全 文 ：大孔吸附树脂超声波辅助解吸附法纯化
淫羊藿中的总黄酮
赵丽恋１，刘　韶２，罗杰英３
（１．湖南中医药大学 药学院，湖南 长沙 ４１０００７；
２．中南大学 湘雅医院 药剂科，湖南 长沙 ４１０００８；
３．湖南中医药大学，湖南 长沙 ４１０００７）
［摘要］　目的：研究大孔吸附树脂超声波辅助法分离和纯化淫羊藿中的总黄酮的工艺条件。方法：以总黄酮的吸附量
和解吸率为考察指标，考察大孔吸附树脂对箭叶淫羊藿黄酮的吸附和解吸附条件。结果：采用 Ｄ１０１型大孔吸附树脂联合超
声波辅助解吸附效果最好。通过纯化后，终产品中物总黄酮含量可达６３８％。结论：本法简单、可行，适合工业生产。
［关键词］　淫羊藿；总黄酮；大孔吸附树脂；超声波
［收稿日期］　２００８１２２３
［通信作者］　罗杰英，教授，博士生导师，Ｔｅｌ：１３９０７３１３３４７，Ｅｍａｉｌ：
ｌｕｏｊｉｅｙｉｎｇｌｊｙ＠２１ｃｎ．ｃｏｍ
［作者简介］　赵丽恋，博士生，研究方向为中药新制剂与新技术，Ｔｅｌ：
（０１０）６４１７８５６２，Ｆａｘ：（０１０）６４１７８５６７，Ｅｍａｉｌ：ｖｏｉｃｅｚｈａｏｌ＠１６３．ｃｏｍ
　　淫羊藿为小檗科植物淫羊藿 Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍｂｒｅｖｉ
ｃｏｒｎｕｍＭａｘｉｍ．、箭叶淫羊藿 Ｅｓａｇｉｔａｔｕｍ（Ｓｉｅｂ．ｅｔ
Ｚｕｃｃ．）Ｍａｘｉｍ．、柔毛淫羊藿ＥｐｕｂｅｓｃｅｎｓＭａｘｉｍ．、巫
山淫羊藿 ＥｗｕｓｈａｎｅｎｓｅＴ．Ｓ．Ｙｉｎｇ、或朝鲜淫羊藿
ＥｋｏｒｅａｎｕｍＮａｋａｉ的干燥地上部分，具有补肾阳，强
筋骨，祛风湿之功效［１］。其主要有效成分为淫羊藿总
黄酮。大孔吸附树脂是在２０世纪６０年代末以离子
交换树脂的基础上发展起来的分离新技术，具有物理
化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、
解吸条件温和、再生处理方便、操作简便、成本较低、
可反复使用等优点。应用大孔吸附树脂分离纯化中
药中的有效组分已成为普遍手段，这些工艺筛选较复
杂，特别是动态解吸附过程中，由于解吸附剂比例的
变化，容易在树脂柱中产生大量气泡，导致工艺不稳
定，解吸附不完全。应用超声波能的提取能力，不进
行柱色谱洗脱，即可解吸附出树脂中吸附的成分，将
大大缩短工艺时间，而且更稳定。大孔吸附树脂分离
纯化淫羊藿总黄酮的工艺已有大量研究［２６］，但未见
利用超声波进行解吸附的报道。本研究报道大孔吸
附树脂吸附淫羊藿中的总黄酮类成分，再利用超声波
解吸附分离纯化淫羊藿总黄酮的工艺。
１　材料
Ｌａｍｂｄａ２５型紫外可见分光光度计（珀金埃尔
默仪器上海有限公司）；ＡＧ２８５电子分析天平（德国
梅特勒公司）；ＫＳ６００Ｄ型超声波清洗器（宁波科生
仪器厂）；淫羊藿来源于湖南省药材公司，经鉴定为
箭叶淫羊藿Ｅｓａｇｉｔａｔｕｍ；淫羊藿苷对照品（中国药
品生物制品检定所，批号 ７３７２００１１１）；ＨＰＤ１００，
ＨＰＤ４００和ＨＰＤ６００大孔吸附树脂（河北沧州宝恩
化工有限公司）；ＬＳＤ６３２，ＬＳＡ１０，ＬＳＡ４０，ＬＳＡ５Ｂ
和ＸＤＡ５大孔吸附树脂（西安蓝晓科技有限公司），
Ｄ１０１型大孔吸附树脂（天津农药股份有限公司树
脂分公司），其余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　供试液的制备
淫羊藿２００ｇ用水提取２次，第１次１０倍量，回
流提取２ｈ，过滤；滤渣加８倍量的水继续回流１５
ｈ，过滤，合并２次滤液。减压浓缩至５００ｍＬ，备用。
２．２　总黄酮的含量测定
２．２．１　对照品溶液的制备　精密称取称取在１０５
℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品 ５ｍｇ，加乙醇溶
解，定容于５０ｍＬ量瓶中，摇匀即得，备用。
２．２．２　标准曲线绘制　精密吸取淫羊藿苷对照品溶
液０５，１０，１５，２０，２５，３０ｍＬ分别于１０ｍＬ量瓶
中，加乙醇稀释至刻度，以乙醇为空白，用分光光度
法，分别在２７０ｎｍ波长处测定吸收度，以吸收度为纵
坐标，质量浓度为横坐标，进行线性回归，结果表明淫
羊藿苷在５～３０ｍｇ·Ｌ－１与吸光度呈线性关系，回归
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方程Ｃ＝００２６２Ａ＋０００１２，ｒ＝０９９９４。
２．２．３　精密度试验　精密量取浓度为１０ｍｇ·Ｌ－１
的淫羊藿苷对照溶液在２７０ｎｍ波长处测定吸光度，
结果ＲＳＤ１５３％（ｎ＝５），表明精密度良好。
２．２．４　稳定性试验　分别量取同一供试品溶液，分
别于０，２，４，６，８ｈ测定吸光度Ａ，结果ＲＳＤ１９４％
（ｎ＝５），表明供试品溶液在８ｈ内稳定性良好。
２．２．５　样品中总黄酮的测定　取淫羊藿供试液和
经树脂处理的淫羊藿供试溶液，稀释适当浓度后，按
标准曲线下方法测定吸光度，代入回归方程计算总
黄酮含量。
２．３　吸附实验
２．３．１　淫羊藿总黄酮吸附容量的测定　精密称取
预处理好的树脂４０ｇ，置于５０ｍＬ磨口锥形瓶中，
加供试液２０ｍＬ，室温下静态吸附１２ｈ后，测定剩余
溶液中淫羊藿总黄酮的浓度，按下式计算各树脂对
淫羊藿总黄酮的吸附容量（ｍｇ·ｇ－１干树脂）：Ｑ＝
（ｍ１－ｍ２）／Ｗ。
式中Ｑ：吸附量（ｍｇ·ｇ－１）。ｍ１：供试液中总黄
酮的量（ｍｇ）。ｍ２：未被吸附的总黄酮的量（ｍｇ）。
Ｗ：树脂质量（ｇ）。结果见表１。
表１　９种树脂的吸附量与解吸率
树脂型号 类别 吸附量／ｍｇ·ｇ－１ 解析率／％
ＨＰＤ１００ 非极性 ３６．４ ８９．８
ＨＰＤ４００ 中极性 ２９．６ ９３．２
ＨＰＤ６００ 极性　 ２０．２ ９５．４
ＬＳＤ６３２ 极性　 ２２．４ ９７．６
ＬＳＡ１０ 中极性 ２８．８ ９５．６
ＬＳＡ４０ 中极性 ２４．５ ９４．３
ＬＳＡ５Ｂ － ３５．７ ９１．５
ＸＤＡ５ 非极性 ３７．６ ９０．４
Ｄ１０１ 非极性 ３９．５ ９２．３
从表１可见，３种非极性树脂 ＨＰＤ１００，ＸＤＡ５
和Ｄ１０１的吸附量较大，分别达到３６４，３７６，３９５
ｍｇ·ｇ－１；活性高比表面树脂 ＬＳＡ５Ｂ吸附量也比较
大，达到３５７ｍｇ·ｇ－１；中极性树脂 ＨＰＤ４００，ＬＳＡ
１０和 ＬＳＡ４０的吸附量居中，分别为 ２９６，２８８，
２４５ｍｇ·ｇ－１；而极性树脂 ＨＰＤ６００和 ＬＳＤ６３２的
吸附量较小，分别为２０２，２２４ｍｇ·ｇ－１。
２．３．２　超声波解吸附试验　吸附饱和的树脂精密
加入乙醇溶液６０ｍＬ，用超声波解吸５ｍｉｎ，过滤，测
定乙醇溶液中总黄酮的含量，并按下式计算总黄酮
解吸率：Ｅ＝ｍ３／ｍ４×１００％。
式中Ｅ：解吸率。ｍ３：乙醇解吸附的总黄酮量
（ｍｇ）。ｍ４：树脂中被吸附的总黄酮量（ｍｇ）＝供试
液中总黄酮的量（ｍｇ）－未被吸附的总黄酮的量
（ｍｇ），即ｍ４＝ｍ１－ｍ２。
结果表明，采用超声波辅助，乙醇对９种树脂吸
附的总黄酮有较好的解吸附效果，最高达９７６％。
根据９种树脂吸附与解吸附的比较，发现 Ｄ１０１型
树脂对淫羊藿总黄酮吸附容量最大，而且总黄酮的
解吸率，可达９２３％，所以选定这种树脂作进一步
的研究。
２．４　解吸剂浓度的考察
解吸剂采用乙醇水体系，该体系效果好，成本
低，毒性也较低，故在本试验中作为解吸剂。将已吸
附好供试液的Ｄ１０１型树脂６份，先用６０ｍＬ水超
声波解吸５ｍｉｎ，弃去水溶液，再分别用１０％，３０％，
５０％，７０％，８０％，９０％乙醇溶液各６０ｍＬ进行超声
波解吸５ｍｉｎ，测定乙醇溶液中总黄酮的含量，计算
解吸率。结果解吸率随乙醇浓度的增加而增大，
１０％，３０％乙醇解吸率很低，８０％乙醇即可将大部分
总黄酮解吸，但乙醇浓度超过８０％以后，解吸率增
加很小，考虑到随着解吸液浓度的增加，解吸液洗下
杂质也会增多，故选择８０％的乙醇做解吸剂。
２．５　解吸剂用量的考察
将已吸附好 ２０ｍＬ供试液的 Ｄ１０１型树脂
４０ｇ（约１２ｍＬ），４份，先用水６０ｍＬ解吸后，再分
别用２，３，４，５倍树脂体积量的８０％乙醇，超声波解
吸５ｍｉｎ，取解吸液，测定乙醇溶液中总黄酮的含量，
计算解吸率，结果使用４倍树脂体积量与使用５倍
量解吸率相差不大，分别为 ８５３％，８９２％。但当
解吸液用量为树脂体积２，３倍量时，解吸率就只有
７０％左右，从节约溶剂及时间方面考虑，解吸剂的用
量确定为树脂体积的４倍。
２．６　淫羊藿中总黄酮类成分保留率考察
将已吸附好样品溶液的 Ｄ１０１型树脂分别用５
倍量树脂体积的水解吸附，再用４倍量树脂体积的
８０％乙醇超声波解吸５ｍｉｎ，取解吸液，测定总黄酮，
计算纯化后总黄酮解吸率，另分别测定树脂纯化前、
后样品液总固物量，计算总固物保留率，结果淫羊藿
提取液经Ｄ１０１型大孔树脂吸附后，８０％乙醇解吸
液总固物的量大约是纯化前总固物的２１５％，纯化
后样品中总黄酮占总固物的６３８％，总黄酮解吸率
为９０１％，说明采用优选出的工艺参数进行实验，
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可以明显减少总固物的得率，提高总黄酮在总固物
中的含量。
３　结论
通过对９种不同类型大孔吸附树脂吸附和解吸
特性的综合比较发现，非极性树脂 Ｄ１０１对淫羊藿
中的总黄酮类成分吸附容量较大，解吸率高，纯化前
总浸膏中淫羊藿总黄酮含量为５７８％ ，纯化后总
固体物中淫羊藿总黄酮含量为６３８％，且解吸率达
９０％以上，证明Ｄ１０１型大孔吸附树脂对淫羊藿总
黄酮有较好的分离纯化作用，且工艺简便，成本低，
易于工业化大生产。
［参考文献］
［１］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２３４．
［２］　金向群，刘永刚，随志刚，等．Ｄ１４０大孔树脂分离纯化淫羊藿
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［３］　谢娟平，孙文基．ＬＳＡ２０树脂吸附分离箭叶淫羊藿黄酮的研究
［Ｊ］．中药材，２００７，３０（４）：４６６．
［４］　葛淑兰，田景振．大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮的分离纯化工
艺研究［Ｊ］．中国药学杂志，２００５，４０（５）：３６５．
［５］　李秀男，孙海虹，马润宇，等．大孔吸附树脂柱层析分离淫羊藿
苷的研究［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００５，１７（２）：１３８．
［６］　肖　洋，何照范．大孔树脂对淫羊藿黄酮的吸附分离［Ｊ］．山地
农业生物学报，２００３，２２（５）：４１４．
ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｆｒｏｍＨｅｒｂａＥｐｉｍｅｄｉｂｙ
ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎｗｉｔｈｔｈｅｈｅｌｐｏｆｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ＺＨＡＯＬｉｌｉａｎ１，ＬＩＵＳｈａｏ２，ＬＵＯＪｉｅｙｉｎｇ３
（１．ＨｕｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙｏｆＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｅｒＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００８，Ｃｈｉｎａ；
３．ＨｕｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｆｒｏｍＨｅｒｂａＥｐｉｍｅｄｉｂｙｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐ
ｔｉｏｎｒｅｓｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｎｉｎｅｔｙｐｅｓｏｆｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｆｏｒｓｅｐａｒａｔｉｎｇｅｆｉｃｉｅｎｃｙｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｉｏ，
ｅｌｕｔｉｎｇｒａｔｉｏｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＤ１０１ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｓｅｐａｒａｔｉｎｇｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ａｆｔｅｒｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎｄ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｔ，ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｐｕｒｉｔｙｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｗａｓｕｐｔｏ６３８％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｆｅａｓｉｂｌｅａｎｄｆｉｔｆｏｒｉｎ
ｄｕｓｔｒｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＨｅｒｂａＥｐｉｍｅｄｉ；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
［责任编辑　周　驰］
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