全 文 ：ＨＰＬＣ同时测定前胡中３种香豆素成分的含量
吴文玲，陈佳佳，刘守金，俞年军，方成武，张庆庆
（安徽中医学院 药学院 安徽现代中药重点实验室，安徽 合肥 ２３００３１）
［摘要］　目的：建立了用ＨＰＬＣ法对前胡药材中白花前胡甲素、乙素和Ｅ素同时定量的方法。方法：高效液相色谱法，色
谱柱ＡｇｉｌｅｎｔＴＣＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇水（７５∶２５）；检测波长３２１ｎｍ；柱温３０℃；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ
－１；进
样量２０μＬ。结果：白花前胡甲素、乙素和 Ｅ素的浓度与峰面积，分别在３２０～２８８０μｇ（ｒ＝０９９９９），１６０～１４４０μｇ（ｒ＝
０９９９５），１６４～１４７６μｇ（ｒ＝０９９９４）呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为９８９２％，９９６６％，９９７２％，ＲＳＤ分别为
１６％，１５％，１４％。结论：不同产地前胡所含的香豆素成分含量存在一定的差异，安徽宁国和祈门的前胡中白花前胡甲素含
量高于药典的规定，且这３种香豆素含量明显高于其他２个产区。该法适合同时测定前胡样品中３种香豆素成分的含量，分
离度好，快速，简便，重现性好。
［关键词］　前胡；白花前胡甲素；白花前胡乙素；前胡Ｅ素；高效液相色谱法
［收稿日期］　２００８１２２３
［基金项目］　安徽省教育厅自然基金重点课题（２００６ＫＪ０９６Ａ）；美国
许氏基金会项目
［通信作者］　刘守金，Ｔｅｌ：（０５５１）５１６９３０６，Ｅｍａｉｌ：ｓｈｊｉｎｌｉｕ＠ｓｉｎａ．
ｃｏｍ
　　前胡为伞形科植物白花前胡 Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ
ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍＤｕｎｎ的干燥根，具宣散风热、降气化痰
的功效。香豆素类成分是前胡药材的主要成分，其
中含量比较大的有白花前胡甲素（±ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎ
Ａ）、乙素（±ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ）、丙素（＋ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎ
Ａ，ＰｄＩａ）、丁素（＋ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ，ＰｄⅡ）和前胡 Ｅ
素（ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＥ）。在评价前胡药材的质量方面，
徐勤等［１２］建立了 ＧＣ和 ＨＰＬＣ法测定白花前胡中
ＰｄＩａ和 ＰｄⅡ含量的方法；叶文鹏等［３］建立了
ＨＰＬＣ法测定白花前胡中ＰｄＩａ含量的方法；张村［４］
等应用ＨＰＬＣ仪对白花前胡甲素含量的测定方法进
行研究，建立了２００５年版《中国药典》［５］前胡药材
成分含量测定标准。检测单一的化学成分往往难以
全面反映药材的质量，本研究建立同时测定白花前
胡药材中３种香豆素含量的 ＨＰＬＣ方法，为客观评
价前胡药材质量提供科学依据。
１　仪器与试药
ＬＣ２０ＡＢ型高效液相色谱仪，ＳＰＤＭ２０Ａ型紫
外检测器，ＣＢＭ２０Ａ型色谱数据处理仪 （日本）。
甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为娃哈哈
纯净水。白花前胡甲素、乙素、Ｅ素对照品由上海
中药标准化研究中心研制，纯度均大于９９４％。
前胡药材于２００７年１０月份分别采自安徽宁国
龙凤山林场和云梯乡、祁门县和安徽中医学院药用
植物园，经安徽中医学院中药与资源教研室鉴定为
Ｐ．ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍ。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液的制备　分别精密称取白花前胡
甲素、乙素、Ｅ素对照品８０１，４００，４１０ｍｇ，加甲醇
溶解稀释并定溶至 １０ｍＬ量瓶中制成 ０８，０４，
０４１ｇ·Ｌ－１溶液，定容，摇匀，过滤微孔滤膜（０４５
μｍ），即得对照品溶液。
２．２　供试品溶液的制备　精密称定前胡药材粉末
０５ｇ，置具塞锥形瓶中，精确加入三氯甲烷２５ｍＬ，
密塞，称重，超声提取１０ｍｉｎ，放冷，称重，用氯仿补
足失重，摇匀，滤过；精密量取滤液１０ｍＬ，置蒸发皿
中，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容于１０ｍＬ量瓶中，
摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取滤液，即得供
试品溶液。
２．３　色谱条件　ＡｇｉｌｅｎｔＴＣＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为甲醇水（７５∶２５）；检测波
长３２１ｎｍ；柱温３０℃；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量
２０μＬ。在此条件下分别对照品、供试品溶液进行分
析，并对系统使用性参数进行考察，结果这３种香豆
素化合物理论塔板数均高于３０００，分离度均大于
１５（图１）。
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第３４卷第９期
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Ａ．对照品；Ｂ．前胡样品；
１．白花前胡甲素；２．白花前胡乙素；３．白花前胡Ｅ素。
图１　前胡样品的ＨＰＬＣ图谱
２．４　线性关系考察　精密称取白花前胡甲素、乙素
和Ｅ素对照品适量，加甲醇溶解并稀释成含白花前
胡甲素、乙素和Ｅ素分别为１６０，０８０，０８２ｇ·Ｌ－１
的储备液，分别精密量取１０，３０，５０，７０，９０ｍＬ
置１０ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配置成
不同浓度的溶液，分别注入高效液相色谱仪，以进样
量（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标绘制标准曲线，
得到以下回归方程：白花前胡甲素 Ｙ＝２Ｅ＋０７Ｘ＋
４１３１２１，ｒ＝０９９９９（ｎ＝５），线性范围３２０～２８８０
μｇ；白花前胡乙素Ｙ＝２Ｅ＋０７Ｘ＋１３９９９１，ｒ＝０９９９５
（ｎ＝５），线性范围１６０～１４４０μｇ；白花前胡 Ｅ素
Ｙ＝２Ｅ＋０７Ｘ＋２３９４２，ｒ＝０９９９４（ｎ＝５），线性范围
１６４～１４７６μｇ。
２．５　精密度试验　取０２４ｇ·Ｌ－１白花前胡甲素溶
液１ｍＬ，白花前胡乙素质量浓度为０１６ｇ·Ｌ－１的
溶液０５ｍＬ，白花前胡 Ｅ素质量浓度为０１６４ｇ·
Ｌ－１的溶液０５ｍＬ，混合均匀制得对照品溶液，精密
吸取对照品溶液２０μＬ，分别重复进样５次，白花前
胡甲素、乙素、Ｅ素峰面积积分值的 ＲＳＤ分别为
１２％，１３％，１４％。
２．６　稳定性试验　分别精密吸取对照品混合溶液
２０μＬ，分别在０，１，２，４，８，１２，２４ｈ进样，依法测定，
由峰面积积分值统计结果可见样品溶液在２４ｈ内
保持稳定，ＲＳＤ分别为１８％，２０％，１９％，供试液
在２４ｈ内稳定。
２．７　重复性试验　精密称取同一批前胡药材粉末
５份各约０５ｇ，按上述方法分别制成样品溶液，测
定峰面积并计算 ＲＳＤ，白花前胡甲素、乙素、Ｅ素峰
面积的 ＲＳＤ分别为２３％，２３％，２４％，该方法的
重复性较好。
２．８　加样回收率试验　精密称定已知含量的祁门
前胡粉末０２５ｇ，共６份，分别精密加入适量的白花
前胡甲素、乙素、Ｅ素，按供试品溶液制备及测定法
操作，进行色谱分析（表１）。白花前胡甲素、乙素、Ｅ
素的平均加样回收率分别为 ９８９２％，９９６６％，
９９７２％，ＲＳＤ分别为１６％，１５％，１４％（ｎ＝５）。
表１　白花前胡甲素、乙素、Ｅ素的加样回收率（ｎ＝５）
对照品
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
均值
／％
ＲＳＤ
／％
白花前胡甲素 ６２４７ ４８００ １０９０３ ９７０１ ９８９２１６
　 ６２２０ ４８００ １０９２６ ９８０４ 　 　
　 ６２０８ ６４００ １２５３２ ９８８１ 　 　
　 ６２２５ ６４００ １２７２１ １０１５０ 　 　
　 ６４８５ ８０００ １４３４３ ９８２３ 　 　
　 ６２６３ ８０００ １４２６０ ９９９６ 　 　
白花前胡乙素 １２２９ １０００ ２２３８ １００９０ ９９６６１５
　 １２２４ １０００ ２２１１ ９８７２ 　 　
　 １２２２ １２００ ２４１６ ９９５４ 　 　
　 １２２５ １２００ ２４４７ １０１８０ 　 　
　 １２３７ １４００ ２６０７ ９７８６ 　 　
　 １２３２ １４００ ２６２０ ９９１２ 　 　
白花前胡Ｅ素 １７５６ １０００ ２７３６ ９７９７ ９９７２１４
　 １７４９ １０００ ２７４４ ９９４８ 　 　
　 １７４５ １２００ ２９７０ １０２１０ 　 　
　 １７５０ １２００ ２９４９ ９９９０ 　 　
　 １７６７ １４００ ３１６９ １００１０ 　 　
　 １７６１ １４００ ３１４４ ９８７７ 　 　
２．９　含量测定　分别精密吸取前胡样品的供试品
溶液各２０μＬ，注入液相色谱仪，按外标法计算供
试品白花前胡甲素、乙素、Ｅ素的含量 （表２）。
表２　前胡样品中３种香豆素含量 ％
Ｎｏ． 产地
白花前
胡甲素
白花前
胡乙素
白花前
胡Ｅ素
ＮＧ０７１０１５ 安徽宁国甲路　 ２４９ ０４９ ０７０
ＮＧ０７１０２０ 安徽宁国云梯　 １１３ ０３９ ０３５
ＱＭ０７１０１９ 安徽祁门县　　 １０９ ０７９ ０２１
ＺＹ０７１１０１ 　安徽中医学院 ０８１ ０２１ ０１３
　 东区药用植物园 　 　 　
ＺＹ０７１１０３ 　安徽中医学院 ０７０ ０６８ ０１４
　 西区药用植物园 　 　 　
３　讨论
白花前胡甲素（±ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ）和丙素（＋
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ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ）、白花前胡乙素（±ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ）和
丁素（＋ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ）是２对旋光异构体，应用反
相高效液相色谱柱不能将它们分开。因此，测定的
白花前胡甲素含量，实际上是白花前胡甲素和丙素
混合成分，同样，测定白花前胡乙素含量也含有丁
素。在药典的基础上，本研究对３种香豆素成分同
时进行含量测定，为客观评价前胡药材的质量提供
依据。
本研究主要目的是建立 ＨＰＬＣ同时测定前胡３
种香豆素成分含量的方法。前胡样品仅采集于安徽
省，但测定结果显示，安徽宁国和祈门的前胡中白花
前胡甲素含量高于《中国药典》的规定，而长江以北
合肥市栽种的前胡中白花前胡甲素低于药典规定，
并且白花前胡乙素和前胡 Ｅ素的含量明显低于宁
国和祈门县产的前胡，表明不同产地前胡所含的香
豆素成分含量存在一定的差异。结果是否具有普遍
性，还有待于进一步研究。
［参考文献］
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素和紫花前胡中紫花前胡苷的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２００１，
２１（２）：９１．
［２］　李　意，杨　智，姚念环，等．白花前胡根中白花前胡丙素的分
离鉴定及其有效成分含量的 ＨＰＬＣ分析［Ｊ］．中草药，１９９９，３０
（８）：５７５．
［３］　叶文鹏，刘俊亭，李延兵，等．反相ＨＰＬＣ法测定白花前胡根中
ＰｄＩａ的含量［Ｊ］．理化检验·化学分册，２００２，３８（６）：２９９．
［４］　张　村，李　丽，耿立冬．白花前胡质量标准研究［Ｊ］．中国中
药杂志，２００５，３０（３）：１７７．
［５］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：１８７．
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｃｏｕｍａｒｉｎｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｒｏｏｔｓｏｆ
ＰｅｕｃｅｄａｎｕｍｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＷＵＷｅｎｌｉｎｇ，ＣＨＥＮＪｉａｊｉａ，ＬＩＵＳｈｏｕｊｉｎ，ＹＵＮｉａｎｊｕｎ，ＦＡＮＧＣｈｅｎｇｗｕ，ＺＨＡＮＧＱｉｎｇｑｉｎｇ
（ＡｎｈｕｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｄｅｒｎｉｚｅｄＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａｌ，ＡｎｈｕｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｆｅｉ２３００３１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｒｅｓｅｒｖｅｄｐｈａｓｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ，ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ，
ｑｉａｎｈｕｃｏｕｍａｒｉｎＥｉｎｒｏｏｔｓｏｆＰｅｕｃｅｄａｎｕｍｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡｇｉｌｅｎｔＴＣＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗａｓｕｓｅｄａｔ
３０℃ ｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ（７５∶２５）．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓｓｅｔａｔ０８ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ３２１
ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ３２０２８８０μｇｆｏｒ±ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ（ｒ＝０９９９９，ｎ＝５），１６０１４４０ｇｆｏｒｐｒａｅｒｕｐ
ｔｏｒｉｎＢ（ｒ＝０９９９５，ｎ＝５）ａｎｄ１６４１４７６ｇｆｏｒｑｉａｎｈｕｃｏｕｍａｒｉｎＥ（ｒ＝０９９９４，ｎ＝５），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅ９８９２％
ｗｉｔｈＲＳＤ１６％ ｆｏｒｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ，９９６６％ ｗｉｔｈＲＳＤ１５％ ｆｏｒｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢａｎｄ９９７２％ ｗｉｔｈＲＳＤ１４％ ｆｏｒｑｉａｎｈｕｃｏｕｍａｒｉｎＥ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｑｕｉｃｋ，ｓｉｍｐｌｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｃｏｕｍａｒｉｎｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｒｏｏｔｏｆＰ．ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｕｍ；ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＡ；ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＢ；ｑｉａｎｈｕｃｏｕｍａｒｉｎＥ；ＨＰＬＣ
［责任编辑　王亚君］
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