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书李惠华等：波浪式ＷＡＶＥ生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究
１８　数据分析　每个处理设３次生物学重复，试验
数据采用ＳＰＳＳ１８软件进行方差分析，采用邓肯新
复极差法（Ｄｕｎｃａｎ′ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｍｅｔｈｏｄ），表示为
３次重复的平均值±标准差（珋ｘ±ｓ）。
２　结果与分析
２１　三角锥形瓶与生物反应器中细胞的生长及ＵＡ
含量变化　以同样的接种浓度，枇杷悬浮细胞在波浪
式生物反应器和摇瓶中分别培养至细胞由嫩黄色转
为灰白色时收获，见图２。在摇瓶中细胞经过２ｄ的
延迟期，第２～１６天处于对数生长期，第１８天细胞的
生长达到峰值，之后开始进入平台期，第２２天收获。
在反应器中没有明显的延迟期，细胞逐渐进入快速生
长，第１４天到达峰值，之后开始进入平台期，第１８天
收获。在生物反应器中的生长周期快于摇瓶中，以收
获时计算，反应器（１８ｄ）和摇瓶（２２ｄ）中细胞干重的
绝对生长速率分别是０２３３，０１１４ｇ·ｄ－１。
不同字母表示差异显著，Ｐ＜０．０５（图４，５同）。
图２　摇瓶和反应器中细胞的生长
Ｆｉｇ２　ＣｅｌｇｒｏｗｔｈｉｎｓｈａｋｅｆｌａｓｋｓａｎｄｉｎＷＡＶＥｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ
在波浪式生物反应器和摇瓶中，枇杷悬浮细胞
合成 ＵＡ的情况见图３。ＵＡ的合成都经过先下降
再上升的过程，摇瓶中下降的时间长于反应器中，收
获时两者 ＵＡ的量均达到最高值，分别为 ２３０３２，
２９４ｍｇ·ｇ－１。反应器中细胞的干重增长及 ＵＡ含
量比摇瓶中高出了１０５５％，２７６５％。
２２　工作体积为１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋营
养代谢　植物细胞悬浮培养是细胞在人为调控的状
态下微生物化地生长，其生长状态与培养液的成份
密切相关，对生物反应器中１Ｌ和５Ｌ不同的工作
体积下，１个培养周期中，培养液中氮（Ｎ），Ｐ，Ｋ，
Ｃａ，Ｍｇ，Ｚｎ，Ｆｅ，Ｍｎ元素的动态消耗情况进行了测
定，在溶氧率２５％，温度２８℃，接种量为４０ｇ，转动
　　　　
图３　摇瓶和反应器中ＵＡ的合成
Ｆｉｇ３　ＵＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｓｈａｋｅｆｌａｓｋｓａｎｄｉｎＷＡＶＥｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ
速度为２０ｒ·ｍｉｎ－１，转动角度为８°，外部用白炽灯
补光，光照强度为４００ｌｘ的培养条件下，不同工作体
积１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋主要元素代谢情况
见表２。
表２中显示接种量为４０ｇ·Ｌ－１，不同培养袋
中不同工作体积（１，５Ｌ）下，营养液中元素的消耗
情况。大量元素Ｎ，Ｐ，Ｋ，微量元素 Ｃａ，Ｍｇ，Ｚｎ，Ｆｅ，
Ｍｎ的消耗趋势基本相似。在１８ｄ的培养周期中，
随着培养时间的增加，与对照相比，各元素的含量逐
渐减少，减少的幅度基本相同，其中Ｐ，Ｍｇ的变化较
为特殊，在培养的初期 Ｐ元素的含量下降迅速，在
第６天，已经下降到检测下限以下，表明Ｐ几乎被消
耗完全，Ｍｇ元素的含量在培养的早期和中期变化缓
和，但在末期（第１６，１８天）下降迅速。５Ｌ工作体
积下，Ｍｇ元素的质量浓度第１８天降到７８３ｍｇ·
Ｌ－１，仅为对照的２２８％，１Ｌ工作体积下也出现相
同的趋势，第１８天仅为对照的２０７％。
２３　工作体积为１Ｌ和５Ｌ的细胞干重及ＵＡ含量
的变化　在溶氧率２５％，温度２８℃，接种量为４０ｇ
·Ｌ－１，转动速度为２０ｒ·ｍｉｎ－１，转动角度为８°，外
部用白炽灯补光，光照强度为４００ｌｘ的培养条件下，
不同工作体积１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋中细胞
干重及ＵＡ含量的变化情况见图４，５。
图４中显示生物反应器中不同工作体积（１，５
Ｌ）下，干重变化趋势基本一致，均出现了先小幅上
升（第０～２天）后快速上升（第２～１４天）之后缓慢
下降（第 １４～１８天）的趋势。在干重变化的数据
中，除了第４天和第１４天工作体积５Ｌ的干重显著
高于工作体积１Ｌ的干重，其他时间点的数据工作
体积１Ｌ与５Ｌ均不存在显著性差异。
图５中显示生物反应器中不同工作体积（１，５
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