全 文 ：)$5 x 5 y Þ &$
ßÞ
(
|
@-Qc& $$;-+( 9R6$ )$5 mn)( #!)$&3)3$4 opqT # ! 0eÄ۞m`nQ~o )$)U$5$&% #% 0eÄ!12mƒˆÂÊ~~o )$>$)3 #% 3ã×mÓ¬­~o 45$)a)$4)$$ &#

rsAt
#!
!
?…
!
:²
!
šƒ„ 
!
ƒ„µû¶*‚€c‚`Ù*‚4567’8
!FMQ$#$# $$$!A3.RNQ$PVNPVR$1RQN6V0c,-. ÷øù ?2@A ú ûüýþÿ!#$ %&ú()ñ£¤ ?… ! ! †%‡ ! ˆ‰ ! $Š ! ‹Œ ! Ž 0eÄ@9:*‚ƒ„ ! 0e 3ã 4#$$ ##

wx
#!
G²÷øù
?2@A
ú ûüýÅ¥!#$þÿ%&$
£¤%&ú¥„()ñ
!B2
Z^—˜
)
¦»§ûüý

C%&¨á§
B2
ô·Kc½³m†ÚPQ
*
ûüý$D § 5 D Y±M^)$
C!l$}¼P: ( %&¨á (B2 ô·Kc½³m†ÚPQ * ú ûüý$
$D Y±M^)$
CN3·
(
3³
(
3ؐ5K¡¼E…gPQ-.丁»
F
)
ûüý$%&¨á>¥„ B2 ô·Ú¦»$£÷ï
$5c5f$)%c#5f*
ú ûüý$\]Y±M^)$
!l$}¼ P: ( %&¨á„ B2 Z^—˜ÆŠ * ú ûüý$
$N3·K$ X$3³K )# S-.N0 g$
5K
#u
à主F
$N3c$$P ·$
$%&¨áK (c$ X-D
g
$B2 ¡·™=K )%c%5$ .X-X
g
)
“)B8
?2@A
ú ûüýÚ¦»šgF#$% &þÿ!$
ÂAQ®ø
D
?
5 D
!Å¥
)

yz{
#!
#$
*
%&þÿ!
*
ú ûüý
*
()ñ
7585+1F402<180-,F+F,.910.8<89528,02F<-/<15,2Q@R(:,015+F/01
D:JVN3PVR
!
$W2GKM3PM0X$ B`UNR0$?2;I?MN$ !FB$*# I#56$66/0-<6,/C$%*&A/6*#1$ K$*(# 4#$$#$ 7.$#* +@:8/1+F/,!FPS-VXP Y,RQM3VL ,VQONdRON-0 -ZR,$/R,NT !B2 R,,V.VQRON-0 *MSMYOVTNMT+FPM,-.LRSNY-0 OMYO*RY,RSNMT -VON0 OPMZQRY] R0T OPMSMR,O-S*NOP ,MQTS6*MNXPO!K? R0T
B2,-0OM0ORYMdRQVRON-0 N0TM7MY+FPM,VQOVSM.MTNV.$K?R0T B2,-0OM0O*MSM,-.LRSMT N0 DR0T 5 D*-S]N0Xd-QV.MY-Z^N-SM3 R,O-S+FPM-SOP-X-0RQOMYO*NOP .RN0 R,O-SY-ZN0-,VQRON-0 R.-V0O$ YLMMT R0T R0XQM-ZS-ORON-0 *RYTMdMQ-LMT O-ZN0T OPM-LON.RQ,-.^N3
0RON-0$N0 D*-S]N0Xd-QV.M-Z^N-SMR,O-S+K?-ZOPM,MQXS-*OP R0T OPMB2,-0OM0ON0 ^N-SMR,O-S*MSMPNXPMSOPR0 OP-YM-ZOPMYPR]3 MS^6$5+5f R0T )%+#5f SMYLM,ONdMQ6+:0 ^N-SMR,O-S$OPMT60R.N,,PR0XMY-ZMQM.M0OYN0 OPMZQVNT ,VQOVSM$OPMTS6*MNXPO-ZOPM,MQ
XS-*OP R0T OPMB2,-0OM0ON0 DR0T 5 D*-S]N0Xd-QV.MY*MSMYN.NQRS+:0-,VQRON-0 -Z$X$S-ORON-0RQYLMMT -Z)# S-.N0
g
$R0T R03 XQM-Z# u*RYOPM-LON.RQ,-.^N0RON-0$ R0T OPM,MQ^N-.RYY-Z(+$X-D g R0T OPMB2,-0OM0O-Z)%+%5$ .X-X
g
*MSMR,PNMdMT
RZOMS $$P ,VQONdRON-0 N0 D*-S]N0Xd-QV.M-Z^N-SMR,O-S+?2@A[N-SMR,O-SNY.-SMYVNOR^QMOPR0 ZQRY]YZ-SOPMREB*C/#$%* ,MQYVY3 LM0YN-0 ,VQOVSM$ R0T ,VQOVSMLRSR.MOMSY,R0 ^MR,PNMdMT ZS-. DO-5 DR.LQNZN,RON-0+ +c5> P01.8,!Q-_VRO* ,MQYVYLM0YN-0 ,VQOVSM* ^N-SMR,O-S* VSY-QN,R,NT .0,#!&T%`dDFNF**&!#&! !! #$ÓàW[$, $ ¹ôBLñzú ×Ø  ¡ $ Á$C()ñ !B2 KÕց,²Ù™ $B2 †B}Ï_ +, $ }݌ +), $ }~ +4, $ Äž¿À +&, $ ÔO7 +5, zteú ×Ø $ àáցA,§_ Àà³D ) –X B2 WXÕÖCÙx§#$ÓK³ D $ WXóô„¥¦ÃüÄO ( ğ ( ÙÛ£ziœ -4(#- )$5 x 5 y Þ &$ ßÞ ( | @-Qc&$$ ;-+( 9R6$)$5
nC
+#,
)
@æ´ %&þÿ!()WX#$( )ñ†Bô·š£$
âQ%ú2šÙFú°×
Ø;ց_F 
$c|™ùWXš½»˜zR @ +%3, ) »]$
ž›#$%&þÿ%&ìâQ²› |c#$%&ú
B2
èâȏ£¤
)
”B
) $$œ3,²´ ³mæ%&þÿ! £¤ $ žÁB3=®øïYG_ $ œ=þ\èü®Q ;£¤YÐ +(3, ) ÕÖ»ËK[à´ %&M^Û ¥s›E8 $ ñS»{”Çºü›gº´ %& ú ûüý£l§ü² +), ) –X´ %&þÿ!ûüýœG²Nú  lvÁ $ ÕÖBÂÃù ( ”Lù ( rXù ( 3rù $ w BR^ç $ Qà_:Y\ÙÌ +4, ) ?2@A ú û üýàˆx÷ø2½%&!ú ûüý $ Û W[ú lvÁ†B4F¥ù0§£Ÿ ( Wϟ !£ ( sÔ£Ÿuù×zRç +&, ) Û^Œ›”~< ÂR_#$%&þÿ!Mì $ E…ì%&ü÷ø ùú ûüý$!ö $ C|K|c#$% &þÿ!³[î¼à_ú()ñ´bŒ¢ ) !M €D’¥¦ !\!M Œà ! R_#$ !R,$/6,1* B*C/#$%* Dc$<br,VQONdRS&aPR-\P-0X# %&þÿ!Mì $ ºŒ~ Ο‚@´ £¤S×°Â¥|ÎPÔà ) !\M ¦»§÷øùú ûüý$#$þÿ%&! : ! #$þÿ%&™åü¦»§÷øùú  ûüý$³m%&! $ !:K #)5$ D ³Õ» $ $ §l·K $$ .D$ N3·K &$ X-D g $ ¥åù ¦Î3³K 4$ S-.N0 g $ 05 ) q* ú ûüý $ $ Y±M^K D$ N3·K &$ X-D g $ 3س5 K )$ S-.N0 g $ 3ؐ5K u$ AÏ! )5f$ 05 ) q) !\]M %&ú¥· ! !€Dæ‚·Ë $ Ÿu“ L $ ²‚\¶¨“u $ abØá $5$ q Ĩ?Bá K%&¨á ) !\%M %&$()ñô·ab ! ¨c%&£Å ÙJ $(5f }QédWX $ £ŸlÆöeab $ ½¾ Œà¡Š$%äà,à¤b£¤¯ $ V< $%&)3 )$))$) !\#M %&!l$}¼ô·ab ! %&!l $ ; ab¬¨ & $f 7˧%%‰½¾ I[=F 5%)3)$$ !
å4b¦
$%&!l$]
!C$† !b$
‘
!Ç
!9X$™ !HM$
È
!90$É !a0 ô·ab¥¦¬ ¨ &$f 7˧%HBmB½¾
;W=F#54 t
) $$ÊÈ ( “)„à$F¡}¼ab ! U-P Fzù?Mlk™e¦ $ abný # U-PFzù ?Mlk™en @RSNR0 %$tA8) !\`M ú ûüý„\]Y±M^ !$5 D %&! ! G²÷øùú ûüý !?2@A)=$$
@²U
”AÅË8

þÿ!#$%&$
UFÁ[€Ø¹
²  á 8 Ÿ u % & ! Ë
! <[ $$)D$3$4$ <[$$ $D$3$4$
Y±M^™åà
$5 D) AÏ! )5f$
05â
) q$N3·K &$ X$3س5K )$ S-.N0
g
$3ؐ5K u$
]1²µlH™
$™ ¨™5K &$$Q7) { ) T ¹²%&!Ëý©è Np³mŸuXŒ ( HD ) !Š=K T) ûü ýì[½s“ÌpZp ) p ! ûüýì[ HNXc!FPM,-0ZNXVSRON-0 -ZOPM?2@A^N-SMR,O-SY6YOM. !\$M ú ûüý$E…gPQ
!
G²Y±
M^K
D
Ÿu%&!Ë
!<[ $$)D$3$4$ C N3· ( 3³ ( 3ؐ5K¡¼ $ {r¡¼w 4 “O E…gPQ $ ZB ) ÁÙ!:] !\`$ N3 c!$$ P
·$) í/N3%&!ù×K # {$$.D N3· X$LJ#c $$U>95 4$ X-D g $ 05 ) q$ µl &$$ Q7$¥åù¦Î3³ 4$ S-
.N0
g
$§l· 4$ .D=
L»
!)5$.D$98
!l
$~¾ ;22$c5 .X-D
g
$! # T) B ! gPQ¡¼“OB FR^QM!HR,O-SYR0T QMdMQY-Z-SOP-X-0RQM7LMSN.M0OY “O 2 N3· =X-D g A 3³ =S-.N0 g 7 3ؐ5 =u &$ $& ) #$ #
4 $)# -&(#- 书李惠华等：波浪式ＷＡＶＥ生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究 １８　数据分析　每个处理设３次生物学重复，试验 数据采用ＳＰＳＳ１８软件进行方差分析，采用邓肯新 复极差法（Ｄｕｎｃａｎ′ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｍｅｔｈｏｄ），表示为 ３次重复的平均值±标准差（珋ｘ±ｓ）。 ２　结果与分析 ２１　三角锥形瓶与生物反应器中细胞的生长及ＵＡ 含量变化　以同样的接种浓度，枇杷悬浮细胞在波浪 式生物反应器和摇瓶中分别培养至细胞由嫩黄色转 为灰白色时收获，见图２。在摇瓶中细胞经过２ｄ的 延迟期，第２～１６天处于对数生长期，第１８天细胞的 生长达到峰值，之后开始进入平台期，第２２天收获。 在反应器中没有明显的延迟期，细胞逐渐进入快速生 长，第１４天到达峰值，之后开始进入平台期，第１８天 收获。在生物反应器中的生长周期快于摇瓶中，以收 获时计算，反应器（１８ｄ）和摇瓶（２２ｄ）中细胞干重的 绝对生长速率分别是０２３３，０１１４ｇ·ｄ－１。 不同字母表示差异显著，Ｐ＜０．０５（图４，５同）。 图２　摇瓶和反应器中细胞的生长 Ｆｉｇ２　ＣｅｌｇｒｏｗｔｈｉｎｓｈａｋｅｆｌａｓｋｓａｎｄｉｎＷＡＶＥｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ 在波浪式生物反应器和摇瓶中，枇杷悬浮细胞 合成 ＵＡ的情况见图３。ＵＡ的合成都经过先下降 再上升的过程，摇瓶中下降的时间长于反应器中，收 获时两者 ＵＡ的量均达到最高值，分别为 ２３０３２， ２９４ｍｇ·ｇ－１。反应器中细胞的干重增长及 ＵＡ含 量比摇瓶中高出了１０５５％，２７６５％。 ２２　工作体积为１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋营 养代谢　植物细胞悬浮培养是细胞在人为调控的状 态下微生物化地生长，其生长状态与培养液的成份 密切相关，对生物反应器中１Ｌ和５Ｌ不同的工作 体积下，１个培养周期中，培养液中氮（Ｎ），Ｐ，Ｋ， Ｃａ，Ｍｇ，Ｚｎ，Ｆｅ，Ｍｎ元素的动态消耗情况进行了测 定，在溶氧率２５％，温度２８℃，接种量为４０ｇ，转动 　　　　 图３　摇瓶和反应器中ＵＡ的合成 Ｆｉｇ３　ＵＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｓｈａｋｅｆｌａｓｋｓａｎｄｉｎＷＡＶＥｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ 速度为２０ｒ·ｍｉｎ－１，转动角度为８°，外部用白炽灯 补光，光照强度为４００ｌｘ的培养条件下，不同工作体 积１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋主要元素代谢情况 见表２。 表２中显示接种量为４０ｇ·Ｌ－１，不同培养袋 中不同工作体积（１，５Ｌ）下，营养液中元素的消耗 情况。大量元素Ｎ，Ｐ，Ｋ，微量元素 Ｃａ，Ｍｇ，Ｚｎ，Ｆｅ， Ｍｎ的消耗趋势基本相似。在１８ｄ的培养周期中， 随着培养时间的增加，与对照相比，各元素的含量逐 渐减少，减少的幅度基本相同，其中Ｐ，Ｍｇ的变化较 为特殊，在培养的初期 Ｐ元素的含量下降迅速，在 第６天，已经下降到检测下限以下，表明Ｐ几乎被消 耗完全，Ｍｇ元素的含量在培养的早期和中期变化缓 和，但在末期（第１６，１８天）下降迅速。５Ｌ工作体 积下，Ｍｇ元素的质量浓度第１８天降到７８３ｍｇ· Ｌ－１，仅为对照的２２８％，１Ｌ工作体积下也出现相 同的趋势，第１８天仅为对照的２０７％。 ２３　工作体积为１Ｌ和５Ｌ的细胞干重及ＵＡ含量 的变化　在溶氧率２５％，温度２８℃，接种量为４０ｇ ·Ｌ－１，转动速度为２０ｒ·ｍｉｎ－１，转动角度为８°，外 部用白炽灯补光，光照强度为４００ｌｘ的培养条件下， 不同工作体积１Ｌ和５Ｌ的无菌细胞培养袋中细胞 干重及ＵＡ含量的变化情况见图４，５。 图４中显示生物反应器中不同工作体积（１，５ Ｌ）下，干重变化趋势基本一致，均出现了先小幅上 升（第０～２天）后快速上升（第２～１４天）之后缓慢 下降（第 １４～１８天）的趋势。在干重变化的数据 中，除了第４天和第１４天工作体积５Ｌ的干重显著 高于工作体积１Ｌ的干重，其他时间点的数据工作 体积１Ｌ与５Ｌ均不存在显著性差异。 图５中显示生物反应器中不同工作体积（１，５ ·５９６１· )$5
x
5
y Þ
&$ßÞ ( | @-Qc&$$;-+( 9R6$ )$5 !!!! B )! ú ûüý$
D
§
5 D
\]Y±M^)!l$ÕÖ}¼P:—˜
FR^QM)!FPM.RN0 MQM.M0OY.MOR^-QNY.V0TMS DR0T 5 DTNZMSM0O*-S]N0Xd-QV.MYN0 ?2@A^N-SMR,O-S .X-D
g
ûüý
ûüO8
=T
; C b †¨
! 4#c5
l%c#4
R
4#c4
l$c() R %5c%( l4c%4 R$5c
lc$# R 4&c& l$c&5
R
c%#
l$c$)
R
&c5
l$c$&
R
&c%4
l$c$)
R
5 D ) )5%c
l$c# , #c) l$c4
^
%4c)^
l)c(4
,
$&c55 l$c(
R^
4$c l$c5
^
c&4
l$c$&
,
&c#)
l$c$)
^
&c#&
l$c$&
^
& ) $$c l)c)& M 5c&% l$c)5 , #(%c l4c$& ^, $)c44 lc&( ^, 4$c4& l$c$5 ,T c)% l$c$& M &c&( l$c$) ,T &c5% l$c$4 , # &&c&4 l)c#5 Z j$c$5 #(c) l5c4 ,TM$$ c%
l)c4)
,T
4$c)& l$c)
T
c
l$c$5
Z
&c)(
l$c$
TMZ
&c5)
l$c$#
T
c4#
lc%4
XP
j$c$5 ##%
l4c5%
TMZ
(%c&5
l)c&
MZ
)(c4
l$c M$c(
l$c$
X
&c44
l$c$5
,TM
&c5
l$c$4
T
$5c&( l$c#
P
j$c$5 ##%c
l(c5
TMZ
(%c)
l$c&# MZ )c)5 l$c)
Z
$c l$c$& P &c# l$c$MZ &c&( l$c$& M ) ()c5 lc&5 N j$c$5 #5#c& l4c5 Z (&c l$c%
ZX
)#c4
l$c% X$c%%
l$c$)
N
&c
l$c$#
X
&c&
l$c$&
M
& 5%c)#
l$c) / j$c$5 #&%c44 lc#%Z X ()c# l$c5(
XP
)4c)
l$c# P$c#)
l$c$)
]
4c(
l$c$4
X
&c44
l$c$4
Z
# )c45
l$c$
]
j$c$5 #)c4#
l$c&5 X #c4 l$c%
N
4c##
l$c N$c5(
l$c$)
Q
4c#
l$c$)
P
&c4
l$c$4
X
c)%
l$c$
]
j$c$5 #)c(5
l4$c44 X #c5 l$c4&
N
%c4
l$c) /$c5&
l$c$)
.
4c5
l$c$)
P
&c$l$c$4 P D ) )# l)c#4 ^ #c45 l$c&
^
%)c)&
l4c%)
^
$&c)5 lc)4 R^ 4c$5
l$c ^ c5( l$c$4 ^ &c# l$c$) ^ &c#( l$c$4 ^ & )(c$
lc#&
T
5c#&
l$c$(
,
%$$c)(
l%c(4
^,
$c4
lc5
,T
4$c((
l$c&&
^,T
c4)
l$c$&
T
&c5
l$c$5
,T
&c#5
l$c$
,
# &#c(#
l&
Z
j$c$5 #(5c)
l)c44
^,T
((c$
l)c4%
TM
4c$
l$c&4
^,
c))
l$c$4
M
&c44
l$c$%
,T
&c##
l$c$#
T
)c##
lc&
X
j$c$5 ##c5
l)4c
MZ
(%c$)
l$c5#
MZ
)(c#5
l$c)#
M
c$
l$c$5
X
&c4
l$c$)
,
&c#4
l$c$
T
$ (c4
lc)(
XP
j$c$5 ##c$4
l$c(
MZ
(#c(#
lc5
MZ
)c5&
l$c&
Z
$c4
l$c$4
P
&c)
l$c$4
Z
&c&5
l$c$&
M
) (4c45
lc4(
N
j$c$5 #5$c&
l4c$#
ZX
(&c&5
l4c)%
XP
)#c&5
l$c$&
X
$c%#
l$c$)
N
&c4
l$c$
X
&c4(
l$c$&
M
& #$c#
l$c)4
/
j$c$5 #&c4)
l)5c54
ZX
()c$4
l$c#
P
)4c5&
l$c
P
$c#5
l$c$)
/
4c(4
l$c$4
X
&c4)
l$c$)
Z
# ))c5%
l$c%
]
j$c$5 #))c#
l(c&&
X
#c)5
l$c&4
N
)c((
l$c4
N
$c#
l$c$
]Q
4c%
l$c$)
P
&c$(
l$c$5
X
(c4
l$c
]
j$c$5 #)c)4
lc&#
X
#c)
l$c
N
%c)
l$c45
/
$c54
l$c$)
.
4c##
l$c$
P
&c$5
X
l$c$
P
!!
j
#
][T\]ñëB·;<جa
!!j$c$5)
p
&!
ûüý\]Y±M^%&ú¥
HNXc&!V.M
p
5!
ûüý\]Y±M^
B2
Z^
HNXc5!B2LS-TV,ON-0 N0 ?2@A^N-SMR,O-S-ZTNZMSM0O*-S]N0X
d-QV.M
3?làå›%&‚³ú¥|
$»O B2 ô· Û£$
N3Kc%&Br8¬gü|
!
Þ
) e&
Š
$ìÞ & ŠE/ B2 ô·UVL£$
üÞ
# e

Š%&¨áõ_¬·%&ú¥å›OP|
$»O B2 ô·â?¢Lx ) üõ_=ú$
$- ïÞ & ŠY±M^ 5 D  B2 ô·¬a£›Y±M ^ D  B2 ô·$
ÁÙO8ç=úY±M^
D
’
5 D
*\Ãü¬aØ;<
) B2
ô·õ_?@
ŒÛ[±
)
tK
$ú ûüý\]Y±M^ !$5 D
\]!
Ë

¨á§
B2
ô·õ_?@ŒÛ[±
)
\%M4
¡¼
4
“OgPQ
!
üAÏ!
)5f$05 ) q$
]1²µlH™
$™¨™5K &$$Q7 ! :)$
†ú ûüý$Y±M^K D ÕÖ !¬=N3· ( 3³ ( 3ؐ5E… 4 ¡¼ 4 “O gPQ$
ZB
4)
ìæ;™šQÖ
$Ct B2! >¾%&¨á n ()ñô· KÜb¡?$
\]¡¼“OH™
#
2
4
h2

h2
)
$A 4 hA ) hA$7
)
h7
4
h7

$4 r¡¼ æ;¥:)gK @ [ h@ < h@ 2$
ÎÏ#$þÿ%& -#(#- Žàfz # ÷øù ?2@A ú ûüýþÿ!#$%&ú()ñ£¤
!!
B
4!
gPQ“)
FR^QM4!>MYVQO-Z-SOP-X-0RQOMYOY
;-c
2
N3·
=X
A
3³
=S-.N0
g
7
5
=u
t
B2
·
=.X
·$O%& õö &$ $& g)4c#54 Φö ) &$ # 5c5&&
꼚
4 &$)# ((c$#)
꼚
& # # g(c$Φö$
êôσ6
5 #$#$c%)#
꼚
# #$)# & %c&5 ͺö %$ $&c(5 ͺö$ & g#$c Φö ($ )# # 4##c#
꼚
!!
j
#
N3c
$$P ·$ * æ; @ 2 c%c&)(* æ; @ [ c%$c5((* æ; @ < c&4c) $()ñô·¡¼áÖ؀gK3³ h 5 h N 3· ) ¡1üPQGȁST8 $ 丁PQ¥q K 2 4 A 4 7 ) $ ¢KÞ ( »PQ $ N3·K $ X$ 3³K )# S-.N0 g $ 5K #u) N3c$$ P
·
»O
%&¨áK
(c$X-D g$B2
¡·™=
)%c%5$.X-X g ) ]M ´˜ ]\!MC$;$9X Q%àÎÏ#$%&!„
B2
Z^
ÕÖ}¼
!
üú ûüý\]Y±M^
!$5 D )$
#$%&þÿ!æ‘$
$w}¼õ_?@ Ɗ$
B8ü\]M^)
$!l$( ¡¶
·ÆŠ
$S-?}¼õ_¼½âQCüN)6 ³[îÅ¥æ‘$ƒW·±²
)
ÂA¥·}¼
C$;$9X
õ_ÛÁÙ¤a}¼ë÷
$C oŽ³5 ä‚$
ü%&†=ú¥|$| ! Þ & e# Š ”o Žè¤aæ) ) Þ ŠKX ; )€³!ۂ ) 9X oŽ³5ü%&ú¥OP| ! Þ # e Š ä‚$
»O
B2
ô·Z^ä¥
)
²º»
$ˆÐ$
¿1š›%&þÿ!$qlø C$;
oŽÛ‚
$A’%&ú ·§€úP: ·B[b Ãì +53#, ) C$;
}¼’%&™DFÙÇìÁj
$ü#$%&ú¥¡|X|„†=ú¥|$|$C$; }¼àÀ^欒ï%&%·¾G§%&B C™D = 1 9X ù?à´ M8œ3/±ûüSõ ׁ$
ü%&ú¥OP|
!
Þ
# e
Š
$9X } ¼ô·²³o‡àÀQ%’%&—x$ФSÊ
„×ØÏP:ûüBÇ;Ö³[îPQ¹8
)
|
cQC£¤ü#$%&þÿ!\]YÐgOg ·FHX C$;$9X }¼$
]OâüìñFÜÈ}¼
K8*‘
$C|QCo‡¡}¼oŽÑ)1†% &ú¥„€ú ¡Z^C ) o][¥C$
´ %&þÿ!3?l;Ö
¥|¡|ØÎP
$ÍslÙ3?lõ<$
¹€ú 
¡FÙ%Ÿ)€
$Rž3?lCú¥ÔÃâ àY;ñS ) X9A%&Ã㛟]!Œ$
$üû@®Q;¦Î$
5 q
ÔÃ
#
ry
$%&Ã× !$$f +%, ) üÛ£¤$
C$; Q%àÎÏ#$%
&!ÕÖ}¼
$QCì!l$‡3
C$; } ¼$
@æ(èâ„!MÁèf³m#$% &þÿì3?lCú¥Ô㤠) ]\M?2@A ú ûüýÚÛgF#$þÿ%&!

!
üÁٔBú ûüýÅ¥!£¤
ú ûüý$%&ú¥„€úP: FÙ% Ÿ¥¥Â›¦»Mì +3(, ) lj ) D ÂÃùú û üýþÿ!“ëËÌ%&£¤B8$
õõŸ
¹%&EËM™D
$¹ûüý$%&ú¥:C
$º­ ·€Â$
¦»$%&„º­·Úûüý£÷ &$c5f$&%c5f$
³¡Q%àú ûüý$õM Ÿ ( @”ù˜ ( ™H úXY +)$,
)
MN†%&
!áh
$–X%oý2½%&ú ûüým£l$?2@A
±K2½÷øùú ûüýG²
à0§£Ÿ÷ø4Fù
$]Nϔ¢$
\¡„ÂÃ
Ò
$’W[ÂÃùlvÁÆÚ$
ÚÛgF´ %&
!
+&,
)
ÛPQ$G² ?2@A ú ûüý³m#$%&þÿ!
$ûüý$%&¨á>¥„
B2
ô·Ú¦»$£÷ï$5c5f$)%c#5f$
Aûüý
5 D
Y±M^
$%&ú¥ ( (oŽ„ B2 Z^?@ŒÛ[±$
Yaüûüý$D Y±M ^)S$-!¬=Q%QC>¨ÚÇ6N²›
?2@A
ú ûüýš¥!M^
)
/’
?2@A
ú
 ûüýýÁÙ%&!—˜jµÆŠ
$AQC @æ·$
(
HD®ø¥O8]3%&»8Ÿu!

)
ljü®oú?2@A
ú ûüýœ²›
%&!3?lUÅÅ¥
$üNú „ÓjØ  %&!¥CX-ïۛŸ) +&$)3)4,
) ?2@A
ú ûüý½<
5 $$=$$ $Y±M^¢ 5$$D$
Q
C6N²›£Ix´ %&þÿ!
)
|c
$g F›´ ú ûüý£l@õ+MNo[»Ë {” ! ´ þÿ!%&ú€úP: èâ -%(#- )$5 x 5 y Þ &$ ßÞ ( | @-Qc&$$ ;-+( 9R6$ )$5 ȏ£¤b8ï $ !%&BŸ€úP:  ô·ÂA\Éb ñS1úëýس… $ 1O @æ´ %&þÿ!WX€ú ¡YG_ú -†Bû2Ødð ) %M “˜ ?2@A ú ûüýÚ¦»šgF#$%&þ ÿ! $ ÂAQ®ø D ? 5 D !Å¥ ) ú  ûüý$ $ N3·K $ X$ 3³K )# S-.N0 g $ 5 K #u K¸ ) |k?} # + ,!FYRN8 U$ WN0 9<+20ON-7NTRONdMR0T R0ON3N0ZQR..RO-S6LS-OM,3
ON-0 -Z-QMR0-QN,R,NT R0T VSY-QN,R,NT N0 C<) ,MQY+U,+UH--T
8,N$)$$$ %4!%#J%&+
+ ) ,!9R,PRT-KI$ ;MNY@[$ [RQM0 IG$ MORQ+20ONTMLSMYYR0O3QN]M
MZM,O-ZVSY-QN,R,NT NY-QROMT ZS-.@/5(*,$#5/0$%$#*&$5D+N0
.N,M#MdNTM0,MZ-SOPMN0d-QdM.M0O-ZOPMT-LR.N0MSXN,Y6YOM.
+U,+CPRS.R,-Q[N-,PM.[MPRd$ )$)$ $4!)#)$&+
+ 4 ,!WBWR037NR$ IBaPM03QV0$ W:;UNR0X3QN0$ MORQ+BSY-QN,R,NT
N0TV,MYPV.R0 PMLRO-.R,MQQN0M899<3%%) RL-LO-YNYdNRL543
TMLM0TM0OLROP*R6+U,++ & ,!UR0X8 9$WMM8 F$QVQRSN..V0MY6YOM.R0T LR0,SMRON,^ MOR3,MQZV0,ON-0 N0 YOSMLO-3
\-O-,N03N0TV,MT TNR^MON,.N,MZMT RPNXP3ZROTNMO+U,+:0ON..V0-
CPRS.R<-Q$)$$($ (!#4+
+ 5 ,!DV U$aPM0XWD$ ?V K9$MORQ+BSY-QN,R,NT R.MQN-SROMY,-X3 0NON-0 TMZN,NOYR0T ROM0VROMY-7NTRONdMTR.RXMN0 OPM^ SRN0 -ZYM3 0MY,M0O.N,MN0TV,MT ^6=3XRQR,O-YM+U,+[N-,PM.CPRS.R,-Q$
) $$%$ %&!%#$%+ + # ,!J-JW$ DNR0XbW$ DN0 ?<$ MORQ+>MXVQRON-0 R0T N.LS-dM3 .M0O-ZOSNOMSLM0MZ-S.RON-0 N0 LQR0O,VQOVSMT ,MQY-ZR,$/6,1*<brB*C/#$%* DN0TQ+U,+U[N-Y,N[N-M0X$ )$$ !5#5+
+ % ,!
‡â
$_ý$
™É
+
ì#$Ó$™ùWX()ñ£¤³…
+U,+
23YQ¥j
$)$$)(!##5$+
+ ,!8PNP <<$ R,$/6,1* B*C/#$%* SMXVQROMYOPMTNR^MON,R0T P6LMSQNLNTM.N,YNX0<br-ZPNXP3ZRO3ZMT .N,M+U,+9-QM,VQMY$ )$4$ #)%)#+
+ ( ,!8.MOR0Y]R:+CS-TV,ON-0 -ZYM,-0TRS6.MOR^-QNOMYVYN0XLQR0O,MQ
,VQOVSMY+U,+2Td[N-,PM.A0X[N-OM,P0-Q$)$ $$#%+ +$,!@MSL--SOM>$ <-0ON0 2$ 9M.MQN0] U+[N-OM,P0-Q-X6Z-SOPMLS-3 TV,ON-0 -ZLQR0OYM,-0TRS6.MOR^-QNOMY+U,+CP6O-,PM. >Md$ )$$ )$#4+ +,! Ž^˜$
á û
$»Ôî$
z
+
,²´ %&þÿ!£¤³
…
+U,+
h2åB&(
$)$$4!#))+ +),! ¥^$
€’Ô
+8
+
´ %&þÿ!ÎÏ¡?£¤
+U,+
ú ()@j
$)$$5!5#+ +4,! [‘8$
¯Õä
+
´ ú ûüý%&þÿ!£¤³…
+U,+
93åB¥j
$)$$&$)!&#$+ +&,!>RdM0 ;$ >RY,PM8$bVMP0 <+MORQ+8,RQMT3VL .R0VZR,OVSN0X -ZSM,-.^N0R0OR0ON^-TNMYLS-TV,MT ^6LQR0O,MQYN0 R)$$3D-S3 ^NORQ63YPR]M0 TNYL-YR^QM^N-SMR,O-S+U,+[N-OM,P0-Q[N-M0X$
)$5$ )!)#4$+ +5,! ‘f$
ö]Ã
$(¾$
z
+
Å¥!†²º»%&þÿ!
ÎÏ
+U,+
Š‹ £¤’El
$)$$%!(#(4(+ +#,! ч$
}|³
$´.¨ + þÿ!æ‘$U
(
c
(
]H¾†9
¥ñÉÖ%&ú¥Îρ£¤
+U,+
$ó,$) $$)$44!# )+ +%,![-NYY-0 29$ I-VOA$ [QNX06>$ MORQ+2YN.LQMR0T MZN,NM0O .MOP-T Z-SOPMQ-0X3OMS.LSMYMSdRON-0 -ZLQR0O,MQYVYLM0YN-0 ,VQ3 OVSMY+U,+CQR0O9MOP-TY$ )$)$ #&+ +,! ! $ £^æ $ ×éé $ z + ,²´ %&þÿ!£¤³ … +U,+ $%$,-. $)$)$4%!)#$+ +(,! £é $ ãÀp $ ºw  + ,²´ %&þÿ!Mìú 3_ £¤³… +U,+ ,qR’£¤ $)$4$4!4###+ +)$,! ºò $ _J $ Ø5O $ z + ÂÃùú ûüýþÿ!“ë ËÌ%&£¤ +U,+ ú Y‘j $)$$ $%!5#5#+ +),! Ùû$
!+
+?2@A
ú ûüýüú àú$ü² +U,+$%ú à-.
$)$$($))!)#)5&+
+)),!
Ùû
$_ъ$
!+
$z +?2@A ú ûüýG @MS- %&} ½È#’×Ó´ +U,+$%ú à-.
$)$)$)5!)# 4&+ +)4,! ™~$
ڍe
+?2@A
F9
ú ûüý=j!ú3?%
&El§ü²
+U,+
ú Y‘j
$)$)$)!4#45+

~-0
!
€‚
#
-(#-