心肌经受较长时间
缺血后得到血液灌注,此时并不能减轻缺血损伤, 而
是加重了损伤, 甚至将可逆性损伤转为不可逆性损
伤, MIRI 过程中, 细胞凋亡有着重要的病理意
义[ 1, 2]。一旦心肌细胞受损启动细胞凋亡程序, 可
导致心肌细胞数目减少和心功能的降低, 加重 MI
RI。1986年 Murry 等首次报道犬心肌短时反复缺
血可缩小随后长时间缺血造成的心肌梗死范围, 即
心肌缺血预适应 ( myocar dial ischemia precondi
t ioning , M IP)。M IP 的保护作用使机体产生了某
些活性物质,增强了细胞或组织器官对不良刺激的
耐受性和适应性, 对抗缺血再灌注引起的损伤。
MIP 是近年来发现的一种能产生强大而肯定的心
脏自我保护作用的措施, 许多临床工作者尝试将
MIP 应用于临床。但其毕竟是一种损伤,且由于缺
血时最佳时间、安全时限等问题使其临床应用受到
限制。因此,近年来提出了药物预适应的概念,即通
过药物激发或模拟内源性保护物质而出现的心肌保
护作用,因其是保护细胞的行之有效的措施, 药物预
处理对缺血再灌注损伤心肌的保护成为目前的研究
热点之一[ 3] 。黄芪为重要的益气中药, 在中医方剂
中使用广泛,主要含有多糖、皂苷类等成分, 黄芪多
糖、黄芪甲苷等为其主要有效成分, 药理作用广
泛[ 4~ 7] 。本实验旨在以细胞凋亡的线粒体途径为切
入点,探讨黄芪中活性成分黄芪甲苷 ( ast ragaloside
, As ) 预处理对 M IRI 造成的细胞凋亡的影响
及其可能存在的机制。
1 材料
1 1 动物: Wistar 雄性大鼠,清洁级, 体质量 200~
250 g ,由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。
1 2 药物: 黄芪甲苷 ( As ) 由吉林省中药研究
所提供,质量分数大于 95%。尼可地尔由长春大政
国际经贸集团制药有限公司提供。5羟癸酸钠 ( 5
hydroxydecanoate, 5HD) 购于 Sigma 公司。
1 3 试剂: 乳酸脱氢酶 ( LDH )、超氧化物歧化酶
( SOD)、丙二醛 ( MDA) 测定试剂盒由南京建成生
物工程研究所提供; TU NEL 试剂盒购于北京中杉
金桥生物技术有限公司; 兔抗大鼠细胞色素 C
( Cy tC) 多克隆抗体购于美国 Santa Cruz 公司; 羊
抗兔二抗抗体购于北京博奥森生物技术有限公司。
1 4 仪器: GF 200半自动生化测定仪 (山东高密
彩虹仪器有限公司) ; 6010 紫外分光光度计 (安捷
伦上海分析仪器厂生产) ; GIS 2008 天能凝胶成像
分析仪 (上海天能科技有限公司) ; 立式电泳仪、半
干式转膜电泳仪、TS 1 脱色摇床 (江苏海门市麒
!1146! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 20090921 基金项目:吉林省中医药管理局项目 ( 08SYS074)作者简介:关凤英( 1975 ) ,女(满族) ,辽宁省盖州市人,讲师,医学博士,主要从事心血管药理学研究。
T el: ( 0431) 85619799 Email: f engying_guan@ yahoo. com. cn
* 通讯作者 杨世杰 T el: ( 0431) 85619483 Email: jcyaol i@ sina. com
麟医用仪器厂) ; JEM 1200EX 电子显微镜, CK 80
超速低温离心机 (美国 Beckman 公司)。
2 方法
2 1 模型制备[ 8] :将 Wistar 大鼠用乌拉坦 ( 1 g/
kg ) 麻醉后,立即仰位固定于手术台上, 将心电图机
针型电极插入大鼠四肢皮下,记录正常 ∀导联心电
图。调节小动物呼吸机,潮气量 7 mL/ 100 g, 吸呼
比 2#1, 呼吸频率 70 次,然后沿胸骨左缘 3~ 4 肋
间开胸,连接小动物呼吸机, 再次记录 ∀导联心电
图。暴露心脏, 结扎左冠状动脉前降支 ( LAD,距左
心耳下降 2 mm 水平处) , 结扎后心脏回位, 记录 ∀
导联心电图,并于结扎 30 min 时松开结扎线, 记录
再灌后∀导联心电图。模型复制成功的标准: 结扎
后∀导联心电图以 ST 段明显抬高表现为心肌缺血
成功复制, 放松结扎线后,抬高的 ST 段下降 1/ 2 以
上为再灌注成功复制。符合该标准者入选实验。
2 2 实验分组和给药: 大鼠随机分为假手术组, 模
型组, As ( 2 5、5 mg/ kg ) 组, As ( 5 mg/
kg ) + 5HD ( 5 mg/ kg ) 组, 阳性药尼可地尔 ( 10
mg/ kg ) 组,每组 6只。假手术组: 冠状动脉下穿线
不结扎,开胸前 10 m in 给予生理盐水 0 2 mL/ 100
g;模型组:开胸前 10 m in 给予生理盐水 0 2 mL/
100 g,结扎 LAD;给药组:开胸前 10 m in 给予相应
治疗药物; 5HD 组: 开胸前 15 min 相应给予 5
HD。给药途径均为 ip。
2 3 酶学测定: 再灌 2 h 结束后, 腹主动脉取血
8~ 10 mL, 置于塑料试管中,在 4 ∃ 下, 3 000 r/ min
离心 10 min 分离血清备用。采用半自动生化测定仪
测定血清 LDH 水平;采用 6010 紫外分光光度计,分
别在 550 nm 和 532 nm 波长下测定吸光度值,以测
定 SOD和 MDA 水平 (按试剂盒说明书操作)。
2 4 心肌细胞凋亡检测: TU NEL 染色按试剂盒方
法检测凋亡细胞的 DNA 碎片。各组实验结束后,
取心尖部位心肌常规脱水固定, 石蜡包埋, 切片, 从
各组取 5张石蜡切片,二甲苯脱蜡, 乙醇梯度脱水,
PBS ( pH 7. 2) 冲洗 (每次 5 min,共 3次,下同) ; 蛋
白酶 K ( 20 g/ mL) 37 ∃ 消化 30 min, PBS 冲洗;
3% H 2O 2室温下处理 5 min 以阻断内源性过氧化
物酶活性, PBS 冲洗, 以含 0 1% Tr itonX 100 的
0 1% 枸橼酸溶液以去除细胞膜表面污物 (冰上 4
min) , PBS 冲洗;加 50 L T UNEL 反应混合液, 包
括脱氧核苷酸转移酶液, 37 ∃ 孵育 60 min, PBS 冲
洗,加 POD 液 37 ∃ 孵育 30 m in, PBS 冲洗, DAB
显色。在 400 % 显微镜下, 于缺血区边缘随机采集
5 个非重叠视野, 检测 100 个心肌细胞中 TU NEL
阳性细胞数, 取其平均值。凋亡阳性率以单位面积
内凋亡细胞数占细胞总数百分比表示。
2 5 电镜观察: 取 1 5 mm3的大鼠新鲜心尖部分
组织,用 2 5% 戊二醛固定 1. 5 h, 1% 锇酸固定 60
m in,经 30%、70%、80%、90%、100% 丙酮逐级脱
水,逐步渗透, 以包埋剂环氧树脂 812 包埋聚合,超
薄切片, 醋酸双氧铀柠檬酸铅双重染色后,在电子
显微镜下进行心肌细胞超微结构观察。
2 6 Western blot t ing 检测心肌细胞胞浆内 CytC
蛋白表达:配制组织裂解缓冲液[ 0 1 mol/ L Tr is !
Cl ( pH 7. 4) , EDT A 1 mmol/ L , 1% 的 Triton
X100, 0. 3 mo l/ L Aprot inin, 1 mmol/ L PM SF]。
分别将液氮内冻存的各组心肌组织取出 120~ 150
mg,在液氮内研磨成粉末后倒入一塑料管中, 加入
1 mL 溶液悬浮,冰上匀浆 3次, 每次 10 s, 超声处理
3 次。10 000 % g 离心 10 m in。取 1 mL 上清, 并用
超高速离心机以 48 000 % g, 4 ∃ 离心 20 min, 上清
即为胞质蛋白。蛋白定量后进行 SDSPAGE 电泳
并转膜。蛋白转膜结束后,以 5% 脱脂奶粉 PBS 配
制液封闭后,膜置于含兔抗大鼠 CytC 抗体溶液中,
室温摇床反应 2 h, TBS [ 154 mmol/ L NaCl, 10
mmol/ L Tris ( pH 9. 5) , 0. 05% 聚山梨酯20]洗
膜,并将膜置于二抗溶液中室温摇床反应 2 h, 用
ECL 试剂盒显色, X胶片显影。用 NIH Image 软
件对 X线胶片上阳性条带实施扫描, 测定吸光度
值,检测胞浆部分 CytC 量。
2 7 数据处理: 数据经单因素方差分析统计学检
测,结果均以 x & s 表示。
3 结果
3 1 对血清 LDH、SOD 及 MDA 水平的影响: 模
型组的 LDH 水平显著高于假手术组 ( P< 0 001) ,
表明心肌缺血再灌注模型成立。As 组血清
LDH 水平低于模型组,差异显著 ( P< 0 05) , 5HD
减弱了 As 的保护作用, 血清 LDH 值高于 As
组 ( P < 0 05) , 结果见表 1。模型组大鼠血清
SOD水平显著低于假手术组 ( P< 0 01) ,而模型组
MDA 的量显著高于假手术组 ( P< 0 01) , 说明心
肌缺血再灌注损伤导致组织的抗氧化能力显著降
低。As 组血清 SOD水平显著高于模型组,差异
显著 ( P< 0 01) ; As 组血清 MDA 水平显著低
于模型组,差异显著 ( P< 0 01) , 说明 As 可提
高机体的抗氧化能力,而 5HD+ As 组 SOD 活
性及 MDA 水平与 As 组比较差异显著 ( P<
!1147!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
0 05) ,说明 5HD 对抗了 As 的抗氧化能力, 结
果见表 1。
3 2 对心肌细胞凋亡的影响: TU NEL 染色结果表
明凋亡阳性细胞呈深棕色, 细胞核萎缩, 染色质边
聚,胞浆不着色。假手术组存在少量凋亡细胞,模型
组可见大量凋亡细胞, 与假手术组比较差异显著
( P< 0 001) ; As 组凋亡细胞百分率低于模型组,
差异显著 ( P< 0 05)。5HD+ As 组凋亡细胞
百分率高于 As 组, 差异显著 ( P< 0 05) ,见图 1
和表 1。
表 1 As 对心肌缺血再灌注大鼠血清 LDH、SOD 和 MDA 水平及心肌细胞凋亡的影响 ( x& s, n= 6)
Table 1 Effects of As on levels of LDH, SOD, and MDA in serum and cardiomyocyte apoptosis
of myocardial ischemicreperfusion rats ( x& s, n= 6)
组别 剂量/ ( m g ! kg- 1) LDH / ( U ! L- 1 ) SOD/ ( U ! mL- 1) MDA/ ( mol! L- 1 ) 凋亡细胞/ %
假手术 - 460 8 & 79 3 378 4 & 22 3 4 0 & 0 6 2 2 & 0 2
模型 - 1 285 8 & 298 9* * * 234 9 & 17 5* * 6 9 & 0 7* * 19 8 & 2 4* * *
As 5 0 930 7 & 131 5 ∋ 346 7 & 21 0∋ ∋ 4 9 & 0 6 ∋ ∋ 12 7 & 2 0 ∋
5HD+ As 5 0+ 5 0 1 222 5 & 109 3 ( 246 4 & 17 1( 6 1 & 0 8 ( 18 9 & 2 0 (
尼可地尔 10 0 977 9 & 132 1 ∋ 294 2 & 16 7∋ 5 0 & 0 9 ∋ 13 5 & 1 7 ∋
与假手术组比较: * * P < 0 01 * * * P < 0 001; 与模型组比较: ∋ P< 0 05 ∋ ∋P < 0 01; 与 As 组比较: ( P < 0 05
* * P< 0 01 * * * P< 0 001 v s Sham gr ou p; ∋P < 0 05 ∋ ∋P < 0 01 v s model group; ( P < 0 05 v s As group
图 1 As 对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响 (TUNEL染色)
Fig. 1 Effects of As on cardiomyocyte apoptosis of myocardial ischemicreperfusion rats ( TUNEL stain)
3 3 电镜观察:模型组肌丝排列疏松、紊乱, 局部肌
丝呈断裂溶解状,肌丝明暗带模糊不清; 有些线粒体
排列紊乱, 有空化,线粒体膜局部破损,嵴不清晰, 还
有一些较特征地表现为线粒体增生,个别核呈固缩
状,染色质凝聚,核周围细胞质空化,表明心肌损伤
时主要表现在线粒体和肌丝的形态结构的改变。电
镜下可见假手术组心肌细胞肌丝排列整齐, 肌节明
暗带清晰, 线粒体沿肌丝长轴排列整齐, 核膜清晰完
整,染色质较均匀分布。镜下可见 As 组的心肌
细胞肌丝排列整齐、肌节明暗带清晰可见,线粒体排
列整齐,局部线粒体空化,形成髓样小体, 亦有许多
线粒体呈凝聚状, 嵴致密,闰盘结构较正常, 核仁清
晰,核膜完整。5HD+ As 组心肌超微结构损伤
介于 As 组及模型组之间。见图 2。
3 4 心肌细胞线粒体 CytC 释放情况: 正常心肌细
胞 CytC 主要位于线粒体, 胞浆中的量极少。心肌
缺血再灌注后可见胞浆中 CytC 显著增多 ( P <
0 01)。As 组可明显抑制 Cy tC 的胞浆释放量
( P< 0 01)。As + 5HD 组 Cy tC 表达量高于
As 组 ( P< 0 05)。结果见图 3。
4 讨论
M IRI 过程中细胞凋亡有着重要的病理意义,
细胞凋亡机制与心肌短暂缺血后再灌注损伤密切相
关。姚震等[ 9] 研究表明, 不同时间的心肌缺血再灌
注损伤均可导致心肌细胞凋亡,以缺血 30~ 60 min
后再灌注时明显,说明心肌细胞凋亡的发生率与此
图 2 As 对心肌缺血再灌注大鼠心肌超微结构的影响
Fig. 2 Effects of As on ultrastructure changes of cardiomyocyte of myocardial ischemiareperfusion rats
!1148! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
与假手术组比较: * P < 0 05; 与模型组比较: ∋P< 0 05
与 As 组比较: ( P< 0 05
* P < 0 05 v s cont rol group; ∋ P< 0 05 v s model group
( P < 0 05 v s As group
图 3 As 对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞线粒体
释放 CytC的影响
Fig. 3 Effects of As on release of CytC from
cardiomyocyte mitochondria of myocardial
ischemiareperfusion rats
前心肌缺血时间长短有关。再灌注损伤引起的细胞
凋亡多分布于短暂缺血后血管再通的相关部位和梗
死灶的收缩带区域。
本研究观察到,与假手术组比较, 模型组 LDH
的漏出量增加; 细胞凋亡率增高;超微结构结果显示
细胞核固缩、线粒体膜等细胞器受损。而预先给予
As 可明显减轻 LDH 的漏出量; 细胞凋亡率显
著降低;超微结构观察显示, As 组的亚细胞形态
有明显的改善, 其作用与阳性药尼可地尔相似 (尼
可地尔为公认的具有药理预适应作用的药物) ,说明
As 对实验大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡
具有明显的保护作用。
心肌缺血再灌注损伤时细胞内氧自由基增多,
钙超载,细胞内产生的活性氧可通过多途径导致细
胞凋亡,线粒体内钙超载和胞浆内大量的自由基使
线粒体的 PTP 呈高通透性持久开放状态,使线粒体
内钙释放, 线粒体肿胀破坏,膜电位完全、永久消失,
对线粒体结构和功能造成不可逆性损伤。线粒体膜
势能改变进而引起线粒体释放 Cy tC、凋亡诱导因子
( apoptosis inducing facto r, AIF) 等凋亡因子,释入
胞浆引起一系列级联反应, 从而诱发心肌细胞凋
亡[ 10]。在细胞凋亡过程中 Cy tC 释放进入胞质, 参
与哺乳动物细胞凋亡信号转导过程,是线粒体释放
最重要的促凋亡因子之一。研究表明,在凋亡初期,
CtyC 可从线粒体内膜释放,从而启动线粒体的凋亡
机制[ 11] 。
本研究观察到 As 明显降低 MDA 的量, 增
强 SOD 活力,提示 A s 可清除氧自由基,对抗脂
质过氧化反应,从而减轻损伤。另外 Western blot
t ing 结果显示 M IRI 导致 CytC 释放量增加, As
保护组 Cyt C 释放量低于模型组,说明 As 可稳
定线粒体膜, 降低其通透性进而维持跨膜电位的稳
定,维持线粒体膜的屏障功能, 保护线粒体, 降低
CytC 的释放量,从而阻止缺氧心肌细胞经线粒体途
径凋亡。
以往研究发现哺乳动物心肌有两种不同的
AT P 敏感钾通道 ( KATPC) :一种通常位于细胞膜上
( sarc KATP C ) ; 另一种分布于线粒体内膜 ( m ito
chondr ial KAT P C, mito KATP C)。最近研究提示,
m ito KATPC 可能在缺血预适应 ( IP ) 中发挥更重要
的作用[ 12] 。Murata[ 13]认为 mito KATP C 激活,膜电
位去极化,可以促进线粒体内钙离子的释放,减轻线
粒体钙超载从而促进缺血心肌功能恢复。Wakiya
ma 等 [ 14]的研究证实 mito KATPC 开放减少, 可减少
CytC 的释放、抑制 caspase3活性、保护线粒体膜电
位而抑制心肌细胞凋亡。实验结果显示, mito KATPC
抑制剂 5HD减弱了 As 对心肌损伤的保护作用,
说明 mito KATPC 的激活可能是 As 保护心肌细胞
的机制之一。
目前对预适应保护作用机制研究的焦点集中在
寻找其作用的最终效应器,以促进其早日应用于临
床。一些研究表明, m ito KATPC 可能是介导 IPC 的
最终效应器[ 15] 。本实验结果表明, As 可直接或者
间接激活 mito KATP C, 保护线粒体功能, 并且降低
CytC 的胞浆释放量,阻断线粒体凋亡途径,而产生药
理预适应作用。其具体分子机制有待进一步研究。
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裙带菜多糖诱导人食管癌细胞 TE13 凋亡的实验研究
商晓辉*
(河北工程大学医学院, 河北 邯郸 056002)
摘 要:目的 探讨裙带菜多糖诱导人食管癌细胞 T E13 凋亡的作用及其机制。方法 采用 MTT 法分析裙带菜
多糖 ( 25、50、100 g/ mL ) 分别作用 24、48、72 h 后对 TE13 细胞增殖的抑制作用; 用透射电镜观察 25、50、100
g / mL 裙带菜多糖分别作用 48 h 后细胞的凋亡结构变化;用流式细胞术分析 TE13 细胞的凋亡率和检测 Sur
v ivin 蛋白的表达水平。结果 不同质量浓度的裙带菜多糖均可明显抑制食管癌 T E13 细胞的增殖 ( P< 0 05) ,
其抑制作用呈质量浓度依赖性,作用 24 h 后的 IC50为 44 8g / mL。不同质量浓度裙带菜多糖作用 48 h 后,均可
诱导 TE13 细胞凋亡, 100 g/ mL 裙带菜多糖可诱导 T E13 细胞凋亡率达 70 51% , 导致 TE13 细胞发生凋亡特
征性超微结构改变,并使 T E13 细胞 Surviv in 蛋白表达水平明显降低 ( P< 0 01)。结论 裙带菜多糖可抑制 TE
13 细胞增殖,诱导细胞凋亡, 该作用与下调细胞 Survivin 蛋白表达有关。
关键词:裙带菜多糖; 食管癌; 细胞凋亡; Sur viv in 蛋白
中图分类号: R286 91 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07115004
裙带菜 Undaria p innati f ida ( Harv. ) Sur. 为
多年生大型褐藻,属于昆布纲,与海带同属于藻类植
物。裙带菜成分主要包括多糖类化合物 [ 1]、挥发油、
类脂、固醇类、亚麻酸和花生四烯酸等不饱和脂肪
酸。裙带菜多糖可用于防治缺碘性甲状腺肿、动脉
硬化、高脂血症、高血压等。近年来关于海藻多糖的
抗癌研究报道很多 [ 2~ 4] , 但关于裙带菜多糖诱导食
管癌细胞凋亡研究很少。本实验探讨裙带菜多糖抗
食管癌的机制, 为研发抗肿瘤新药提供实验依据。
1 材料与方法
1 1 裙带菜多糖的提取和纯化:采用传统的水提
乙醇沉淀法。取裙带菜洗净, 捣碎后, 甲醛浸泡固
色,用 30 倍的 pH 8. 0 的蒸馏水加热提取 5 h, 滤
过,浓缩, 浓缩液加入 3倍量的乙醇, 静置过夜, 离
心,收集沉淀物, 再进行一次加水溶解, 80% 乙醇沉
淀,离心,收集沉淀物进行透析, 透析保存液再加入
无水乙醇沉淀得裙带菜多糖。裙带菜多糖粗品含较
多的水溶性蛋白, 60 ∃ 蒸馏水溶解,用 2% 三氯乙
酸 ( T CA) 使水溶性蛋白变性, 静置过夜, 6 000 r/
m in 离心 30 min, 收集上清液, 以 75% 乙醇沉析,
离心收集沉淀。最后进行透析脱盐, 用蒸馏水对多
糖粗品进行溶解, 使用相对分子质量为 12 000 透析
袋,每袋 5 mL, 蒸馏水搅拌透析过夜, 24 h 换一次
蒸馏水,收集透析液,蒸发浓缩, 减压干燥, 得到多糖
晶体(收率 0 4% )。取裙带菜多糖晶体样品 200 g ,
混合溶于 2 L 蒸馏水中, 用 0. 45 m 微孔滤膜滤
过,滤液用 RPM I 1640 培养基稀释 (终体积分数小
于 0 1%)。
!1150! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 20091127 基金项目:邯郸市科技厅资助项目 ( 08231080622)作者简介:商晓辉( 1976 ) ,女,山东省聊城人,硕士,讲师,研究方向是肿瘤免疫学、抗肿瘤中药研究。Email: geer345@ sina. com