全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ测定野菊花中槲皮素、木犀草素、
芹菜素和刺槐素
申海进，郭巧生，房海灵，王艳茹，靳淼
（南京农业大学 中药材研究所，江苏 南京 ２１００９５）
［摘要］　目的：建立ＨＰＬＣ同时测定野菊花中槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素含量的方法。方法：ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相Ａ为甲醇，Ｂ为０２％磷酸溶液，线性梯度洗脱；检测波长３５０ｎｍ；柱温２５℃；流速１０ｍＬ
·ｍｉｎ－１；进样量 ２０μＬ。结果：槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素的浓度与峰面积，分别在 １０２～２０４８ｍｇ·Ｌ－１
（ｒ＝０９９９４），１０３～２０５４ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９２），１１２～２２４０ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９５），１０１～２０２２ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９８）呈
良好的线性关系；平均加样回收率依次为１０１３％，１００６％，９８４％，９９０２％，ＲＳＤ为１３％，１４％，１７％，０８３％。不同来源
的药材间４种测定的黄酮组分及总黄酮含量差异均极显著。结论：该方法快速，简便，重现性好，适合于同时测定野菊花样品
中槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素的含量。
［关键词］　野菊花；槲皮素；木犀草素；芹菜素；刺槐素；高效液相色谱法
［收稿日期］　２００９０７１８
［基金项目］　国家科技基础条件平台项目（２００５ＤＫＡ２１０００）
［通信作者］　 郭巧生，Ｔｅｌ：（０２５）８４３９６５９１；Ｅｍａｉｌ：ｇｑｓ＠
ｎｊａｕｅｄｕｃｎ
　　野菊花 ＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉ为菊科植物野
菊ＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍＬ的干燥头状花序，苦
辛，微寒，归肝、心经，清热解毒［１］。野菊花的主要
有效成分为黄酮类化合物，除蒙花苷［１］外，尚含刺
槐素／金合欢素［２３，６］、木犀草素［２６］、槲皮素［２３］、芹
菜素［６］、异泽兰素［６］等多种黄酮成分。因此建立能
准确测定野菊花中黄酮组分的方法，对于其质量控
制和确保疗效具有重要的意义。
关于野菊花中黄酮的测定方法很多，如木犀草
素和蒙花苷［４］同时测定的ＨＰＬＣ法；刺槐素、木犀草
素和槲皮素同时测定的毛细管电泳的紫外检测
法［２］及电化学检测法［３］。但野菊花中 ４种黄酮成
分同时测定的ＨＰＬＣ法则少见报道。
１　仪器、试剂与试药
液相色谱仪为美国 ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司
Ａｇｉｌｅｎｔ１１２０ＣｏｍｐａｃｔＬＣ（Ｇ４２８８Ａ）；紫外可见分光
光度计为美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司Ｌａｍｂｄａ２５。甲醇为
Ｍｅｒｃｋ色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其它试剂均为国
产 分 析 纯。木 犀 草 素 （纯 度 ≥ ９８％，批 号
１１６Ｋ４０７８）、槲皮素（纯度≥９８％，批号８７Ｋ０７４４）等
购自Ｓｉｇｍａ；刺槐素（纯度≥９７％，批号１４７０７２９４）购
自Ｆｌｕｋａ；芹菜素（纯度≥９５％，批号１１００６ＫＨ）购自
Ａｌｄｒｉｃｈ；芦丁（纯度≥９５％，批号１５７２４ＡＨ）购自Ｓｉｇ
ｍａＡｌｄｒｉｃｈ。
试验原植物材料于２００７采自江苏、安徽及浙江
各地，经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物
野菊Ｃｉｎｄｉｃｕｍ。种植于南京农业大学中药材研究
所药用植物种质资源圃，于２００８年１０月，当舌状花
序开放７０％左右时采集头状花序。采后立即 １０５
℃杀青３ｍｉｎ，再４５℃通风干燥至恒重，粉碎后过
１００目筛，备用。
２　方法与结果
２１　色谱条件　ＺＯＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相 Ａ为甲醇，Ｂ为
０２％磷酸水溶液，线性梯度洗脱，洗脱程序见表１；
流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３５０ｎｍ；柱温２５℃；进
样量２０μＬ。保留时间在３７ｍｉｎ内，色谱图见图１。
表１　梯度洗脱条件
ｔ／ｍｉｎ Ａ／％ Ｂ／％
０ ４７ ５３
２０ ４７ ５３
３０ ７０ ３０
４０ ７０ ３０
４５ １００ ０
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第３４卷第２４期
２００９年１２月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
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　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
Ａ混合对照品；Ｂ野菊花样品；１槲皮素；２木犀草素；
３芹菜素；４刺槐素。
图１　混合对照品及野菊花样品的ＨＰＬＣ图
２２　对照品溶液的制备　精密称取槲皮素、木犀草
素、芹菜素和刺槐素对照品，甲醇溶解制成对照品母
液。再分别吸取一定体积的各对照品母液于同一容
量瓶，甲醇定容得质量浓度依次为 １０２４０，５１３６，
２６８８，１０１１２ｍｇ·Ｌ－１的混合对照品溶液，０４５μｍ
滤膜滤过备用。
２３　供试品溶液的制备　样品以甲醇提取，料液比
１∶２０，浸泡４ｈ后，再超声提取１ｈ，过滤。药渣重复
提取３次，合并滤液定容后得样品提取液。植物组
织中的黄酮，除苷元外，还有糖苷［７］，测定前须水
解。据ＬｅｅＪＪ［８］方法，有改动，样品提取液加入浓
盐酸（样酸 ５∶１），９０℃水浴水解１ｈ，冷却后定容，
０４５μｍ滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液。
２４　线性关系考察　对照品溶液稀释至一定浓度
后，测定。以对照品溶液的质量浓度 Ｘ（ｍｇ·Ｌ－１）
为横坐标，峰面积 Ｙ为纵坐标进行线性回归，结果
见表２。
２５　精密度考察　对照品溶液连续进样５次。峰
面积 的 ＲＳＤ 依 次 为 ０２８％，０３２％，０６５％，
０２３％，表明精密度良好。
２６　稳定性试验　对照品溶液置４℃冰箱保存，分
　　
表２　各黄酮组分的回归方程、相关系数及线性范围
对照品 回归方程 ｒ 线性范围／ｍｇ·Ｌ－１
槲皮素　 Ｙ＝１Ｅ＋０６Ｘ＋２０７３０８ ０９９９４ １０２～２０４８
木犀草素 Ｙ＝１Ｅ＋０６Ｘ２３９４７２ ０９９９２ １０３～２０５４
芹菜素　 Ｙ＝２Ｅ＋０６Ｘ＋３６２５５ ０９９９５ １１２～２２４０
刺槐素　 Ｙ＝１Ｅ＋０６Ｘ＋２３６６２ ０９９９８ １０１～２０２２
别在０，１，４，８，１２，２４ｈ后，测定。峰面积的 ＲＳＤ分
别为：０６３％，０４７％，０８９％，０３２％，说明对照品
溶液在２４ｈ内稳定性良好。
２７　重复性　同一样品取５份，按２３项制备供试
液，测定。各测定成分含量的 ＲＳＤ依次为 １３％，
１５％，１７％，０８％，表明重复性良好。
２８　加样回收率试验　取一定体积的对照品溶液，
用已知黄酮含量并按 ２３项制备获得的供试液定
容，测定，结果见表３。
表３　槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素
的加样回收率（ｎ＝５）
对照品
样品中量
／μｇ
加入量
／μｇ
测得量
／μｇ
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
槲皮素　 ４８．４８ １０２．４０ １５２．８３ １０１．３ １．３
木犀草素 ３６．０５ ５１．３６ ８７．９５ １００．６ １．４
芹菜素　 ３７．２９ ２６．８８ ６３．１６ ９８．４ １．７
刺槐素　 ５０．９７ １０１．１２ １５０．６０ ９９．０２ ０．８３
２９　样品测定　槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐
素的含量测定按本文方法，总黄酮含量测定参照郭
巧生［９］的方法，外标法计算，并采用 Ｅｘｃｅｌ２００７和
ＳＰＳＳ１６０软件进行数据的统计分析。结果见表４。
３　讨论
本方法比吕元琦［２］和许雪琴［３］的方法多测定
了芹菜素，且采用了比毛细管电泳更普及的高效液
相色谱法。
表４　野菊花样品中槲皮素、木犀草素、芹菜素、刺槐素及总黄酮的含量（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
样品来源 槲皮素／％ 木犀草素／％ 芹菜素／％ 刺槐素／％ 总黄酮％
江苏南京 ０．１９±０．０１ｅ ０．０７±０．００ｅ ０．１１±０．０１ｇ ０．２５±０．０１ｅ ２．７３±０．１１ｇ
江苏常州 ０．１２±０．０１ｆ ０．１４±０．００ｄ ０．２１±０．０１ｄ ０．２７±０．００ｄ ３．２３±０．０９ｆ
江苏无锡 ０．２３±０．０１ｄ ０．０５±０．００ｆ ０．１６±０．０１ｆ ０．３２±０．０１ｃ ３．３７±０．０７ｅｆ
浙江湖州 ０．２４±０．０１ｄ ０．１３±０．００ｄ ０．１９±０．０１ｅ ０．２４±０．００ｅ ３．５５±０．１３ｅ
安徽滁州 ０．２７±０．０１ｃ ０．２５±０．０１ｂ ０．２７±０．０１ｃ ０．３３±０．０１ｃ ５．０４±０．０７ｄ
安徽宣城 ０．２８±０．００ｃ ０．２２±０．０１ｃ ０．２８±０．０１ｂｃ ０．４２±０．０１ａ ５．４５±０．０９ｃ
安徽阜阳 ０．３１±０．０１ｂ ０．２７±０．０１ａ ０．３２±０．０１ａ ０．３９±０．０１ｂ ５．７３±０．１２ｂ
安徽六安 ０．３９±０．０１ａ ０．２８±０．０１ａ ０．３０±０．０１ｂ ０．４１±０．０１ａ ６．１９±０．０８ａ
　　注：差异显著性分析取α＝００１水平，同一列中含有不相同字母者为差异极显著。
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　　样品提取液水解后用紫外可见分光光度计扫
描，扫描范围２９０～４５０ｎｍ，步长２ｎｍ，结果显示在
３２０，３２９，３３９，３５１，３６５ｎｍ等处有吸收峰，选择了
３５０ｎｍ作液相检测波长，试验显示在此波长下的各
测定成分的含量变化和峰面积响应以及线性都较
好。这与药用菊花的 ＨＰＬＣ法同时测定槲皮素、木
犀草素和芹菜素时，选择的２５３ｎｍ［９］，及同时测定
木犀草素、芹菜素和香叶木素时，选择的３４４ｎｍ［１０］
都有差异，推测是由于野菊花和菊花的提取液中所
含杂质不同所致。本文测定结果与刘菲等［１１］的研
究结果存在一定差异，这可能与测定的目的物不同
有关。
来源于安徽的野菊花样品中４种测定的黄酮组
分及总黄酮的含量均比来源于江苏和浙江的高，这
与ＣｈｅｎｇＷＭ［１２］提出的安徽产野菊花的质量较好
的观点一致。其确切的原因将有待进一步研究。
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［１０］　李福高，周慧，孙冬黎，等ＨＰＬＣ法测定经酸水解的菊花中
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黄酮的含量 ［Ｊ］中国中药杂志，２００９，３４（１６）：２０６７
［１２］　ＣｈｅｎｇＷＭ，ＬｉＪ，ＹｏｕＴＰ，ＨｕＣＭＡｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄ
ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍｔｈｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｏｆＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍＬｉｎｎｅ［Ｊ］ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００５，
１０１：３３４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ｌｕｔｅｏｌｉｎ，ａｐｉｇｅｎｉｎａｎｄａｃａｃｅｔｉｎｉｎ
ＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉｂｙＲＰＨＰＬＣ
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ｓｅｓｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ０２％ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃａｃｉｄｉｎａｇｒａｄｉｅｎｔｍａｎｎｅｒＴｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓｓｅｔａｔ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ
３５０ｎｍＲｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ１０２２０４８ｍｇ·Ｌ－１ｆｏｒｑｕｅｒｃｅｔｉｎ（ｒ＝０９９９４，ｎ＝５），１０３２０５４ｍｇ·Ｌ－１ｆｏｒ
ｌｕｔｅｏｌｉｎ（ｒ＝０９９９２，ｎ＝５），１１２２２４０ｍｇ·Ｌ－１ｆｏｒａｐｉｇｅｎｉｎ（ｒ＝０９９９５，ｎ＝５），１０１２０２２ｍｇ·Ｌ－１ｆｏｒａｃａｃｅｔｉｎ（ｒ＝０９９９
８，ｎ＝５），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙＲｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅ１０１３％ ｗｉｔｈＲＳＤ１３％ ｆｏｒｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，１００６２％ ｗｉｔｈＲＳＤ１４％ ｆｏｒｌｕｔｅｏｌｉｎ，９８４２％
ｗｉｔｈＲＳＤ１７％ ｆｏｒａｐｉｇｅｎｉｎａｎｄ９９０２％ ｗｉｔｈＲＳＤ０８％ ｆｏｒａｃａｃｅｔｉｎＡｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（α＝００１）ａｍｏｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
ｆｏｕｒｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗａｓｆｏｕｎｄＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｑｕｉｃｋ，ｓｉｍｐｌｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ｌｕｔｅｏｌｉｎ，ａｐｉｇｅｎｉｎａｎｄａｃａｃｅｔｉｎｉｎＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉＩｎｄｉｃｉ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉｉｎｄｉｃｕｍ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ｌｕｔｅｏｌｉｎ；ａｐｉｇｅｎｉｎ；ａｃａｃｅｔｉｎ；ＨＰＬＣ
［责任编辑　王亚君］
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