全 文 ：银杏内酯 Ｂ柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究
刘婷１，甄小龙１，程昊１，李伟泽２，郝保华１
（１．西北大学 生命科学学院，陕西 西安７１００６９；
２．中国药科大学 药学院，江苏 南京 ２１０００９）
［摘要］ 目的：制备银杏内酯Ｂ（ＧＢ）柔性纳米脂质体，并对其体外透皮规律进行研究。方法：采用薄膜分散法制备银杏
内酯Ｂ柔性纳米脂质体，并对其形态及粒径大小进行分析；采用改良的 Ｆｒａｎｚ扩散池进行体外透皮吸收试验，比较银杏内酯Ｂ
醇溶液、银杏内酯Ｂ柔性纳米脂质体及普通银杏内酯Ｂ纳米脂质体的经皮累积渗透量及渗透速率。结果：此方法制得的脂质
体平均包封率为（８９５２±１７６）％，平均粒径为（２０８３±２５４９）ｎｍ，Ｚａｔａ电位为－４９２ｍＶ。柔性纳米脂质体８ｈ的累积透过
量为１８９９７μｇ·ｃｍ－２，８ｈ的渗透速率为２３７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１。结论：柔性纳米脂质体包封率较高，稳定性良好，可显著促
进银杏内酯Ｂ的透皮吸收。
［关键词］ 银杏内酯Ｂ；柔性纳米脂质体；体外透皮
［收稿日期］ ２００９０４２７
［通信作者］ 郝保华，教授。Ｔｅｌ：（０２９）８１９７０５１９，Ｅｍａｉｌ：ｂａｏｈｕａｈ
＠ｎｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
［作者简介］ 刘婷，硕士研究生，主要从事药剂学方面研究。Ｅ
ｍａｉｌ：ｌｉｕ－＿－ｔｉｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
柔性纳米脂质体是一种新型的皮肤给药转释系
统，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以增强
药物的亲细胞性，降低不必要的系统毒性，增强脂溶
性药物在体液中的溶解性，调节药物的释放模
式［１］。在脂质体双分子层中加入不同的附加剂可
以显著影响脂质体的性质和功能。由磷脂和适合的
表面活性剂制备得到的纳米脂质体具有充分的柔
性，与普通脂质体相比，能显著增加药物的经皮渗透
量。本试验研究了仅有磷脂的普通纳米脂质体和含
有表面活性剂胆酸钠的柔性纳米脂质体对离体小鼠
皮肤的药物渗透作用，证实了柔性纳米脂质体可以
显著增加药物的经皮透过量。
老年痴呆患者常见出现记忆力减退的症状，因
此会出现忘记服药或者服错药的现象，由此导致服
药量不足或者会引起药物中毒。银杏内酯为银杏科
植物银杏Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ的提取物，具有抑制血小板
活化因子、抗氧化等作用，能降低脑血管阻力，改善
脑循环，增加脑血流量，改善脑的营养，尤其是银杏
内酯Ｂ（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ，ＧＢ），具有扩张血管、改善脑循
环、较强的抑制血小板活化因子作用［２３］，有助于改
善记忆和脑功能不全或与年龄有关的中枢神经系统
功能障碍，对大脑及血脑屏障有保护作用，可用于治
疗老年痴呆症。
本实验用脂质体载药系统技术研究制得 ＧＢ柔
性纳米脂质体，作为透皮给药制剂的一种，能选择性
的作用于中枢神经系统，是一种安全有效的治疗老
年痴呆的药物制剂。
１ 材料
ＹＰ５００１电子精密天平（上海良平）；ＲＥ５２ＡＡ
旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；高效液相色谱
仪（Ｗａｔｅｒｓ：１５２５型泵，２４８７型检测器）；ＦＪ２００高速
分散匀质机（上海标本模型）；ＳＫ１２００Ｈ（４５Ｗ）超声
仪（上海科导超声仪器有限公司）；ＴＧＬ１６Ｂ离心机
（上海安亭科学仪器有限公司）；７８１磁力加热搅拌
器（江苏金坛市正基仪器有限公司）；Ｈ７０００透射电
镜（日本Ｈｉｔａｃｈｉ公司）；Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳＡ光子相关
光谱仪（英国马尔文公司）；双室扩散池（自制，有效
扩散面积为２２７ｃｍ２，容积为２５ｍＬ）。
大豆卵磷脂（天津博迪化工）；胆固醇（天津博
迪化工）；ＧＢ（纯度≥９９％，西安小草植物科技有限
责任公司）；胆酸钠（天津市化学试剂研究所）；维生
素Ｅ（ＶｉｔＥ浙江医药股份有限公司新昌制药厂）；甲
醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；０２２μｍ的微孔
滤膜（上海新亚药业有限公司）。
昆明种小鼠雌雄随机，体重１８～２２ｇ。（第四军
医大学动物中心）。
２ 方法
２．１ ＧＢ柔性纳米脂质体的制备
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称取５００ｍｇ大豆卵磷脂，１００ｍｇ胆固醇，５０ｍｇ
ＧＢ，２０ｍｇＶｉｔＥ，加入１００ｍＬ无水乙醇使之溶解，
转运至５００ｍＬ圆底烧瓶中，将装有上述溶液的圆底
烧瓶与旋转减压蒸发仪连接，在圆底烧瓶上形成均
匀的薄膜。同时称取１００ｍｇ胆酸钠，加入介质溶剂
使之溶解，将其溶液滴加至圆底烧瓶中洗脱膜材，并
继续水化１ｈ。将得到的脂质体混悬液以水浴式超
声仪超声１０ｍｉｎ，再以 ０２２μｍ的微孔滤膜过滤，
即得到ＧＢ柔性纳米脂质体。制备过程中不加入胆
酸钠，即得普通ＧＢ纳米脂质体。
２．２ 粒径测定
取脂质体适量，滴入盛样器，用光子相关光谱仪
测定脂质体的平均粒径及粒径分布并记录照片；采
用电位测定仪测定脂质体的Ｚｅｔａ电位。
２．３ 形态观察
吸取脂质体混悬液少许滴于有支持膜的铜网
上，稍干后用３％的磷钨酸负染，滤纸吸铜网边缘
多余的液体，稍干后，用透射电镜观察其形貌并记
录照片。
２．４ 包封率测定
２．４．１ 色谱条件 ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８柱（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ）；柱温２８℃；检测波长２２５ｎｍ；流动
相甲醇０１％磷酸溶液（３５∶６５）；流速 １０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；进样量２０μＬ。
２．４．２ 标准曲线与线性范围 精密称取在１０５℃
干燥至恒重的 ＧＢ３００１２ｍｇ置１００ｍＬ量瓶中，用
流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取 １０，
２０，４０，６０，８０，１００ｍＬ分别置５０ｍＬ量瓶中并
稀释至刻度，用０２２μｍ微孔滤膜过滤后，分别取
２０μＬ注入液相色谱仪中测定。以峰面积（Ａ）为纵
坐标，浓度（Ｃ）为横坐标进行线性回归，得回归方程
为Ａ＝１５０９１９６Ｃ＋３１５８６５２，ｒ＝０９９９２，线性范
围为６００２～６００２４ｍｇ·Ｌ－１。
２．４．３ 精密度考察 精密吸取２．４．２项下的 ＧＢ
标准溶液２０μＬ照上述色谱条件，重复进样６次，测
定ＧＢ的峰面积，ＲＳＤ１１％（ｎ＝６），结果表明仪器
精密度良好。
２．４．４ 稳定性考察 取２．４．２项下的 ＧＢ标准溶
液，照上述色谱条件分别在０，２，４，６，８，１２，２４ｈ进
样测定银杏内酯 Ｂ的峰面积，ＲＳＤ０７６％，结果表
明ＧＢ标准溶液在２４ｈ内稳定。
２．４．５ 回收率测定 取２．４．２项下的 ＧＢ标准溶
液适量，分别加入０５ｍＬ空白脂质体中，加入无水
乙醇定容，配成６００２，２４０１０，６００２４ｍｇ·Ｌ－１３个
浓度的样品，分别进样３次，计算回收率，测得其平
均回收率为９９８％，ＲＳＤ０８６％（ｎ＝３）。
２．４．６ 脂质体包封率的测定 精密吸取１０ｍＬ脂
质体混悬液，置于塑料离心管中，８０００ｒ·ｍｉｎ－１高
速离心２０ｍｉｎ，取上清液，用微孔滤膜过滤后进样测
定，即得游离药物（Ｗ游）。
测定样品中 ＧＢ的总质量时，选择无水乙醇［４］
为脂质体消解液，可使混悬液澄清。精密吸取 ＧＢ
柔性纳米脂质体混悬液１０ｍＬ置于２０ｍＬ量瓶中，
用无水乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，经 ０２２μｍ
微孔滤膜过滤后注入液相色谱仪中测定，即得脂质
体中药物的总质量（Ｗ总）。
包封率＝（Ｗ总 －Ｗ游）／Ｗ总 ×１００％
２．５ 体外透皮试验
取体重合格的健康昆明种小鼠，脱颈处死，剪
净腹部的毛，然后剥离此处皮肤，剔除皮下脂肪组
织，用蒸馏水冲洗干净后即用；将皮肤夹于双室扩
散池中间，角质层面向供给池，真皮层面向接收
池；供给池分别注入２０ｍＬＧＢ醇溶液、ＧＢ柔性
纳米脂质体以及普通ＧＢ纳米脂质体，接收池中分
别加入２０ｍＬ３０％乙醇作为接收液，并在接收池中
加入磁力搅拌子；双室扩散池固定在磁力搅拌器
上，并以恒定的速度搅拌接收液，保持恒温在
（３２±０５）℃；分别于１，２，３，４，５，６，７，８ｈ
在接收池取样１０ｍＬ，并补给等量的同温度３０％
乙醇。接收液经０２２μｍ微孔滤膜过滤，注入液
相色谱仪中，由标准曲线计算浓度，按下式计算累
计渗透量和渗透速率：
累积渗透量：△Ｍ＝Ｖ∑Ｃ／Ａｅ
渗透速率：Ｊ＝△Ｍ／△ｔ
其中：Ｖ为扩散池容积（２０ｍＬ）；Ｃ为接收液中
ＧＢ的质量浓度；Ａｅ为有效扩散面积（２２７ｃｍ２）；△ｔ
为取样点的时间间隔。
３ 结果
３．１ ＧＢ柔性纳米脂质体外观形态
透射电镜测得 ＧＢ柔性纳米脂质体呈圆球形
状，表面光滑，形状规则，见图１。
３．２ ＧＢ柔性纳米脂质体的粒径分布和 Ｚａｔａ电位
测定
用Ｚａｔａｓｉｚｅｒ光子相关光谱仪测得 ＧＢ柔性纳米
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图１ ＧＢ柔性纳米脂质体电镜照片（×２万）
脂质体的平均粒径为（２０８３±２５４９）ｎｍ，且粒径
分布较窄，测得Ｚａｔａ电位为－４９２ｍＶ。
３．３ ＧＢ柔性纳米脂质体包封率测定结果
脂质体平均包封率为（８９５２±１７６）％。
３．４ 体外透皮结果
ＧＢ柔性纳米脂质体、普通 ＧＢ纳米脂质体和
ＧＢ溶液的累积渗透量和渗透速率结果见图 ２，３。
柔性纳米脂质体８ｈ的累积透过量为１８９９７μｇ·
ｃｍ－２，８ｈ的渗透速率为２３７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１，分
别是普通纳米脂质体和药物醇溶液的 ３１２倍和
６３２倍，差异具有统计学意义（Ｐ＜００１）。
图２ 不同剂型中ＧＢ的累积渗透量
图３ 不同剂型ＧＢ的渗透速率
４ 讨论
本实验通过对 ＧＢ柔性纳米脂质体的研制，显
示处方工艺可行。制得的柔性纳米脂质体通过电镜
观察，其形状规则，呈圆形，粒径理想。Ｚｅｔａ电位为
－４９２ｍＶ，表明脂质体粒子表面荷负电，这一定程
度上阻止了脂质体粒子聚结，保证了混悬液的物理
稳定性。
在体外透皮试验中，为了更好的模拟药物在体
内渗透条件，透皮接收介质必须对药物有足够的溶
解性。ＧＢ为脂溶性药物，因此常规接收液生理盐水
无法满足条件，根据文献报道［５］，综合考虑 ＧＢ的溶
解度和介质对皮肤的影响，故选择３０％乙醇作为接
收介质。
在透皮过程中，加入胆酸钠的柔性纳米脂质体
的累进渗透量明显高于普通纳米脂质体，Ｃｅｖｃ等［６］
认为常规脂质体柔性不够，通过皮肤角质层狭窄孔
道时易破碎而引起阻塞，而柔性纳米脂质体具有高
度的变形性，通过狭窄通道后仍保持原形。药物脂
质体进入皮肤后，在表皮真皮内形成药物储库，使药
物缓慢释放，可持久地发挥局部药效，显著地提高
药物的治疗指数。因此，柔性纳米脂质体可显著促
进ＧＢ的经皮吸收，从而为开发 ＧＢ制剂奠定了
基础。
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ｅｄ．ＥｖｉｄｅｎｃｅｆｒｏｍｄｏｕｂｌｅｌａｂｅｌＣＬＳＭｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓａｎｄｄｉｒｅｃｔｓｉｚｅ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，２００２，１５６４：２１．
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ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｏｆｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ
ＬＩＵＴｉｎｇ１，ＺＨＥＮＸｉａｏｌｏｎｇ１，ＣＨＥＮＧＨａｏ１，ＬＩＷｅｉｚｅ２，ＨａｏＢａｏｈｕａ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＇ａｎ７１００６９，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅｏｆｐｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｐｒｅｐａｒｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏｌｉｄＢ（ＧＢ）ａｎｄｓｔｕｄｙｔｈｅｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｌａｗ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＦｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧＢｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｆｉｌｍｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｔｈｅｓｈａｐｅａｎｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ
ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．ＧＢｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｔｅｓｔｓｉｎｖｉｔｒｏｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｋｉｎｏｆｒａｔｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｍｏｄｉｆｉｅｄＦｒａｎｚｄｉｆｕｓｉｏｎｃｅｌ．Ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ
ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎａｍｏｕｎｔｓｏｆＧＢａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧＢａｎｄｏｒｄｉｎａｒｙｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧＢｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：
Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ｔｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ，ａｎｄｔｈｅＺａｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｔｈｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅ（８９．５２±１．７６）％，
ａｎｄｗａｓ（２０８．３±２５．４９）ｎｍ，ａｎｄｗａｓ４９．２ｍＶ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｐｅｒｍｅａｔｉｏｎａｍｏｕｎｔｏｆｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｉｎ８
ｈｏｕｒｓｗａｓ１８９．９７μｇ·ｃｍ－２，ａｎｄｉｔｓｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎ８ｈｏｕｒｓｗａｓ２３．７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｎｃａｐｓｕｌａ
ｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｔｈｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｉｓｇｏｏｄ，ａｎｄｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅＧＢｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｉｓｆｉｎｅ．Ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｃａｎｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｄｉｆｕｓｉｏｎｒａｔｅｏｆＧＢｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｋｉｎｏｆｒａｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ；ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ
［责任编辑 周驰］
第三次全国道地药材学术研讨会暨中药资源生态专业委员会换届选举大会征文通知（第二轮）
第三届全国道地药材学术研讨会暨中药资源生态专业委员会换届选举大会定于２００９年９月１８－２０日在山东济南召开。
本次会议由中国生态学学会中药资源生态专业委员会主办，中国中医科学院中药研究所、山东省科学院协办。会议主要内容为
中药资源生态学，特别是中药道地药材学术研讨，经验交流。本次会议将邀请中药学和生态学及相关领域的科技工作者参加。
一、会议议题 １．中药道地药材的研究；２．中药资源生态学及其相关研究；３．中药资源生物多样性及保护利用，４中药资源可
持续发展；５．中药栽培中的环境问题及对策；６．濒危中药资源及保护现状；７．新技术在中药资源研究中的应用；８．当今世界生
态学发展的前沿及研究的热点问题及其对中药资源生态学研究的影响等。
二、征文要求 １．参会者与论文作者请填写报名回执，并于２００９年７月３０日前寄回大会秘书处；２．征文截止日期：２００９年７
月３０日；３．论文长度不超过８０００字，摘要３００字左右。文章题目请用四号黑体居中，题目下方的作者姓名用小四楷体居中，
正文小五号宋体。文章可分段落，但不设各级标题；４．作者简介限１００字，请用小五号宋体，（包括：姓名、性别、出生年月、工作
单位、职务、职称、专业领域、主要成就、联系地址、邮政编码、电话、传真与电子信箱）附于摘要下方；５．文稿请于２００９年８月
２０日前，以ｗｏｒｄ文档发送ｚｈｏｎｇｙａｏｓｈｅｎｇｔａｉ＠１２６．ｃｏｍ。
三、会议日期 会议报到日期：２００９年９月１９日。
会期：２００９年９月２０～２１日上午，２２日下午离会。
四、会议地点及住宿费用 山东翰林大酒店地址：济南市经十路１６７８７号（山东省千佛山医院对面）；豪华标准间：会议价：３２０
元／间／夜（含双早）；标间：会议价：２９０元／间／夜（含双早）；前台联系电话：０５３１８６１８１８８８。
乘车路线：①火车站乘Ｋ５１路到山东省千佛山医院站（山东师范大学南门）下车，打的士从火车站到翰林大酒店约１８元。
②汽车总站乘Ｋ６８路到山东省千佛山医院站（山东师范大学南门）下车，打的士从汽车总站到翰林大酒店约２０元左右。③飞
机场乘坐机场大巴到燕山立交桥下车，沿经十路西行８００米即到（山师东路口）。
四、会务费 人民币８００元（含会务费、资料费及２天餐费），报到时缴纳。差旅费、住宿费自理。
五、会议秘书处联系地址 地址：北京东直门内南小街１６号 中国中医科学院中药研究所；邮编：１００７００；联系人：林淑芳、张
霁、郭兰萍；电话：６４０１４４１１２９５５或２９５６；传真：０１０８４０２７１７５８；Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｙａｏｓｈｅｎｇｔａｉ＠１２６．ｃｏｍ；济南联系人及联系电话：王
岱杰 ０５３１８２６０５３１９（Ｏ）；１５９６５３１７５８１；王晓０５３１８２６０５３１９（Ｏ）１３０３１７４８０１９。
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第３４卷第１７期
２００９年９月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９