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Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月
β-榄香烯抑制肝星状细胞表达 ANGⅡ及
RhoA/ROCK 信号
杨 玲 1 ，但 丹 2，朱 锐 1，周 雯 1，钱 伟 1，叶 进 1*，侯晓华 1
（1. 华中科技大学 同济医学院 附属协和医院，湖北 武汉 430022；
2. 武汉市中西医结合医院 湖北 武汉 430022）
[摘要] 目的：探讨 β 榄香烯对肝星状细胞表达分泌血管紧张素 II、血管紧张素原及 Rho/ROCK 的影响.方法：HSC-T6
细胞株培养 24 h，以不同浓度 β榄香烯及空白对照分别作用 4，12，24 h 后，放射免疫法检测培养上清中 ANGⅡ的量，RT-PCR
检测 HSC 中 AGT 及 Rho/ROCK mRNA 的表达。结果：在 4 h 时，10.0 mg·L-1 β-榄香烯组培养上清中 ANGII 的分泌量为
（50.970±8.081）pmol·L-1，较空白组（74.500±10.999）pmol·L-1明显下降（P<0.05），而 5.0，2.5 mg·L-1β-榄香烯组对 ANGII
分泌无明显抑制作用。12 h 时，10，5 mg·L-1β-榄香烯组 ANGⅡ分泌量分别为（83.727±6.850），（91.090±3.226）pmol·L-1，
显著低于空白对照组（104.367±5.030）pmol·L-1，（P<0.01，P<0.05）；而 2.5 mg·L-1 β-榄香烯组作用不明显。24 h 时，5，
2.5 mg·L-1 β榄香烯组 ANGⅡ分泌量分别为（104.133±3.296），（100.957±2.581）pmol·L-1，与空白组（116.620±7.110）pmol·L-1
比较明显减少（P<0.05，P<0.01）；而 10 mg·L-1 β-榄香烯组作用不明显。与空白组比较，4，12，24 h 各时间点，各个浓度
的 β榄香烯对 HSC 表达 AGTmRNA 均有抑制作用，F 分别为 30.33，28.04，107.19，P 均为 0。4，12，24 h 各时间点，2.5，
5.0，10 mg·L-1 β 榄香烯对 HSC 表达 RhoAmRNA 均有抑制作用，F 分别为 19.87，14.35，40.13，均 P=0，无明显剂量依赖
性；4，24 h 时间点，2.5，5.0，10 mg·L-1 β榄香烯对 HSC 表达 ROCK-1，ROCK-2 mRNA 均有抑制作用（P <0.01），而 12
h 时各组之间无显著差异。结论：β榄香烯能使 HSC 分泌 ANGⅡ及 HSC 内 AGT mRNA 表达降低，同时抑制下游信号 RhoA，
ROCK-1，ROCK-2 mRNA 的表达，抑制 ANGⅡ的生物学效应，从而延缓肝纤维化及门脉高压的发生。
[关键词] 肝纤维化；β-榄香烯；肝星状细胞；ANGⅡ；RhoA/ROCK
4肝星状细胞（HSC）在肝脏纤维化、微循环改
变及门脉高压形成过程中的作用已经得到广泛认
同。活化后的 HSC 加速增殖，收缩性增强，合成
大量基质促成肝脏纤维化的发生发展，引起肝脏血
流阻力及血流量的改变，促使门脉高压的形成。活
化后的 HSC 自身分泌多种血管活性物质，它们的
产生促进了 HSC 的活化、增殖，参与了肝脏纤维
化及门脉高压的形成，在临床治疗中具有重要的指
导意义[1]。
血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）是缩血管物质中具有
代表性的一种。Rho/ROCK 信号是 HSC 活化增殖和
收缩的主要通路之一，ANGⅡ从 HSC 胞内分泌到
最终参与肝纤维化的过程与 Rho/ROCK 信号途径
密切相关。本研究拟观察莪术提取物 β-榄香烯对

[收稿日期] 2008-08-25
[基金项目] 国家自然科学基金项目（30500658）
[通信作者] *叶进，教授，华中科技大学同济医学院附属协和医院消化
内科，Tel：（027）85726086，E-mail：yejin8689@sina.com
HSC 表达 ANGⅡ及胞内 Rho/ROCK 信号的影响，
探讨其对 HSC 表达 ANGⅡ及胞内信号途径的调
节，为肝纤维化及门脉高压的治疗寻找一条新的途
径。
1 材料与方法
1.1 药物及试剂
β-榄香烯（大连金港制药有限公司，批号：
0612211），Rho 激酶抑制剂 Y-27632（Sigma 公司），
TRIzol 试剂（ invitrogen 公司），AGT，RhoA，
ROCK-1，ROCK-2，β-actin 引物（上海英骏生物技
术有限公司）；逆转录试剂盒（Promega 公司）；2×Taq
PCR Master Mix，Marker（北京天根生物技术公司）。
1.2 细胞系
大鼠肝星状细胞系（HSC-T6)，其表现型为活
化的 HSC（上海中医药大学肝病研究所惠赠）。
1.3 仪器
PTC150 型 PCR 仪（美国 MJ Research 公司），


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核酸电泳仪为瑞典 Pharmacia Biotech 公司生产。柯
达凝胶成像系统及分析软件。
1.4 方法
1.4.1 细胞培养及药物处理 将大鼠肝星状细胞
系 HSC-T6 细胞以 1×105 个 mL 接种于 6 孔板，待
细胞 90％铺满孔底时，分别加入不同浓度的 β-榄香
烯（2.5，5.0，10.0 mg·L-1），Rho 激酶的抑制剂
Y-27632（30 μmol·L-1）作用 4，12，24 h 后，分别
收集细胞上清及细胞，用于下述实验检测，并设立
空白对照组，每组设 3 复孔，实验重复 3 次。
1.4.2 上清中血管紧张素 ANGⅡ的检测 采用放
射免疫法（RIA)测定，ANGⅡ试剂盒购自北京北方
生物技术研究所，仪器为 DFM-96 型 10 管放射免
疫 γ 计数器，经协和医院核医学实验室检测并发报
告。
1.4.3 检测细胞内 AGT ， RhoA ， ROCK-1 ，
ROCK-2mRNA 的表达 RNA 的提取及逆转录反
应：采用 TRIzol 一步法总 RNA 提取试剂盒，用氯
仿-异丙醇-75%乙醇法常规操作提取 RNA，按逆转
录试剂盒说明书操作，将提取的 RNA 分别逆转录
成 cDNA：加入 1 μL OLigo（dT）引物，5.5 μL DEPC
水混匀后于 70 ℃反应 5min。取出后冰浴，加入 4 μL
5×逆转录缓冲液，2 μL 10mmol·L-1 dNTP 混合物，
0.5 μL RNA 酶抑制剂，1 μL MMLV，混匀后于 37 ℃
反应 60 min，然后于 95℃加热 5 min，灭活逆转录
酶。cDNA 置于-20 ℃保存。
PCR 扩增 AGT，RhoA，ROCK-1，ROCK-2，
β-actin（内参）：以上述逆转录 cDNA 为模板扩增
上述引物。每 25 μL 反应体系内含双蒸水 9.9 μL，
2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，上游及下游引物各
0.3 μL，逆转录产物 cDNA 2 μL。PCR 反应条件和
产物大小见表 1。
表 1 RT-PCR 引物序列、反应条件及产物大小
基因 引物序列 反应条件 大小/bp
RhoA 5′-TGACCGCCTGTAGCCTTGAC-3′
5′-CCCACTCGCCCTGATTTATG-3′
94 5℃ min；94 30℃ s，53 30℃ s，
72 30℃ s，35 个循环；72 7℃ min
493
ROCK-1 5′-TGATGGCTATTATGGACGAG-3′
5′-GGAGCGTTTCCCAAGC-3′
94 5℃ min；94 30℃ s，47 30℃ s，
72 30℃ s，35 个循环；72 7℃ min
293
ROCK-2 5′-CCTGTCAAGCGTGGTAGTGA-3′
5′-TTAGTGTTGTTCCGCACAGG-3′
94 5℃ min；94 30℃ s，57 30℃ s，
72 30℃ s，35 个循环；72 7℃ min
359
β-actin（内参） 5′-AGGGAAATCGTGCGTGAC-3′
5′-ACCCAGGAAGGAAGGCT-3′
94 5℃ min；94 30℃ s，48 30℃ s，
72 30℃ s，35 个循环；72 7℃ min
189
AGT 5′-CACCCCTTTCATCTCCTCTAC-3′
5′-TCTTGCCTCACTCAGCATCTT-3′
94 5℃ min；94 30℃ s，62 30℃ s，
72 30℃ s，35 个循环；72 7℃ min
261

PCR 产物半定量分析：取 4 μL PCR 产物经含
有 goldview 的 1.2％琼脂糖凝胶电泳，应用 JS-380
自动凝胶图像分析仪照相记录特异性条带，用
SensiAnsys 凝胶图像分析软件分析条带相对灰度。
基因相对表达量=目标基因灰度值/β-actin 灰度。
1.5 统计学处理
各组检测值均以 ±x s 表示。用 SPSS 13. 0 统计
软件对资料进行方差分析，多重比较采用 Dunnett-t
检验，P<0.05 则具有统计学差异。
2 结果
2.1 β 榄香烯对 HSC 分泌 ANGⅡ的影响
4 h 时间点各组 HSC 分泌 ANGⅡ平均值经
F 检验差异无统计学意义；12，24 h 时间点各
组 HSC 分泌 ANGⅡ平均值经 F 检验差异有统
计学意义，(P<0.05)。经 Dunnett-t 检验，4 h
时间点 10.0 mg·L-1 β-榄香烯可显著抑制 ANGII
表达(P=0.04)；12 h 时间点 2.5 mg·L-1 β-榄香烯
组与空白组比较差异无统计学意义，5 mg·L-1 β-
榄香烯组、10.0 mg·L-1 β-榄香烯组与空白组比
较，差异均有统计学意义（P<0.05）；24 h 时间
点 2.5，5.0 mg·L-1 β-榄香烯组与空白组比较，
差异均有统计学意义（P<0.05），10.0 mg·L-1 β-
榄香烯组与空白组比较差异无统计学意义。表
明 β-榄香烯抑制 ANGII 的分泌无剂量依赖性。
而 β-榄香烯作用后各时间点 ANGII的分泌量与
Y27632 组比较无显著性差异，见表 2。
2.2 β 榄香烯对 HSC 表达血管紧张素原 mRNA
（AGT mRNA）的影响


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表 2 不同药物干预后 HSC 分泌 ANGⅡ
的量 （ ±x s ，n=3） pmol·L-1
干预 4 h 12 h 24 h
空白 74.500±10.999 104.367±5.030 116.620±7.110
Y27632 70.573±10.222 91.050±5.550 104.350±7.244
10.0 mg·L-1β-榄香烯 50.970±8.0811) 83.727±6.8502) 106.420±3.912
5.0 mg·L-1β-榄香烯 58.650±9.259 91.090±3.2261) 104.133±3.2961)
2.5 mg·L-1β-榄香烯 61.020±8.775 94.607±3.548 100.957±2.5812)
注：Y27632 为 Rho 激酶抑制剂；与空白组比较 1)P <0.05，2)P<0.01。

F 检验显示，4，12，24 h 各时间点，各个浓度
的 β-榄香烯对 HSC 表达 AGT mRNA 均有抑制作
用，具有明显统计学差异，（P< 0.001）。经 Dunnett-t
检验显示，与空白组比较，经不同浓度的 β-榄香烯
及 Y27632 作用后各时间点的肝星状细胞 AGT
mRNA 表达均有抑制作用（均 P<0.01）；4 h 时 2.5
mg·L-1 β-榄香烯对 ATG mRNA 的抑制作用优于
Y27632 （P<0.01），12 h 时 2.5，5.0 mg·L-1 β-榄香
烯的作用均较 Y27632 明显（P<0.05，P<0.01），24
h 时 5.0 mg·L-1 β 榄香烯对 AGT mRNA 抑制作用优
于 Y27632 （P<0.01），见表 3。
表 3 HSC 在不同药物干预后 AGTmRNA 表达量
（ ±x s ，n=3)
干预 4 h 12 h 24 h
空白 0.420±0.008 1.509±0.186 1.764±0.040
Y27632 0.342±0.0052) 1.041±0.1832) 1.406±0.0852)
10.0 mg·L-1β-榄香烯 0.364±0.0062) 0.798±0.1132) 1.495±0.0122)
5.0 mg·L-1β-榄香烯 0.393±0.0052) 0.450±0.0702,4) 0.840±0.0732,4)
2.5 mg·L-1β-榄香烯 0.343±0.0161,4) 0.706±0.0042,3) 1.272±0.0442)
注：与空白组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与 Y27632 组比较 3)P <0.05，
4)P<0.01（表 4~6 同）。

2.3 β-榄香烯对 HSC 表达 RhoAmRNA 的影响
F 检验显示，4，12，24 h 各时间点，2.5，5.0，
10 mg·L-1 β-榄香烯对 HSC 表达 RhoAmRNA 均有抑
制作用，（均 P<0.001），无明显剂量依赖性。与空
白组比较，Y27632 对 RhoAmRNA 表达有显著抑制
作用（P<0.01），β-榄香烯与 Y27632 相比作用不及
Y27632，在 4，12 h 时 Y27632 的作用显著优于 β
榄香烯（P<0.05），见表 4。
2.4 β 榄香烯对 HSC 表达 ROCK-1mRNA 的影响
F 检验显示，4，24 h 时间点，2.5，5.0，10 mg·L-1
β-榄香烯及 Y27632 对 HSC 表达 ROCK-1AmRNA
表 4 不同浓度 β-榄香烯对 HSC 表达 RhoAmRNA
的影响（ ±x s ，n=3)
干预 4 h 12 h 24 h
空白 1.410±0.015 1.741±0.205 2.144±0.126
Y27632 0.648±0.1412) 0.747±0.0632) 1.291±0.0712)
10.0 mg·L-1β-榄香烯 1.099±0.0831,4) 1.214±0.0631,3) 1.453±0.0412)
5.0 mg·L-1β-榄香烯 0.854±0.1432) 1.361±0.1604) 1.421±0.1022)
2.5 mg·L-1β-榄香烯 0.941±0.1182,3) 1.454±0.2544) 1.541±0.0922,3)

均有抑制作用，F 值分别为 10.29，62.63，P
值分别为 0.001、0.000。而 12 h 时各组之间无显著
差异。与 Y27632 组比较，4 h 时不同剂量的 β-榄香
烯对 ROCK-1mRNA 的抑制作用无显著差异，而 24
h 时 β 榄香烯的作用不及 Y27632（P<0.05），见表
5。
表 5 HSC 在不同药物干预后 ROCK-1mRNA
表达量（ ±x s ，n=3）
干预 4 h 12 h 24 h
空白 0.980±0.0844) 1.071±0.243 1.226±0.1054)
Y27632 0.702±0.0362) 0.762±0.138 0.808±0.0262)
10.0 mg·L-1 β-榄香烯 0.786±0.0652) 0.718±0.157 0.859±0.1274)
5.0 mg·L-1 β-榄香烯 0.734±0.0292) 0.719±0.185 0.898±0.0142,4)
2.5 mg·L-1 β-榄香烯 0.764±0.0622) 0.625±0.1371) 1.123±0.1473)

2.5 β-榄香烯对 HSC 表达 ROCK-2mRNA 的影响
F 检验显示，4，24 h 时间点，2.5，5.0，10 mg·L-1β
榄香烯及 Y27632 对 HSC 表达 ROCK-2AmRNA 均
有抑制作用，(P<0.05)；而 12 h 时各组之间无显著
差异。各浓度 β-榄香烯的抑制作用无明显差异。与
Y27632 相比，4，12 h 时 β-榄香烯对 ROCK-2mRNA
表达抑制作用无差异，而 24 h 时 β-榄香烯的作用不
及 Y27632（P<0.05），见表 6。
表 6 HSC 在不同药物干预后 ROCK-2mRNA
表达（ ±x s ，n=3)
干预 4 h 12 h 24 h
空白 0.964±0.0604) 1.317±0.192 1.737±0.131
Y27632 0.421±0.0442) 1.128±0.139 1.357±0.0741)
10.0 mg·L-1 β-榄香烯 0.417±0.0522) 0.782±0.2311) 1.332±0.1141)
5.0 mg·L-1 β-榄香烯 0.318±0.0482) 1.052±0.203 1.846±0.2564)
2.5 mg·L-1 β-榄香烯 0.529±0.0612) 0.942±0.295 1.829±0.1724)

3 讨论
实验发现 β-榄香烯对活化的 HSC 显示出强大
的抑制作用，使上清中 ANGⅡ分泌量减少，并下调


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HSC 中 AGTmRNA 的表达，同时抑制下游途径
RhoA 及其激酶 ROCK-1，ROCK-2mRNA 的表达。
β-榄香烯对 ANGⅡ及作用途径的抑制，可能影响
HSC 的分泌、收缩及活化，从而使肝脏纤维化和门
脉高压得到改善和逆转。
已经证实，HSC 的活化与肝纤维化及门脉高压
的发生密切相关[1]。HSC 活化后对血管活性物质敏
感性增加，表现为血管活性物质受体表达增加，并
以自分泌和旁分泌形式分泌血管活性物质，正反馈
调节诱导 HSC 收缩、增殖和分泌 ECM，促进肝纤
维化门脉高压的发生发展[1-2]。ANGⅡ是一种重要
的缩血管因子。研究表明大鼠 HSC 能够表达 RAS
的全部成分，并其主要活性物质—ANGⅡ，其在
HSC 激活过程中逐渐升高，正反馈调节肝星状细胞
表达 RAS[3-4]。新近研究表明 ANGⅡ对活化的肝星
状细胞的作用是活化，增殖，分泌，收缩，促进肝
ECM 的合成，对细胞因子的网络调控及凋亡多个方
面的[5-6]。ANGⅡ主要通过 1 型受体发挥作用。有
研究将 ANG 1Ⅱ 型受体拮抗剂洛沙坦作用于 HSC，
结果显示可完全阻断 ANGⅡ对于 HSC 的收缩和增
殖作用，并引起肝硬化患者门脉压力的明显下降。
然而长时间的给药可能导致低血压和肾小球滤过
率下降等一系列并发症的发生，所以不是一种理想
的治疗药物[7]。
最新发现，HSC 与平滑肌细胞收缩的调节机制
不同，内皮素刺激引起的 HSC 收缩不依赖钙通道，
后者由钙离子介导收缩，而前者主要由 Rho 相关激
酶信号途径介导[8-9]，研究认为钙依赖和非钙依赖途
径对 HSC 特异性收缩模式的形成都是必要的，而
经 PKC，RhoA 介导的信号级联放大非钙依赖途径
起着主导作用[10]。ANGⅡ可以由 HSC 大量表达生
成，然而其从 HSC 胞内分泌到最终参与肝纤维化
的过程与 RhoA/ROCK 信号途径密切相关[11]。Rho
蛋白是许多膜表面受体的下游效应蛋白，在细胞的
信号转导通路中作为信号转换器或分子开关，作用
于细胞骨架或其靶蛋白而产生多种生物效应，在细
胞形态学、细胞骨架功能、分泌和细胞收缩中均发
挥作用[12]，RhoA 是其中的一种，它参与调节肌动
蛋白应力纤维（stress fiber) 的装配，RhoA 相关激
酶 ROCK-1，ROCK-2 是其下游效应分子[13]，接受
RhoA 传递的活化信号 [14]。这一通路如果被阻断，
HSC 的活化、分泌、收缩等都会受到很大影响。
β-榄香烯是中药莪术提取物的一种，中药莪术
为姜科植物蓬莪术的根茎，辛、苦、温，具行气破
血、消积止痛作用。现代药理研究显示莪术具有调
节机体免疫功能、抗肿瘤、诱导肿瘤细胞凋亡、促
进微循环、抑制微动脉收缩等作用，莪术提取物对
肝纤维化大鼠血管紧张素Ⅱ及其 I 型受体的表达有
下调的作用[15]，且可调节肝星状细胞 a-SMA 和Ⅰ
型胶原的基因表达，抑制 HSC 的活化和增殖[16]。
前期实验显示 β-榄香烯对 CCl4 诱导的大鼠肝纤维
化模型具有拮抗作用。本实验用不同浓度的 β榄香
烯作用于 HSC，4，12，24 h 3 个时间段上清中的
ANGⅡ分泌量均较空白组减少，胞内 AGT mRNA
的表达有明显下降，差异显著（P<0.05），表达抑制
与药物浓度的关系尚未得到证实。ANGⅡ作为一种
强大的缩血管因子和 HSC 的活化因子，β-榄香烯对
其的抑制作用可能是其拮抗肝纤维化的重要途径。
实验发现，三个时间段，不同浓度的 β-榄香烯
能够对 RhoA 及激酶 ROCK-1，ROCK-2 mRNA 的
表达发挥明显的抑制作用，与空白组相比较，差异
有统计学意义（P<0.05）。这种作用未显示出剂量
依赖性。即 β-榄香烯能够对胞内 AGTmRNA 的表
达，胞外 ANGⅡ的分泌，以及下游信号通路中
RhoA，ROCK-1，ROCK-2mRNA 表达都表现出抑
制作用。
已证实 Rho 激酶的抑制剂 Y27632 可抑制 HSC
收缩，促使 HSC 凋亡，降低门脉压力[12,17]。实验中
将 Y27632 作用组与空白组相比较，Y27632 对
ANGⅡ的表达及下游RhoA/ROCK信号途径均表现
出明显的抑制作用。将 β-榄香烯的作用与 Y27632
进行了对照：①对于上清中的 ANGⅡ分泌的抑制，
β-榄香烯与Y27632的抑制作用无差异；②对于HSC
内 AGTmRNA 的表达抑制，12，24 h 时小剂量的 β-
榄香烯的抑制作用较 Y27632 强，差异有统计学意
义（P<0.05），4 h 两者作用程度无差异；③对于 HSC
内 RhoAmRNA 的表达抑制，β-榄香烯与 Y27632
相比作用较弱，在 4 及 12 h 差异显著（P<0.05）；
④作用 4 ， 12 h 时 β- 榄香烯对 ROCK-1 ，
ROCK-2mRNA 表达抑制作用与 Y27632 组相比无
差异，但 24 h 时 Y27632 的抑制作用强于 β-榄香烯。
由此可见 β-榄香烯能较强地抑制 HSC 中缩血管物


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质 ANGⅡ的表达及分泌，并表现出 Rho 激酶抑制
剂样的作用，可在一定程度上抑制 RhoA/ROCK 信
号的表达，从而可能抑制 HSC 的活化，介导 HSC
凋亡，延缓肝纤维化的发生发展。
对 HSC 的调控是改善慢性肝脏疾病的关键。
HSC 活化后所表现出的增殖，收缩，自分泌等作用
促进了肝脏纤维化的发生发展和门脉高压的形成
和维持。中药莪术提取物 β-榄香烯对活化的 HSC
显示出强大的抑制作用，使调节肝窦微循环的一个
重要物质血管紧张素Ⅱ的表达和分泌降低，同时使
其下游与肝纤维化密切相关的重要信号途径
RhoA/ROCK 表达下调，影响了 HSC 的收缩，分泌
及活化，从而使肝脏纤维化和门脉高压得到改善和
逆转成为可能。本实验中发现 β 榄香烯从 2.5 mg·L-1
到 10.0 mg·L-1 均为有效浓度，且作用不呈现出剂量
依赖性。β-榄香烯作为一种可能的降低门脉高压延
缓肝纤维化的药物，其对于细胞内介导 HSC 收缩
的钙离子通道是否存在调节，对其他细胞因子的作
用，及其最佳作用剂量，还有待进一步的研究。
[参考文献]
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http://www.cjcmm.com.cn ·463·
Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月

β-elemene inhibits expression of ANG and RhoA/RⅡ OCK
signaling in hepatic stellate Cells

YANG Ling1，DAN Dan2，ZHU Rui1，ZHOU Wen1，QIAN Wei1，YE Jin1*，HOU Xiaohua1
（1．Department of Gastroenterology，Union Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science & Technology，
Wuhan 430022，China；2. Wuhan hospital of Traditional and Western Medicine，Wuhan 430022，China）

[Abstract] Objective：To investigate the influence of β-Elemene on expression of ANG and RhoA/ROCK signaling in Ⅱ
Hepatic Stellate Cells. Method：In vitro，HSC-T6 cell line was cultured for 24 hours and treated with several concentration of
β-elemene（5.0，5.0，2.5 mg·L-1） and Y-27632（30 μmol·L-1） for 4，12 and 24 h. Secretion of ANG in the supernatant was detected Ⅱ
by Radioimmunoassay. The mRNA expression of AGT，RhoA，ROCK-1 and ROCK-2 for 4 h，12 h，24 h was detected by RT-PCR
respectively. Result：On the time point of 4h，the secretion of ANGII in supernatant by 10 mg·L-1 β-elemene was 50.970±8.081
pmol·L-1，vs the control group（74.500±10.999）pmol·L-1，P<0.05；5.0 mg·L-1 and 2.5 mg·L-1β-elemene had no inhibitory effect
on the secretion of ANGII，P>0.05. On the time point of 12h，the secretion of ANGII in supernatant by 10 mg·L-1，5 mg·L-1β-elemene
was 83.727±6.850 pmol·L-1，91.090±3.226 pmol·L-1，respectively，lower than the control（104.367±5.030 pmol·L-1），P<0.01，
P<0.05. On the time point of 24h，compared with the control（116.620±7.110）pmol·L-1)，the secretion of ANGII in supernatant by
2.5 mg·L-1 and 5 mg·L-1 β-elemene was （104.133±3.296） pmol·L-1，（100.957±2.581） pmol·L-1，respectively，P<0.05，
P<0.01；but the effect of 10 mg·L-1 β-elemene was not obviouse，P>0.05. Compared with control group，the mRNA expression of
AGT by different concentration of β-elemene were significantly inhibited on different time point（4，12，24 h），F value was 30.33，
28.04，107.19，respectively，P=0.000. On the time point of 4h，12 h and 24 h，the RhoAmRNA expression could be inhibited by
2.5，5.0，10 mg·L-1 β-elemene，(P=0.000)，and there existed no dose dependence. On the time point of 4 h and 24 h，ROCK-1 and
ROCK-2mRNA could be inhibited by 2.5，5.0 and 10 mg·L-1 β-elemene，P<0.01，but on the time point of 12 h，there was no
inhibitory effect. Conclusion：β-elemene can inhibit the expression of AGTmRNA in HSC and the secretion of ANG in Ⅱ
supernatant. In addition，β-elemene can inhibit the mRNA expression of RhoA，ROCK-1，ROCK-2mRNA to further regulate the
biological effect of ANG and delay the progress of hepatic fibrosis.Ⅱ
[Key words] hepatic fibrosis；β-elemene；hepatic stellate cell；ANGⅡ；Rho/ROCK
[责任编辑 刘 ]