全 文 ：益母草的化学成分及其抗人白血病 Ｋ５６２细胞
活性研究
丛悦１，郭敬功２，王天晓１，李勉１，李克１，王金辉３，李钦１
（１．河南大学 药学院 中药研究所，河南 开封 ４７５００４；
２．河南大学 植物逆境生物学重点实验室，河南 开封 ４７５００４；
３．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］　目的：研究益母草的化学成分，评价益母草化学成分体外抗白血病 Ｋ５６２细胞活性。方法：运用硅胶柱色谱、葡
聚糖凝胶ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０、聚酰胺柱色谱和大孔树脂等色谱方法对益母草化学成分进行分离纯化，利用核磁共振技术鉴定了
它们的化学结构。通过测试体外最低抑制浓度评价有关物质的抗肿瘤活性。结果：分离、纯化并鉴定了８个化合物，分别为槲
皮素３Ｏ洋槐双糖苷（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３Ｏｒｏｂｉｎｏｂｉｏｓｉｄｅ，１），芦丁（ｒｕｔｉｎ，２），异槲皮苷（ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ，３），金丝桃苷（ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ，４），槲
皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，５），芹菜素（ａｐｉｇｅｎｉｎ，６），芫花素（ｇｅｎｋｗａｎｉｎ，７）和苯甲酸（ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，８）。结论：化合物１，３，４，８为首次从该
属植物中分离得到，化合物２，５～７首次从该种植物中分离得到。化合物１～６，８显示出不同程度的抑制人白血病Ｋ５６２细胞
活性。
［关键词］　益母草；化学成分；抗人白血病Ｋ５６２细胞活性
［收稿日期］　２００９０２１８
［基金项目］　新世纪优秀人才支持计划（ＮＣＥＴ０４０２８９）；河南大学
校内基金项目（０７ＹＢＺＲ０３７）
［通信作者］　王金辉，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６４７８，Ｆａｘ：（０２４）２３９８６４７９，
Ｅｍａｉｌ：ｗｊｈ．１９７２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　益母草为唇形科益母草属植物 Ｌｅｏｎｕｒｕｓｈｅｔｅｒｏ
ｐｈｙｌｕｓＳｗｅｅｔ的新鲜或干燥地上部分，原名茺蔚，始
载于《神农本草经》，别名益母艾、苦草、坤草等，其
味辛、微苦，性微寒，入心包、肝经，具有活血调瘀、利
尿消肿之功效，现代药理研究表明具有兴奋子宫、改
善心肌缺血、降低血液黏度、改善肾脏功能、抑制乳
腺癌等作用［１２］，在临床上用于月经不调，产后瘀阻、
心脑血管疾病、血液病等疾病的治疗。本研究从益
母草 Ｌ．ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓ地上部分分离得到 ８个化合
物，其中化合物１，３，４，８为首次从该属植物中分离
得到，化合物２，５～７为首次从该种植物中分离得
到。并且发现化合物１～６，８都有不同程度的抑制
人白血病Ｋ５６２细胞活性。
１　材料
ＹａｎａｃｏＭＰＳ３型熔点测定仪（未校正）；ＢＲＵＫ
ＥＲＡＰＸ３００型核磁共振光谱仪（ＴＭＳ做内标）；ＶＧ
５０５０Ｅ型质谱仪，ＬＣＱ液质连用仪。ＴＯＳＯＨ高效
液相色谱仪（紫外检测器ＴＯＳＨＯＵＶ８０１１），色谱柱
为ＴＯＳＯＨ８０ＯＤＳ。薄层色谱及制备性薄层用硅胶
ＧＦ２５４和柱色谱用硅胶（２００～３００目）均为青岛海
洋化工厂生产。大孔树脂 ＨＰＤ１００由河北沧州宝
恩化工公司生产。ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０为 Ｐｈａｒｍａｃｉｅ公
司产品。柱色谱中所用试剂均为 ＡＲ级，其中所用
石油醚为中沸程（６０～９０℃）。ＨＰＬＣ用溶剂均为
色谱纯。益母草购自湖北省常州市，经沈阳药科大
学中药学院孙启时教授鉴定为Ｌ．ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓ，鉴定
标本存放于沈阳药科大学天然药化教研室。
２　提取分离
取益母草１４９ｋｇ，用７０％乙醇回流提取３次，
每次２０ｈ，回收溶剂，过滤，依次用石油醚，三氯甲
烷，醋酸乙酯萃取，之后水溶液上大孔树脂 ＨＰＤ
１００，６０％乙醇洗脱液的水溶部分（４６ｇ），经硅胶干
柱色谱，用三氯甲烷甲醇醋酸乙酯甲酸水６０∶３０∶
２０∶３∶３展开，均匀分成２７份，第２０～２２份用甲醇
洗脱，氨水中和，回收溶剂，用水溶解，经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ２０柱色谱，甲醇洗脱部分用 ＰＨＰＬＣ制备，检测
波长２５４ｎｍ，流动相１０％四氢呋喃水溶液洗脱，得
到化合物 １，２。６０％乙醇洗脱液的醇溶部分（３１
ｇ），经硅胶干柱色谱，用三氯甲烷甲醇醋酸乙酯
甲酸水 １０∶１５∶２０∶１∶１展开，均匀分成 １５份，
第１２～１３份用甲醇洗脱下来，回收溶剂，用水溶解，
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第３４卷第１４期
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经 ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０柱色谱，甲醇洗脱部分，用
ＰＨＰＬＣ，检测波长２５４ｎｍ，流动相１５％四氢呋喃水
溶液洗脱，得到化合物３，４。
取益母草４０ｋｇ，用９５％乙醇回流提取３次，
每次２０ｈ，回收溶剂，用水热溶，依次用石油醚，三
氯甲烷，醋酸乙酯萃取，回收溶剂。醋酸乙酯层部分
（１３ｇ），经硅胶柱色谱分离，三氯甲烷甲醇系统洗
脱得到馏分１～８，馏分１经硅胶柱色谱分离用三氯
甲烷甲醇（１５∶１）得到馏分５～６，经ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０
柱色谱，甲醇洗脱得到化合物７；馏分２经硅胶柱色
谱分离用三氯甲烷甲醇（２０∶１）洗脱得到馏分１０～
１５，上ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０，甲醇洗脱得到化合物６。馏
分３经聚酰胺色谱柱，用三氯甲烷甲醇（１∶１）洗脱，
得到馏分２０～２５，经 ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０柱色谱，甲醇
洗脱得到化合物５。
取益母草５０ｋｇ，用水煎煮３次，每次３０ｈ，将
提取液，用盐酸调ｐＨ２过滤，滤液通过阳离子交换
树脂，水洗下来的部分上大孔树脂，水洗脱后，用
７０％乙醇洗脱，７０％乙醇洗脱部分（１５５ｇ）经硅胶
柱色谱分离，用三氯甲烷甲醇不同比例的混合溶剂
进行洗脱，（１００∶２）洗脱部分得到化合物８。
３　结构鉴定
化合物１　黄色粉末，盐酸镁粉反应阳性。ＥＳＩ
ＭＳｍ／ｚ６３３２［Ｍ＋Ｎａ］＋，６０９１［Ｍ－Ｈ］－。１ＨＮＭＲ
（Ｃ５Ｄ５Ｎ，３００ＭＨｚ）δ：６６３（１Ｈ，ｓ，Ｈ８），６５９（１Ｈ，ｓ，
Ｈ６），８３２（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ２′），８０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７２
Ｈｚ，Ｈ６′），７３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ５′）１３１（１Ｈ，
ｓ，ＨＯ５），５８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７５Ｈｚ，Ｇａｌ１），５２１（１Ｈ，
ｂｒｓ，Ｒｈａ１），３９８～４９５（１０Ｈ，Ｇａｌ２～Ｇａｌ６，
Ｒｈａ２～Ｒｈａ５），１５５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５９Ｈｚ，Ｒｈａ６′）。
１３ＣＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ，７５ＭＨｚ）δ：１５８１（Ｃ２），１３５９（Ｃ
３），１７８８（Ｃ４），１６２７（Ｃ５），９９８（Ｃ６），１５７７（Ｃ
９），９４６（Ｃ８），１６６０（Ｃ７），１０５２（Ｃ１０），１２２３（Ｃ
１′），１１７８（Ｃ２′），１４６８（Ｃ３′），１５０５（Ｃ４′），１１６２
（Ｃ５′），１２３０（Ｃ６′）；１０５２（Ｇａｌ１），７３９（Ｇａｌ２），
７５３（Ｇａｌ３），６９７（Ｇａｌ４），７５３（Ｇａｌ５），６７１（Ｇａｌ
６）；１０２０（Ｒｈａ１），７２７（Ｒｈａ２），７２２（Ｒｈａ３），７３３
（Ｒｈａ４），６９７（Ｒｈａ５），１８６（Ｒｈａ６）。经与文献［３］
数据对照基本一致，因此，鉴定化合物１为槲皮素３
ＯβＤ（６ＯαＬ吡喃鼠李糖基）吡喃半乳糖苷。
化合物２～６和８　根据理化反应，与对照品薄
层对照并文献［４７］比较，分别鉴定为芦丁、异槲皮
素、金丝桃苷、槲皮素、芹菜素、苯甲酸。
化合物７　黄色不定型粉末，ｍｐ２８５～２８６℃，
三氯化铁铁氰化钾反应阳性，盐酸镁粉反应阳
性。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，３００ＭＨｚ）δ：６３９（１Ｈ，ｓ，Ｈ
３），６７８（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ６），６８６（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ８），７９７
（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７８Ｈｚ，Ｈ２′，６′），６９４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７８
Ｈｚ，Ｈ３′，５′），１２９７（１Ｈ，ｓ，５ＯＨ），１０４０（１Ｈ，ｓ，４′
ＯＨ），３８７（３Ｈ，ｓ，７ＯＣＨ３）。
１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，７５
ＭＨｚ）δ：１６４１（Ｃ２），１０３１（Ｃ３），１８２０（Ｃ４），
１５７３（Ｃ５），９８０（Ｃ６），１６５２（Ｃ７），９２７（Ｃ８），
１６１４（Ｃ９），１０４７（Ｃ１０），１２１１（Ｃ１′），１２８６（Ｃ
２′，６′），１６１３（Ｃ４′），１１６１（Ｃ３′，５′），５６１（７
ＯＣＨ３）。以上数据与文献［８］数据对照一致，故鉴
定化合物７为芫花素。
４　体外抗肿瘤活性
应用ＭＴＴ方法［９］检测化合物１～８对人白血病
Ｋ５６２细胞的抑制作用。化合物１～６，８对 Ｋ５６２细
胞的ＩＣ５０值分别为１７２９，２１５６，２１６７，２４１２，６３，
１０４，１１６５ｍｇ·Ｌ－１。化合物７不溶于培养液。阳
性对照阿霉素（ＤＯＸ）对 Ｋ５６２细胞的 ＩＣ５０为 １４８
ｍｇ·Ｌ－１。结果显示，化合物 １～６，８对人白血病
Ｋ５６２细胞具有不同程度的抑制作用，其中槲皮素活
性最强，苯甲酸活性最弱。
［参考文献］
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第３４卷第１４期
２００９年７月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
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　Ｊｕｌｙ，２００９
ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｎｌｅｕｋｅｍｉａＫ５６２ｃｅｌｏｆ
Ｌｅｏｎｕｒｕｓｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓ
ＣＯＮＧＹｕｅ１，ＧＵＯＪｉｎｇｇｏｎｇ２，ＷＡＮＧＴｉａｎｘｉａｏ１，ＬＩＭｉａｎ１，ＬＩＫｅ１，ＷＡＮＧＪｉｎｈｕｉ３，ＬＩＱｉｎ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｆｅｎｇ４７５００４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＳｔｒｅｓＢｉｏｌｏｇｙ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｆｅｎｇ４７５００４，Ｃｈｉｎａ；
３．ＳｃｈｏｏｌｏｆＴａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＴｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＬｅｏｎｕｒｕｓｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｒｅｐｅａｔｅｄｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ｏｎｓｉｌｉｃａｇｅｌ，ＨＰＤ１００，ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０，ａｎｄＰＨＰＬＣ．Ｅａｃｈｃｏｍｐｏｕｎｄｗａｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃａｎｄｐｈｙｓｉｃａｌｄａｔａ．Ｅｉｇｈｔ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｏｂｅｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３Ｏｒｏｂｉｎｏｂｉｏｓｉｄｅ（１），ｒｕｔｉｎ（２），ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ（３），ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ（４），
ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ（５），ａｐｉｇｅｎｉｎ（６），ｇｅｎｋｗａｎｉｎ（７），ａｎｄｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ（８）．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ２，５７ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＬ．ｈｅｔｅｒｏ
ｐｈｙｌｕｓｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ；Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ１，３，４，８ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｕｓＬｅｏｎｕｒｕｓ．Ｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｇａｉｎｓｔ
ｌｅｕｋｅｍｉａＫ５６２ＣｅｌｓｏｆｐｕｒｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｔｅｓｔｉｎｇｔｈｅｉｒＩＣ５０．Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ１６，８ｅｘｈｉｂｉｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ａｇａｉｎｓｔｌｅｕｋｅｍｉａＫ５６２ｃｅｌｓｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｔｅｎｔ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｌｅｏｎｕｒｕｓｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓ；ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ；ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉａＫ５６２ｃｅｌｓａｃｔｉｖｉｔｙ
［责任编辑　王亚君］
关于召开２００９年药物溶出度国际学术研讨会的通知
拟定于２００９年９月在北京和上海两地召开药物溶出度国际学术研讨会，将邀请固体制剂溶出度研究领
域的中外专家，就会议主题进行专题讲座。现将会议的有关事宜通知如下：
一、会议专题讲座：
药物溶出度及生物利用度；中国药典２０１０年版简介；药物缓释、控释制剂研究发展等。
二、会议征文与要求：
１．征文内容：药物溶出度法在药品检验中的应用；药物溶出度法对缓释、控释制剂质量的评价；药物溶出
度法在中药制剂及生化药物制剂中的应用；药用辅料、药用胶囊对药物溶出度的影响；药物溶出度与生物利
用度之间的关系；药物溶出度仪器的研究进展。
２．征文要求：①未公开发表的论文均可作为本次征文稿件，研究论文一般不超过３０００字，综述不超过
５０００字；②论文格式请按本刊稿约要求；③每篇稿件需附单位介绍信及５０元审稿费；④征文截止日期２００９
年７月３０日；⑤投稿方式：请登录本刊在线投稿系统：进行在线投稿，“期刊栏目”请选择“２００９溶出度会议
征文”；⑥论文经专家审阅后，将在本刊发表，并酌收版面费。
３．联系方式：地址：北京市崇文区天坛西里２号，中国药品生物制品检定所药物分析杂志编辑部；邮政编
码：１０００５０；电话：０１０６７０５８４２７；传真：０１０６７０１２８１９；Ｅｍａｉｌ：ｙｗｆｘ＠ｎｉｃｐｂｐ．ｏｒｇ．ｃｎ；ｗｗｗ．ｙｗｆｘｚｚ．ｃｎ；联系人：刘
小帅。
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第３４卷第１４期
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　Ｊｕｌｙ，２００９