全 文 ：同的展开系统进行了考察。以氯仿2醋酸乙酯2甲酸
(5 ∶4 ∶1)为展开剂进行实验 ,样品无法展开 ;以正
丁醇2冰醋酸2水 (4 ∶1 ∶5) 展开时 ,展开速度慢 ,分
离效果差 ,脱尾较严重。以本实验所采用的展开系
统进行鉴别和测定质量分数 ,效果较好。
结果表明 ,运用安玛西亚的 A KTA Explorer 100
制备色谱系统分离猫豆胍对照品 ,具有自动化程度
高 ,收集全面等优点 ,而且样品质量分数高。该法可
作为猫豆胍对照品的分离制备方法。
参考文献 :
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驴胶补血颗粒的壳聚糖纯化工艺研究
谢 　安 ,周文龙 ,杨顺龙 ,廖志雄
①
(九芝堂股份有限公司 ,湖南 长沙 　410008)
摘 　要 :目的 　对驴胶补血颗粒提取液的纯化工艺进行研究。方法 　采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄清法纯化提取
药液 ,并以干膏得率、多糖量为考察指标对絮凝澄清工艺参数进行优选。结果 　以絮凝前药液浓缩至密度为 1106
(60 ℃测定) ,絮凝时药液温度为 45～85 ℃,加入 5 %的壳聚糖溶液进行絮凝为最佳工艺。结论 　采用此方法能有
效去除提取药液中的鞣质等亲水性杂质 ,同时具有生产周期短、工艺简单、成本低廉及环保等特点。
关键词 :驴胶补血颗粒 ;壳聚糖 ;絮凝澄清 ;纯化
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 06 - 0906 - 03
　　驴胶补血颗粒由黄芪、党参、熟地、白术、当归、
阿胶 6 味中药组成 ,具有滋阴补血 ,健脾益气 ,调经
活血的功能 ,主要用于久病体虚 ,气虚血亏型月经不
调等妇女疾患。本品提取工艺中采用传统的水提醇
沉法 ,经醇沉回收乙醇的药液往往黏性较大 ,较难浓
缩、干燥 ,制粒亦困难且易吸潮霉变 ,且醇沉处理生
产周期长 ,成本高。采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄
清法优于醇沉法 ,提取液经处理后有效成分损失少 ,
易于浓缩、干燥 ,其干膏不易吸湿 ,且工艺简单、成本
低廉[1～6 ] 。本实验采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄清
法纯化提取药液 ,并以固形物保留率、多糖为考察指
标对絮凝澄清工艺参数进行优选。
1 　仪器与材料
TU —1901 双光束紫外可见分光光度计 (北京
普析通用) 。药材均为道地药材 ,由九芝堂商南植物
药有限公司提供 ,由九芝堂股份有限公司质量中心
检测合格 ;壳聚糖 (南通兴城生物制品厂) ,D2无水葡
萄糖对照品 (批号 :1108332200302) 由中国药品生物
制品检定所提供 ,甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其他
试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　驴胶补血颗粒提取药液的制备 :按处方比例称
取药材 ,加水煎煮 3 次 ,第 1 次 115h ,第 2、3 次各 1
h ,合并煎液 ,滤过 ,滤液浓缩 ,即得。
212 　固形物保留率的测定 :取絮凝前后的样品溶液
各 2510 mL ,分别置于干燥至恒重的蒸发皿中 ,水浴
蒸干 ,于 105 ℃干燥至恒重 ,称定质量 ,计算絮凝前
后固形物保留率。
213 　干膏得率的测定 :精密吸取 10 mL 絮凝后的
浸膏 ,置已干燥至恒重的蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,于
105 ℃干燥 3 h ,取出 ,立即置干燥器中冷却 015 h ,
称定质量 ,计算干膏得率。
214 　多糖的测定
21411 　对照品溶液的制备 :取 105 ℃下干燥至恒重
的 D2无水葡萄糖约 5116 mg ,精密测定 ,置 50 mL
量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
21412 　供试品溶液的制备 :分别精密吸取絮凝液
10 mL ,加 5 倍量无水乙醇至含醇量达 83133 % ,离
·609· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月
①收稿日期 :2009210218　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :谢　安 (1966 —) 女 湖南长沙人 硕士 高级工程师 从事新药研究与开发多年 Tel : (0731) 84499775
心 (5 000 r/ min) 15 min ,取沉淀低温干燥 ,加水溶
解 ,滤过 ,滤液置 100 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度。
精密吸取 5mL 溶液置 100 mL 量瓶中 ,加水稀释至
刻度 ,即得。
21413 　标准曲线的制备 :分别精密吸取 D2无水葡
萄糖对照品溶液 210、410、610、810、1010、1210 mL
于 50 mL 量瓶中 ,加水稀释至刻度。各取 110 mL
于 25 mL 具塞刻度试管中 ,分别加入 5 %苯酚溶液
110mL ,摇匀 ,加入 510mL 浓硫酸 ,立即摇匀。沸水
浴加热 15min ,冰水浴冷却 ,放至室温 ,以蒸馏水同法
做成空白参比。照分光光度法 (《中国药典》2005 年版
一部附录ⅤB) ,在 490 nm 处测定吸光度 ( A) 。以 A
值为纵坐标 ,质量浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。
21414 　测定法 :分别精密吸取各供试品溶液 110
mL 于 25 mL 具塞试管中 ,依标准曲线制备项下方
法 ,自“加 5 %苯酚溶液 110mL”起 ,依法测定 A 值 ,
从标准曲线上读出供试品溶液中多糖的质量浓度 ,
计算 ,即得。
21415 　多糖保留率的规定 :多糖保留率 = 絮凝后多
糖质量/ 絮凝前多糖质量 ×100 %
215 　单因素试验考察
21511 　絮凝前浸膏密度的考察 :浸膏的密度是影响
絮凝澄清工艺的重要因素 ,故对絮凝前浸膏的密度
进行考察。取浓缩后的浸膏适量 ,分别稀释至密度
为 1101、1104、1107 (60 ℃测) ,调节 p H 值为 414。
分别精密量取药液 200 mL ,水浴加热 ,用 40 %
NaO H 调 p H 值为 610。加入 20 mL 壳聚糖溶液 ,
边加边搅拌 ,加完后继续搅拌 10 min。药液自然冷
却 ,静置 2 h ,待絮凝液澄清 ,用 120 目滤布双层滤
过 ,得絮凝液。观察滤过情况 ,测定絮凝前后固形物
比值、多糖保留率 ,结果见表 1。以滤过情况、絮凝
前后固形物保留率、多糖保留率为考察指标 ,当浸膏
密度大于 1107 时 ,絮凝液十分黏稠 ,滤过相当困难 ,
提示絮凝前浸膏密度不能大于 1107。当浸膏密度
为 1101 ,絮凝效果较好 ,但在大生产中浸膏密度太
低 ,影响生产能力及效果 ,故浸膏密度应选择在
1101～1106。
表 1 　絮凝前浸膏密度考察结果
Table 1 　Results of extract density before flocculation
clarif ication
浸膏密度 滤过情况 固形物保留率/ % 多糖保留率/ %
11 01 容易滤过 9915 8211
11 04 容易滤过 9613 7813
11 07 不易滤过 8219 7010
21512 　壳聚糖加入量的考察 :壳聚糖的加入量直接
影响到絮凝澄清工艺的纯化结果 ,因此对壳聚糖的
加入量进行考察。取浓缩后的浸膏适量 ,调节密度
为 1105 (60 ℃测) ,用 40 % NaO H 调节 p H 值为
610。取浸膏 100 mL ,共 6 份 ,水浴加热至 60 ℃,分
别加入 0 (为原液) 、5、10、15、20、25 mL 壳聚糖溶
液 ,边加边搅拌 ,加完后继续搅拌 10 min。自然冷
却 ,静置 2 h ,待絮凝液澄清后 ,用 120 目滤布双层滤
过 ,观察滤过情况 ,得各絮凝液 ,测定絮凝前后含固
量比值、多糖保留率。结果见表 2。当壳聚糖加入
量超过 15mL 时 ,絮凝沉降较困难 ,絮凝液难以滤
过 ,提示壳聚糖加入量不能超过 15 %。当壳聚糖溶
液的加入量为 5～10 mL 时 ,絮凝前后含固量比值
及多糖保留率均较高 ,故采用壳聚糖溶液加入量为
浸膏质量的 510 %～1010 %时较为合适。
表 2 　壳聚糖加入量对指标的影响
Table 2 　Effects of chitosan amount on indexes
壳聚糖加入量/ mL 滤过情况 固形物保留率/ % 多糖保留率/ %
5 容易滤过 96101 91164
10 容易滤过 94125 82145
15 较易滤过 93170 76158
20 较难滤过 88105 72149
25 较难滤过 81150 69183
216 　正交试验优选絮凝澄清工艺
21611 　因素水平的确定 :在上述单因素试验初步优
选壳聚糖絮凝澄清工艺条件的基础上 ,采用正交试
验法对壳聚糖絮凝澄清最佳工艺条件进行进一步验
证优选。根据预试结果 ,选取浸膏密度、壳聚糖用量
及絮凝时药液温度为考察因素 ,采用 L 9 (34 ) 正交表
安排试验 ,以干膏得率、絮凝前后多糖保留率为考察
指标 ,采用方差分析 ,q 检验确定最佳工艺条件 ,因
素水平见表 3。
表 3 　因素与水平
Table 3 　Factors and levels
水平
因　素
A 浸膏密度 B 壳聚糖用量/ % C 药液温度/ ℃
1 11 02 5 45
2 11 04 7 65
3 11 06 9 85
21612 　正交试验与结果 :用 L 9 (34 ) 正交表安排试
验 ,按前述测定方法测定 ,结果见表 4。
　　将正交试验结果进行方差分析 ,结果见表 5。
　　以干膏得率为指标分析 :极差 R 值大小显示 ,
各因素作用主次为 A > B > C ,方差分析结果表明 :A
因素和 B 因素的影响均有显著性意义 ,以 A3B1 C3
组合为佳 ,因 C 因素差异性不具显著意义 ,故在中
试和大生产中可选用 A3B1 C1 ～C3 。以多糖保留率
·709·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月
为指标分析 :极差 R 值大小显示 ,各因素作用主次
为 B > A > C ,方差分析结果表明 :B 因素的影响具
有显著性意义 ,以 A2B1 C1 组合为佳 ,因 A、C 因素
差异性不具显著意义 ,故在中试和大生产中可选用
A1～A3B1 C1～C3 。
表 4 　正交试验设计表及结果
Table 4 　Design and results of orthogonal test
试验号 A B C D
干膏得
率/ %
多糖保留
率/ %
　　　　1 1 1 1 1 371 86 86154
　　　　2 1 2 2 2 351 53 82103
　　　　3 1 3 3 3 361 84 80102
　　　　4 2 1 2 3 371 93 88131
　　　　5 2 2 3 1 361 05 85113
　　　　6 2 3 1 2 371 07 83102
　　　　7 3 1 3 2 401 81 90154
　　　　8 3 2 1 3 381 09 84146
　　　　9 3 3 2 1 401 05 80135
干膏得率 K1 110123 116160 1131 02 113196
　　　　K2 111105 109167 1131 51 113141
　　　　K3 118195 113196 1131 70 112186
　　　　R 8172 6193 01 68 0155
多糖含量 K1 248159 265139 2541 02 252102
　　　　K2 256146 251162 2501 69 255159
　　　　K3 255135 243139 2551 69 252179
　　　　R 7187 22 . 00 5 . 00 3157
表 5 　方差分析
Table 5 　Analysis of variance
误差来源 SS V MS F 显著性
　干膏得率 A 151 460 2 71730 7616500 P < 01 05
　　　　　B 81 160 2 41080 4014400 P < 01 05
　　　　　C 01 080 2 01040 014100
　　　　　D 01 200 2 01100
多糖保留率 A 121 096 2 61048 511406
　　　　　B 821 372 2 411186 3510058 P < 01 05
　　　　　C 41 320 2 21160 118358
　　　　　D 21 353 2 11177
　　F0105 (2 ,2) = 191 00 　　F0101 (2 ,2) = 99100
　　综合上述试验结果及指标分析 ,拟定以 A3B1 C1～
C3 为最佳絮凝工艺 ,即絮凝前药液浓缩至密度为
1106 (60 ℃测) ,絮凝时药液温度为 45～85 ℃,加入
5 %的壳聚糖溶液进行絮凝。
217 　絮凝澄清工艺的验证 :按上述较优工艺条件进
行试验验证 ,即絮凝前药液浓缩至密度为 1106 (60
℃测) ,絮凝时药液温度为 45 ℃,加入 5 %的壳聚糖
溶液进行絮凝。以干膏得率、絮凝前后药液中多糖
保留率为考察指标 ,结果见表 6。结果表明 ,该方法
重复可行。
表 6 　正交试验验证( n = 3)
Table 6 　Verif ication test ( n = 3)
试验序号 浸膏得率/ % 多糖保留率/ %
1 39170 88184
2 38197 89137
3 40113 90126
3 　讨论
本品采用传统的水提醇沉法不仅可沉淀淀粉、
蛋白质等大量的亲水性杂质 ,同时也除去了药材提
取液中大多数低分子多糖成分 (多糖保留率 ≤
50 %) ,而现代研究表明大多数中药中的低分子多糖
类成分具有增加免疫力、抗癌、抗辐射、抗突变、保肝
和养颜及造血等作用 ,如黄芪、党参、当归中的多糖
等都具上述作用[7～10 ] ,按现代的中药研究理论 ,本
品目前采用的纯化工艺将部分有效成分作为无效杂
质去除 ,在一定程度上影响产品的质量及疗效 ,故本
实验采用多糖为主要考察指标对絮凝澄清工艺参数
进行优选 ,经验证的絮凝方法 ,多糖保留率 ≥80 % ,
大部分多糖物质得以保留。
中药提取液中常含有大量的糖类、无机盐、黏液
质等强吸潮性成分 ,特别是醇沉后的浸膏更易吸潮 ,
对固体制剂的成型影响较大 ,而采用絮凝澄清法纯
化提取液 ,能较好的去除此类成分 ,纯化后药液易干
燥 ,较难吸潮 ,易于制剂成型 ,且成品稳定性好。进
行中试放大表明 ,本实验提取纯化方法方便 ,可行 ,
生产周期短 ,且环保、节能、安全。
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·809· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月