全 文 ：银杏内酯 Ｂ柔性纳米脂质体的制备及体外透皮研究
刘婷１，甄小龙１，程昊１，李伟泽２，郝保华１
（１．西北大学 生命科学学院，陕西 西安７１００６９；
２．中国药科大学 药学院，江苏 南京 ２１００６９）
［摘要］ 目的：制备银杏内酯Ｂ（ＧＢ）柔性纳米脂质体，并对其体外透皮规律进行研究。方法：采用薄膜分散法制备银杏
内酯Ｂ柔性纳米脂质体，并对其形态及粒径大小进行分析；采用改良的 Ｆｒａｎｚ扩散池进行体外透皮吸收试验，比较银杏内酯Ｂ
醇溶液、银杏内酯Ｂ柔性纳米脂质体及普通银杏内酯Ｂ纳米脂质体的经皮累积渗透量及渗透速率。结果：此方法制得的脂质
体平均包封率为（８９５２±１７６）％，平均粒径为（２０８３±２５４９）ｎｍ，Ｚａｔａ电位为－４９２ｍＶ。柔性纳米脂质体８ｈ的累积透过
量为１８９９７μｇ·ｃｍ－２，８ｈ的渗透速率为２３７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１。结论：柔性纳米脂质体包封率较高，稳定性良好，可显著促
进银杏内酯Ｂ的透皮吸收。
［关键词］ 银杏内酯Ｂ；柔性纳米脂质体；体外透皮
［收稿日期］ ２００９０４２７
［通信作者］ 郝保华，教授。Ｔｅｌ：（０２９）８１９７５１９，Ｅｍａｉｌ：ｂａｏｈｕａｈ
＠ｎｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
［作者简介］ 刘婷，硕士研究生，主要从事药剂学方面研究。Ｅ
ｍａｉｌ：ｌｉｕ＿ｔｉｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
柔性纳米脂质体是一种新型的皮肤给药转释系
统，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以增强
药物的亲细胞性，降低不必要的系统毒性，增强脂溶
性药物在体液中的溶解性，调节药物的释放模
式［１］。在脂质体双分子层中加入不同的附加剂可
以显著影响脂质体的性质和功能。由磷脂和适合的
表面活性剂制备得到的纳米脂质体具有充分的柔
性，与普通脂质体相比，能显著增加药物的经皮渗透
量。本试验研究了仅有磷脂的普通纳米脂质体和含
有表面活性剂胆酸钠的柔性纳米脂质体对离体小鼠
皮肤的药物渗透作用，证实了柔性纳米脂质体可以
显著增加药物的经皮透过量。
老年痴呆患者常见出现记忆力减退的症状，因
此会出现忘记服药或者服错药的现象，由此导致服
药量不足或者会引起药物中毒。银杏内酯为银杏科
植物银杏Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ的提取物，具有抑制血小板
活化因子、抗氧化等作用，能降低脑血管阻力，改善
脑循环，增加脑血流量，改善脑的营养，尤其是银杏
内酯Ｂ（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ，ＧＢ），具有扩张血管、改善脑循
环、较强的抑制血小板活化因子作用［２３］，有助于改
善记忆和脑功能不全或与年龄有关的中枢神经系统
功能障碍，对大脑及血脑屏障有保护作用，可用于治
疗老年痴呆症。
本实验用脂质体载药系统技术研究制得 ＧＢ柔
性纳米脂质体，作为透皮给药制剂的一种，能选择性
的作用于中枢神经系统，是一种安全有效的治疗老
年痴呆的药物制剂。
１ 材料
ＹＰ５００１电子精密天平（上海良平）；ＲＥ５２ＡＡ
旋转蒸发仪（上海亚荣）；高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ：
１５２５型泵，２４８７型检测器）；ＦＪ２００高速分散匀质机
（上海标本模型）；ＳＫ１２００Ｈ（４５Ｗ）超声仪（上海科
导）；ＴＧＬ１６Ｂ离心机（上海安亭）；７８１磁力加热搅
拌器（江苏金坛市正基仪器有限公司）；Ｈ７０００透射
电镜（日本 Ｈｉｔａｃｈｉ公司）；Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳＡ光子相
关光谱仪（英国马尔文公司）；双室扩散池（自制，有
效扩散面积为２２７ｃｍ２，容积为２５ｍＬ）。
大豆卵磷脂（天津博迪化工）；胆固醇（天津博
迪化工）；ＧＢ（纯度≥９９％，西安小草植物科技有限
责任公司）；胆酸钠（天津市化学试剂研究所）；维生
素Ｅ（浙江医药股份有限公司新昌制药厂）；甲醇为
色谱纯；其他试剂均为分析纯；０２２μｍ的微孔滤膜
（上海新亚）。
２ 方法
２．１ 银杏内酯柔性纳米脂质体的制备
称取５００ｍｇ大豆卵磷脂，１００ｍｇ胆固醇，５０ｍｇ
ＧＢ，２０ｍｇＶＥ，加入１００ｍＬ无水乙醇使之溶解，转
运至５００ｍＬ圆底烧瓶中，将装有上述溶液的圆底烧
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瓶与旋转减压蒸发仪连接，在圆底烧瓶上形成均匀
的薄膜。同时１００ｍｇ胆酸钠，加入介质溶剂使之溶
解，将其溶液滴加至圆底烧瓶中洗脱膜材，并继续水
化１ｈ。将得到的脂质体混悬液以水浴式超声仪超
声１０ｍｉｎ，再以 ０２２μｍ的微孔滤膜过滤，即得到
ＧＢ柔性纳米脂质体。制备过程中不加入胆酸钠，即
得普通ＧＢ纳米脂质体。
２．２ 粒径测定
取脂质体适量，滴入盛样器，用光子相关光谱仪
测定脂质体的平均粒径及粒径分布并记录照片；采
用电位测定仪测定脂质体的Ｚｅｔａ电位。
２．３ 形态观察
吸取脂质体混悬液少许滴于有支持膜的铜网
上，稍干后用３％的磷钨酸负染，滤纸吸铜网边缘
多余的液体，稍干后，用透射电镜观察其形貌并记
录照片。
２．４ 包封率测定
２．４．１ 色谱条件 ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８柱（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ）；柱温２８℃；检测波长２２５ｎｍ；流动
相甲醇０１％磷酸溶液（３５∶６５）；流速 １０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；进样量２０μＬ。
２．４．２ 标准曲线与线性范围 精密称取在１０５℃
干燥至恒重的 ＧＢ３００１２ｍｇ置１００ｍＬ量瓶中，用
流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取 １０，
２０，４０，６０，８０，１００ｍＬ分别置５０ｍＬ量瓶中并
稀释至刻度，用０２２μｍ微孔滤膜过滤后，分别取
２０μＬ注入液相色谱仪中测定。以峰面积（Ａ）为纵
坐标，浓度（Ｃ）为横坐标进行线性回归，得回归方程
为Ａ＝１５０９１９６Ｃ＋３１５８６５２，ｒ＝０９９９２，线性范
围为６００２～６００２４ｍｇ·Ｌ－１。
２．４．３ 精密度考察 精密吸取２．４．２项下的 ＧＢ
标准溶液２０μＬ照上述色谱条件，重复进样６次，测
定ＧＢ的峰面积，ＲＳＤ１１％（ｎ＝６），结果表明仪器
精密度良好。
２．４．４ 稳定性考察 取２．４．２项下的 ＧＢ标准溶
液，照上述色谱条件分别在０，２，４，６，８，１２，２４ｈ进
样测定银杏内酯 Ｂ的峰面积，ＲＳＤ０７６％，结果表
明ＧＢ标准溶液在２４ｈ内稳定。
２．４．５ 回收率测定 取２．４．２项下的 ＧＢ标准溶
液适量，分别加入０５ｍＬ空白脂质体中，加入无水
乙醇定容，配成６００２，２４０１０，６００２４ｍｇ·Ｌ－１３个
浓度的样品，分别进样３次，计算回收率，测得其平
均回收率为９９８％，ＲＳＤ０８６％（ｎ＝３）。
２．４．６ 脂质体包封率的测定 精密吸取１０ｍＬ脂
质体混悬液，置于塑料离心管中，８０００ｒ·ｍｉｎ－１高
速离心２０ｍｉｎ，取上清液，用微孔滤膜过滤后进样测
定，即得游离药物（Ｗ游）。
测定样品中 ＧＢ的总质量时，选择无水乙醇［４］
为脂质体消解液，可使混悬液澄清。精密吸取 ＧＢ
柔性纳米脂质体混悬液１０ｍＬ置于２０ｍＬ量瓶中，
用无水乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，经 ０２２μｍ
微孔滤膜过滤后注入液相色谱仪中测定，即得脂质
体中药物的总质量（Ｗ总）。
包封率＝（Ｗ总 －Ｗ游）／Ｗ总 ×１００％
２．５ 体外透皮试验
取体重合格的健康昆明种小鼠，脱颈处死，剪
净腹部的毛，然后剥离此处皮肤，剔除皮下脂肪组
织，用蒸馏水冲洗干净后即用；将皮肤夹于双室扩
散池中间，角质层面向供给池，真皮层面向接收
池；供给池分别注入２０ｍＬＧＢ醇溶液、ＧＢ柔性
纳米脂质体以及普通ＧＢ纳米脂质体，接受池中分
别加入２０ｍＬ３０％乙醇作为接受液，并在接受池中
加入磁力搅拌子；双室扩散池固定在磁力搅拌器
上，并以恒定的速度搅拌接收液，保持恒温在
（３２±０５）℃；分别于１，２，３，４，５，６，７，８ｈ
在接收池取样１０ｍＬ，并补给等量的同温度３０％
乙醇。接收液经０２２μｍ微孔滤膜过滤，注入液
相色谱仪中，由标准曲线计算浓度，按下式计算累
计渗透量和渗透速率：
累积渗透量：△Ｍ＝Ｖ∑Ｃ／Ａｅ
渗透速率：Ｊ＝△Ｍ／△ｔ
其中：Ｖ为扩散池容积（２０ｍＬ）；Ｃ为接收液中
ＧＢ的质量浓度；Ａｅ为有效扩散面积（２２７ｃｍ２）；△ｔ
为取样点的时间间隔。
３ 结果
３．１ ＧＢ柔性纳米脂质体外观形态
透射电镜测得 ＧＢ柔性纳米脂质体呈圆球形
状，表面光滑，形状规则，见图１。
３．２ ＧＢ柔性纳米脂质体的粒径分布和 Ｚａｔａ电位
测定
用Ｚａｔａｓｉｚｅｒ光子相关光谱仪测得 ＧＢ柔性纳米
脂质体的平均粒径为（２０８３±２５４９）ｎｍ，且粒径
分布较窄，见图２，测得 Ｚａｔａ电位为 －４９２ｍＶ，
见图３。
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图１ ＧＢ柔性纳米脂质体电镜照片 （×２００００）
图２ ＧＢ柔性纳米脂质体的粒径分布
图３ ＧＢ柔性纳米脂质体的Ｚａｔａ电位
３．３ ＧＢ柔性纳米脂质体包封率测定结果
脂质体平均包封率为 （８９５２±１７６）％。
３．４ 体外透皮结果
ＧＢ柔性纳米脂质体、普通 ＧＢ纳米脂质体和
ＧＢ溶液的累积渗透量和渗透速率结果见图４，５。
柔性纳米脂质体８ｈ的累积透过量为１８９９７μｇ·
ｃｍ－２，８ｈ的渗透速率为 ２３７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１，
分别是普通纳米脂质体和药物醇溶液的３１２倍和
６３２倍，差异具有统计学意义 （Ｐ＜００１）。
４ 讨论
本实验通过对ＧＢ柔性纳米脂质体的研制，显
示处方工艺可行。制得的柔性纳米脂质体通过电镜
观察，其形状规则，呈圆形，粒径理想。Ｚｅｔａ电位
图４ 不同剂型中ＧＢ的累积渗透量
图５ 不同剂型ＧＢ的渗透速率
为－４９２ｍＶ，表明脂质体粒子表面荷负电，这一
定程度上阻止了脂质体粒子聚结，保证了混悬液的
物理稳定性。
在体外透皮试验中，为了更好的模拟药物在体
内渗透条件，透皮接受介质必须对药物有足够的溶
解性。ＧＢ为脂溶性药物，因此常规接受液生理盐
水无法满足条件，根据文献报道［５］，综合考虑 ＧＢ
的溶解度和介质对皮肤的影响，故选择３０％乙醇
作为接受介质。
在透皮过程中，加入胆酸钠的柔性纳米脂质体
的累进渗透量明显高于普通纳米脂质体，Ｃｅｖｃ
等［６］认为常规脂质体柔性不够，通过皮肤角质层
狭窄孔道时易破碎而引起阻塞，而柔性纳米脂质体
具有高度的变形性，通过狭窄通道后仍保持原形。
药物脂质体进入皮肤后，在表皮真皮内形成药物储
库，使药物缓慢释放，可持久地发挥局部药效，显
著地提高药物的治疗指数。因此，柔性纳米脂质体
可显著促进ＧＢ的经皮吸收，从而为开发 ＧＢ制剂
奠定了基础。
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ｅｄ．ＥｖｉｄｅｎｃｅｆｒｏｍｄｏｕｂｌｅｌａｂｅｌＣＬＳＭｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓａｎｄｄｉｒｅｃｔｓｉｚｅ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，２００２，１５６４：２１．
ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｏｆｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ
ＬＩＵＴｉｎｇ１，ＺＨＥＮＸｉａｏｌｏｎｇ１，ＣＨＥＮＧＨａｏ１，ＬＩＷｅｉｚｅ２，ＨａｏＢａｏｈｕａ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＇ａｎ７１００６９，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅｏｆｐｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｐｒｅｐａｒｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ（ＧＢ）ａｎｄｓｔｕｄｙｔｈｅｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｌａｗｓ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＦｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｆｉｌｍｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｔｏａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｓｈａｐｅａｎｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ．
ｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｔｅｓｔｓｉｎｖｉｔｒｏｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｋｉｎｏｆｒａｔｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｍｏｄｉｆｉｅｄＦｒａｎｚｄｉｆｕｓｉｏｎｃｅｌｓ．Ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａ
ｔｅｄｐｅｒｍｅａｔｉｏｎａｍｏｕｎｔａｓｗｅｌａｓｔｈｅｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ，ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏｌｉｄ
ＢａｎｄｏｒｄｉｎａｒｙｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏｌｉｄＢ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｔｈｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗａｓ（８９５２
±１７６）％，ａｎｄｔｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｗａｓ（２０８３±２５４９）ｎｍ，ｔｈｅＺａｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌｗａｓ－４９２ｍＶ．Ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｐｅｒｍｅａｔｉｏｎａｍｏｕｎｔ
ｏｆｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｉｎ８ｈｏｕｒｓｗａｓ１８９９７μｇ·ｃｍ２，ａｎｄｉｔｓｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎ８ｈｏｕｒｓｗａｓ２３７５μｇ·ｃｍ－２·ｈ－１．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｔｈｅｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗａｓｇｏｏｄ，ａｎｄｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｉｓｆｉｎｅ．Ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓｃａｎ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｄｉｆｕｓｉｏｎｒａｔｅｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｋｉｎｏｆｒａｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｉｎｋｇｏｌｉｄＢ；ｆｌｅｘｉｂｌｅｎａｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｉｆｕｓｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ
［责任编辑 周 驰］
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