全 文 ：·制剂与质量·
指纹图谱评价雷公藤胃漂浮缓释制剂的体外释放度研究
张 　伟1 ,2 ,宋洪涛1 3 ① ,张 　倩3
(11 南京军区福州总医院 药学科 ,福建 福州 　350025 ; 21 福建中医学院 药学系 ,福建 福州 　350003 ;
31 福建医科大学药学院 ,福建 福州 　350004)
摘 　要 :目的 　考察雷公藤胃漂浮缓释制剂的体外释放行为 ,建立其质量评价方法。方法 　采用 HPLC 法进行释
放介质指纹图谱分析 ,选择雷公藤内酯醇为参照峰 ,分别求出其他指纹峰与对照峰面积的线性相关方程 ,计算相对
释放度及相似因子 f 2 值。结果 　雷公藤胃漂浮缓释片和胃漂浮缓释微丸中的各成分在缓释的同时未能达到同步
释放 ,而采用多元定时释药技术制备的雷公藤胃漂浮缓释胶囊中的各成分在缓释的同时达到了同步释放。结论 　
以指纹图谱特征峰为指标可以更加科学全面地评价雷公藤缓释制剂的体外释放行为及其制剂的质量。
关键词 :雷公藤胃漂浮缓释制剂 ; HPLC 指纹图谱 ;体外释放
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320376205
Evaluation on in vit ro release of gastric floating sustained2release preparation
of Tri pter ygium wil f ordii by HPLC f ingerprints
ZHAN G Wei1 ,2 , SON G Hong2tao1 , ZHAN G Qian3
(11Department of Pharmacy , Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Region , Fuzhou 350025 , China ; 21 Department
of Pharmacy , Fujian College of Traditional Chinese Medicine , Fuzhou 350003 , China ; 31 School of Pharmacy ,
Fujian Medical University , Fuzhou 350004 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he drug i n vi t ro release behavior of gast ric floating sustained2
release p reparation of T ri ptery gi um w i l f ordi i and establish their quality evaluating met hods1 Methods
H PL C was Employed to gain t he fingerp rint s of releasing medium of preparations1 Triptolide was selected
as marker to calculate t he linear equation concerning peak area t hen t he relative drug release and f 2 simila2
rity factor value were acquired1 Results 　Various component s in gast ric floating sustained2release tablet s
and pellet s of T1 w i l f ordi i could not release synchronously while sustained2releasing but all of t hem in t he
gast ric floating sustained2release cap sules of T1 w i l f ordi i prepared by using multiparticulate site2con2
t rolled release technology could release synchronously while sustained2releasing1 Conclusion 　The quality
and i n vi t ro release behavior of gast ric floating sustained2release p reparation of T1 w i l f ordi i could be eval2
uated more scientifically and comprehensively by using HPL C fingerp rint s met hod1
Key words : T ri ptery gi um w i l f ordi i gast ric floating sustained2release p reparation ; HPL C finger2
print s ; i n v i t ro release
　　中药成分复杂 ,各成分的量较低 ,只有在体内同
时释放吸收、同时作用于靶点部位才能发挥中药多
层次、多靶点的综合优势 ,若将其割裂开来 ,不仅违
背了中医用药的整体观 ,而且必将降低中药的临床
疗效。所以 ,中药缓释制剂制备的关键技术及难点就
在于如何使中药的各成分在缓释的同时达到同步释
放 ,以使各成分在体内能够相互协同、相辅相成[1 ] 。
然而 ,如何科学全面地考察和评价中药缓释制剂的质
量 ,又是研究者必须慎重考虑和选择的关键问题。本
实验制备了 3 种雷公藤胃漂浮缓释制剂 ,采用 HPLC
指纹图谱考察了多组分的释放行为 ,以期为中药缓释
制剂的制备和质量评价提供参考。
·673· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009207203　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :福建省自然科学基金资助项目 (2006J0116)
作者简介 :张　伟 (1984 —) ,女 ,河南南阳人 ,硕士研究生 ,研究方向为中药制剂与质量控制。
Tel : (0591) 22859972 　E2mail : weiweiann61845654 @yahoo1com1cn3 通讯作者　宋洪涛 Tel : (0591) 22859459 　E2mail : sohoto @vip1 sohu1com
1 　仪器与试药
　　HP1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公
司) ;RCZ —5A 型智能药物溶出度仪 (天津大学精密
仪器厂) ; TDP —5 型单冲压片机 (上海天凡制药机
械厂) ;J HQ —100 型微型流化床包衣机 (沈阳医联
新药研究所) ;JBZ —300 型包衣制粒机 (沈阳医联新
药研究所) ;B T1 —100 E 型恒流泵 (上海琪特分析仪
器有限公司) 。
雷公藤内酯醇对照品 (中国药品生物制品检定
所 ,批号 1115672200502) ;雷公藤提取物 (无锡开立
达实业有限公司 ,批号 070203) ;羟丙基甲基纤维素
( HPMCK4M 、H PMCE5 ,上海卡乐康包衣有限公司) ;
十六醇、十八醇 (广东汕头西陇化工厂) ;微晶纤维素
(MCC ,江苏常熟药用辅料厂) ;低取代羟丙基纤维
素 (L2H PC ,营口奥达药用辅料厂) ;乙基纤维素水
分散体 (Surelease ,上海卡乐康包衣有限公司) ;聚维
酮 ( PV P K30 ,国药集团化学试剂有限公司) ;碳酸氢
钠 (Na HCO3 ,国药集团化学试剂有限公司) ;硬脂酸
镁 (上海实验试剂有限公司) ; 十二烷基硫酸钠
(SDS ,浙江豪森制药有限公司) ;乙腈为色谱纯 ,其
他试剂为分析纯。
2 　方法与结果
211 　雷公藤胃漂浮缓释制剂的制备
21111 　雷公藤胃漂浮缓释片的制备[2 ] :按处方量分
别称取 20 %雷公藤提取物、10 %MCC、30 % HPM2
CK4M 、15 %十六醇、10 % PV P 和 15 %碳酸氢钠 ,过
80 目筛 ,混合 ,加入适量硬脂酸镁混合均匀 ,用直径
9 mm 的冲头 ,采用粉末直接压片法压制成平弧片 ,
片质量为 200 mg ,即得。
21112 　雷公藤胃漂浮缓释微丸的制备 :按处方量分
别称取 10 %的微晶纤维素 ( MCC) 和 90 %的十八
醇 ,过筛混匀 ,加入 40 % (0140 g/ mL) 的水制软材 ,
采用挤出滚圆法制备空白胃漂浮微丸 (24～40 目) 。
将雷公藤提取物混悬于含 1 %HPMC(5 mPa ·s) 和
015 %SDS 的水溶液中制成载药包衣液 ,使用流化
床对微丸进行载药包衣 ,制备载药胃漂浮微丸。以
含 3 %PV P 的乙基纤维素水分散体为缓释层包衣材
料 ,包衣增重 20 % ,然后于 40 ℃烘箱中热处理 12
h ,即得。
21113 　采用多元定时释药技术制备雷公藤胃漂浮
缓释胶囊[3 ] :称取适量 21112 项下制备的载药胃漂
浮微丸 , 置流化床包衣机内 , 以 3 % L2HPC、1 %
H PMC(5 mPa ·s)和 1 %SDS 的混悬液作为内层溶
胀材料进行包衣 ,包衣增重 15 % ,继以乙基纤维素
水分散体作为外层控释材料进行包衣制备不同包衣
增重的胃漂浮定时释药包衣微丸 ,然后于 40 ℃烘箱
中热处理 12 h。等量称取控释层包衣增重分别为
0 %、8 %、12 %、15 %、22 %的包衣微丸 ,混均装入硬
胶囊中 ,即得。
212 　色谱条件 : XB2C18 色谱分析柱 (200 mm ×416
mm ,5μm) (上海月旭材料科技有限公司) ;流动相 :
011 % 磷酸水溶液 ( A)2乙腈 (B) ,梯度洗脱 : 20 %
B～40 %B ( 0～45 min) , 40 %B～50 %B ( 45～ 75
min) ,50 %B～60 %B (75～85 min) ,60 %B～90 %B
(85～120 min) ,90 %B～100 %B (120～130 min) ;体
积流量 : 110 mL/ min ;柱温 : 35 ℃;检测波长 : 218
nm ,进样量 :20μL 。
213 　溶液的制备
21311 　对照品溶液的制备 :称取雷公藤内酯醇对照
品适量 ,精密称定 ,置 25 mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 432μg/ mL 对照品溶液。
21312 　供试品溶液的制备 :照《中国药典》2005 年
版释放度测定法 (附录 ⅩD 第一法) ,采用溶出度测
定 (附录 ⅩC) 第三法的装置 ,以 011 % SDS 的人工
胃液 250 mL 为溶出介质 ,转速 (100 ±1) r/ min ,温
度 (37 ±015) ℃。在每个溶出杯中投入已精密称重
的雷公藤胃漂浮缓释制剂适量 ,立即计时 ,分别在
1、2、4、6、8、10、12 h 滤过 ,取样 10 mL ,置 25 mL 具
塞试管内 ,加醋酸乙酯 10 mL ,振摇。待静置分层 ,
吸取上层溶液 9 mL ,水浴加热蒸干 ,加乙腈 200μL
溶解 ,即得。
214 　方法学考察
21411 　精密度试验 :取同一供试品溶液 ,连续进样
6 次 ,对各色谱峰进行比较 ,其相对保留时间 RSD
均小于 013 % ,相对峰面积 RSD 均小于 3 % ,表明
其精密度良好。
21412 　重现性试验 :取同一样品 6 份 ,分别制备供
试品溶液 ,测定 ,各色谱峰相对保留时间 RSD 均小
于 013 % ,相对峰面积 RSD 均小于 3 % ,表明重现性
良好。
21413 　稳定性试验 :取同一样品溶液 ,分别在 0、4、
8、12、16、24 h 进样测定 ,各色谱峰相对保留时间
RSD 均小于 013 % ,相对峰面积 RSD 均小于 3 % ,表
明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
215 　释放特征指纹图谱中共有峰与对照峰的确定 :
经比较不同时间点取样的供试品指纹图谱 ,发现在
1、2 h 取样时间点的供试品中有些峰未给出峰面
积 ,在每个取样时间点供试品中均能给出峰面积的
·773·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
约有 14 个峰 ,故确定这 14 个峰为释放指纹图谱的
特征共有峰。其中 2 号峰为雷公藤内酯醇 ,其分离
度较高、峰面积较大、稳定性好 ,且方便购得 ,故选为
对照峰。雷公藤胃漂浮缓释片、雷公藤胃漂浮缓释
微丸和采用多元定时释药技术制备的雷公藤胃漂浮
缓释胶囊的释放特征指纹图谱分别见图 1。
216 　特征指纹峰成分体外释放度的测定
21611 　对照峰标准曲线的制备 :精密吸取雷公藤内
酯醇对照溶液 0101、0102、0105、011、012、015、110
mL 置于 10 mL 量瓶中 ,加乙腈至刻度 ,摇匀 ,进样
测定。以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标绘制标
准曲线 ,回归方程为 Y = 21019 4 X + 171227 , r =
01999 9。结果表明 ,雷公藤内酯醇的进样量在
8164～864 ng 与峰面积呈良好的线性关系。
21612 　特征指纹峰成分释放度的计算 :将胃漂浮缓
释制剂分别进行释放度测定 ,记录指纹图谱。以特
征指纹峰对相应时间雷公藤内酯醇的峰面积进行线
性回归 ,求出相关性方程 ( r 均大于 0195) ,通过相关
性方程将指纹峰面积折算出相当于相应对照品峰面
积 ,将此值代入雷公藤内酯醇回归方程 ,求出指纹峰
成分相当于雷公藤内酯醇的量 ,即该成分的相对释
放量 ,以单元中实际相对量为 100 % ,计算指纹峰对
应成分的累积释放率[4 ] 。以雷公藤内酯醇释放度为
对照成分释放度 ,采用 f2 相似因子法计算各特征指
纹峰的释放相似度。雷公藤胃漂浮缓释片、雷公藤
胃漂浮缓释微丸和采用多元定时释药技术制备的雷
公藤胃漂浮缓释胶囊的 14 个特征指纹峰成分的体
外释放曲线分别见图 2 ,相似因子 f 2 值见表 1。
3 　讨论
　　雷公藤是有毒中药 ,临床用于类风湿关节炎、肾
小球肾炎、肾病综合征等的治疗 ,疗效显著 ,但不良反
应较大且常见 ,同时鉴于小肠是雷公藤主要有效成分
雷公藤内酯醇的主要吸收部位 ,所以 ,研制雷公藤胃
漂浮缓释制剂具有较高的实用价值和现实意义。
　　参考文献报道的方法[5 ,6 ] ,曾选择使用了乙腈2
水、乙腈21 %醋酸水溶液、乙腈2011 % 磷酸水溶液等
多种流动相系统 ,结果表明以乙腈2011 % 磷酸水溶
液为流动相 ,梯度洗脱效果较好。二萜内酯类化合
物和倍半萜类生物碱是雷公藤中的主要有效成分 ,
其中二萜内酯类化合物含有不饱和内酯环 ,在 218
nm 附近有最大吸光值 ;而倍半萜类生物碱在 220、
267 nm 有其特征吸收峰。为了最大程度地反映出
雷公藤制剂中所含的主要有效成分的化学信息 ,本
实验选择了 210、215、218、225、267 nm 波长进行测
图 1 　雷公藤胃漂浮缓释片( A) 、胃漂浮缓释微丸( B)
和胃漂浮缓释胶囊( C)不同时间点释放样品的
HPLC指纹图谱
Fig11 　HPLC Fingerprints of dissolution samples of gastric
floating sustained2release tablets ( A) , pellets ( B) ,
and capsules ( C) of T1 wil f ordii at different times
定 ,结果在波长 218 nm 下出现的色谱峰适中 ,峰形
完整 ,故选择 218 nm 作为雷公藤制剂体外释放度
的测定波长。
·873· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
图 2 　雷公藤胃漂浮缓释片( A) 、胃漂浮缓释微丸( B) 和
胃漂浮缓释胶囊( C)中多成分的释放曲线
Fig12 　Release prof iles of different components from gas2
tric floating sustained2release tablets ( A) , pellets
( B) , and capsules ( C) of T1 wil f ordii
表 1 　制剂中各特征指纹峰成分的体外释放 f 2 值( n = 6)
Table 1 　f 2 Values of in vit ro release of every peak
in f ingerprints of three kinds of sustained2
release preparation ( n = 6)
峰号
f 2 值
缓释片 缓释微丸 缓释胶囊
1 　　 601 0 4711 7317
2 　　 1001 0 10010 10010
3 　　 431 2 5716 6517
4 　　 641 1 6418 7415
5 　　 621 0 6011 8015
6 　　 591 4 6218 6910
7 　　 491 1 4719 7119
8 　　 601 4 6919 8310
9 　　 671 8 4816 8816
10 　　 421 9 7310 7013
11 　　 621 3 6110 6910
12 　　 491 3 5714 7213
13 　　 481 6 4918 7719
14 　　 661 5 4912 8213
　　从缓释制剂体外释放的 HPL C 指纹图谱及释
放曲线可以直观看出 ,雷公藤胃漂浮缓释片和缓释
微丸中各成分的体外释放不同步。进一步以雷公藤
内酯醇释放度为对照 ,采用相似因子法定量评价各
成分的释放行为 ,结果有 1/ 3 的指纹峰成分释放的
f 2 值 < 50 ,说明这些指纹峰成分与雷公藤内酯醇的
体外释放度有较大差异 ,表明雷公藤胃漂浮缓释片
和缓释微丸中各成分在缓释的同时未达到同步释
放。究其原因 ,亲水凝胶骨架型胃漂浮缓释片的释
药机制是以扩散与溶蚀相结合 ,膜控缓释微丸是以
药物扩散为主要释药机制 ,由于中药中的多种成分
均匀分布在固体制剂中 ,它们受到制剂处方因素和
工艺条件的影响是相同的 ,因此 ,对于这类制剂 ,各
种成分的释放行为差异主要取决于药物本身的理化
性质如分子大小、极性、溶解度、油水分配系数等。
而雷公藤中的化学成分相当复杂 ,各种成分的理化
性质差异较大 ,其释药速率必然也有较大差异。也
就是说 ,采用常用的凝胶缓释骨架片和膜控缓释微
丸的制备技术 ,难以保证中药中的各成分在缓释的
同时达到同步释放。
　　而采用多元定时释药技术制备的雷公藤胃漂浮
缓释胶囊 ,各指纹峰成分体外释放的相似度良好 ,
50 ≤f 2 ≤100 ,显示各指纹峰成分在缓释的同时达到
了同步释放。该制备技术依据的是双层膜时控2爆
破原理 ,即在载药层之外首先包一层溶胀层 ,最后再
包一层控释层。当水分进入控释层后 ,溶胀层首先
吸水膨胀 ,当溶胀压足够大时 ,控释层衣膜破裂 ,药
物迅速释放。通过选择和改变溶胀层和控释层的材
料和包衣增重 ,可以制备具有不同释药时滞的定时
脉冲释药微丸 ,将其按一定比例混合装入胶囊即可
制成缓释制剂 ,该胶囊中的微丸在释放介质中可于
不同时间依次胀破释药 ,从而确保中药缓释制剂中各
成分达到同步释放 ,并在整体上呈现出一种缓释特
征。由于药物的释放主要与包衣膜的材料及厚度有
关 ,而与药物本身的理化性质关系较小 ,所以可使理
化性质不同的各成分在缓释的同时达到同步释放。
如果只采用一个成分或采用比色法测定雷公藤
总二萜内酯作为释放度考察指标 ,3 种制剂均具有
良好的缓释特征 ,但由于任何一种成分或某类成分
不能代替中医用药的整体疗效 ,所以仅靠一个指标
无法区分缓释制剂的优劣 ,也无法证明中药缓释制
剂中的各成分是否达到了整体同步缓释 ,雷公藤叶
提取物的指纹图谱研究已有报道[7 ] ,而采用 HPL C
指纹图谱技术可以充分了解中药缓释制剂中各成分
的体外释放行为 ,并且可以区分采用不同缓释技术
·973·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
制备的中药缓释制剂的优劣 ,达到了预期目的。因
此 ,在目前条件下 ,采用色谱指纹图谱来考察中药缓
释制剂多组分的体外释放行为 ,评价中药缓释制剂
的质量 ,具有较强的科学性、代表性、可行性和适用
性 ,值得进一步研究推广。
参考文献 :
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甘草次酸脂质体的制备及其药剂学性质的研究
郭波红1 ,2 ,程 　怡1 3 ① ,林绿萍1
(11 广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 　510006 ; 21 广东药学院 药剂教研室 ,广东 广州 　510006)
摘　要 :目的 　研究甘草次酸阳离子脂质体的制备方法并考察其药剂学性质。方法 　采用正交设计筛选处方 ,乙醇
注入法制备甘草次酸脂质体 ;用葡聚糖凝胶 G250 柱分离脂质体和游离药物 ,用 HPLC 法测定包封率 ;用透射电镜观
察脂质体的外观形态 ,并用粒径分析仪测定脂质体的粒径和 zeta 电位 ;进一步考察脂质体的释放规律。结果
所得脂质体包封率为 (91161 ±1116) % ;形态为粒径均匀的球形和类球形 ,粒径为 (141 ±10) nm ,Zeta 电位为 (3519 ±
5) mV ;脂质体的体外释放符合 Higuchi 方程 ;具有较好的稳定性。结论 　优选得到的甘草次酸脂质体处方和制备
工艺合理、稳定 ,其体外释放具有缓释特点。
关键词 :甘草次酸脂质体 ;包封率 ;体外释放
中图分类号 :R28412 ;R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320380204
Preparation and pharmaceutical characterization of glycyrrhetinic acid l iposomes
GUO Bo2hong1 ,2 , CH EN G Yi1 , L IN lü2ping1
(11 Department of Chinese Herbal Medicine , Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510006 ,
China ; 2 Department of Pharmacy , Guangdong College of Pharmacy , Guangzhou 510006 , China)
Abstract : Objective 　To prepare and characterize glycyrrhetinic acid cationic liposomes1 Methods 　Li2
posomes were prepared by et hanol injection technique1 An ort hogonal test was utilized to optimize t he for2
mulation and preparation of glycyrrhetinic acid lipo somes1 The unencap sulated glycyrrhetinic acid and lipo2
somes were separated by Sep hadex gel G250 , t he encap sulation efficiency was detected by HPL C1 The
morp hological examination of glycyrrhetinic acid liposomes was performed using t ransmission elect ron
microscopy1 The particle size and Zeta potential of t he liposomes were measured1 The release rate of gly2
cyrrhetinic acid f rom liposomes was tested1 Results 　The liposomes wit h sp herical or ellip soidal shape and
bet ter stability feat ured t he encap sulation efficiency of (91161 ±1116) % , t he mean partical size of (141 ±
10) nm , and Zeta potential of (3519 ±5) mV1 The i n v i t ro release kinetics were consistent with Higuchi
equation1 The stability of glycyrrhetinic acid liposomes was better1 Conclusion 　The selected formulation
and preparation technic of glycyrrhetinic acid liposomes could be rational , stable , and wit h a sustained
feat ure i n v i t ro release 1
Key words : glycyrrhetinic acid liposome ; encap sulation efficiency ; i n vi t ro release
·083· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009208214　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30772790) ;高等学校博士学科点专项科研基金 (20060572012)
作者简介 :郭波红 (1976 —) ,女 , 湖南人 ,2007 级在读博士研究生 ,讲师 ,主要从事药物新剂型的研究。
Tel : (020) 39352117 　E2mail : bohong2g @1631com3 通讯作者　程　怡　E2mail : ncchengyi @21cn1com