全 文 ：肿节风水提物及其市售制剂的 HPLC特征图谱研究
姚志红1, 2 ,潘宇明1 ,戴 毅1 , 2 ,顾利红3 ,刘明艳1 , 段营辉4 , 姚新生1, 2, 4*
( 1 暨南大学 中药及天然药物研究所,广东 广州 510632; 2 中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室,
广东 广州 510632; 3 广州市药品检验所 中药室, 广东 广州 510160; 4 沈阳药科大学
天然药物化学教研室, 辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 建立肿节风水提物的 HPLC 特征图谱并明确其特征色谱峰的化学成分, 对肿节风水提物及其市售
制剂的质量进行评价。方法 以 Ultimate XBC18色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m) , 乙腈水(各含 0 1%甲酸)为
流动相梯度洗脱,体积流量为 1 0 mL / min, 柱温: 30 ,检测波长为 330 nm; 以共有模式特征图谱为对照, 对不同
厂家的肿节风水提物及其市售制剂进行相似度评价。结果 建立的肿节风水提物的 H PLC 特征图谱具有良好的
稳定性、精密度、重现性。不同厂家生产的 12 批肿节风水提物及 20 批市售制剂与共有模式对照特征图谱的相似
度分别在 0 883~ 0 987 和 0 797~ 0 982。其中 8个特征色谱峰经化学指认,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、
hydroxypropiovanillone、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸4O葡萄糖苷和迷迭香酸。结论 本研究建立了涵盖肿节
风中抗炎活性成分与特征成分的 H PLC 特征图谱,反映了肿节风水提物及相关制剂的多成分的整体面貌, 为全面、
有效控制肿节风及相关制剂的质量奠定了科学基础。
关键词:肿节风; 肿节风水提物;肿节风制剂; H PLC 特征图谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 09145704
HPLCCharacteristic chromatogram of Sarcandrae Herba water extract and its preparations
YAO Zhihong1, 2 , PAN Yuming 1 , DAI Yi1, 2 , GU Lihong3 , LIU M ingyan1 ,
DUAN Yinghui4 , YAO Xinsheng1, 2, 4
( 1 Institut e o f T r aditional Chinese Medicine & Natur al P roducts, Jinan Univer sity , Guangzhou 510632, China;
2 Guangdong Province Key Labo rato ry of Pharmacodynam ic Constituents of TCM and New Drug Resear ch,
Guang zhou 510632, China; 3 Depar tment o f T r adit ional Chinese M edicine, Guangdong Inst itute
for Drug Contr ol, Guangdong 510160, China; 4 Depar tment o f Natur al P roducts Chemistr y,
Shenyang Pharmaceutical Univer sity, Shenyang 110016, China)
Abstract: Objective T o develop an HPLC character ist ic chr omatogr am of S ar candr ae H erba water
ex t ract for evaluat ion of it s quality and the related products Methods T he method w as developed on a C18
column ( 250 mm 4 6 mm, 5 m) by g radient elution w ith acetonit rilewater ( both containing 0 1% for
mic acid) as mobile phase at a flow rate o f 1 0 mL/ m in w ith the detected w avelength at 330 nm and column
temperature at 30 The quality of the w ater ex t ract and its r elated pr oducts w ere evaluated by
comparing w ith the established reference character ist ic chromato gram Results The H PLC char acteristic
reference chromato gram was established w ith good stability, precision, and reproducibility It s similarity
among 12 batches o f the ext ract and 20 batches o f related preparat ions r anged in 0 883 - 0 987 and
0 797- 0 982, respect ively Furthermore, eight peaks in the character ist ic chromato gram were identif ied
as neochlor ogenic acid, chlo rogenic acid, crypto chloro genic acid, hydroxypropio vanillone, caffeic acid,
isof raxidin, ro smarinic acid4Og lucoside, and rosmar inic acid, respect ively Conclusion With anti
inf lammatory bio act iv e ing redients and characterist ic components included, the HPLC characterist ic chro
matogram reveales the prof ile of mult iple chem ical substances in Sarcandrae H er ba water ex t ract and its
products and this w ould contr ibute to it s ef fective quality cont rol
Key words: Sarcandrae H er ba; Sar candr ae H erba water ex tr act; Sarcandr ae H erba preparat ion;
HPLC characterist ic chromato gram
!1457!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 20091205 基金项目:中国药典项目资助项目( TS61) ;广州市中药现代化重大专项资助项目( 2004Z1E5011)作者简介:姚志红( 1967 ∀ ) ,女,上海人,副教授,主要从事中药质量控制、药动学研究。
T el : (020) 85221767 Email: tyaozh@ jn u edu cn
肿节风又名九节茶, 草珊瑚等,为金粟兰科植物
草珊瑚 Sarcand ra glabr a ( Thunb ) Nakai的干燥
全株,具有抗菌、消炎及肿瘤抑制作用 [ 12]。目前全
国有 56 家药厂以肿节风为原料生产相关制剂 [ 3]。
肿节风主要化学成分为有机酸、倍半萜、黄酮及香豆
素类化合物等, 但主要的药效成分尚不明确[ 4] 。#中
国药典∃2005年版对肿节风药材及市售制剂的鉴别
项下方法包括试管反应、对照药材和异嗪皮啶对照
品的 T LC鉴别法。试管鉴别反应专属性太差,操作
繁锁、影响因素多。对照药材 T LC 鉴别法及林瑞
超[ 56]、程翼宇等 [ 7] 开展的肿节风 HPLC 指纹图谱
的研究成果,虽然都在一定程度上反映了肿节风及
产品的整体质量, 但前者操作繁琐、影响因素多; 后
者除指认了特征成分异嗪皮啶外,未能对其他色谱
峰进行化学指认;两种方法都未能反映肿节风的抗
炎活性,无法对肿节风及其相关制剂进行全面、有效
的整体质量控制。本课题组前期对肿节风水提物进
行了化学成分研究,活性研究发现其中量较高的迷
迭香酸能够有效抑制 15脂加氧酶的活性, 结合文
献报道[ 810] , 提示其为肿节风中的抗炎活性成分。
为此,本研究以绿原酸、异嗪皮啶和迷迭香酸为参
照,建立了肿节风水提物的 HPLC 特征图谱, 指认
了其中 8个特征色谱峰的化学结构,并对不同厂家
生产的 12批肿节风水提物及 20批市售肿节风制剂
进行了相似度考察,建立的 HPLC 特征图谱能反映
肿节风水提物及其市售制剂多成分(包括指标成分
与抗炎活性成分)的整体面貌, 研究成果为全面、有
效地控制其产品质量奠定了科学基础。
1 仪器与试药
安捷伦 1200 高效液相色谱仪 (包括 G1311A
Quat泵, G1329AALS 自动进样器, G1316ATCC
柱温箱, G1365D ∀ MWD 紫外检测器) ; Sar to rius
BP211D十万分之一电子天平; 中药指纹图谱相似
度评价系统 2004 A版(国家药典委员会)。
肿节风对照药材(中国药品生物制品检定所,批
号 1048200504) ; 自制肿节风水提物(批号 ZJF1、
ZJF2) ;异嗪皮啶对照品(中国药品生物制品检定
所,质量分数为 98% 以上, 批号 1108347200304) ;
迷迭香酸对照品 ( Sigma 公司, 质量分数为 97%以
上,批号 536954)。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、4
hydroxypropio vanillone、咖啡酸、迷迭香酸4O
D葡萄糖苷对照品均为本实验室从肿节风水提物
中分离获得,并经过波谱学实验鉴定结构,质量分数
均在 95%以上。乙腈(色谱纯, Digma 公司) ; 甲醇
(色谱纯,山东禹王实业有限公司) ,甲酸(分析纯,广
州化学试剂厂) ; 蒸馏水(怡宝食品饮料有限公司)。
实验用肿节风水提物及相关制剂的样品信息见
表 1。
表 1 肿节风水提物及市售制剂
Table 1 Sarcandrae Hebra water extract and its preparations
生产厂家 品名 规格 批号
广州敬修堂(药业)股份有限公司 水提物 N02002、N02003、N02004、S12284、S12285、S12286
上海信谊嘉华药业有限公司 水提物 090103、090104、090105
江西天施康中药股份有限公司 水提物 081207、081208、081209
广州敬修堂(药业)股份有限公司 清热消炎宁胶囊 每粒含干浸膏 0 5 g Z11128、Z11138、Z11139、Z12144、S04008、Z11128、
Z05072、Z07090、Z10120、S05009
上海信谊嘉华药业有限公司 肿节风片 每片质量 0 354 g 081001
江西天施康中药股份有限公司 肿节风片 片芯质量 0 25 g 08071501、08011101、08011102、08052102、09033801、
09022202、09024301、09051201
广西河丰药业股份有限公司 肿节风片 每片质量 0 535 g 081202、090203
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 美国 Ult imate XBC18色谱柱( 250
mm 4 6 mm, 5 m) ;流动相为乙腈( B, 含0 1%甲
酸)0 1%甲酸( A) , 梯度洗脱( 0~ 5 min 8% B, 60
min 35% B, 70 min 60% B, 72~ 80 m in 100% B) ; 体
积流量为 1 0 mL/ min; 柱温 30 ; 检测波长 330
nm ;进样量 10 L。
2 2 溶液的制备
2 2 1 供试品溶液的制备:取肿节风水提物粉末约
0 5 g(制剂各取 20 粒; 清热消炎宁胶囊取其内容
物;肿节风片刀刮法除去外层包衣,充分研碎) , 精密
称定,加入 60%甲醇 50 mL, 超声处理 30 m in, 取
出,放冷,摇匀,滤过,即得。
2 2 2 参照物溶液的制备: 各取绿原酸、异嗪皮啶
和迷迭香酸对照品适量, 精密称定, 加 60%甲醇溶
解制成含绿原酸 15 g/ mL、异嗪皮啶 15 g / mL、迷
迭香酸 25 g/ mL 的混合溶液,即得。
2 3 方法学考察
2 3 1 稳定性试验: 取同一份肿节风水提物(批号
N02002) ,制备供试品溶液,分别于 0、2、4、8、12、16、
!1458! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
24 h 进行检测, 计算得色谱图的相似度值不低于
0 99, 10个主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面
积的 RSD均小于 2%。上述结果表明, 供试品在室
温下 24 h内稳定。
2 3 2 重现性试验:取同一批肿节风水提物(批号
N02002) ,平行制备6份供试品溶液,进行检测。计算
得各色谱图的相似度值不低于 099, 10个主要色谱峰
的相对保留时间和相对峰面积的 RSD均小于2%。
2 3 3 精密度试验:取同一份肿节风水提物(批号
N02002) ,制备供试品溶液, 连续进样 6次, 进行检
测,计算得各色谱图的相似度值不低于 0 99, 10 个
主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD
均小于 2%。
2 4 肿节风水提物 HPLC特征图谱的相似度评价
及色谱峰的化学指认: 分别制备不同厂家(表 1)生
产的肿节风水提物供试品溶液,进行检测,采用#中
药指纹图谱相似度评价系统2004 A 版∃软件对所得
特征图谱进行分析。以 5点(峰 1, 2, 3, 6, 8)进行多
点校正,时间窗 0 1, 中位数法, 自动匹配后生成肿
节风水提物对照特征图谱(共有模式) , 见图 1。计
算 12批肿节风水提物特征图谱与肿节风水提物对
照特征图谱、实验室自制肿节风水提物特征图谱及
肿节风对照药材水提物特征图谱的相似度, 见表 2。
结果显示 12批肿节风水提物特征图谱与对照特征
图谱的相似度在 0 883~ 0 987;与自制水提物特征
图谱相似度在 0 720~ 0 975, 而与对照药材水提物
特征图谱的相似度较差,仅在 0 404~ 0 810。以异
嗪皮啶(峰 6)为参照峰, 12批供试品特征图谱中的
8个共有峰(峰 1~ 6、8、9)的相对保留时间的 RSD
均小于 2 0% ,但相对峰面积的 RSD 差别较大, 在
13% ~ 49%。结果提示,各批次肿节风水提物整体
具有一定的相似性,但色谱峰所代表的化学成分量
有较大的差异。
制备肿节风水提物供试品溶液,并取咖啡酸、异
嗪皮啶和迷迭香酸对照品, 以及从肿节风水提物中
分离得到 5种化学成分适量, 以 60%甲醇水溶解,
分别进行检测。对比 8 个对照品的色谱保留行为,
肿节风水提物 HPLC 特征图谱中 8个特征色谱峰
得到了明确的化学指认, 见图 1。按保留时间先后
顺序依次为新绿原酸(峰 1)、绿原酸(峰 2)、隐绿原
酸(峰 3)、hydroxypropio vanillone (峰 4)、咖啡酸
(峰 5)、异嗪皮啶 (峰 6)、迷迭香酸4O葡萄糖苷
(峰 7)和迷迭香酸(峰 8)。
2 5 肿节风市售制剂H PLC特征图谱相似度评
1新绿原酸 2绿原酸 3隐绿原酸 4hydroxypr opiovanil
lone 5咖啡酸 6异嗪皮啶 7迷迭香酸4O葡萄糖苷
8迷迭香酸
1neochlorogen ic acid 2 chlorogenic acid 3 cryptochlorogenic
acid 4hydroxypropiovanillone 5 caf feic acid 6i sofraxidin
7 rosmarinic acid4Oglu coside 8rosm arinic acid
图 1 肿节风水提物对照特征图谱
Fig 1 HPLC Chromatogram of reference characteristic
of Sarcandrae Hebra water extract
表 2 各图谱的相似度计算结果
Table 2 Similarity of characteristic chromatograms
批 号 与对照特征图谱相似度
与 ZJF1
相似度
与 ZJF2
相似度
与对照药材
相似度
081207 0 941 0 975 0 939 0 722
081208 0 883 0 964 0 959 0 797
081209 0 910 0 969 0 942 0 787
090103 0 985 0 935 0 844 0 513
090104 0 977 0 897 0 800 0 426
090105 0 967 0 883 0 791 0 404
N02002 0 987 0 901 0 790 0 479
N02003 0 974 0 871 0 760 0 406
N02004 0 971 0 882 0 770 0 440
S12284 0 902 0 826 0 725 0 510
S12285 0 899 0 821 0 722 0 499
S12286 0 934 0 826 0 720 0 456
ZJF1 0 913 1 000 0 959 0 733
ZJF2 0 804 0 959 1 000 0 810
对照药材 0 485 0 733 0 810 1 000
价:将所收集的不同厂家生产的 20批肿节风市售单
方制剂,制备供试品溶液, 分别进行检测, 并计算所
得特征图谱与 12批肿节风水提物对照特征图谱的
相似度,见图 2。结果显示, 所收集的 20 批市售肿
节风单方制剂中 13批的相似度在 0 9以上(表 3) ,
其中江西天施康药业的肿节风片占 4批(共 8批) ,
广州敬修堂药业清热消炎宁胶囊占 7批(共 9批)。
可见本研究所建立的对照特征图谱可以对不同厂家
生产的市售肿节风单方制剂的质量进行初步的质量
评价,并为生产厂家从中间环节对产品的稳定性进
行监控提供了参考。
3 讨论
3 1 提取方法的选择: 实验比较了甲醇、不同比例
的甲醇水及水等作为提取溶剂及不同提取时间的
分析结果,最终以 60%甲醇超声提取供试品 30 min
时效果最佳。
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图 2 相似度计算市售肿节风制剂特征图谱与肿节风水
提物对照特征图谱的叠加图
Fig 2 Overlay of characteristic chromatograms
of Sarcandrae Herba preparations and
ref erence characteristic chromatogram
of its herb extract for similarity
表 3 肿节风制剂特征图谱与肿节风水提物对照特征图谱
的相似度计算结果
Table 3 Similarity between HPLC characteristic chromato
grams of Sarcandrae Herba preparations and refer
ence characteristic chromatogram of its herb extract
批 号
与肿节风水提物
对照特征图谱的
相似度结果
批 号
与肿节风水提物
对照特征图谱的
相似度结果
081001 0 939 09051201 0 931
081202 0 865 S00048 0 843
090203 0 920 S05009 0 850
08011101 0 981 Z05072 0 976
08011102 0 982 Z07090 0 935
08052102 0 845 Z10120 0 947
08071501 0 830 Z11128 0 944
09022202 0 819 Z11138 0 910
09024301 0 960 Z11139 0 973
09033801 0 797 Z12144 0 971
3 2 色谱条件的选择
3 2 1 色谱柱的选择: 选用了 U lt imate XB C18
( 250 mm 4 6 mm , 5 m)、A gilent Eclipse XDB
C18 ( 250 mm 4 6 mm, 5 m)、Phenomenex Gemini
C18 ( 250 mm 4 6 mm, 5 m)色谱柱进行试验, 结
果以 U lt imate XB C18 ( 250 mm 4 6 mm, 5 m)分
离效果最佳。
3 2 2 流动相的选择:比较了甲醇水、甲醇( 0 2%
醋酸)0 2%醋酸、乙腈水、乙腈( 0 1%甲酸)0 1%
甲酸作为流动相在不同梯度洗脱下的色谱图,以乙
腈( 0 1%甲酸)0 1%甲酸分离效果最佳。
3 2 3 检测波长的选择:考虑到课题组从肿节风水
提物中分离得到的化合物多为酚酸类物质,为能在
同一张色谱图尽可能地展示出此类成分, 本研究选
择了 330 nm 作为检测波长。该波长下异嗪皮啶的
响应较现行药典对肿节风药材及部分肿节风制剂测
定项所采用 344 nm 的响应并没有明显地减弱。
3 3 对照特征图谱的选择: 由于所收集到的 12批
肿节风水提物间相似度较高,而与对照药材水提物
的相似度较低(大部分在 0 5以下) , 同时考虑到肿
节风水提物大多为肿节风制剂的中间产品,其共有
模式特征图谱可以较好地反映肿节风水提物及市售
制剂中的多成分的整体面貌,并有助于实现肿节风
从生产的中间环节到市售产品的整体质量控制, 本
研究中以 12批肿节风水提物供试品生成的共有模
式图谱作为肿节风对照特征图谱。
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