全 文 ：ＨＰＬＣ测定决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量
唐力英１，王祝举１，邬秋萍２，赫 炎３，黄璐琦１
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；２．江西中医学院，江西 南昌 ３３０００６；
３．中国中医科学院 中医临床基础研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：建立决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量测定方法。方法：采用 ＨＰＬＣ，ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈四氢呋喃１％冰醋酸（１８∶３∶７９），流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３０℃，检测波长２７８
ｎｍ。结果：红镰霉素龙胆二糖苷在０１～０５μｇ线性关系良好（ｒ＝０９９９９），平均回收率１０１１％（ｎ＝５），ＲＳＤ
２２％。结论：本法快速、灵敏、准确、可靠、重复性好，可用于中药决明子药材的质量控制。
［关键词］ 决明子；红镰霉素龙胆二糖苷；ＨＰＬＣ；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０３６６０３
［收稿日期］ ２００７０１１９
［通讯作者］ 王祝举，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９７５，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎ
ｇｚｈｕｊｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
决明子为豆科植物决明 ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．或
小决明Ｃ．ｔｏｒａＬ．的干燥成熟种子，具有清肝明目，
润肠通便的功效［１］。现代研究表明，决明子主要药
效成分为蒽醌类和萘并吡喃酮苷类化合物［２］。据
报道决明子中某些蒽醌苷和萘并吡喃酮苷具有对抗
四氯化碳和半乳糖胺对原代培养小鼠肝细胞毒害的
作用［３，４］。决明子药材的质量控制目前多用大黄
素、大黄酚等常见的蒽醌苷元，但这些化合物专属性
差，且含量低，药典２００５年版采用水解后测定，要求
含量不低于００８％。国内外关于萘并吡喃酮糖苷
类化合物含量测定尚未见报道。作者在研究中发现
红镰霉素龙胆二糖苷（ｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ）属
于萘并吡喃酮糖苷类化合物，为决明子中特有成分，
其他植物中未见报道，并且具有保肝活性，含量又
高，用于决明子的质量控制专属性强，因此本实验建
立了高效液相色谱法测定其含量，并对不同来源的
决明子药材进行了该成分的含量测定。结果表明本
法快速、灵敏、准确，可靠，重复性好，可用于中药决
明子药材的质量控制，为评价决明子药材质量提供
了参考依据。
１ 仪器与试药
美国Ｗａｔｅｒｓ公司高效液相色谱仪（ＷａｔｅｒｓＤｅｌｔａ
２６９５型泵，Ｗａｔｅｒｓ２９９６紫外检测器），Ｅｍｐｏｗｅｒ数据
处理系统。ＳＡＲＴＩＯΜＳ２００４ＭＰ型１／１０万电子分析
天平。
红镰霉素龙胆二糖苷对照品由本实验室自制，结
构经波谱鉴定，经ＨＰＬＣ法测定纯度大于９９５％；乙
腈为ＨＰＬＣ级（Ｆｉｓｈｅｒ公司），甲醇为色谱纯（天津四
友公司），水为重蒸水，其余试剂为分析纯。决明子药
材于２００６年分别购自安徽亳州、河北安国、云南昆
明、广州清平药材市场和广西药材公司，由王祝举副
研究员鉴定为豆科植物决明Ｃ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ或小决明
Ｃ．ｔｏｒａ。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈四氢呋喃１％冰醋酸（１８∶３∶
７９），流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３０℃，检测波长 ２７８
ｎｍ。在该色谱条件下，样品中红镰霉素龙胆二糖苷
峰与其他非被测成分峰能够达到基线分离，保留时间
在１５ｍｉｎ左右，对照品与样品的色谱图见图１。
图１ 对照品及样品色谱图
Ａ．对照品；Ｂ．供试品；１．红镰霉素龙胆二糖苷
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取２００ｍｇ红镰
霉素龙胆二糖苷对照品，加甲醇溶解并定容至１００
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第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
ｍＬ量瓶中（质量浓度为００２００ｍｇ·ｍＬ－１），待用。
２．３ 供试品溶液制备 称取样品（过 ６０目筛）
００５ｇ，精密称定，准确加入２５ｍＬ甲醇，称重，回流
提取２ｈ，放至室温，再称重，补足失重，过滤，弃去初
滤液，取续滤液，用０４５μｍ微孔滤膜过滤即为供
试品溶液，备用。
２．４ 线性关系考察 分别吸取对照品溶液５，１０，
１５，２０，２５μＬ进样，由所测得峰面积为纵坐标（Ｙ），
进样量（μｇ）为横坐标（Ｘ）作图，进行线性回归，方
程为Ｙ＝４２７×１０６Ｘ＋３０７×１０３，ｒ＝０９９９９，表明
进样量在０１～０５μｇ线性关系良好。
２．５ 稳定性试验 精密吸取对照品溶液１０μＬ，分
别在０，１，２，４，８，２４ｈ时进样，在所选色谱条件下测
定，所测峰面积的ＲＳＤ１８％，表明在２４ｈ内稳定性
良好。
２．６ 精密度试验 精密吸取对照品溶液１０μＬ，连
续进样 ５次，在上述条件下测定峰面积，其 ＲＳＤ
１０％，表明精密度良好。
２．７ 重复性试验 取同一样品，称取５份，按２．３
项下操作制备供试液，准确吸取供试液 １０μＬ，进
样，测定峰面积，计算含量，质量分数平均值为
０９６％，其ＲＳＤ２８％，表明重复性良好。
２．８ 回收率试验 取同一已知含量（０９６％）的样
品５份，每份００５ｇ，精密称定后，每份加入００２００
ｍｇ·ｍＬ－１对照品溶液２５ｍＬ，按２．３项下操作制备
供试液，准确吸取供试液１０μＬ，进样，在上述色谱
条件下测定，计算回收率，结果见表１。
表１ 红镰霉素龙胆二糖苷的加样回收率
样品中含量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０４８２１ ０９８２６ １００１
０４７７３ ０９８３４ １０１２
０４８３０ １００２０ １０３８ １０１１ ２２
０４７７３ ０９６６５ ９７９
０４８２１ ０９９３７ １０２３
注：对照品加入量均为０５０００ｍｇ
２．９ 样品测定 按２．３项下操作制备供试液，准确
吸取对照品溶液１０μＬ及供试液１０μＬ，进样，在上
述色谱条件下测定，采用外标一点法计算其含量，结
果见表２。
３ 讨论
本试验建立了高效液相色谱法测定决明子中红
镰霉素龙胆二糖苷含量的方法，方法学考察表明，该
表２ 决明子中红镰霉素龙胆二糖苷含量
样品来源 拉丁学名
红镰霉素龙胆
二糖苷质量分数／％
广西药材公司 Ｃａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ ０９６
河北安国 Ｃ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ ０８１
安徽亳州 Ｃ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ ０８４
云南昆明 Ｃ．ｔｏｒａ ０６２
广州清平 Ｃ．ｔｏｒａ ０８６
法准确、灵敏、简单、快速，可作为决明子药材质量控
制的方法之一。
应用该法对５个不同来源的２种决明子药材中
的红镰霉素龙胆二糖苷含量进行了测定，结果表明
不同产地决明子中红镰霉素龙胆二糖苷含量明显高
于决明子中蒽醌苷元类成分的含量［５］（２００５年版药
典规定大黄酚不低于００８％）。该成分在决明子药
材中含量高，为具有保肝活性的主要成分，性质稳
定，为决明子的特征性成分，更能代表药材的质量品
质。分析结果表明红镰霉素龙胆二糖苷在两种决明
子中含量均较高，在此条件下均能很好的分离，该方
法能够同时满足两种决明子的含量测定。
比较了不同浓度的甲醇，乙醇和水作为提取溶
剂，考察结果表明在水及低浓度甲醇中几乎无法提
取出所测成分，在８０％以上的甲醇中提取完全，提
取率一致，故选取甲醇作为提取溶剂。对回流、冷
浸、超声等３种提取方法进行比较，结果回流提取１
ｈ较超声提取１ｈ的提取效果明显提高，而冷浸过夜
方法则提取效果较差，在加热条件下提取率明显增
高，所以采用热回流提取方法，推测可能与该成分的
溶解度较小有关。并且对提取时间进行了０５，１，
１５，２，２５ｈ的比较，结果２ｈ即可提取完全，所以
回流时间选择２ｈ。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：９８．
［２］ 张启伟，阴 健，张 俊．生、炒决明子及其煎剂中部分活性成
分的比较［Ｊ］．中草药，１９９６，２７（２）：７９．
［３］ ＷｏｎｇＳＭ，ＷｏｎｇＭ，ＳｅｌｉｇｍａｎｎＯ，ｅｔａｌ．Ｎｅｗａｎｔｉｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃ
ｎａｐｈｔｈｏｐｙｒｏｎｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｓｏｆＣａｓｉａｔｏｒａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ
Ｍｅｄ，１９８９，５５（３）：２７６．
［４］ ＷｏｎｇＳＭ，ＷｏｎｇＭ，ＳｅｌｉｇｍａｎｎＯ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｈｒａｑｕｌｎｏｎｇｇｌｙｃｏ
ｓｉｄｅｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｓｏｆＣａｓｉａｔｏｒａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，２８
（１）：２１１．
［５］ 冯映冰，龚志萍．决明子药材中大黄酚含量的反相 ＨＰＬＣ法测
定［Ｊ］．分析测试学报，１９９９，１８（４）：７９．
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第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅｉｎＣａｓｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａｂｙＨＰＬＣ
ＴＡＮＧＬｉｙｉｎｇ１，ＷＡＮＧＺｈｕｊｕ１，ＷＵＱｉｕｐｉｎｇ２，ＨＥＹａｎ３，ＨＵＡＮＧＬｕｑｉ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＪｉａｎｇＸｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００４，Ｃｈｉｎａ；
３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢａｓｉｃＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅｉｎＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＨＰＬＣｗｉｔｈＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅＴＨＦ１％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（１８∶３∶７９）
ｗａｓｕｓｅｄａｓａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ｗｉｔｈｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｔ４０℃ ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈａｔ２７８ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：
Ａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ０．１０．５μｇｗｉｔｈｒ＝０．９９９９ｆｏｒｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１０１．１％，
ａｎｄＲＳＤｗａｓ２．２３％ （ｎ＝５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｐｒｅｃｉｓｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．
ＩｔｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＳｅｍｅｎＣａｓｓｉａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ；ｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ；ＨＰＬＣ
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００６１２０９
［基金项目］ 吉林省科技厅项目（２００５０９０３１）
［通讯作者］ 杨世海，Ｔｅｌ：（０４３１）４５３３３０４，Ｅｍａｉｌ：ｊｌｙａｎｇｓ＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
抱茎苦荬菜的组织培养及植株再生
陶 静１，杨世海１，张梦萍２，田义新１
（１．吉林农业大学 中药材学院，吉林 长春 １３０１１８；
２．江都中医院，江苏 江都 ２２５２００）
［摘要］ 目的：探讨苦荬菜组织培养和植株再生条件。方法：以苦荬菜叶片为外植体，应用正交设计方法，对
愈伤组织的诱导和分化培养基进行优化筛选。结果：最佳的愈伤组织诱导培养基为ＭＳ＋２，４Ｄ１５ｍｇ·Ｌ－１＋６
ＢＡ１５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ１０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ１５ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ１５ｍｇ·Ｌ－１，最佳的不定芽诱导培养基为 ＭＳ＋２，
４Ｄ０２ｍｇ·Ｌ－１＋６ＢＡ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ０５ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ０５ｍｇ·Ｌ－１，不定芽经附加
ＩＢＡ０１ｍｇ·Ｌ－１的１／４ＭＳ培养基生根后移栽成活，获得再生植株。结论：建立了一套有效的苦荬菜组织培养再生
体系。
［关键词］ 苦荬菜；组织培养；植株再生；正交试验
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０３６８０４
抱茎苦荬菜 ＩｘｅｒｉｄｉｕｍｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉｕｍＨａｎｃｅ为菊
科苦荬菜属植物，又名苦碟子、盘尔草、秋苦荬菜、
鸭子食等［１］。苦荬菜味苦、性微寒。具有清热祛
火、消炎解毒、凉血消肿、祛瘀止痛、补虚止咳的作
用。现代科学研究表明［２］，苦荬菜含有三萜、甾
醇、倍半萜、黄酮、香豆素等，对循环系统，具有增
加冠脉流量、增加心肌营养性血流量，改善心脏微
循环等方面的作用，可开发成为治疗心脑血管系
统疾病的药物。
目前国内外有关苦荬菜的研究主要集中在生
药学及其所含的化学成分、生物活性物质、临床应
用等方面［３５］，但在组织培养、遗传改良方面却鲜
有报道，仅有唐万侠报道了以苦荬菜地上部分的
培养细胞为原料，生物制备具有特殊药用价值的
·８６３·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８