全 文 ：乌药中异喹啉生物碱去甲异波尔定的含量测定
陈建忠１，鱺桂新２，３，杨莉２，王长虹２，王峥涛１，２，３
（１．中国药科大学 生药学研究室，江苏 南京 ２１００３８；
２．上海中医药大学 教育部中药标准化重点实验室，上海 ２０１２１０；
３．上海中药标准化研究中心，上海 ２０１２１０）
［摘要］ 目的：建立乌药中去甲异波尔定的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定去甲异波尔定（ｎｏｒｉｓｏｂｏｌｄｉ
ｎｅ）的含量，以ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉＣ１８柱为固定相，乙腈０５％甲酸（加三乙胺调节ｐＨ至２２５）为流动相，梯度洗脱，检测波长
为２８０ｎｍ，柱温２５℃。结果：去甲异波尔定在 ００１５～１５０９μｇ峰面积与进样量呈良好的线性，ｒ＝０９９９９；平均回收率为
９９５８％，相对标准偏差为１４％。结论：通过对２０批不同来源的乌药样品中去甲异波尔定的测定，结果表明方法简单，准确
可靠，重复性好，可为提升乌药的质量标准提供依据。
［关键词］ 乌药；去甲异波尔定；高效液相色谱法；含量测定
［收稿日期］ ２００９０３２４
［通讯作者］ 王峥涛，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０２１）５１３２２５０７，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｚｈｔ＠
ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
乌药为樟科山胡椒属植物乌药Ｌｉｎｄｅｒａａｇｇｒｅｇａ
ｔａ（Ｓｉｍｓ）Ｋｏｓｔｅｒｍ．的干燥块根，为传统常用中药，
是重要的温胃理气止痛药之一［１］。药理学研究表
明乌药具有广泛的药理活性。如乌药能增加消化液
的分泌［２］，还能对抗临床应用大黄引起的腹痛［３］，
有兴奋和增强胃运动节律作用［４］，可以显著抑制溃
疡的形成，明显对抗乙醇诱发的细胞损伤，具有细胞
保护作用［５］。近来又发现乌药具有较强的镇痛、抗
炎作用［６］和显著的抗风湿作用［７］。
《中国药典》２００５年版一部中乌药的薄层鉴别
和含量测定的指标成分都是乌药醚内酯。乌药醚内
酯为倍半萜类成分，是乌药的特征性成分，专属性
强，作为乌药的真伪鉴别指标较为适宜。但乌药醚
内酯为脂溶性成分，在水煎液中的煎出率较低，且含
量也较低，作为含量测定的指标不是最佳的选择。
乌药含有多种异喹啉类生物碱［８］，且具有良好的生
物活性，试验表明乌药总碱具有抗类风湿关节炎的
活性，口服给药能显著抑制大鼠佐剂关节炎、小鼠胶
原关节炎，并能显著抑制 ＣｏｎＡ（刀豆蛋白 Ａ）引起
的小鼠脾淋巴细胞增殖，ＬＰＳ（脂多糖）所致小鼠腹
腔巨噬细胞释放 ＮＯ（一氧化氮）和 ＩＬ１（白细胞介
素１）［９１１］，去甲异波尔定是其中的主要成分。最新
研究报道，乌药中异喹啉类生物碱的含量测定方法
有高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）和超高效液相色谱法
（ＵＰＬＣ）两种，测定的指标成分有波尔定、降波尔
定、网状香荔枝碱和 Ｌｉｎｄｅｒｅｇａｔｉｎｅ［１２１３］。综上所述，
本实验选择去甲异波尔定作为含量测定的指标，采
用高效液相色谱法进行含量测定，为提升乌药的质
量标准提供方法依据。
１ 仪器与试药
美国安捷伦 ＨＰ１１００系列高效液相色谱仪（包
括四元泵，自动进样器，二极管阵列检测器。去甲异
波尔定对照品由上海中药标准化研究中心提供（纯
度大于９８％），乙腈为色谱纯（美国Ｆｉｓｈｅｒ公司），甲
酸和三乙胺为色谱纯（美国 Ｔｅｄｉａ公司），水为重蒸
水，其余溶剂为分析纯。
２０批乌药样品分别收集于安徽、河北、河南、四
川、哈尔滨、贵州、江西、浙江等地和市售乌药，均由
上海中医药大学吴立宏博士鉴定，除了一批为伪品
以外，其余的均为樟科山胡椒属植物乌药 Ｌ．ｅａｇ
ｇｒｅｇａｔａ。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相，乙腈为 Ａ相，
０５％甲酸（用三乙胺调节 ｐＨ至２２５）为 Ｂ相，梯
度洗脱，０～１３ｍｉｎ，１０％ ～２２％Ａ；１３～２２ｍｉｎ，２２％
Ａ。柱温 ２５℃；流速 １ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长 ２８０
ｎｍ，进样量５μＬ。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取去甲异波尔定
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对照品适量，加甲醇０５％盐酸的混合溶液（２∶１）制
成每１ｍＬ中含去甲异波尔定 ０２ｍｇ，摇匀，即得。
２．３ 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）
０５ｇ，精密称定，置２５０ｍＬ圆底烧瓶中，精密加入
甲醇稀盐酸（０５％）的混合液（２∶１）２５ｍＬ，称定质
量，加热回流并保持微沸１ｈ，放冷，再称定质量，用
甲醇稀盐酸（０５％）的混合液（２∶１）补足减失的质
量，摇匀，静止，取上清夜，０４５μｍ滤膜过滤即得。
２．４ 检测限与定量限 以信噪比为３∶１确定检测
限为 １５０９ｎｇ；以信噪比为 １０∶１确定定量限为
３０１８ｎｇ，ＲＳＤ１７％。
２．５ 线性关系 取去甲异波尔定对照品１５ｍｇ，精
密称定，置５０ｍＬ量瓶中，加混合溶剂甲醇稀盐酸
（０５％）溶液（２∶１）稀释至刻度，摇匀。精密吸取该
溶液０１，２，４，６，８，１０ｍＬ转移至１０ｍＬ量瓶中，加
混合溶剂甲醇０５％盐酸溶液（２∶１）至刻度，摇匀，
分别制成浓度为 ０００３０，００６０４，０１２０７，０１８１
１，０２４１５，０３０１８ｇ·Ｌ－１的对照品溶液。准确吸
取上述对照品溶液５μＬ，按上述确定的色谱条件进
行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，回归方
程为Ｙ＝８５６９４Ｘ－１３３０３，相关系数ｒ＝０９９９９。
２．６ 精密度试验 准确吸取同一供试品溶液 ５
μＬ，连续６次，分别测定去甲异波尔定的峰面积，结
果ＲＳＤ０３８％。
２．７ 重现性试验 取同一样品（四川成都）６份，精
密称定，按“供试品溶液制备”项下操作，在上述色
谱条件下进行进样测定，测得去甲异波尔定的平均
含量为０９９０％，ＲＳＤ０３８％。
２．８ 稳定性试验 准确吸取同一供试品溶液 ５
μＬ，分别在０，４，１２，２４，４８，７２ｈ进行测定，以去甲异
波尔定的峰面积进行考察，进样 ６次，测得 ＲＳＤ
０９３％。表明，样品至少在７２ｈ内稳定。
２．９ 加样回收率试验 取已知去甲异波尔定含量
的乌药样品粉末０２５ｇ，精密称定９份，每３份加入
相同量（分别为已知含量的８０％，１００％，１２０％）的
去甲异波尔定对照品，按“供试品溶液制备”项下方
法操作，测定。９次平均回收率为 ９９５８％，ＲＳＤ
１４％。结果见表１。
２．１０ 样品测定 按照本方法的测定条件，分别测定
２０批次的乌药样品，每个批次平行２份，每份样品平
行进样２次，以外标法计算样品中去甲异波尔定的含
量，结果见表２。样品和对照品ＨＰＬＣ图见图１。
表１ 加样回收率试验考察（ｎ＝９）
称样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０２４８５ ２４６０２ １９８０ ４４７４９ １０１７６
０２４５１ ２４２６５ １９８０ ４４３２１ １０１２９
０２４８３ ２４５８２ １９８０ ４４４１２ １００１５
０２４１８ ２３９３８ ２４６３ ４８２１５ ９８５７
０２４９３ ２４６８１ ２４６３ ４８８１７ ９８００ ９９５８１４３
０２４４７ ２４２２５ ２４６３ ４８２３１ ９７４７
０２４８７ ２４６２１ ２９６０ ５４０７４ ９９５０
０２４５３ ２４２８５ ２９６０ ５３８５８ ９９９１
０２４４１ ２４１６６ ２９６０ ５３６３９ ９９５７
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．去甲异波尔定。
图１ 去甲异波尔定对照品及样品ＨＰＬＣ图
表２ ２０批次不同来源乌药中去甲异波尔定的
质量分数（ｎ＝２） ％
收集地 产地 去甲异波尔定
安徽亳州 浙江 ０２１４
浙江天台 浙江 ０２６５
上海浦东新区 浙江 ０３８３
浙江天台 浙江 ０４８４
江西玉山 浙江 ０６４６
河北安国 浙江 ０６５６
河北安国 浙江 ０６９０
黑龙江哈尔滨 浙江 ０７５８
河南中原 浙江 １０７９
安徽亳州 浙江 １２６５
广东广州 广东 ０３１５
四川成都 广东 ０９６６
陕西西安 福建 ０５２０
广东普宁 江西 ０７３６
湖北 湖北 ０７３３
重庆石柱 重庆 ００００
贵州威宁 不详 ０６１０
贵州贵阳 不详 ０９８５
四川内江 不详 ０９８９
四川威远 不详 １０８２
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３ 讨论
在供试品溶液制备中，分别考察了不同的提取
溶剂（０５％盐酸溶液、１％盐酸溶液、甲醇、不同比
例的甲醇和０５％盐酸溶液的混合液、氯仿和醋酸
乙酯）、不同的提取方法（超声法、回流法和浸渍
法）、提取时间（３０，６０，１２０，１８０ｍｉｎ）、提取次数（１
次、２次和３次），结果表明，以甲醇和０５％盐酸溶
液混合液（２∶１）为溶剂，５０倍量，回流提取一次，每
次６０ｍｉｎ，为最佳提取方法。
在耐受性实验中，还分别考察了不同的色谱柱、
不同流速、不同的柱温和不同流动相 ｐＨ值等，结果
表明，色谱条件的微小变化对测定结果影响不大
（ＲＳＤ均小于２％），说明本方法的耐用性好。
各批样品中去甲异波尔定的含量在 ０２１４～
１２６５％，不同产地之间的含量相差比较大，即使同
一产地的各个批间，也差异较大。其中从重庆石柱
收集的样品为伪品，未能检出去甲异波尔定。说明
各地各批次的乌药品质有较大的区别，这不利于中
医的临床用药。因此，本文报道乌药中去甲异波尔
定的含量测定方法，简单、可靠和重现性好，可用于
中药乌药的质量控制研究，对于提高其质量、保证临
床疗效具有重要意义。
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ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｏｒｉｓｏｂｏｌｄｉｎｅｉｎＲａｄｉｘＬｉｎｄｅｒａｅｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＣＨＥＮＪｉａｎｚｈｏｎｇ１，ＣＨＯＵＧｕｉｘｉｎ２，３，ＹＡＮＧＬｉ２，ＷＡＮＧＣｈａｎｇｈｏｎｇ２，ＷＡＮＧＺｈｅｎｇｔａｏ１，２，３
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００３８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｔｉｙｏｆ
ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１２０１，Ｃｈｉｎａ；
３．ＳｈａｎｇｈａｉＲ＆ＤＣｅｎｔｒｅｆｏｒＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１２０１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｏｒｉｓｏｂｏｌｄｉｎｅｉｎＲａｄｉｘＬｉｎｄｅｒａｅａｎｄｔｏ
ｐｒｏｖｉｄｅｖａｌｕａｂｌｅｄａｔａｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲａｄｉｘＬｉｎｄｅｒａｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉＣ１８ｃｏｌ
ｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｔ２５℃ ｕｓｉｎｇａｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｏｆｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡ（０５％ ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ，ａｄｊｕｓｔｅｄｐＨ２２５ｗｉｔｈｔｒｉ
ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）ａｎｄｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢ（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２８０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄ
ｌｉｎｅａｒｉｔｙ（ｒ＝０９９９９）ｗｉｔｈｉｎｔｅｓｔｒａｎｇｅｓｏｆ００１５１５０９μｇ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９５８％ ｗｉｔｈＲＳＤｏｆ１４％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：
Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．ＩｔｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＲａｄｉｘＬｉｎｄｅｒａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲａｄｉｘＬｉｎｄｅｒａｅ；ｎｏｒｉｓｏｂｏｌｄｉｎｅ；ＨＰＬＣ；ａｓｓａｙ
［责任编辑 王亚君］
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第３４卷第２１期
２００９年１１月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００９